Combining structure and dynamics: non-denaturing high-pressure effect on lysozyme in solution

Small-angle X-ray scattering (SAXS) and elastic and quasi-elastic neutron scattering techniques were used to investigate the high-pressure-induced changes on interactions, the low-resolution structure and the dynamics of lysozyme in solution. SAXS data, analysed using a global-fit procedure based on a new approach for hydrated protein form factor description, indicate that lysozyme completely maintains its globular structure up to 1500 bar, but significant modi. cations in the protein-protein interaction potential occur at approximately 600-1000 bar. Moreover, the mass density of the protein hydration water shows a clear discontinuity within this pressure range. Neutron scattering experiments indicate that the global and the local lysozyme dynamics change at a similar threshold pressure. A clear evolution of the internal protein dynamics from diffusing to more localized motions has also been probed. Protein structure and dynamics results have then been discussed in the context of protein-water interface and hydration water dynamics. According to SAXS results, the new configuration of water in the first hydration layer induced by pressure is suggested to be at the origin of the observed local mobility changes.

Cearania heterophylla gen. nov et sp nov., a fossil gymnosperm with affinities to the Gnetales from the Early Cretaceous of northern Gondwana

Vegetative and fertile shoots of a shrub-like seed plant from the late Aptian Crato Formation of Brazil are described as Cearania heterophylla Kunzmann, Mohr and Bernardes-de-Oliveira, gen. nov. et sp. nov. Anatomical details of the axes, epidermal features and separate ovulate and pollen producing organs indicate the gymnospermous nature of this plant. The vascular tissue of the axes includes tracheids with bordered pits and fiber tracheids. Vegetative shoots comprising at least three branching orders bear opposite-decussately arranged ovate to lanceolate, dorsiventrally flattened, parallelodromous, rather thick leaves that vary tremendously in size. The amphistomatic leaves bear (brachy-)paracytic stomatal complexes arranged in simple longitudinal files. The ovulate structure is interpreted as a terminally attached single globular ovule/seed surrounded by at least five to six lanceolate bracts. A terminally attached pollen-cone like structure grows on a lateral leafy shoot. The unusual character combination may indicate that the fossils belong to a hitherto unknown group with affinities to ephedroid Gnetales. Sterile shoots formerly often described as Podozamites, Nageiopsis or Lilites that are at least partly congeneric with C. heterophylla Kunzmann, Mohr and Bernardes-de-Oliveira, gen. nov. et sp. nov. had a wide geographic distribution during the Early Cretaceous. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

Structure, processing and midgut secretion of putative peritrophic membrane ancillary protein (PMAP) from Tenebrio molitor larvae

A cDNA coding for a Tenebrio molitor midgut protein named peritrophic membrane ancillary protein (PMAP) was cloned and sequenced. The complete cDNA codes for a protein of 595 amino acids with six insect-allergen-related-repeats that may be grouped in A (predicted globular)- and B (predicted nonglobular)-types forming an ABABAB structure. The PMAP-cDNA was expressed in Pichia pastoris and the recombinant protein (64 kDa) was purified to homogeneity and used to raise antibodies in rabbits. The specific antibody detected PMAP peptides (22 kDa) in the anterior and middle midgut tissue, luminal contents, peritrophic membrane and feces. These peptides derive from PMAP, as supported by mass spectrometry, and resemble those formed by the in vitro action of trypsin on recombinant PMAP. Both in vitro and in vivo PMAP processing seem to occur by attack of trypsin to susceptible bonds in the coils predicted to link AB pairs, thus releasing the putative functional AB structures. The AB-domain structure of PMAP is found in homologous proteins from several insect orders, except lepidopterans that have the apparently derived protein known as nitrile-specifier protein. Immunocytolocalization shows that PMAP is secreted by exocytosis and becomes entrapped in the glycocalyx, before being released into midgut contents. Circumstantial evidence suggests that PMAP-like proteins have a role in peritrophic membrane type 2 formation. (C) 2007 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Avaliação da eficiência de co-transformação de soja (Glycine max (L.) Merrill) via bombardeamento de partículas utilizando um gene de seleção e um gene de interesse em plamídeos diferentes

Visando aumentar a resistência a moléstias fúngicas, o presente trabalho teve como objetivo introduzir um gene (chit1) que codifica uma quitinase do fungo Metarhizium anisopliae em cultivares de soja [Glycine max (L.) Merrill]. A co-transformação foi a estratégia escolhida, visando a obtenção de plantas livres de transgenes marcadores na progênie das plantas transformadas. A co-transformação foi realizada via biolística, tendo como tecido-alvo conjuntos de embriões somáticos globulares das cultivares MG/BR46 Conquista e IAS-5. O plasmídeo pGusHyg, que contém o gene repórter gusA e o gene marcador hpt, foi bombardeado concomitantemente com o plasmídeo pMOG463chit1, que porta o gene chit1. Os conjuntos de embriões bombardeados foram transferidos para meio seletivo contendo higromicina, visando a obtenção de material estavelmente transformado. Os conjuntos embriogênicos higromicina-resistentes foram transferidos seqüencialmente para meios de proliferação D-20 (sem higromicina), maturação e regeneração. No total, foram obtidos 387 e 380 embriões histodiferenciados das cultivares MG/BR46 Conquista e IAS-5, respectivamente. Plantas transgênicas adultas e férteis foram regeneradas. Para avaliar a eficiência da estratégia de cotransformação, foram realizadas análises moleculares de embriões histodiferenciados e de plantas regeneradas. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram o cálculo da taxa de co-transformação de 44% para os embriões histodiferenciados da cultivar MG/BR46 Conquista e de 50% para plantas de IAS-5. Não existem, até o momento, relatos de trabalhos em soja utilizando embriões somáticos globulares em proliferação como alvo para estudos de co-transformação.

Estudo eritroleucométrico e proteinograma sérico do sangue do cordão umbilical e jugular de eqüinos ao nascimento e de suas respectivas mães

Colheram-se amostras de sangue do cordão umbilical (SCU) e do sangue circulante de cinco eqüinos neonatos, imediatamente após o nascimento, e o sangue da própria mãe, utilizando-se um sistema a vácuo. O material foi submetido à contagem global de hemácias e leucócitos e à determinação do volume globular e da concentração de hemoglobina; à contagem diferencial de leucócitos em esfregaços sangüíneos; e ao cálculo dos índices eritrocitométricos. Foram realizadas a dosagem de proteínas séricas totais e a eletroforese das proteínas séricas em gel de agarose. Não houve diferenças significativas entre os parâmetros do SCU e do sangue da jugular dos potros. No SCU dos potros observaram-se valores mais elevados para contagem global de hemácias (9,75x10(6)/µl), dosagem de hemoglobina (14,65g/dl) e concentração de hemoglobina corpuscular média (37,23g/dl); e valores menores para volume corpuscular médio (40,50fl), proteína total (4,37g/dl), alfa-globulinas (0,65g/dl), beta-globulinas (1,10g/dl), gama-globulinas (0g/dl) e contagens global (5,40 x 10³/µl) e diferencial de leucócitos, exceto contagem de neutrófilos bastonetes e monócitos, quando comparados com os valores obtidos no sangue de suas mães.

Influência do tipo de parto na hematologia do cordão umbilical de cães

O sangue do cordão umbilical humano tem sido crescentemente utilizado como fonte de células-tronco. Os modelos experimentais de células-tronco da medula óssea, em cães, têm propiciado informações importantes para transplantes medulares em humanos. Vários trabalhos citam a influência do tipo de parto nas características do sangue do cordão umbilical (SCU) humano. Entretanto, não existem relatos sobre a colheita do sangue do cordão umbilical de cães. O objetivo deste ensaio é avaliar a influência do tipo de parto na hematologia do cordão umbilical de cães. No presente protocolo experimental, foram estudados 54 fetos de cães, ao final da vida intra-uterina, provenientes de parto normal (n=24) e cesariana (n=30). A colheita de sangue do cordão umbilical foi realizada com seringa de cinco mL contendo solução anticoagulante EDTA (1mg/1mL sangue). em seguida, a contagem global de hemácias, leucócitos, plaquetas, a determinação da concentração de hemoglobina, taxa de hematócrito, os índices eritrocitários foram realizados no contador automático de células. A contagem diferencial de leucócitos foi determinada em esfregaços de SCU corados com May-Grunwald-Giemsa (MGG). Com relação ao eritrograma e ao plaquetograma, não houve diferença significativa entre as amostras obtidas em cesarianas e partos normais. Os valores do leucograma do SCU colhido em partos normais foram superiores àqueles obtidos em cesarianas (P<0,05). Portanto, o tipo de parto influencia os valores hematológicos do cordão umbilical de cães.

Hemograma e hemogasometria de eqüinos submetidos à obstrução experimental de jejuno

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Hematological profile of healthy Pantaneiro horses

Determinaram-se os valores do hemograma de 187 eqüinos sadios da raça Pantaneira. Para a composição de seis grupos experimentais consideraram-se a faixa etária e o sexo. Verificaram-se 6,2± 1,2 a 8,9± 2,3 hemácias/µl (x10(6)), 32,0± 4,0 a 37,0± 2,8% de volume globular (VG), 11,5± 1,0 a 12,8± 1,6g de teor de hemoglobina/dl, 11,0± 3,2 a 17,0± 2,8 leucócitos/µl (x 10³), 4,9± 1,8 a 7,5± 1,5 neutrófilos segmentados/µl (x 10³) e 5,2± 2,0 a 8,6± 2,0 linfócitos/µl (x 10³). Observaram-se valores mais baixos na contagem de hemácias, e VG e valores mais altos do volume globular médio (VGM) em cavalos castrados (acima de 25 meses de idade). As contagens de leucócitos e neutrófilos segmentados em potros com até oito meses de idade apresentaram valores mais elevados que os encontrados em animais acima dos 25 meses de idade. Constatou-se que não houve influência do sexo nos parâmetros analisados.

Hemograma e proteinograma plasmático de eqüinos hígidos e de eqüinos acometidos por abdômem agudo, antes e após laparotomia

Foram examinados 20 eqüinos adultos, 10 sadios e 10 acometidos por abdômen agudo, submetidos à laparotomia. O exame clínico e a colheita de amostras de sangue foram realizados antes da laparotomia e diariamente, a partir da cirurgia, até o 10º dia após a intervenção. Constatou-se elevação da temperatura retal, das freqüências cardíaca e respiratória, do número de hemácias e de leucócitos, do volume globular e dos valores das proteínas plasmáticas após a cirurgia, em ambos os grupos, porém com valores mais elevados nos animais enfermos, especialmente do número de neutrófilos. O proteinograma plasmático dos eqüinos com abdômen agudo mostrou que houve elevação significativa nas concentrações de proteínas na fase aguda com maiores valores ao redor de 48 horas após a cirurgia. Os resultados indicaram que o padrão de elevação e decréscimo dessas proteínas pode ser útil na definição do prognóstico do quadro clínico de abdômen agudo e da recuperação cirúrgica dos eqüinos.

Estudo clínico e laboratorial da pneumonia de bezerros induzida pela inoculação intrabronquial de Mannheimia haemolytica

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Desempenho de diferentes estádios embrionários no cultivo in vitro de embriões de 'Pêra Rio' x 'Poncã'

Objetivou-se verificar qual o melhor estádio embrionário para o cultivo de embriões imaturos oriundos de frutos provenientes de hibridação entre 'Pêra Rio' x 'Poncã' , bem como o efeito de diferentes concentrações do meio de cultura MT. Os embriões em diferentes estádios de desenvolvimento (globulares, torpedo e cordiforme) foram excisados e inoculados em tubos de ensaio contendo 15 mL do meio MT com diferentes concentrações (0; 50; 100 e 150% da composição original e acrescido de 50 g.L-1 de sacarose). Após a inoculação, os embriões foram incubados à 27±1ºC, fotoperíodo de 16 horas e irradiância de 32 mmol.m-2.s-1. Após 90 dias, avaliou-se o comprimento da parte aérea e do sistema radicular, massa fresca e número de folhas das plântulas. Melhor desenvolvimento dos embriões imaturos foi obtido em estádio cotiledonar e com a concentração de 150% do meio MT.

Marcadores fenotípicos para caracterização de caprinos com diferentes níveis de resistência às endoparasitoses gastrintestinais

The aim of this study was to evaluate and characterize phenotypically goats with different levels of resistance to gastrointestinal nematodes. For a period of 93 days, 60 F2 goats originated from ½ Saanen and ½ Anglo- nubian animals were kept in the same area of pasture. Every seven days, feces and blood were collected for eggs per gram counts of feces (EPG) and cultures of feces and to determinate the number of eosinophils, packed cell volume and total plasma protein, respectively. On the same day, the animals were weighed and submitted to body score condition and FAMACHA method to worm control. Based on the average of EPG, the twelve animals with the highest average (susceptible group) and the twelve animals with the lowest average of EPG (resistant group) were selected, slaughtered and necropsied to recovery, counting andparasites identification. The resistant animals present lower EPG mean (P <0.0001) and 4.7 folder less parasites than susceptible animals. The resistant group presented higher mean packed cell volume (26.48%) and total plasma protein (6.24 g / dl) than susceptible one (24,04% e 5,82g/dl, respectively). The average number of eosinophils was similar in both groups The Haemonchus sp. was the most prevalent in the culture of feces, followed by Trischostrongylus sp. and Oesophagostomum sp.. The counting of nematodes in the abomasum of susceptible group was higher than in resistant one. The species identified were H. contortus in abomasums and T. colubriformis in small intestine. It can be concluded that EPG, packed cell volume and total plasma protein were useful phenotypic markers to identify animals as resistant and susceptible to gastrointestinal nematodes infections

Parâmetros parasitológicos e desempenho produtivo de ovinos naturalmente infectados com nematoides gastrintestinais mantidos em diferentes pastagens tropicais

The control of gastrointestinal nematodes of small ruminants is usually done with anthelmintics. However, due to the emergence of ever-increasing parasite resistance to these drugs, looking up an alternative control parasites. One of this is sought in pasture management, as these are the sources of animals` infection by L3 infective larvae of helminths. The aim of this study was to evaluate the performance of sheep to natural infections by gastrointestinal nematodes grazing Panicum maximum cv. Massai and cv. Aruana, and Brachiaria brizantha cv. Piatã and cv. Marandu. The work was conducted from May to August-2011 with 48 male sheeps SRD versus Santa Inês breed. The animals were naturally infected with gastrointestinal nematodes, and maintained in four different cultivars of tropical forage grasses, naturally contaminated with eggs and larvae of gastrointestinal nematodes. Each week the animals were phenotypically characterized by parasitological examinations (eggs per gram of feces - EPG, and feces culture), hematological (packed cell volume PCV, and blood eosinophil count) method to evaluate the Famacha© colorof ocular mucosa, and the measures of body condition score and weight. In pastures was made the recovery of infective larvae in order to determine the quantity of L3 present in the pasture. The experimental design was a randomized completed block with two replications and before the entry of animals in the paddocks, they have been wormed. The experiment was ended when the animals reached 32.0 kg liveweight, and then were slaughtered and autopsies performed for the recovery and identify parasites of the abomasum, small intestine and large intestine. Results were subjected to analysis of variance, t test and Tukey`s test. The animals kept on pastures of Marandu grass had lower EPG counts, higher percentage of packed cell volume and higher average weight; those who remained in the Piatã pasture had lower eosinophil counts per microliter of blood. About the Famacha©, the highest prevalence was Famacha 2, and the body condition score ranged between 2 and 3. The results of feces cultures and recovery of larvae on pastures showed the presence of larvae of Trichostrongylus sp., and at the necropsy too. This way, it was concluded that the grass cultivars influences the sheep parasite load; the Famacha, together with EPG and packed cell volume are important indicators for use in controlling gastrointestinal nematode infections. The Trichostrongylus sp. was the most prevalent parasite in sheep during the rainy season

Avaliação clínico-laboratorial de bovinos Nelore infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax

Avaliaram-se as alterações clínico-laboratoriais de seis bezerros Nelore, de ambos os sexos, inoculados experimentalmente com 10(7) organismos viáveis de Trypanosoma vivax, isolados de bovinos da região de Poconé, Estado de Mato Grosso. Os animais foram observados diariamente, durante 30 dias, quanto aos parâmetros de temperatura retal, volume globular (VG), parasitemia, produção de anticorpos, coloração de mucosas, comportamento e apetite. Determinaram-se os níveis séricos de aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA), gama glutamiltransferase (GGT), creatina kinase (CK), colesterol, uréia, creatinina, cálcio, fósforo e o perfil eletroforético das proteínas séricas aos 4, 8, 12, 16, 23 e 30 dias pós-inoculação (DPI). Durante os 6 meses seguintes, os animais foram observados semanalmente, avaliando-se a temperatura retal, o VG e a parasitemia. T. vivax foi evidenciado a partir do terceiro e quarto DPI em todos os bezerros e persistiu até o 30° DPI em cinco dos seis animais em estudo. Ocorreu um decréscimo significativo (p<0,05) do valor médio do VG (25%) aos dez DPI. Os animais não apresentaram qualquer alteração no quadro clínico, bem como na avaliação da bioquímica sérica durante o período experimental. A soroconversão ocorreu aos 6 e 8 DPI, permanecendo todos os animais soropositivos nos 30 dias experimentais. Bovinos nelores jovens, infectados experimentalmente com T. vivax, foram capazes de estabelecer um equilíbrio na relação hospedeiro-parasita.

Desenvolvimento de um modelo experimental de hemodiálise em cães

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)