Análise da diversidade genética entre acessos de banco ativo de germoplasma de algodão

O conhecimento da diversidade genética entre um grupo de genitores é importante no melhoramento, sobretudo na identificação de combinações híbridas de maior heterozigose e maior efeito heterótico e, portanto, na recuperação de genótipos superiores nas gerações segregantes. Os métodos preditivos de diversidade têm sido muito utilizados porque dispensam a obtenção de combinações híbridas entre os genitores e normalmente usam uma medida de similaridade para avaliar a diversidade entre eles. Foram avaliados 221 acessos do banco ativo de germoplasma de algodão da Epamig, por meio da distância euclidiana média e posterior agrupamento dos indivíduos, de modo a permitir escolhas mais apropriadas de genitores para cruzamentos. Para isso foram consideradas 11 características morfológicas e de fibra. Foi detectada grande diversidade genética entre os 221 acessos reunidos em dez grupos distintos. A maior distância euclidiana (4,36) ocorreu entre os acessos S 8186 e T-295-1-1 e a menor (0,25) entre os acessos TX CACES 1-81 e TX CDPS 177.

Franceschetti hereditary recurrent corneal erosion.

PURPOSE: To describe new affected individuals of Franceschetti's original pedigree of hereditary recurrent erosion and to classify a unique entity called Franceschetti corneal dystrophy. DESIGN: Observational case series. METHODS: Slit-lamp examination of 10 affected individuals was conducted. Biomicroscopic examinations were supplemented by peripheral corneal biopsy in 1 affected patient with corneal haze. Tissue was processed for light and electron microscopy and immunohistochemistry was performed. DNA analysis was carried out in 12 affected and 3 nonaffected family members. RESULTS: All affected individuals suffered from severe ocular pain in the first decade of life, attributable to recurrent corneal erosions. Six adult patients developed bilateral diffuse subepithelial opacifications in the central and paracentral cornea. The remaining 4 affected individuals had clear corneas in the pain-free stage of the disorder. Histologic and immunohistochemical examination of the peripheral cornea in a single patient showed a subepithelial, avascular pannus. There was negative staining with Congo red. DNA analysis excluded mutations in the transforming growth factor beta-induced (TGFBI) gene and in the tumor-associated calcium signal transducer 2 (TACSTD2) gene. CONCLUSION: We have extended the pedigree of Franceschetti corneal dystrophy and elaborated its natural history on the basis of clinical examinations. A distinctive feature is the appearance of subepithelial opacities in adult life, accompanied by a decreased frequency of recurrent erosion attacks. Its clinical features appear to distinguish it from most other forms of dominantly inherited recurrent corneal erosion reported in the literature.

Efficient lentiviral gene transfer into corneal stroma cells using a femtosecond laser.

We investigated a new procedure for gene transfer into the stroma of pig cornea for the delivery of therapeutic factors. A delimited space was created at 110 mum depth with a LDV femtosecond laser in pig corneas, and a HIV1-derived lentiviral vector expressing green fluorescent protein (GFP) (LV-CMV-GFP) was injected into the pocket. Corneas were subsequently dissected and kept in culture as explants. After 5 days, histological analysis of the explants revealed that the corneal pockets had closed and that the gene transfer procedure was efficient over the whole pocket area. Almost all the keratocytes were transduced in this area. Vector diffusion at right angles to the pocket's plane encompasses four (endothelium side) to 10 (epithelium side) layers of keratocytes. After 21 days, the level of transduction was similar to the results obtained after 5 days. The femtosecond laser technique allows a reliable injection and diffusion of lentiviral vectors to efficiently transduce stromal cells in a delimited area. Showing the efficacy of this procedure in vivo could represent an important step toward treatment or prevention of recurrent angiogenesis of the corneal stroma.

Banco de sementes no solo em sistemas de cultivo lavoura-pastagem

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de sistemas de cultivo, do preparo do solo e dos níveis de adubação sobre o banco de sementes, em solos de áreas submetidas a: três sistemas de cultivo - lavoura contínua (L), lavoura-pastagem-lavoura (LPL) e pastagem-lavoura-pastagem (PLP); dois sistemas de preparo do solo - convencional (C) e semeadura direta (D); dois níveis de adubação - manutenção (1) e corretiva gradual (2); e uma área de pastagem contínua, com preparo convencional e adubação corretiva gradual. No sistema de cultivo lavoura-pastagem, a densidade de sementes, excluindo-se as áreas de cultivo de LPLC1 e de LPLC2, foi menor do que nas lavouras contínuas e maior do que na pastagem contínua. Nas áreas de lavoura, o banco de sementes foi menor em áreas com semeadura direta do que com preparo convencional do solo, mas nas áreas de PLP, com adubação corretiva gradual, não houve diferença entre os sistemas de preparo do solo. A adubação causou redução na densidade de sementes apenas nas áreas de cultivo de LPLC e PLPC. A adoção de sistemas de cultivo lavoura-pastagem com semeadura direta pode auxiliar no manejo de plantas daninhas em áreas de lavoura de grãos.

Banco de sementes em cerrado sensu stricto sob queimada e sistemas de cultivo

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de queimada e de sistemas de cultivo sobre o banco de sementes em solo de Cerrado. Foi realizada amostragem em área sob cerrado sensu stricto queimada e não queimada, assim como em área de pastagem e lavoura com preparo convencional do solo. Não houve redução no banco de sementes, embora tenha havido menor número de espécies e de famílias, e dos índices de diversidade, com a queimada. Houve maior índice de valor de importância (IVI) e número de espécies nativas, na área não queimada, e de espécies invasoras na área queimada. Na área de lavoura, houve maior densidade de sementes do que na área de pastagem e de cerrado. Asespécies com o maior IVI nas áreas foram aquelas consideradas invasoras e forrageiras. A área de lavoura apresentou menores IVI de espécies nativas, índices de diversidade (Shannon e Simpson) e percentagem de espécies nativas do que as áreas de pastagem e cerrado. O cultivo com lavoura causa maior perturbação nas áreas do que a queimada.

Diversidade genética entre acessos de cacau de fazendas e de banco de germoplasma na Bahia

O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade genética de acessos de cacau, selecionados previamente como produtivos e resistentes à vassoura-de-bruxa na Bahia, e estudar suas inter-relações com genótipos no banco de germoplasma. Amostras de DNA de folhas dos 120 acessos, coletados em 17 fazendas de sete municípios do Sul da Bahia, foram amplificadas pela técnica de RAPD ("random amplified polymorphic DNA"). Os coeficientes de dissimilaridade genética, calculados pelo método de Jaccard a partir das bandas RAPD, permitiram evidenciar, pela análise de agrupamento, que a maioria das seleções das fazendas (89,2%) agrupou-se com acessos do banco de germoplasma considerados representativos da diversidade de cacau (híbridos, trinitários, Scavinas, amazônicos e cacau-comum). As demais seleções distribuíram-se em outros sete grupos distintos. Há elevada diversidade genética entre as seleções das fazendas, e algumas delas devem ter-se originado de genitores não incluídos nesta análise. Esses materiais apresentam potencial para seleção de clones com maior diversidade para novos cruzamentos ou uso pelos agricultores.

Epithelial Ingrowth After Lasik/altk: An Immunohistological Study Of 4 Cases. Do Epithelial Inclusions Grow From Trapped Corneal Stem-like Cells?

Purpose: To characterize the clinical, morphological and immunohistological features of epithelial ingrowth cells after laser in situ keratomileusis (LASIK) or Automated Lamellar Therapeutic Keratoplasty (ALTK) with specific reference to current markers of corneal stem cells.Methods: Four patients were included in this interventional non-comparative case series. Full ophthalmologic examination was performed. Epithelial ingrowth specimens from 4 patients were removed surgically and immunostained for cytokeratin 3 (CK3), cytokeratin 15 (CK15), cytokeratin 19 (CK19), Muc5AC, p63α, C/EBPδ, Bmi-1, BCRP/ABCG2 and Ki-67.Results: The time interval between LASIK/ALTK and ingrowth surgical removal was, 3, 11, 15 and 36 months. On slit lamp examination, early epithelial ingrowth appeared as whitish pearls and late epithelial ingrowth as confluent whitish opacities. Microscopically, the epithelial ingrowths showed features of a squamous non keratinizing epithelium. No mitotic figure was seen. Ki-67 labelling of 3 cases showed a proliferation index of 3-4%. Superficial squamous cells strongly expressed CK3. Expression of C/EBPδ, BCRP/ABCG2 and p63α was seen in more than 70% of cells and Bmi-1 was positive in up to 30% of cells in the specimens tested. There was no expression of CK19 or CK15.Conclusions: Epithelial ingrowths can persist for up to 3 years following LASIK surgery. They show a capacity for self-renewal and corneal differentiation. Besides, they express p63α, C/EBPδ, Bmi-1, BCRP/ABCG2 which have been proposed as markers of stem cell phenotype. These observations suggest that post-LASIK/ALTK epithelial inclusions could derive from stem-like cells located in the peripheral corneal epithelium.

Caracterização fenotípica e molecular de esporos de fungos micorrízicos arbusculares mantidos em banco de germoplasma

O objetivo deste trabalho foi caracterizar fenotípica e genotipicamente isolados de espécies de fungos micorrízicos arbusculares (FMA) mantidos em cultura pura e avaliar a aplicabilidade da técnica PCR-DGGE desenvolvida para Gigaspora, na identificação molecular de espécies de FMA pertencentes a outros gêneros. A caracterização fenotípica das espécies foi realizada de acordo com critérios morfológicos, descritos pela taxonomia, e com uso de descrições originais das espécies presentes na literatura especializada. A análise genotípica foi feita com base na discriminação específica da região V9 do 18S rDNA, que permitiu a diferenciação das espécies e não revelou qualquer diferença entre os isolados geográficos de Glomus clarum, e entre os de Glomus etunicatum. Isto indica a aplicabilidade da técnica para a avaliação da pureza genética e discriminação de espécies de FMA.

Diversidade genética de acessos do banco de germoplasma de mangaba em Sergipe

O objetivo deste trabalho foi estimar a variabilidade genética de acessos de mangaba provenientes de populações naturais, de 11 localidades, com marcadores RAPD. Os acessos pertencem ao Banco Ativo de Mangaba da Embrapa Tabuleiros Costeiros, em Itaporanga d'Ajuda, SE. Foram utilizados 13 iniciadores, que geraram 82 fragmentos, dos quais 78 (95%) eram polimórficos. A análise genética entre localidades apresentou baixa diversidade genética; entretanto, a similaridade genética variou de 0,02 a 0,91, para os 55 acessos. Foi possível identificar grupos divergentes por meio dos agrupamentos UPGMA e ACoP. Os acessos menos similares foram provenientes de Ipiranguinha (Conde, PB) e Preguiça (Indiaroba, SE), e os mais semelhantes de Jandaíra (Costa Azul, BA). Do conjunto total, 49 acessos foram geneticamente distintos e seis semelhantes. Por meio dos marcadores RAPD, foi possível obter um perfil molecular único, além de estimar a variabilidade existente entre os acessos avaliados. O Banco Ativo de Germoplasma de Mangaba da Embrapa Tabuleiros Costeiros apresenta baixa diversidade genética entre as localidades.

El Banco de Santa Fe, la ciudad de Rosario y el español Carlos Casado del Alisal

En el Paseo Intendente Eduardo Grandoli, encontramos la estatua de Carlos Casado del Alisal, precisamente el fundador y Director General del Banco de Santa Fe en la ciudad de Rosario entre los años 1878 y 1886. Carlos Julián Niceto Casado del Alisal, el español oriundo de Palencia, emigró hacia 1857 a la Argentina, y se estableció en la ciudad de Rosario. Allí colaboró con Urquiza. Con los años, se convirtió en el empresario más destacado de las repúblicas de Argentina y del Paraguay. En Rosario se encargaría de llevar adelante una serie de empresas financieras, productivas y mercantiles que le otorgaron un gran poder económico. El palentino comenzó a actuar de prestamista e impuso el uso de su propia moneda bautizada"Carlos Casado". Reproducimos aquí uno de los ejemplares de la moneda cuyo valor era de diez pesos plata boliviana en efectivo, con pagaré a la vista y al portador. También mostramos el antiguo edificio del Banco Provincial de Santa Fe, el banco que tiene vigencia hoy día, que fue fundado y dirigido por el propio Carlos Casado del Alisal.

Evaluation of the integrity of human corneal epithelium maintained in organ-culture during eye banking using Corneamax®

Purpose: Mediums have been developed to conserve corneal endothelium in organ-culture during eye banking. CorneaMax® is used by 25% of Eye Bank in Europe. Only little is known about conservation of corneal epithelium with this medium during banking. Its preservation could be of interest in clinic to cure corneal disease with stem cells deficiency. Therefore, we wanted to examine the integrity of human corneal epithelium maintained in CorneaMax®. Methods: Human corneas, considered unsuitable for transplantation, were obtained from the Eye Bank in Lausanne. Average post-mortem time was 14 hours. Cornoscleral rings were maintained in organ-culture in Corneamax® at 32°C. Samples were formalin-fixed after period ranging from 0 (D0) to 35 days (D35, N=5 for each time points) and stained with H&E. Proliferation and apoptosis were evaluated by immunostaining with antibody against Ki67 and Caspase3 respectively. Results: Corneas, which were not in organ-cultured (D0), showed different morphology, including intact epithelium with 5 to 7 layers, but also completely denuded basement membrane. In two cases, at D0, the epithelium lost its adherence to the basal lamina of the cornea creating a large epithelial sheet. During the two first days, corneas and limbus area lost totally their epithelium, except for some remaining limbal basal cells. From day 2 to day 10, regeneration of the epithelium took place, starting from the limbal region in direction to the central cornea. From day 10 to day 35, corneal epithelium appeared as an atrophic epithelium, consisting of only two cell layers. Proliferation happened in the whole cornea during the 35 days of organ-culture, as shown by Ki67 positive cells. Apoptosis was rarely detected in the corneal epithelium. Conclusions: Corneas maintained in CorneaMax® showed a complete disappearance of the corneal epithelium during the two first days and a conservation of limbal basal cells in the limbal region. These remaining cells allowed a full regeneration of the tissue, leading to an atrophic epithelium, composed of only two cell layers. This atrophic epithelium could be seen in all the organ-cultured corneas during the 35 days of conservation. This study is a first step to develop medium in organ-culture in order to conserve corneal epithelial cells.

Long-Term Follow-Up of Multilayer Amniotic Membrane Transplantation (MLAMT) for Non-Traumatic Corneal Perforations or Deep Ulcers with Descemetocele.

Background: To evaluate the long-term efficacy of multilayer amniotic membrane transplantation for reconstruction of epithelium and stroma in non-traumatic corneal perforations (less than 2 mm) or deep ulcers with descemetocele.Design: Retrospective, non-comparative, interventional case series.Patients and Methods: Eleven consecutive patients with non-traumatic corneal perforations or deep corneal ulcers with descemetocele refractory to conventional treatments: herpetic or zoster keratitis (n = 4), Sjögren's syndrome (n = 2), rosacea (n = 1), hydrops (n = 1), mucous membrane pemphigoid (n = 1), bacterial keratitis (n = 1) and perforation after protontherapy for melanoma (n = 1). Intervention was: multilayer amniotic membrane transplantation with cryopreserved amniotic membrane. Complication rate and clinical outcome were evaluated in this long-term follow-up.Results: Mean follow-up was 32 months (12 to 60). Integration of the multilayer amniotic membrane was obtained in 10 cases after one year. Corneal epithelium healed above the membrane in 10 cases within 3 weeks and remained stable after 32 months in 9 cases. Thickness of the stroma was increased and remained stable during the follow-up in 9 cases. In one case herpetic keratitis recurred with a corneal perforation. The clearing of the amniotic membrane was gradually obtained over a period of 11 months. Complications occurred in 15 % of the eyes during the long-term follow-up.Conclusion: Multilayer amniotic membrane transplantation is a safe and efficient technique for a long restoration of the corneal integrity after non-traumatic corneal perforations or deep corneal ulcers with descemetocele. Long-term prognosis of these eyes depends of the gravity of the initial disease.

Caracterização física e de produção de acerola do banco ativo de germoplasma em Pernambuco

Este trabalho teve por objetivo avaliar as características físicas dos frutos e a produção de doze genótipos de aceroleiras do Banco Ativo de Germoplasma da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Frutos colhidos nas safras Inverno/1999, Verão/2000 e Verão/2001 foram avaliados quanto a massa, altura e diâmetro médio, bem como as características de produção e o número médio de frutos/genótipo. A análise conjunta (média das safras) revelou uma variação média na massa de 3,88 a 7,11g, na altura de 1,74 a 2,07cm e no diâmetro de 1,94 a 2,46cm. A variação na produção anual dos 12 genótipos, no ano de 1999, compreendeu valores entre 3,23 e 10,31kg de fruto/planta, enquanto no ano de 2000 esta variação foi de 6,73 a 44,70kg de fruto/planta. Nos anos de 1999 e 2000, cerca de 50% da produção anual ficou concentrada nos meses de outubro, novembro e dezembro. Os genótipos 012-CPA, 013-CPA e 014-CPA destacaram-se como potencialmente promissores por terem sido os mais produtivos além de terem apresentado características físicas, referentes à massa e do diâmetro dos frutos, exigidas pelas indústrias de transformação.

Identificação de microssatélites para o mamoeiro por meio da exploração do banco de dados de DNA

Os marcadores microssatélites são ferramentas úteis em diversas análises genéticas em plantas. No caso do mamoeiro (Carica papaya L.), poucos locos de microssatélites foram descritos até o momento. Assim, o objetivo deste trabalho foi explorar a base de dados do GenBank / NCBI (National Center of Biotechnoloy Information) à procura de microssatélites de mamoeiro, visando a seu futuro uso em estudos genéticos e moleculares aplicados ao melhoramento genético. As seqüências foram obtidas no GenBank / NCBI, no formato FASTA, e analisadas para a presença de microssatélites com um mínimo de 20; 7 e 5 repetições dos motivos de mono-, di- e trinucleotídeos, respectivamente, e acima de 4 repetições para tetra- e pentanucleotídeos. Seqüências com mais de 90% de similaridade foram consideradas redundantes e, portanto, eliminadas das análises. Foram analisadas 44.591 seqüências, das quais 3.180 foram não-redundantes e apresentaram 3.947 microssatélites. Desse total, 3.587 foram classificados como microssatélites perfeitos, 8 imperfeitos, 65 interrompidos, 239 compostos-perfeitos, 8 compostos-imperfeitos e 40 compostos-interrompidos. As repetições de di- e trinucleotídeos representaram 65,7 e 14,4% do total de seqüências analisadas, respectivamente. Somente os motivos do tipo AT/TA representaram 44,1% dos microssatélites encontrados. Os motivos mais comuns de tri-, tetra- e pentanucleotídeos foram AAT, AATT e TTTAA, respectivamente. Observou-se que, nas seqüências disponíveis, o genoma do mamoeiro apresenta, em média, um microssatélite a cada 5,65 kb.