Pesquisa de ovos ��pesados�� de helmintos nas fezes: estudo comparativo entre os métodos da sedimenta����o espont��nea em ��gua e de Ritchie

Com a finalidade de melhor conhecer a sensibilidade do m��todo de Ritchie (centr��fugos edimenta����o em formol-��ter), quanto ao diagn��stico de parasitoses intestinais pelo exame das fezes, foi investigada a capacidade dele no sentido de detectar ovos ��pesados" de helmintos (Schistosoma mansoni e Ascaris lumbricoides inf��rteis). Houve compara����o com o desempenho do processo da sedimenta����o espont��nea em ��gua, usado com o mesmo intuito. Os resultados obtidos e a respectiva avalia����o estat��stica demonstraram que a t��cnica da sedimenta����o espont��nea em ��gua �� mais eficiente, tendo sido analisadas 300 amostras de fezes, metade das quais certamente contendo os dois tipos de ovos citados e a outra parte considerada em trabalho laboratorial rotineiro.

Aplica����o dos métodos de c��lculo de incertezas utilizados na calibra����o de balan��as manom��tricas (padr��es prim��rios de press��o)

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Mec��nica

Métodos de quantifica����o da chuva incidente em paredes

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Civil - Perfil de Constru����o

Identifica����o de micobact��rias n��o tuberculosas atrav��s de métodos moleculares n��o comerciais

Embora Mycobacterium tuberculosis, o agente etiol��gico da tuberculose humana, seja a principal causa de micobacteriose no Homem, outras micobact��rias n��o tuberculosas (MNT), podem tamb��m causar infec����o em seres humanos, sendo cada vez mais frequentemente isoladas no laborat��rio de micobacteriologia. Dada a morosidade da identifica����o de MNT por métodos convencionais, torna-se essencial o desenvolvimento de métodos r��pidos e fi��veis para a sua identifica����o. Neste estudo foram comparados tr��s métodos moleculares para a identifica����o de MNT, baseados na an��lise de restri����o enzim��tica ap��s amplifica����o de: (i) regi��o rRNA 16S-23S ���Internal Transcribed Spacer��� (ITS), (ii) gene hsp65, e (iii) zona ITS e regi��es adjacentes, 16S e 23S rDNA. Para este fim, avaliamos 50 isolados, correspondendo a 47 isolados cl��nicos de MNT e tr��s estirpes de refer��ncia, representando as 11 esp��cies de MNT mais frequentemente isoladas no laborat��rio de Micobact��rias do Instituto de Higiene e Medicina Tropical (IHMT, UNL) e uma estirpe refer��ncia de M. tuberculosis, e identificadas anteriormente utilizando o sistema comercial GenoType�� Mycobacterium CM/AS (Hain Lifescience). O PCR-RFLP do gene hsp65 proporcionou os melhores resultados, identificando correctamente 42 dos 49 isolados de MNT, pertencentes a M. avium, M. gordonae, M. intracellulare, M. kansasii, M. chelonae, M. fortuitum, M. abscessus, M. szulgai, M. peregrinum e M. xenopi. O PCR-RFLP da regi��o ITS identificou correctamente 28 dos 49 isolados testados, n��o distinguindo M. intracellulare/M. scrofulaceum, M. avium/M. bohemicum e M. kansasii/M. szulgai. Finalmente, o PCR-RFLP da regi��o ITS e regi��es adjacentes mostrou o pior desempenho, com apenas oito isolados correctamente identificados e falhando na amplifica����o de diversos isolados. Dos tr��s métodos testados, o PCR-RFLP do gene hsp65 e da regi��o ITS mostraram maior capacidade de identifica����o e reprodutibilidade. No entanto, a sua aplica����o exige uma optimiza����o cuidadosa das condi����es de an��lise e a sua aplicabilidade depende, em grande parte, da diversidade xi de MNT em cada laborat��rio. Verificaram-se tamb��m v��rias dificuldades a n��vel da interpreta����o dos resultados. Assim, apesar das vantagens referidas na literatura para estes tr��s métodos, verificou-se que o grau de variabilidade e dificuldade de interpreta����o associados aos padr��es obtidos, limitam a sua implementa����o no laborat��rio de diagn��stico de micobacteriologia.

Avalia����o de métodos de pr��-tratamento na gasifica����o da biomassa

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Energia e Bioenergia

Chagas cong��nito en Bolivia: est��dio comparativo de la eficacia y el costo de los métodos de diagnostico

Ochocientos veinte reden nacidosfRN) de ≤2500g de la Matemidad Percy Bolandfueron examinados entre 1988 y 1989por los diferentes métodos de diagn��stico de la enfermedad de Chagas (Patologia de placenta, serologia, parasitologia y cl��nica) con el prop��sito de determinar su eflcacia y costo. El examen histopatologico permiti�� detectar 87 casos de infecci��n placentaria. De este total, se observaron 43 (49%) casos RN positivos al examen parasitologico de la sangre del cordon. Este n��mero aumento con la repetici��n de la prueba durante el primer mes de vida del nino, alcanzando el mismo nivel que la histopatologia. Con el examen serol��gico se detectaron 2 casos positivos. El signo cl��nico de alia especificidad de la enfermedad de Chagas en RN es la hepato-esplecnomegalia. Se discuten ventajas y desventajas en cuanto a costo y factibilidad de dos estrategias de detecci��n de la enfermedad de Chagas cong��nito, la primera basada en la histopatologia y la otra en la parasitologia. Se concluye que los programas de detecci��n de la enfermedad de Chagas no pueden ser uniformes, yaquese deben tomar en cuenta aspectos deprevalencia de la enfermedad, existencia del vector y disponibilidad de t��cnicas de laboratorio.

Pesquisa de oocistos de Cryptosporidium sp em fezes: compara����o entre os métodos de Kinyoun modificado e de heine

Para diagnosticar a infec����o intestinal pelo Cryptosporidium sp, hoje bastante em foco pela n��o incomum participa����o no contexto da s��ndrome da imunodefici��ncia adquirida (AIDS), v��rias t��cnicas t��m sido indicadas. Com o intuito de esclarecer vantagens e desvantagens, envolvendo quantifica����o, morfologia, durabilidade do esfrega��o e tempo de prepara����o, comparamos os resultados obtidos mediante emprego de dois desses processos, ou seja, de Kinyoun modificado e de Heine, aplicados em amostras fecais de pacientes com AIDS. A sensibilidade foi bastante semelhante e a escolha deve depender da valoriza����o das virtudes de cada uma das t��cnicas, que s��o: quanto �� de Kinyoun modificada, a durabilidade dos esfrega��os e, a prop��sito da de Heine, a rapidez com que se d�� o preparo, aliada �� superioiidade quando o par��metro �� a quantidade de oocistos encontrados, mais freq��entemente verificada.

Desenvolvimento de métodos moleculares para a dete����o de Trypanosoma spp em glossinas (Diptera: Glossinidae) da Rep��blica da Guin�� Bissau

As moscas do g��nero Glossina s��o vetores de patologias provocadas por v��rias esp��cies de parasita do g��nero Trypanosoma, como a Tripanossomose Humana Africana e as Tripanossomoses Animais. A correta identifica����o destes tripanossomas �� um ponto fulcral quando se procura determinar o risco de doen��a que determinadas popula����es de glossinas podem provocar. No presente trabalho foram utilizadas e adaptadas diversas metodologias de diagn��stico molecular, nomeadamente o PCR em tempo real e o PCR-RFLP, que permitiram, atrav��s da utiliza����o de primers gen��ricos, a determina����o da carga parasit��ria e a correta identifica����o dos tripanossomas presentes no vetor. Os primers denominados Tryp18SF e Tryp18SR foram desenvolvidos especificamente para serem utilizados na identifica����o das esp��cies de tripanossoma utilizando PCR em tempo real com metodologia SYBR�� Green I e PCR-RFLP. Os primers denominados Tryp18S2F, Tryp18S2R e sonda Tryp18S2P foram desenvolvidos para a quantifica����o dos parasitas presentes nas amostras utilizando PCR em tempo real com metodologia Taqman��. Foi estudada uma amostra de 762 glossinas provenientes do territ��rio da Rep��blica da Guin��-Bissau, zona atualmente considerada como estando livre de Tripanossomose Humana Africana, mas onde n��o s��o realizadas atividades de recenseamento de casos desde o final da ocupa����o portuguesa. Das 762 glossinas utilizadas, 241 estavam infetadas com tripanossomas, o que representa uma percentagem de infe����o geral de 31,6 %. Destas glossinas, 28.63 % encontravam-se infetadas com Trypanosoma grayi, 14.11 % com Trypanosoma congolense, 7.05 % com Trypanosoma vivax e 0.83 % com Trypanosoma brucei brucei, tendo as infe����es mistas representado 1.66 %. N��o foi poss��vel a identifica����o conclusiva ao n��vel da esp��cie em 48.13 % das amostras positivas, tendo estas ficado consideradas como Trypanosoma spp. N��o foram identificados vetores infetados com tripanossomas respons��veis pelas patologias humanas. A utiliza����o de primers gen��ricos para a identifica����o permitiu obviar o n��mero de rea����es necess��rias para identificar corretamente o parasita respons��vel pela infe����o, e este trabalho �� de resto a primeira descri����o da utiliza����o de primers gen��ricos que permitam a identifica����o de Trypanosoma grayi. Esta �� tamb��m a primeira descri����o da utiliza����o de PCR em tempo real com metodologia Taqman�� para quantifica����o de tripanossomas, e a sua utiliza����o com primers gen��ricos aumenta a aplicabilidade em estudos epidemiol��gicos de grande escala. Palavras-chave: PCR em tempo real; PCR-RFLP; Rep��blica da Guin��-Bissau; Glossina; Trypanosoma; Tripanossomose.

Contribui����o para o conhecimento da Leptospirose humana na regi��o do Lobito (Angola): aplica����o de métodos de diagn��stico serol��gico e molecular

A Leptospirose �� um problema emergente na Sa��de P��blica, devido ��s suas propor����es epidemiol��gicas e pelo aumento da incid��ncia da doen��a em pa��ses industrializados e em desenvolvimento (Meites et al., 2004). A doen��a tem uma ampla distribui����o geogr��fica e ocorre com maior frequ��ncia nas zonas tropicais, subtropicais e temperadas (Vijayachari et al., 2008). Contudo, em algumas regi��es desconhece-se a verdadeira preval��ncia, sendo reportada atrav��s de surtos espor��dicos (Pappas et al., 2007). As manifesta����es cl��nicas inespec��ficas da infec����o podem ser subdiagnosticadas nas regi��es tropicais, onde as doen��as febris s��o comuns e onde podem ser confundidas com doen��as mais conhecidas como a Mal��ria, Hepatite Viral, Dengue e outras. Em Angola, o diagn��stico �� realizado apenas atrav��s da hist��ria do paciente e suspeita cl��nica, dando origem a diagn��sticos pouco precisos. Deste modo, �� importante o uso de métodos laboratoriais, especialmente testes serol��gicos espec��ficos, para a confirma����o do diagn��stico cl��nico (Levett, 2001). O objectivo principal deste estudo foi investigar a ocorr��ncia de Leptospirose humana em Lobito (Prov��ncia de Benguela) e identificar os serovares circulantes de Leptospira interrogans sensu lato (s.l.), utilizando t��cnicas serol��gicas e moleculares. Entre Abril e Junho de 2011, ap��s o necess��rio consentimento informado, fez-se um inqu��rito cl��nico-epidemiol��gico a 141 pacientes (64 homens e 77 mulheres) assistidos no Hospital Geral do Lobito, por cefaleias e febre com diagn��stico desconhecido, dos quais se colheram 141 amostras s��ricas e 36 amostras de urina. A avalia����o serol��gica foi inicialmente feita no laborat��rio local atrav��s da T��cnica de Aglutina����o Macrosc��pica sobre L��mina (MACROLepto) ��� teste de rastreio - e, posteriormente confirmada pela T��cnica de Aglutina����o Microsc��pica (TAM) - teste de refer��ncia - realizado no Laborat��rio de Leptospirose (IHMT, em Lisboa). Para a detec����o de DNA de Leptospira utilizou-se a Reac����o da Polimerase em Cadeia (PCR) com primers baseados no gene hap 1. Procedeu-se ainda �� sequencia����o dos produtos da PCR. As principais manifesta����es cl��nicas foram: cefaleias (73,8%), febre (65,2%), mialgias (41,1%) e n��useas (33,3%). Dos dados epidemiol��gicos observou-se que 131 dos pacientes tiveram contacto com os principais reservat��rios de leptospiras, os roedores, e 76 ingeriram ��gua n��o pot��vel. Os resultados serol��gicos revelaram no teste MACROLepto: 14 (10%) amostras positivas e 18 (13%) n��o-conclusivas, sendo os serogrupos Icterohaemorrhagiae (Copenhageni), Australis (Bratislava) e Sejroe os mais comuns. Destas amostras, cinco, foram confirmadas pela TAM (presen��a de aglutininas anti ��� L. interrogans s.l.). Paralelamente, o DNA de Leptospira foi detectado em 13+/81 (16%) das amostras s��ricas e numa amostra de urina. A sequencia����o identificou os serovares Copenhageni e Lai, ambos pertencentes ao serogrupo Icterohaemorrhagiae da esp��cie gen��mica L. interrogans. Os resultados obtidos mostraram que a maioria dos pacientes, mesmo aqueles que praticavam actividades de menor risco epidemiol��gico, tiveram contacto com roedores e com ��guas n��o pot��veis. O estudo tamb��m provou que a Leptospirose afectou sobretudo as mulheres adultas, admitindo-se que este achado possa ser comum noutras regi��es do Pa��s. Por ��ltimo, ficou demonstrada a exist��ncia de Leptospirose na regi��o, o que poder�� contribuir para a inclus��o da doen��a na lista de doen��as febris em Angola e noutros pa��ses tropicais.

Avalia����o e optimiza����o de métodos de correc����o de atenua����o em PET

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Biom��dica

Uniformiza����o dos métodos de avalia����o do estado de conserva����o de edif��cios definidos no quadro legal portugu��s

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Civil - Perfil de Constru����o

Seguran��a estrutural em geotecnia atrav��s de métodos de base probabil��stica

Disserta����o elaborada no Laborat��rio Nacional de Engenharia Civil para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Civil no Ramo de Geotecnia pela Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa, no ��mbito do protocolo de coopera����o entre a FCT/UNL e o LNEC

Chlamydia trachomatis: gen��tipos circulantes, compara����o de métodos para o seu diagn��stico e necessidade do seu rastreio

As infec����es urogenitais originadas por Chlamydia trachomatis t��m aumentado nos ��ltimos anos em todo o mundo, afectando essencialmente jovens adultos com vida sexual activa. O seu rastreio recomenda-se nas mulheres entre os 19-25 anos de idade em alguns pa��ses Europeus, desde que seja de custo efic��cia, para preven����o das suas complica����es (doen��a inflamat��ria p��lvica e infertilidade). Os testes de amplifica����o de ��cidos nucleicos (NAATs) s��o cada vez mais utilizados no seu diagn��stico pela sua elevada sensibilidade e especificidade. Este estudo teve como objectivo conhecer a preval��ncia de infec����o urogenital por C. trachomatis em popula����es de risco, atrav��s das t��cnicas de Multiplex PCR e de PCR em Tempo Real e identificar os gen��tipos de C. trachomatis. Pretendeu-se tamb��m conhecer a preval��ncia de anticorpos anti-C. trachomatis e verificar a necessidade de execu����o do rastreio da infec����o urogenital por C. trachomatis. C. trachomatis foi identificada em amostras de indiv��duos da consulta de venereologia do Hospital de Santa Maria e da consulta da Unidade de DST do Instituto de Higiene e Medicina Tropical, com uma preval��ncia de 25% (10/40) e 6,8% (5/74), respectivamente, tendo sido identificados quatro gen��tipos diferentes, D, Da, E e F. A t��cnica de PCR em Tempo Real apresentou melhores resultados na identifica����o de C. trachomatis do que a de Multiplex PCR. A preval��ncia de anticorpos anti-C. trachomatis da classe IgG com um t��tulo de 1:320 foi de 59,4% (57/96) e com um t��tulo de 1:1.000 foi de 39,6% (38/96). A preval��ncia de anticorpos da classe IgM, geralmente associada a infec����o aguda, foi 35,9% (14/39) dos indiv��duos. No presente estudo verificou-se que, embora a pesquisa de anticorpos n��o pare��a ser eficiente no diagn��stico de C. trachomatis, pode eventualmente ser ��til como marcador epidemiol��gico de infec����o. O elevado n��mero de anticorpos presente nos indiv��duos do nosso estudo parece indicar a necessidade do rastreio da infec����o urogenital por C. trachomatis neste tipo de popula����es.