芦笋抗氨基酸及氨基酸类似物突变体的筛选

由芦笋无菌苗诱导得到的愈伤组织，经甲基磺酸乙酯（EMS）诱变处理后，进行抗氧乙基半胱氨酸(AEC)和赖氨酸加苏氨酸(Lys十Thr)的突变体筛选工作，得到如下结果: ①AE C可抑制芦笋愈伤组织的生长，但此抑制作用可被赖氨酸或甲硫氨酸都分解除。利用AEC的抑制作用筛选得到抗0.5mMAEC的愈伤组织AR10并再生植株。AR10愈伤组织离开选择剂两代后仍保持对AE C的抗性。还发现抗性愈伤组织对2mM的半胱氨酸的抑制作用具有交叉抗性，对1mM的Lys+Thr的抑制作用有较弱的交叉抗性。AR10的再生植株一部分表出对A EC的抗性，另一部分则无抗性氨基酸分析表明，抗性愈伤组织内游离赖氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸有所增加，而在开生植株中发现了半胱氨酸和赖氨酸的特异性增加（分别是对照的4•56和5 •39倍)。AR10的抗性机理目前尚不清楚。 ②2mM的Lys十Thr Lys+Thr对芦笋愈伤组织生长具有抑制作用。甲硫氨酸可部分解除.Ly s十Thr的抑制作用。用2mM的Lys+Thr筛选得到的抗性细胞系LTR2. LTR3，在离开选择压力一代，细胞增殖五倍的情况下仍保持对选择剂的稳定抗性。LTR2、L T R3愈价组织对A E C如仰制作用表现出部分的交叉抗性。另外还发现抗性系对苏氨酸(2mM )的生长抑制作用具有抗性，对赖氨酸(2mM)的生长抑制作用却无抗性，氨基酸分析表明。LTR2LTR3愈份组织内游离赖氨酸含量明显提高(分别是对照的2•18和2.67倍)，另发现一种峰值介于赖氨酸与游离氨之间的未知氨基酸增加更为显著(分别是对照的4•03和11•42倍)。这些结果表明抗性愈伤组织内氨基酸合成的某些关键酶可能发生了改变，对末端物的反馈抑制敏感性有所降低。