A novel dual-fluorescence strategy for functionally validating microRNA targets in 3-prime untranslated regions: regulation of the inward rectifier potassium channel Kir2.1 by miR-212.

Gene targeting by microRNAs is important in health and disease. We developed a functional assay for identifying microRNA targets and applied it to the K+ channel Kir2.1 (KCNJ2) which is dysregulated in cardiac and vascular disorders. The 3'UTR was inserted downstream of the mCherry red fluorescent protein coding sequence in a mammalian expression plasmid. MicroRNA sequences were inserted into the pSM30 expression vector which provides enhanced green fluorescent protein as an indicator of microRNA expression. HEK293 cells were co-transfected with the mCherry-3'UTR plasmid and a pSM30-based plasmid with a microRNA insert. The principle of the assay is that functional targeting of the 3'UTR by the microRNA results in a decrease in the red/green fluorescence intensity ratio as determined by automated image analysis. The method was validated with miR-1, a known downregulator of Kir2.1 expression, and was used to investigate targeting of the Kir2.1 3'UTR by miR-212. Red/green ratio was lower in miR-212-expressing cells compared to non-targeting controls, an effect that was attenuated by mutating the predicted target site. MiR-212 also reduced inward rectifier current and Kir2.1 protein in HeLa cells. This novel assay has several advantages over traditional luciferase-based assays including larger sample size, amenability to time course studies and adaptability to high-throughput screening.

Il Piano della Performance nei Comuni medi. La proposta di una nuova configurazione per superare l’inadeguatezza delle prime applicazioni

Il D.Lgs. 150/09 ha inteso dar vita ad una “riforma organica” della PA italiana, improntandone il funzionamento a logiche di programmazione e controllo delle performance. Attorno a tale concetto la riforma ha costruito un Sistema teso a programmare, misurare, controllare, valutare e comunicare la performance degli enti. Il lavoro si focalizza sulla programmazione, e in particolare sullo strumento cardine introdotto dal D.Lgs. 150/09: il Piano della Performance (PdP). Il contributo, basato su una metodologia deduttivo-induttiva, si concentra sui comuni medi italiani, scelti in quanto statisticamente rappresentativi del livello medio di complessità degli enti locali. Sono stati oggetto di indagine i PdP pubblicati sui siti istituzionali degli enti considerati, al fine di verificarne sia il livello di aderenza alle Linee Guida (LG) emanate dalla Commissione Indipendente per la Valutazione, la Trasparenza e l’Integrità delle amministrazioni pubbliche (CIVIT) e dalla Associazione Nazionale Comuni Italiani (ANCI), sia il loro livello di adeguatezza economico-aziendale. Preliminarmente si indagherà il tema della programmazione, sotto il profilo normativo-dottrinale, concentrandosi su soggetti, processi e strumenti. Poi si sposterà il focus sul PdP: dopo aver definito obiettivi, quesiti e metodologia della ricerca, verranno esplicitate le configurazioni di PdP emergenti dalle LG CIVIT e ANCI. Verranno poi illustrati i risultati della ricerca empirica, mettendo in luce il livello di allineamento dei PdP dei comuni medi alle LG, nonché il livello di adeguatezza economico-aziendale degli stessi. Si tratteggeranno quindi alcune brevi conclusioni.

External validation of the 2008 Framingham cardiovascular risk equation for CHD and stroke events in a European population of middle-aged men. The PRIME study

To test the applicability of the sex-specific 2008 Framingham general cardiovascular risk equation for coronary heart disease (CHD) and stroke in European middle-aged men from Ireland and France.