N-acetilcisteína e trolox na conservação de células espermáticas epididimárias de cães

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Efeitos de reguladores do metabolismo lipídico no desenvolvimento in vitro de embriões bovinos e na sobrevivência à vitrificação

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Utilização de sistemas de refrigeração de sêmen equino na estabilização das amostras seminais previamente à congelação

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Trehalose and a calcium chelator for ram semen cryopreservation

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Alterações celulares induzidas pelo estresse térmico em embriões bovinos

Fundação de Apoio à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Caracterização de célula progenitora hepática no cultivo celular de fígado de feto canino

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeito da adição de butil-hidroxitolueno nos meios de refrigeração e congelação sobre a viabilidade espermática de equinos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Perfil lipídico da membrana citoplasmática de espermatozoides in natura e criopreservados de jumentos e cavalos

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Estudo sobre a redução do estresse oxidativo em sêmen equino a partir da adição de quercetina nos diluentes de refrigeração e congelação

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos do acetato de deslorelina sobre a produção in vivo e in vitro de embriões de gatas domésticas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudo sobre a redução do estresse oxidativo em sêmen equino a partir da adição de quercetina nos diluentes de refrigeração e congelação

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos do acetato de deslorelina sobre a produção in vivo e in vitro de embriões de gatas domésticas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Effects of different cryopreservation methods on post-thaw culture conditions of in vitro produced bovine embryos

The aim of this work was to evaluate the effect of cryopreservation protocols on subsequent development of in vitro produced bovine embryos under different culture conditions. Expanded in vitro produced blastocysts (n = 600) harvested on days 7-9 were submitted to controlled freezing [slow freezing group: 10% ethylene glycol (EG) for 10 min and 1.2 degrees C/min cryopreservation]; quick-freezing [rapid freezing group: 10% EG for 10 min, 20% EG + 20% glycerol (Gly) for 30 s]; or vitrification [vitrification group: 10% EG for 10 min, 25% EG + 25% Gly for 30 s] protocols. Control group embryos were not exposed to cryoprotectant or cryopreservation protocols and the hatching rate was evaluated on day 12 post-insemination. In order to evaluate development, frozen-thawed embryos were subjected to granulosa cell co-culture in TCM199 or SOFaa for 4 days. Data were analyzed by PROC MIXED model using SAS Systems for Windows (R). Values were significant at p < 0.05. The hatching rate of the control group was 46.09%. In embryos cultured in TCM199, slow freezing and vitrification group hatching rates were 44.65 +/- 5.94% and 9.43 +/- 6.77%, respectively. In embryos cultured in SOFaa, slow freezing and vitrification groups showed hatching rates of 11.65 +/- 3.37 and 8.67 +/- 4.47%, respectively. In contrast, the rapid freezing group embryos did not hatch, regardless of culture medium. The slow freezing group showed higher hatching rates than other cryopreservation groups. Under such conditions, controlled freezing (1.2 degrees C/min) can be an alternative to cryopreservation of in vitro produced bovine embryos.

Viabilidade celular da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos após o processo de congelamento e descongelamento

Cinco cavalos adultos foram submetidos à coleta de medula óssea do esterno e de tecido adiposo da região glútea. As amostras foram processadas para obtenção da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo, o número de células obtidas e a viabilidade celular foram determinados. Em seguida, realizou-se o congelamento das amostras em solução contendo 20% de soro fetal bovino e 10% de dimetilsulfóxido. Depois de um mês, realizou-se o descongelamento das amostras e a viabilidade celular foi novamente mensurada. Os resultados revelaram que as técnicas utilizadas tanto para coleta de medula óssea quanto de tecido adiposo em equinos são simples, rápidas e seguras. As metodologias adotadas para o processamento das amostras foram eficientes, obtendo-se aproximadamente 95% de viabilidade celular. Após o descongelamento, a viabilidade média das amostras de células mononucleares da medula óssea foi de 86% e da fração vascular estromal do tecido adiposo de 64%. Frente à importância da terapia celular na clínica médica de equinos, concluiu-se que é necessária a realização de mais estudos, visando padronizar uma técnica de criopreservação que mantenha a integridade das células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos.

Storage of bovine reproductive tissues and RNA extracts on ice for 24h or repeated freeze–thaw cycles do not affect RNA integrity

The aims of this study were to test (i) the effect of time of tissue and RNA extracts storage on ice and (ii) the effect of repeated freeze–thaw cycles on RNA integrity and gene expression of bovine reproductive tissues. Fragments of endometrium (ENDO), corpus luteum (CL) and ampulla (AMP) were subdivided and incubated for 0, 1, 3, 6, 12 or 24 h on ice. RNA extracts were incubated on ice for 0, 3, 12 or 24 h, or exposed to 1, 2, 4 or 6 freeze–thaw cycles. RNA integrity number (RIN) was estimated. Expression of progesterone receptor (PGR) and cyclophilin genes from RNA extracts stored on ice for 0 or 24 h, and 1 or 6 freeze–thaw cycles was measured by qPCR. Tissue and RNA extract incubation on ice, and repeated freeze–thaw cycles did not affect RIN values of RNA from ENDO, CL or AMP. Storage on ice or exposure to freeze–thaw cycles did not affect Cq values for PGR or cyclophilin genes. In conclusion, neither generalized RNA degradation nor specific RNA degradation was affected by storage of tissue or RNA extracts on ice for up to 24 h, or by up to 6 freeze–thaw cycles of RNA extracts obtained from bovine ENDO, CL and AMP.