Avaliação de antígenos do trypanosoma cruzi para a reação de hemaglutinação indireta: II. Antígenos de diferentes amostras e formas evolutivas

Para aprimorar a sensibilidade e a especificidade da reação de hemaglutina-ção indireta no diagnóstico da doença de Chagas, foram utilizados eritrocitos sensibilizados com antígeno de epimastigotas de diferentes amostras (clones Al.7, B12, Cl e cepas D150 e Y), de tripomastigotas metacíclicos de cultura (TMC) e de tri-pomastigotas de cultura de células (TCC) do Trypanosoma cruzi. Foram titulados 132 soros de indivíduos chagásicos e 161 soros de não chagásicos, diagnosticados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), considerada como reação de referência no cálculo dos índices de co-positividade (i.c.p.), co-negatividade (i.c.n.) e concordância. Utilizando o título discriminante (T.D.) de 1:40, os antígenos da cepa Y e do clone B12 apresentaram valores elevados para os três índices calculados, indicando boa sensibilidade e especificidade em relação à RIFI. Os antígenos dos clones Al .7 e Cl apresentaram baixa especificidade considerando o T.D. de 1:40, mas ocorreu um aumento acentuado para o i.c.n. considerando o T.D. de 1:80, indicando um aumento de especificidade relativa sem alteração significativa da sensibilidade relativa. Com os antígenos T.M.C, e T.C.C, foram observados títulos mais baixos e valores menores para o i.c.p., indicando pouca sensibilidade em relação à RIFI.

Manifestações respiratórias na malária por Plasmodium falciparum e Vivax: vivax

Foram selecionados 110 pacientes que procuraram a SUCAM/CUIABÁ para diagnóstico e tratamento de malária, com queixa de febre e procedente de área malarígena. Nestes pacientes foram realizados: gota espessa para a pesquisa de Plasmodium; aplicação de questionário padronizado para detectar sintomas respiratórios presentes no momento da entrevista; gasometria arterial e espirometria para avaliar a função pulmonar. Desta amostra, 62 pacientes foram positivos para malária sendo 41 P. vivax, 20 P. falciparum e 01 forma mista (grupo Malárico); 48 mostraram-se negativos à pesquisa de hematozoários através da gota espessa (grupo Não Malárico). As manifestações respiratórias encontradas nesta população quando comparadas os grupos Malárico e Não Malárico, foram respectivamente: 1º) Sintomáticos Respiratórios de 46,8% para 22 9% (p < 0,05); 2°) Alterações Espirométricas de 53,2% para 20,8% (p < 0,05); 3°) Alterações Gasométricas de 62,9% para 25,0% (p < 0,05). Com estes resultados concluímos que há nítida associação entre a Malária produzida pelo P. vivax e P. falciparum e as manifestações respiratórias apresentadas, nesta população de estudo.

Lytic antibodies elicited by Trypanosoma cruzi infection recognize epitopes present on both bloodstream trypomastigote and epimastigote forms of parasite

Sera of Chaga's disease patients containing anti-T. cruzi lytic antibodies were submitted to affinity chromatography using Sepharose 4B conjugated with antigen extracted from epimasiigote or trypomasiigote forms of the parasite. Epimastigotes were obtained from culture at the exponential growth phase and the trypomastigotes from blood of infected and immunosuppressed mice. Antigen of both parasite forms was obtained by sonication of the parasites followed by centrifugation. Both antigens were then conjugated to activated Sepharose 4B. Affinity chromatography was performed by passing sera from chagasic patients through an immunoadsorbent column containing either epimasiigote or trypomasiigote antigens. Antibodies bound to the column were eluted with cold 0,2 M glycine buffer pH 2,8. The eluted antibodies were analysed regarding their isotype and lytic activity. The results showed that anti-T. cruzi lytic antibodies present in sera from chagasic patients are mainly located in the IgG isotype and recognize epitopes present in both trypomasiigote and epimastigote forms. A brief report of this work has already been published12.

Effect of scorpion toxin on the enterochromaffin-like cells in normal and Trypanosoma cruzi-infected rats: a morphological study

Intravenous injection of scorpion toxin (Tityus serrulatus) in normal and Trypanosoma cruzi infected rats did not cause ultrastructural morphologic changes on enterochromaffin-like (ECL) cells of the stomach, although it induced a significant increase of the gastric secretion. Our data seem to indicate that gastric ECL cells structure is not affected by stimulation with scorpion toxin or by acute infection with T. cruzi in the rat.

Natural Trypanosoma cruzi infection in dogs of endemic areas of the Argentine Republic

The population dynamics and the prevalence of chagasic infection of 352 dogs living in 108 rural houses infested by triatomines were studied. The region was divided into three sections according to increasing distances to an urban area. Each animal was identified by means of its particular characteristics and built, and its owners gave information about its habits. By means of xenodiagnosis, serology and ECG studies, prevalences of infection, parasitological-serological correlation, percentage of altered electrocardiographic outlines and percentage of houses with parasitemic dogs, were determined. The rural area showed a characteristic T. cruzi infection pattern and differences in the canine population parameters with respect to the other areas were observed: a higher proportion of puppies than adult dogs, a more sedentary population, higher prevalences of infection, as measured by xenodiagnosis, in dogs, and the highest proportion of bedroom insects infected with T. cruzi. It is assumed that the sedentary characteristics of the human population in that rural area impinge in the blood offer to the triatomine population, and the high percentage of parasitemic dogs of the area, contribute to the rise of "kissing ougs" infected with T. cruzi found in bedrooms.

Estudo sorológico de infecções experimentais por Trypanosoma evansi, em cobaias

Comparamos os métodos de Imunofluorescência Indireta (IFI), Imunodifusão Radial Dupla e Aglutinação, para a pesquisa de anticorpos em soros, na tripanossomíase experimental por Trypanosoma evansi, em cobaias. Foram obtidas 20 amostras de soro correspondentes às 4 primeiras semanas de infecção. A IFI foi positiva em apenas 6 animais, com títulos variando de 1:4 a 1:16. Os títulos mais altos foram observados na 3ª semana pós-infecção. Anticorpos aglutinantes foram observados a partir da 1ª semana pós-infecção e, após a 2ª semana, todos os animais apresentaram reação de aglutinação positiva, com títulos variando de 1:8.000 a 1:250.000. O tratamento dos soros com 2-Mercapto-etanol inibiu a reação de aglutinação, sugerindo ser IgM a principal classe dos anticorpos presentes no soro dos animais infectados. Não se constatou a presença de anticorpos precipitantes durante todo o curso da infecção.

Differences in the antigenic profile of bloodstream and cell culture derived trypomastigotes of Trypanosoma cruzi

A comparative study of the antigenic profile of bloodstream and cell culture derived trypomastigotes showed many differences in their components. Using mouse anti-T. cruzi antibodies the differences were located mostly in the 120 kDa band, whereas using chagasic patient sera the differences were located in the 85 and 52 kDa bands. These findings might explain known physiological differences between trypomatigotes obtained from cell culture and from infected blood. A brief report of this work has already been published9.

Prevention of electrocardiographic and histopathologic alterations in the murine model of Chagas' disease by preinoculation of an attenuated Trypanosoma cruzi strain

The effects of infection with Trypanosoma cruzi on the electrocardiographic tracings of mice were studied in 4.groups of animals: (1) normal; (2) infected with a pathogenic T. cruzi strain (TS COB); (3) immunized with 3 intraperitoneal inocula of 10(6) attenuated T. cruzi epimastigotes (TCC) and (4) immunized-infected, which sequentially received the treatments of groups 3 and 2. Infection and protection were confirmed by xenodiagnosis and histopathology. Isolated alterations such as extrasystolia, 1st degree atrioventricular block, arrhythmia and ST elevation were observed in normal as well as infected mice. However, tracings taken repeatedly on each mouse over a 293 day period revealed a set of alterations which were more frequently seen in infected (14/22) than in normal (4/27) animals (p = 0.00048). These alterations consisted of supraventricular tachycardia, sinus bradycardia and persisting, first degree AV blocks, often associated to pacemaker changes. Inoculation of attenuated T. cruzi (group 3) did not increase these alterations (2/27 mice) but significantly prevented their development after challenge with the pathogenic strain (1/19 versus 14/22 mice, p = 0.000095). Thus, preimmunization reduced not only parasitemia but also a pathogenic consequence of T. cruzi infection. This evidence is relevant for immunoprevention studies against Chagas' disease.

El inmunoensayo enzimático (ELISA) en el diagnóstico serológico de Plasmodium vivax

Comunicamos nuestra experiencia con la aplicación del inmunoensayo enzimático al diagnóstico serológico de Plasmodium vivax con antígeno homólogo. Este se obtuvo a partir de una muestra de sangre de un paciente y luego de lisar los glóbulos rojos con detergente (NP-40). En un "pool" conformado con 11 sueros de pacientes con malaria por P. vivax se encontraron anticuerpos de las clases IgM, IgG e IgA. Se introdujo además la proteína A como sonda secundaria para determinar la respuesta anti-P. vivax en una muestra de 30 sueros de pacientes con un primer episodio palúdico. Se encontró un 93% de correlación con el diagnóstico parasitológico y la prueba resultó específica y reproducible.

Efecto de la reinfección sobre la evolución de ratas infectadas con Trypanosoma cruzi

El objetivo de este trabajo fue comprobar si una de las variables medio-ambientales, la reinfección, puede modificar el comportamiento observado en un modelo de rata a nivel de parasitemia, anticuerpos séricos, manifestaciones electrocardiográficas y/o lesión miocárdica. Los grupos experimentales fueron: GI: ratas infectadas al destete con 1 x 10(6) T. cruzi; GR: igual a GI más reinfecciones cada 30 días hasta los 150 días post-infección inicial (p.i.i.); GI1 ratas de 51 días infectadas; GT: testigos. Se detectó parasitemia alta en GI y GR hasta los 20 días p.i.i. tendiendo a negativizarse al día 30. En GR no se observaron parásitos despúes del primer reinóculo, resistencia que no es debida sólo a la mayor edad del huésped pués hubo parasitemia en GI1. Los xenodiagnósticos fueron negativos en los tres grupos. Los anticuerpos séricos no se modificaron significativamente en GR respecto de GI, salvo en los anticuerpos 7S, pues los del GR presentaron títulos superiores en algunos de los días estudiados. Los ECG basales no mostraron cambios distintivos en las ratas infectadas. La prueba de ajmalina mostró una disminución de la FC independiente del tratamiento; el PR, QaT y QRS se prolongaron significativamente en todos los grupos respecto del basal (p < 0.05), salvo el QaT en el GT; además, el cambio de PR y QaT fue mayor en los infectados (p < 0.05). En los grupos infectados hubo también una amplia variación en la orientación del eje eléctrico respecto del valor basal, acompañado de cambios morfológicos más manifiestos en GR. La proporción de lesión cardíaca detectada histológicamente en los grupos infectados, fue significativamente superior a la del GT (p < 0.01). Se concluye que la reinfección no reproduce el cuadro agudo inicial y no modifica el tipo y grado de lesión cardíaca observada histológicamete. La prueba de ajmalina muestra cambios electrocardiográficos compatibles con daño miocárdico incipiente en las ratas infectadas y sugieren mayor compromiso en el grupo reinfectado.

Observações sobre a viabilidade do Trypanosoma cruzi no caldo da cana

Em Catolé do Rocha (Estado da Paraíba, Brasil) várias pessoas foram concomitantemente acometidas de doença de Chagas, em fase aguda. A propósito desse evento, houve cogitação de que o Trypanosoma cruzi foi veiculado pela via digestiva, através de ingestão de caldo de cana acidentalmente contaminado. Com o presente estudo, verificamos que o parasita permaneceu viável, durante quatro horas, no líquido em questão mantido em temperatura ambiente. Ao mesmo tempo, comprovamos que após uma hora ele pôde promover infecção em camundongo ao ser administrado por meio de sonda gástrica, renovando o interesse já demonstrado quanto a esse mecanismo alternativo de transmissão.

Simultaneous identification of Trypanosoma cruzi surface and internal antigens reactive to different immunoglobulin classes (radio-immunoblotting)

A radioactive Western-blotting technique was developed by which the reactivity of Immunoglobulins (Igs) from different classes to both membrane radiolabelled and internal parasite antigens is simultaneously identified. The method includes radioiodination of parasites, polypeptide fractionation by SDS-PAGE, Western-blot transfer and autoradiography of the immunoblots developed with anti-Igs conjugates labelled with enzymes. The analysis is then performed by the comparison of common bands on the autoradiograms and the respective substrate stained nitrocellulose blots. This technique was used to analyse T. cruzi trypomastigote surface labelled antigens reactive to IgM, IgA and IgG specific antibodies. A different pattern of reactivity with acute Chagas' disease patients sera was thus obtained.

Trypanosoma cruzi: modification of alkaline phosphatase activity induced by trypomastigotes in cultured human placental villi

Human term placental villi cultured ''in vitro" were maintained with bloodstream forms of Trypanosoma cruzi during various periods of time. Two different concentrations of the parasite were employed. Controls contained no T. cruzi. The alkaline phosphatase activity was determined in placental villi by electron microscopy and its specific activity in the culture medium by biochemical methods. Results showed that the hemoflagellate produces a significant decrease in enzyme activity as shown by both ultracytochemical and specific activity studies and this activity was lower in cultures with high doses of parasites. The above results indicate that the reduction in enzyme activity coincides with the time of penetration and proliferation of T. cruzi in mammalian cells. These changes may represent an interaction between human trophoblast and T. cruzi.

Análise da freqüência de recaídas de malária por Plasmodium vivax em região não endêmica (São Paulo, Brasil)

Em virtude da existência de poucas informações, devidamente registradas, sobre freqüência e épocas de recaídas de malária por Plasmodium vivax, contraída no Brasil, foi analisada casuística observada em região não endêmica e constituída por pacientes corretamente tratados. O índice de recaídas documentadas em São Paulo, foi alto (24,5%), com desenvolvimento precoce na maioria das oportunidades, ou seja, em tempo inferior a três meses.

Epidemiological survey of Trypanosoma cruzi infection in North-Eastern Brazil using different diagnostic methods

A survey of the prevalence of Trypanosoma cruzi infection was carried out in Oitis, a small community in the State of Piaui, Brazil. Two hundred and sixty five individuals were screened by microscopic examination, hémoculture, indirect immunofluorescence (IFA), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) using the monoclonal antibody TCF87 against to a 25kd T. cruzi antigen. Seropositivity was 14.3% by the IFA test, 14.7% by ELISA, and 13.2% by C-ELISA. The C-ELISA using the TCF87 monoclonal antibody seems to be applicable in serodiagnosis of Chagas' disease.