Papel das hemaglutininas 67-72p de Corynebacterium diphtheriae na ligação a proteínas plasmáticas, superfícies celulares, invasão e indução de apoptose

Corynebacterium diphtheriae pode ser isolado tanto de quadros de difteria clássica, quanto de infecções sistêmicas, como endocardite. O fibrinogênio (Fbn) e a fibronectina (Fn) são glicoproteínas presentes na matriz extracelular de tecidos conjuntivos. A influência destas proteínas na patogênese das infecções locais e invasivas causadas por C. diphtheriae é objeto de estudo devido ao fato do bacilo diftérico poder ser encontrado em lesões nas quais o Fbn e a Fn são predominantes, incluindo a pseudomembrana diftérica e vegetações cardíacas presentes na endocardite infecciosa. São crescentes as evidências de que o C. diphtheriae pode, além de aderir, ser internalizado por células em cultura. No presente estudo, investigou-se a participação de C. diphtheriae e das proteínas de superfície 67-72p na aderência à Fn e ao Fbn de plasma humano e a eritrócitos. A aderência às células HEp-2 e internalização também foram analisadas. A participação de 67-72p nos mecanismos de morte celular foi avaliada através das colorações por Azul de Tripan e 46-diamidino-2-fenil indol (DAPI), pelo ensaio de redução utilizando dimetil-tiazol-difenil tetrazólio (MTT) e por citometria de fluxo. As 67-72p foram extraídas da superfície da amostra toxigênica C. diphtheriae subsp. mitis CDC-E8392 através de processos mecânicos e precipitação com sulfato de amônio saturado. Análises por SDS-PAGE e immunoblotting detectaram a presença das bandas protéicas de 67 e 72kDa nas amostras toxinogênicas e atoxinogênicas analisadas, as quais pertenciam aos biotipos fermentador e não fermentador de sacarose. C. diphtheriae foi capazes não só de formar agregados na presença de plasma de coelho, mas também de converter Fbn em fibrina independentemente da presença do gene tox. No entanto, a amostra atoxinogênica ATCC 27010 (tox-) foi menos aderente ao Fbn do que a homóloga ATCC 27012 (tox+). A interação bacteriana com eritrócitos foi inibida somente pela Fn. Ligações entre Fn e/ou Fbn com 67-72p foram demonstradas por dot blotting, ELISA e/ou ensaios utilizando fluorescência. As 67-72p foram capazes de inibir as interações bacterianas com o Fbn, indicando que 67-72p podem participar do processo de aderência do patógeno aos tecidos do hospedeiro. Através da microscopia óptica, demonstrou-se a ligação de 67-72p adsorvidas em microesferas de látex com células HEp-2. Anticorpos de coelho do tipo IgG anti 67-72p interferiram somente com a expressão do padrão de aderência do tipo difuso, normalmente apresentado pela amostra CDC-E8392. A Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) e a inibição da internalização bacteriana pela IgG anti 67-72p ou por 67-72p indicaram o papel de 67-72p como invasina. Alterações do citoesqueleto de células HEp-2 com acumulação de actina polimerizada, induzida por microesferas sensibilizadas com 67-72p, foi observada pelo fluorescent actin staining (FAS) test. Foi visualizado um aumento no número de bactérias viáveis no compartimento intracelular após tratamento de células HEp-2 ou dos microrganismos com Fn. A presença de partículas de látex adsorvidas com 67-72p no interior de vacúolos frouxos em células HEp-2 sugeriu que estas proteínas podem causar efeito citotóxico. A avaliação através das colorações com Azul de Tripan, DAPI e os ensaios de redução utilizando MTT demonstraram um decréscimo na viabilidade de células tratadas com 67-72p. As mudanças morfológicas observadas 3 horas após o início do tratamento com 67-72p incluíram vacuolização, fragmentação nuclear e formação de corpúsculos apoptóticos. A citometria de fluxo revelou um decréscimo de 15,13% no volume/tamanho de células tratadas com 67-72p. Além disso, o ensaio utilizando Iodeto de Propídio (IP) e Anexina V (AV)-FITIC demonstrou que havia 66,1% de células vivas (IP-/AV-), 16,6% de células em apoptose inicial (IP-/AV+) e 13,8% de células em apoptose tardia ou necrose secundária. Em conclusão, as 67-72p estão diretamente envolvidas na interação com Fn e Fbn. As proteínas não fimbriais 67-72p são hemaglutininas implicadas na aderência a células respiratórias e na internalização. Além disso, estas proteínas podem atuar como fatores de virulência em potencial para induzir apoptose de células epiteliais nos estágios iniciais da difteria e nas infecções invasivas causadas pelo C. diphtheriae

Resposta adaptativa e efeitos das substâncias oxidantes - K2TeO3, H2O2 e paraquate - na produção de biofilme de amostras de Corynebacterium diphtheriae isolados de origens diversas

A difteria é uma doença imunoprevinível que permanece endêmica em diversas regiões do mundo. Além dos casos de difteria clássica, doenças invasivas como endocardite, osteomielite, pneumonia e infecções relacionadas à cateter, tem acometido indivíduos adultos parcialmente imunizados. A natureza multifatorial dos fatores de virulência que favorecem a formação de biofilme e sobrevivência em macrófagos tem sido evidenciada para o Corynebacterium diphtheriae. Entretanto, escassos são os trabalhos que investigaram a influência de condições ambientais na virulência do patógeno. Uma vez que agentes oxidantes são capazes de gerar radicais livres e levar ao estresse oxidativo que, consequentemente, podem resultar em resposta adaptativa e influenciar na formação do biofilme e na virulência bacteriana, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar os efeitos do peróxido de hidrogênio (H2O2), paraquate e telurito de potássio (K2TeO3) em propriedades biológicas de cepas de C. diphtheriae de origens diversas. Os resultados demonstraram que as amostras de C. diphtheriae apresentaram níveis de resistência ao K2TeO3, H2O2 e paraquate, porém em intensidades variadas e independentes da capacidade de produção da toxina diftérica. Algumas amostras, toxinogênicas ou não, isoladas do trato respiratório superior demonstraram resposta adaptativa para H2O2 passando, portanto, a expressar resistência aumentada após uma prévia exposição ao referido agente oxidante. C. diphtheriae não exibiu respostas adaptativas para o K2TeO3 e paraquate. C. diphtheriae foi capaz de produzir biofilme na superfície de substratos abióticos de natureza hidrofílica (vidro) e hidrofóbica (poliestireno) na presença de agentes oxidantes K2TeO3, H2O2 e paraquate. A presença dos agentes oxidantes influenciou na formação de biofilme de algumas amostras. O paraquate inibiu a produção de biofilme de todas amostras. A amostra TR241 teve a produçao de biofilme inibida na presença dos três agentes oxidantes analisados. Por outro lado, a presença de H2O2 e do K2TeO3 estimulou a produção de biofilme de algumas amostras. Para todas as amostras de C. diphtheriae testadas, independentes das origens, biotipos e da capacidade de produção de toxina diftérica, os ensaios moleculares indicaram a presença de sequências gênicas cromossômicas homólogas, codificadores da proteína DIP 0906 (TeR) e da proteína DIP 1421 (OxyR), envolvidos na resistência ao telurito e na proteção contra o estresse oxidativo, respectivamente. Não foi observada correlação da suscetibilidade e a resposta adaptativa aos agentes oxidantes com as diferentes características bacterianas: origem, sítio de isolamento, produção de toxina diftérica, metabolização de sacarose e produção de biofilme. Em conclusão, o estresse oxidativo foi capaz de influenciar fatores de virulência do C. diphtheriae, como a capacidade de produçao de biofilme, que podem estar contribuindo para a patogenia da difteria clássica assim como de doenças invasivas causadas por cepas atoxinogênicas.

Aspectos clínico-epidemiológicos e microbiológicos de processos infecciosos causados por Corynebacterium spp em pacientes de centro de referência oncológico Rio de Janeiro, Brasil

Os resultados permitiram a redação de quatro artigos. Aspectos microbiológicos e clínicos de corinebacterioses em pacientes com câncer observados durante cinco anos foram descritos no Artigo 1. No Artigo 2 foram apresentados casos de bacteremia causados por corinebactérias invasivas não toxigênicas em dois períodos com intervalo de sete anos. As infecções em pacientes com câncer por C. diphtheriae, causando casos clínicos atípicos foram descritas no Artigo 3, além do estudo dos principais fatores de virulência de uma cepa de C. diphtheriae isolada de infecção associada ao cateter de nefrostomia foi descrita no Artigo 4. Resumidamente no Artigo 1, além dos aspectos clínico-epidemiológicos foram avaliados os perfis de resistência aos antimicrobianos e o potencial de virulência dos micro-organismos. Em cinco anos, 932 amostras de corinebactérias, com perfis de resistência aos antimicrobianos testados, foram isoladas de pacientes com câncer. As espécies predominantes foram Corynebacterium amycolatum (44,7%), Corynebacterium minutissimum (18,3%) e Corynebacterium pseudodiphtheriticum (8,5%). O uso de catéteres de longa permanência e a neutropenia, foram às condições importantes para infecção por corinebactérias. As doenças de base mais comuns foram os tumores sólidos. Pacientes hospitalizados apresentaram risco seis vezes maior de morrer, quando relacionadas às taxas de mortalidade com 30 dias (RC= 5,5; IC 95%= 1,15-26,30; p= 0,033). As bacteremias (Artigo 2) causadas por corinebactérias foram observadas em dois períodos: 2003-2004 (n=38) e de 2012-2013 (n=24). As espécies multirresistentes C. amycolatum e Corynebacterium jeikeium foram os principais responsáveis pelos quadros de bacteremia. Havia 34 pacientes com tumores sólidos e 28 pacientes com doenças linfoproliferativas, sendo que 21 deles apresentavam neutropenia e 54 utilizavam cateter venoso central. Em 41 pacientes havia infecção relacionada ou associada aos dispositivos intravasculares. Os pacientes com bacteremia responderam ao tratamento com vancomicina após a remoção do cateter. O comportamento agressivo da neoplasia, o tempo de internação hospitalar e o uso de CVC aumentaram o risco de bacteremias por Corynebacterium spp. No Artigo 3, 17 casos de infecções atípicas causadas por Corynebacterium diphtheriae foram diagnosticadas de 1996 a 2013. A incidência de C. diphtheriae correspondeu a 15,8 casos/100.000 admissões, 465 vezes maior que a incidência de difteria na população brasileira. Sintomas toxêmicos foram observados em nove pacientes, embora quadros de difteria clássica e endocardite não fossem observados. O perfil eletroforético em campo pulsado (PFGE) demonstrou um perfil de distribuição endêmica, apesar de haver dois casos de pacientes com o mesmo perfil eletroforético sugerindo transmissão relacionada aos cuidados à saúde. A adesão em superfícies bióticas e abióticas e produção de biofilme em cateter de poliuretano (Artigo 4) foi demonstrada em C. diphtheriae não toxigênico no sítio de inserção do cateter de nefrostomia. Os dados desses artigos permitiram concluir que (i) diferentes espécies de corinebactérias multirresistentes foram capazes de causar infecções em pacientes com câncer, incluindo bacteremias; (ii) C. diphtheriae foi capaz de causar infecções graves em indivíduos imunocomprometidos, incluindo infecções relacionadas ao uso de dispositivos invasivos em populações de risco, tais como pacientes com câncer.

Enterococcus faecalis: fatores de virulência relacionados aos processos de natureza endodôntica

O objetivo principal deste estudo foi investigar a interação de 24 cepas de E. faecalis isoladas de infecções endodônticas primárias às proteínas de matriz dentinária, como também a moléculas de matriz presentes em lesões de endocardites. A análise desta interação foi feita através de técnica enzimática, com confirmação pela técnica de fluorescência. Além disto, foi realizada a confirmação do isolamento da espécie E. faecalis, através da técnica de PCR para o gene 16SrRNA e a análise da presença de genes de virulência da referida espécie microbiana para aderência às supostas proteínas de matriz incluindo às de ligação ao colágeno (ace, gelE, esp, agg e efaA). O maior padrão de interação das cepas ocorreu com a fibronectina (83,4%), seguido pelo fibrinogênio (62,5%) e colágeno humano tipo I (52%). Curiosamente, a aderência observada para o colágeno do tipo I, foi de pequena magnitude, quando comparado com a amostra padrão da ATCC 29212. As cepas ATCC 29212, A1, A43 e A68 interagiram com todas as proteínas de matriz utilizadas neste estudo. Um percentual expressivo das cepas testadas apresentou amplificação para efaA (86,9%) e para ace (73,9%). Paralelamente, todas as cepas apresentaram amplificação para gelE e foram negativas para os genes agg e esp. Adicionalmente, não houve correlação entre a detecção dos genes de virulência e a interação às proteínas de matriz, evidenciando que, mesmo com a detecção dos genes nas amostras, se faz necessário avaliar a expressão gênica por qPCR.

Heterorhabditidoides chongmingensis gen. nov., sp nov (Rhabditida : Rhabditidae), a novel member of the entomopathogenic nematodes

During a recent soil sample survey in Eastern China, a new entomopathogenic nematode species, collected from the Chongming Islands in the southern-eastern area of Shanghai, was discovered. Morphological characteristics of different developmental stages of the nematode combined with molecular data showed that this nematode is a new genus of Rhabditidae, and described as Heterorhabditidoides chongmingensis gen. nov., sp. nov., for that it shares more morphological characteristics with heterorhabditids than with ste-inernematids. For males, the papillae formula of bursa is 1, 2, 3, 3, with constant papillae number in the terminal group, stoma tubular-shaped and about 1.5 head width; cheilorhabdions cuticularized, esophageal collar present and long, median bulb present. For infective juveniles, EP = 90 (80-105) mu m, ES = 104 (92-120) mu m, tail length = 111 (89-159) mu m, and a = 19.1 (15-21). The percentages of the nucleotides A, T, C and G in the ITS1 regions of the new species are significantly different from those of heterorhabditids and other rhabditids. Molecular phylogenetic trees based on 18S rDNA and the internal transcribed spacer (ITS) sequences data revealed that the new entomopathogenic nematode species forms a monophyletic group, which is a sister group of the clade comprised of some genera of Rhabditidae. (c) 2008 Elsevier Inc. All rights reserved.

无指盘臭蛙皮肤抗感染多肽组学研究

在过去的一个多世纪里，两栖类动物皮肤分泌液作为它们的第一道防御屏障引起了研究者们极大的兴趣，同时也开展了相关的许对研究，到目前为止，已从中分离鉴定出了百余种的活性物质。无指盘臭蛙是我国的一种特有两栖动物，初步的活性检测发现，无指盘臭蛙皮肤分泌液具有很强的抗菌，溶血以及蛋白酶抑制剂活性。 在本论文中，我们利用多肽组学与基因组学的方法对无指盘臭蛙皮肤的抗感染多肽组进行了研究。 通过三步分离纯化过程：一步Sephadex G-50分子筛和两步反相高压液相（RP-HPLC）的方法，从无指盘臭蛙皮肤分泌液中分离纯化得到了21条新的抗菌肽，它们分别属于17个不同的抗菌肽家族，其中8个分别属于已知的5个抗菌肽家族，它们是：Brevinin-1E(2个)、Brevinin-2E（1个）、Esculentin-1（1个）、Esculentin-2（1个）和Nigrocin（3个）抗菌肽家族。另外的13个抗菌肽与已发现的抗菌肽表现出较低的相似性，我们将它们归类到12种新的抗菌肽家族，它们是：Odorranain-A (1个)、Odorranain-B(1个)、 Odorranain-C(1个)、 Odorranain-G (1个)、Odorranain-H (2个)、 Odorranain-J (1个)、Odorranain-L (1个)、Odorranain-M (1个)、 Odorranain-N (1个)、 Odorranain-O (1个)、Odorranain-Q(1个)、 Odorranain-T(1个)。 从单个无指盘臭蛙皮肤里面，我们克隆得到了372条抗菌肽序列，它们编码107条新的抗菌肽，这一发现使得目前发现的两栖类抗菌肽的数目几乎增加了1倍。这也是目前发现的抗菌肽最为丰富的物种。这107条抗菌肽分别属于30个不同的抗菌肽家族，其中有24个为新的抗菌肽家族。这些抗菌肽的多样性可能是通过点突变、碱基的插入或删除、结构域的穿梭以及拼接等多种机制形成的。这些抗菌肽多样性的形成可能与无指盘臭蛙生活环境中微生物的组成有关。30个家族抗菌肽前体序列的SPD区域（包括信号肽和前导肽序列，Signal and Propiece Domain, SPD）非常保守，表明它们可能起源于同一个祖先基因。对7个抗菌肽家族的非同义碱基替代率Dn与同义碱基替代率Ds进行检测发现，它们可能经受着不同选择压力的作用。无指盘臭蛙皮肤抗菌肽在二级结构和功能上都表现出丰富的多样性。在一个两栖类个体里面发现如此丰富的抗菌肽甚是让人惊讶。这一发现也使得我们不得不重新认识先天性免疫在两栖类动物防御系统中的重要性，对两栖类生态环境的分子基础以及那种认为一种两栖类只需要20-30种抗菌肽就足以抵御环境中的微生物的看法重新审视。我们的研究还显示：无指盘臭蛙抗菌肽之间还存在着协同效用。 我们对无指盘臭蛙皮肤抗菌肽的去极化作用进行了研究，发现所检测的7个抗菌肽都可使金黄色葡萄球菌发生去极化，但是它们使细菌发生去极化的能力不同。对12种抗菌肽的抗菌机制研究发现，它们通过多种不同的机制发挥作用：有些在细菌内形成片层样的囊泡状结构，有些导致细胞质壁的分离，有些在细菌的膜上形成穿孔，有些则导致了细菌染色质的固缩。 总之，这些研究为设计新型的抗菌肽提供了有用的参考资料。

Development and characterization of monoclonal antibodies to spring viraemia of carp virus

Five monoclonal antibodies (mAbs) against spring viraemia of carp (SVCV0504, isolated from common carp in China) were produced from mice immunized with purified virus preparations. The virion of SVCV contains five structural proteins, representing the nucleoprotein (N), phosphoprotein (P), matrix protein (M), glycoprotein (G) and RNA-dependent RNA polymerase (Q. Western blotting analysis revealed that three mAbs (1145, IE10, and 11-17) recognized specifically to a single protein of 47 kDa (N), the mAb 3G4 reacted with, two SVCV0504 proteins of 69 kDa (G) and 47 kDa (N), while the mAb 1A9 reacted with three SVCV0504 proteins of 69 kDa (G), 50 kDa (P), and 47 kDa (N). By indirect ELISA, two mAbs (1H5 and 11-17) showed cross-reactivity with pike fry rhabdovirus (PFRV), but no cross-reactions with the Siniperca chuatsi rhabdovirus (SCRV), Scophthalmus maximus rhabdovirus (SMRV), Paralichthys olivaceus rhabdovirus (PoRV) were demonstrated with the five mAbs. Indirect immunofluorescence showed intense fluorescence in the cytoplasm of the SVCV0504-infected epithelioma papulosum cyprini (EPC) cells in areas corresponding to the location of granular structures. The sucrose gradient-purified SVCV0504 particles could be detected successfully by these mAbs using immunodot blotting. mAb 1A9 could completely neutralize 100 TCID50 (50% tissue culture infective dose) of SVCV0504 at a dilution of 1:8. This is the first report of development of the neutralizing mAbs against SVCV. The mAb 1A9 was analyzed further and could be used to successfully detect viral antigens in the infected-EPC cell cultures or in cryosections from experimentally infected crucian carp (Carassius auratus) by immunohistochemistry assay. Furthermore, a flow cytometry procedure for the detection and quantification of cytoplasmic SVCV0504 in cell cultures was developed with mAb 1A9. At 28 h after inoculation with the virus (0.01 PFU/cell), 10.12% of infected cells could be distinguished from the uninfected cells. These mAbs will be useful in diagnostic test development and pathogenesis studies for fish rhabdovirus. (c) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Doença periodontal e AVC

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Medicina Dentária

Nutraceutical and functional food bioactive peptides in beef

In recent years, the potential to positively modulate human health through dietary approaches has received considerable attention. Bioactive peptides which are released during the hydrolysis or fermentation of food proteins or following digestion may exert beneficial physiological effects in vivo. The aim of this work was to isolate, characterise and evaluate Angiotensin-І-converting enzyme (ACE-І) inhibitory, antimicrobial and antioxidant peptides from the bovine myofibrillar proteins actin and myosin. In order to generate these peptides, the myofibrillar proteins actin and myosin were hydrolysed with digestive enzymes pepsin, trypsin and α-chymotrypsin, or with the industrial thermolysin-like enzyme “Thermoase”, Amano Inc. It was found that each hydrolysate generated contained peptides which possessed ACE inhibitory, antioxidant and antimicrobial activity. The peptides responsible in part for the observed ACE inhibitory, antioxidant and antimicrobial activity of a number of hydrolysates were isolated using the method of RP-HPLC and the bioactive peptides contained within each active fraction was determined using either MALDI-TOF MS/MS or N-terminal peptide sequencing. During the course of this thesis six ACE inhibitory and five antimicrobial peptides were identified. It was determined that the reported antioxidant activity was a direct result of a number of peptides working in synergy with each other. The IC50 values of the six ACE inhibitory peptides ranged in values of 6.85 to 75.7 µM which compare favourably to values previously reported for other food derived ACE inhibitory peptides, particularly the well known milk peptides IPP and VPP, IC50 values of 5 and 9 µM respectively. All five antimicrobial peptides identified in this thesis displayed activity against Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus and Listeria innocua with MIC values ranging from 0.625 to10 mM. The activity of each antimicrobial peptide was strain specific. Furthermore the role and importance of charged amino acids to the activity of antimicrobial peptides was also determined. Generally the removal of charged amino acids from the sequence of antimicrobial peptides resulted in a loss of antimicrobial activity. In conclusion, this thesis revealed that a range of bioactive peptides exhibiting ACE inhibitory, antioxidant and antimicrobial activities were encrypted in bovine myofibrillar proteins that could be released using digestive and industrial enzymes. Finally enzymatic hydrolysates of muscle proteins could potentially be incorporated into functional foods; however, the potential health benefits would need to be proven in human clinical studies.

Multivalent benzoboroxole functionalized polymers as gp120 glycan targeted microbicide entry inhibitors.

Microbicides are women-controlled prophylactics for sexually transmitted infections. The most important class of microbicides target HIV-1 and contain antiviral agents formulated for topical vaginal delivery. Identification of new viral entry inhibitors that target the HIV-1 envelope is important because they can inactivate HIV-1 in the vaginal lumen before virions can come in contact with CD4+ cells in the vaginal mucosa. Carbohydrate binding agents (CBAs) demonstrate the ability to act as entry inhibitors due to their ability to bind to glycans and prevent gp120 binding to CD4+ cells. However, as proteins they present significant challenges in regard to economical production and formulation for resource-poor environments. We have synthesized water-soluble polymer CBAs that contain multiple benzoboroxole moieties. A benzoboroxole-functionalized monomer was synthesized and incorporated into linear oligomers with 2-hydroxypropylmethacrylamide (HPMAm) at different feed ratios using free radical polymerization. The benzoboroxole small molecule analogue demonstrated weak affinity for HIV-1BaL gp120 by SPR; however, the 25 mol % functionalized benzoboroxole oligomer demonstrated a 10-fold decrease in the K(D) for gp120, suggesting an increased avidity for the multivalent polymer construct. High molecular weight polymers functionalized with 25, 50, and 75 mol % benzoboroxole were synthesized and tested for their ability to neutralize HIV-1 entry for two HIV-1 clades and both R5 and X4 coreceptor tropism. All three polymers demonstrated activity against all viral strains tested with EC(50)s that decrease from 15000 nM (1500 microg mL(-1)) for the 25 mol % functionalized polymers to 11 nM (1 microg mL(-1)) for the 75 mol % benzoboroxole-functionalized polymers. These polymers exhibited minimal cytotoxicity after 24 h exposure to a human vaginal cell line.

Developing drugs for developing countries.

Infectious and parasitic diseases create enormous health burdens, but because most of the people suffering from these diseases are poor, little is invested in developing treatments. We propose that developers of treatments for neglected diseases receive a "priority review voucher." The voucher could save an average of one year of U.S. Food and Drug Administration (FDA) review and be sold by the developer to the manufacturer of a blockbuster drug. In a well-functioning market, the voucher would speed access to highly valued treatments. Thus, the voucher could benefit consumers in both developing and developed countries at relatively low cost to the taxpayer.

Deforestation and the spatio-temporal distribution of savannah and forest members of the Simulium damnosum complex in southern Ghana and south-western Togo

Spatio-temporal data on cytotaxonomic identifications of larvae of different members of the Simulium damnosum complex collected from rivers in southern Ghana and south-western Togo from 1975 until 1997 were analysed. When the data were combined, the percentages of savannah blackflies (S. damnosum sensu stricto and S. sirbanum) in the samples were shown to have been progressively increasing since 1975. The increases were statistically significant (P < 0·001), but the rates of increase were not linear. Further analyses were conducted according to the collection seasons and locations of the samples, to account for possible biases such as savannah flies occurring further south in the dry season or a preponderance of later samples from northern rivers having more savannah flies. These analyses showed that the increasing trend was statistically significant (P< 0·0001) only during the periods April to June and October to December. The presence of adult savannah flies carrying infective larvae (L3) indistinguishable from those of Onchocerca volvulus in the study zone was confirmed by examinations of captured flies. The percentages of savannah flies amongst the human-biting populations and the percentages with L3s in the head were higher during dry seasons than wet seasons and the savannah species were found furthest south (5 °25′N) in the dry season. Comparisons of satellite images taken in 1973 and 1990 over a study area in south-western Ghana encompassing stretches of the Tano and Bia rivers demonstrated that there have been substantial increases in urban and savannah areas, at the expense of forest. This was so not only for the whole images but also for subsamples of the images taken at 1, 2, 4, 8 and 16 km distant from sites alongside the River Tano. At every distance from the river, the percentages of pixels classified as urban or savannah have increased in 1990 compared with 1973, while those classified as degraded or dense forest have decreased. The possibility that the proportionate increases in savannah forms of the vectors of onchocerciasis, and hence in the likelihood of the transmission of savannah strains of the disease in formerly forested areas, were related to the decreases in forest cover is discussed.

Treatment of effluents contaminated with prions. Chemical reactor design

The control and elimination of prionic infective agents that may be present in the effluents, turns out to be a complicated mechanism inside a High Containment bological Facility. There are two ways to carry out this neutralization: Installation of thermal systems to ensure achieve a minimum temperature of 134 ° C sterilization plateau for a residence time of 18 minutes, and the use of chemical reactors based on the addition of sodium hypochlorite so the mixture maintained 2% of free chlorine during the reaction period. This study presents the design phases, elements and benefits, of a chemical reactor that allows the treatment of prion effluents in order to serve as a model to biocontainment facilities with areas of animal experimentation, who want to develop their work with prions.

Studies on the immunoglobulin E responses to Teladorsagia circumcincta in sheep: purification of a major high molecular weight allergen.

Studies on the immunoglobulin (Ig)E immune responses to the gastric nematode, Teladorsagia circumcincta, have demonstrated a major high molecular weight allergen (HMWTc). Cross reactive allergens of similar MW were demonstrated for Trichostrongylus colubriformis and Cooperia curticei, but not for Haemonchus contortus. Purification of HMWTc was achieved by gel-filtration chromatography, and nonreducing SDS-PAGE and Western blot analysis revealed two closely associated bands with a molecular weight of approximately 140-150?kDa. Reduction showed four IgE reactive bands of 120, 50, 45 and 30?kDa, and deglycosylation abrogated the immunoreactivity of the 120 and 30?kDa bands. Ultrastructural immunolocalization by electron microscopy revealed that the IgE reactivity was confined to the cuticular surface of the infective (L3) larvae. ELISA studies to determine the IgE anti-HMWTc responses in lambs during their first grazing season, demonstrated significantly higher IgE antibody in lambs with low accumulative faecal egg count (FEC) compared to animals with high accumulative FEC. These studies provide evidence for a protective function of IgE antibody in Teladorsagia infections in lambs.

Antimicrobial activity of neuropeptides against a range of micro-organisms from skin, oral, respiratory and gastrointestinal tract sites

Many neuropeptides are similar in size, amino acid composition and charge to antimicrobial peptides. This study aimed to determine whether the neuropeptides substance P (SP), neurokinin A (NKA), calcitonin gene-related peptide (CGRP), neuropeptide Y (NPY) and vasoactive intestinal polypeptide (VIP), displayed antimicrobial activity against Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans. SP, NPY, VIP and CGRP displayed variable degrees of antimicrobial activity against all the pathogens tested with the exception of S. aureus. These antimicrobial activities add a further dimension to the immunomodulatory roles for neuropeptides in the inflammatory and immune responses. (c) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.