Variation of strand break yield for plasmid DNA irradiated with high-Z metal nanoparticles.

PURPOSE: Poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) plays an important role in DNA repair, and PARP inhibitors can enhance the activity of DNA-damaging agents in vitro and in vivo. AG014699 is a potent PARP inhibitor in phase II clinical development. However, the range of therapeutics with which AG014699 could interact via a DNA-repair based mechanism is limited. We aimed to investigate a novel, vascular-based activity of AG014699, underlying in vivo chemosensitization, which could widen its clinical application. EXPERIMENTAL DESIGN: Temozolomide response was analyzed in vitro and in vivo. Vessel dynamics were monitored using "mismatch" following the administration of perfusion markers and real-time analysis of fluorescently labeled albumin uptake in to tumors established in dorsal window chambers. Further mechanistic investigations used ex vivo assays of vascular smooth muscle relaxation, gut motility, and myosin light chain kinase (MLCK) inhibition. RESULTS: AG014699 failed to sensitize SW620 cells to temozolomide in vitro but induced pronounced enhancement in vivo. AG014699 (1 mg/kg) improved tumor perfusion comparably with the control agents nicotinamide (1 g/kg) and AG14361 (forerunner to AG014699; 10 mg/kg). AG014699 and AG14361 relaxed preconstricted vascular smooth muscle more potently than the standard agent, hydralazine, with no impact on gut motility. AG014699 inhibited MLCK at concentrations that relaxed isolated arteries, whereas AG14361 had no effect. CONCLUSION: Increased vessel perfusion elicited by AG014699 could increase tumor drug accumulation and therapeutic response. Vasoactive concentrations of AG014699 do not cause detrimental side effects to gut motility and may increase the range of therapeutics with which AG014699 could be combined with for clinical benefi

Specialised pacemaking cells in the rabbit urethra.

1. Collagenase dispersal of strips of rabbit urethra yielded, in addition to normal spindle-shaped smooth muscle cells, a small proportion of branched cells which resembled the interstitial cells of Cajal dispersed from canine colon. These were clearly distinguishable from smooth muscle in their appearance under the phase-contrast microscope, their immunohistochemistry and their ultrastructure. They had abundant vimentin filaments but no myosin, a discontinuous basal lamina, sparse rough endoplasmic reticulum, many mitochondria and a well-developed smooth endoplasmic reticulum. 2. Interstitial cells were non-contractile but exhibited regular spontaneous depolarisations in current clamp. These could be increased in frequency by noradrenaline and blocked by perfusion with calcium-free solution. In voltage clamp they showed abundant calcium-activated chloride current and spontaneous transient inward currents which could be blocked by chloride channel blockers. 3. The majority of smooth muscle cells were vigorously contractile when stimulated but did not show spontaneous electrical activity in current clamp. In voltage clamp, smooth muscle cells showed very little calcium-activated chloride current. 4. We conclude that there are specialised pacemaking cells in the rabbit urethra that may be responsible for initiating the slow waves recorded from smooth muscle cells in the intact syncitium.

Interactions between the budding yeast IQGAP homologue Iqg1p and its targets revealed by a split-EGFP bimolecular fluorescence complementation assay.

A split-EGFP based bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assay has been used to detect interactions between the Saccharomyces cerevisiae cytoskeletal scaffolding protein Iqg1p and three targets: myosin essential light chain (Mlc1p), calmodulin (Cmd1p) and the small GTPase Cdc42p. The format of the BiFC assay used ensures that the proteins are expressed at wild type levels thereby avoiding artefacts due to overexpression. This is the first direct in vivo detection of these interactions; in each case, the complex is localised to discrete regions of the yeast cytoplasm. The labelling with EGFP fragments results in changes in growth kinetics, cell size and budding frequency. This is partly due to the reassembled EGFP locking the complexes into essentially permanent interactions. The consequences of this for Iqg1p interactions and BiFC assays in general are discussed. (c) 2008 International Federation for Cell Biology. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

A novel calmodulin-like protein from the liver fluke, Fasciola hepatica

An 18.2 kDa protein from the liver fluke, Fasciola hepatica has been identified and characterised. The protein shows strongest sequence similarity to egg antigen proteins from Schistosoma mansoni, Schistosoma japonicum and Clonorchis sinensis. The protein is predicted to adopt a calmodulin-like fold; it thus represents the third calmodulin-like protein to be characterised in F. hepatica and has been named FhCaM3. Compared to the classical calmodulin structure there are some variations. Most noticeably, the central, linker helix is disrupted by a cysteine residue. Alkaline native gel electrophoresis showed that FhCaM3 binds calcium ions. This binding event increases the ability of the protein to bind the hydrophobic fluorescent probe 8-anilinonaphthalene-1-sulphonate, consistent with an increase in surface hydrophobicity as seen in other calmodulins. FhCaM3 binds to the calmodulin antagonists trifluoperazine and W7, but not to the myosin regulatory light chain binding compound praziquantel. Immunolocalisation demonstrated that the protein is found in eggs and vitelline cells. Given the critical role of calcium ions in egg formation and hatching this suggests that FhCaM3 may play a role in calcium signalling in these processes. Consequently the antagonism of FhCaM3 may, potentially, offer a method for inhibiting egg production and thus reducing the spread of infection.

FhCaBP3: A Fasciola hepatica calcium binding protein with EF-hand and dynein light chain domains

A DNA sequence encoding a protein with predicted EF-hand and dynein light chain binding domains was identified in a Fasciola hepatica EST library. Sequence analysis of the encoded protein revealed that the most similar known protein was the Fasciola gigantica protein FgCaBP3 and so this newly identified protein was named FhCaBP3. Molecular modelling of FhCaBP3 predicted a highly flexible N-terminal region, followed by a domain containing two EF-hand motifs the second of which is likely to be a functioning divalent ion binding site. The C-terminal domain of the protein contains a dynein light chain like region. Interestingly, molecular modelling predicts that calcium ion binding to the N-terminal domain destabilises the ß-sheet structure of the C-terminal domain. FhCaBP3 can be expressed in, and purified from, Escherichia coli. The recombinant protein dimerises and the absence of calcium ions appeared to promote dimerisation. Native gel shift assays demonstrated that the protein bound to calcium and manganese ions, but not to magnesium, barium, zinc, strontium, nickel, copper or cadmium ions. FhCaBP3 interacted with the calmodulin antagonists trifluoperazine, N-(6-aminohexyl)-5-chloro-1-naphthalenesulfonamide and chlorpromazine as well as the myosin regulatory light chain-binding drug praziquantel. Despite sequence and structural similarities to other members of the same protein family from F. hepatica, FhCaBP3 has different biochemical properties to the other well characterised family members, FH22 and FhCaBP4. This suggests that each member of this trematode calcium-binding family has discrete functional roles within the organism.

Genome-wide association study identifies novel loci associated with resistance to bovine tuberculosis

Tuberculosis (TB) caused by Mycobacterium bovis is a re-emerging disease of livestock that is of major economic importance worldwide, as well as being a zoonotic risk there is significant heritability for host resistance to bovine TB (bTB) in dairy cattle. To identify resistance loci for bTB, we undertook a genome-wide association study in female Holstein-Friesian cattle with 592 cases and 559 age-matched controls from case herds. Cases and controls were categorised into distinct phenotypes: skin test and lesion positive vs skin test negative on multiple occasions, respectively these animals were genotyped with the Illumina BovineHD 700K BeadChip. Genome-wide rapid association using linear and logistic mixed models and regression (GRAMMAR), regional heritability mapping (RHM) and haplotype-sharing analysis identified two novel resistance loci that attained chromosome-wise significance, protein tyrosine phosphatase receptor T (PTPRT; P=4.8 × 10 -7) and myosin IIIB (MYO3B; P=5.4 × 10 -6). We estimated that 21% of the phenotypic variance in TB resistance could be explained by all of the informative single-nucleotide polymorphisms, of which the region encompassing the PTPRT gene accounted for 6.2% of the variance and a further 3.6% was associated with a putative copy number variant in MYO3B the results from this study add to our understanding of variation in host control of infection and suggest that genetic marker-based selection for resistance to bTB has the potential to make a significant contribution to bTB control.

PKC-β exacerbates in vitro brain barrier damage in hyperglycemic settings via regulation of RhoA/Rho-kinase/MLC2 pathway

Stroke patients with hyperglycemia (HG) develop higher volumes of brain edema emerging from disruption of blood-brain barrier (BBB). This study explored whether inductions of protein kinase C-β (PKC-β) and RhoA/Rho-kinase/myosin-regulatory light chain-2 (MLC2) pathway may account for HG-induced barrier damage using an in vitro model of human BBB comprising human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) and astrocytes. Hyperglycemia (25 mmol/L D-glucose) markedly increased RhoA/Rho-kinase protein expressions (in-cell westerns), MLC2 phosphorylation (immunoblotting), and PKC-β (PepTag assay) and RhoA (Rhotekin-binding assay) activities in HBMEC while concurrently reducing the expression of tight junction protein occludin. Hyperglycemia-evoked in vitro barrier dysfunction, confirmed by decreases in transendothelial electrical resistance and concomitant increases in paracellular flux of Evan's blue-labeled albumin, was accompanied by malformations of actin cytoskeleton and tight junctions. Suppression of RhoA and Rho-kinase activities by anti-RhoA immunoglobulin G (IgG) electroporation and Y-27632, respectively prevented morphologic changes and restored plasma membrane localization of occludin. Normalization of glucose levels and silencing PKC-β activity neutralized the effects of HG on occludin and RhoA/Rho-kinase/MLC2 expression, localization, and activity and consequently improved in vitro barrier integrity and function. These results suggest that HG-induced exacerbation of the BBB breakdown after an ischemic stroke is mediated in large part by activation of PKC-β.

Small GTPase RhoA and its effector rho kinase mediate oxygen glucose deprivation-evoked in vitro cerebral barrier dysfunction

BACKGROUND AND PURPOSE: Enhanced vascular permeability attributable to disruption of blood-brain barrier results in the development of cerebral edema after stroke. Using an in vitro model of the brain barrier composed of human brain microvascular endothelial cells and human astrocytes, this study explored whether small GTPase RhoA and its effector protein Rho kinase were involved in permeability changes mediated by oxygen-glucose deprivation (OGD), key pathological phenomena during ischemic stroke.

METHODS: OGD increased RhoA and Rho kinase protein expressions in human brain microvascular endothelial cells and human astrocytes while increasing or unaffecting that of endothelial nitric oxide synthase in respective cells. Reperfusion attenuated the expression and activity of RhoA and Rho kinase in both cell types compared to their counterparts exposed to equal periods of OGD alone while selectively increasing human brain microvascular endothelial cells endothelial nitric oxide synthase protein levels. OGD compromised the barrier integrity as confirmed by decreases in transendothelial electric resistance and concomitant increases in flux of permeability markers sodium fluorescein and Evan's blue albumin across cocultures. Transfection of cells with constitutively active RhoA also increased flux and reduced transendothelial electric resistance, whereas inactivation of RhoA by anti-RhoA Ig electroporation exerted opposite effects. In vitro cerebral barrier dysfunction was accompanied by myosin light chain overphosphorylation and stress fiber formation. Reperfusion and treatments with a Rho kinase inhibitor Y-27632 significantly attenuated barrier breakdown without profoundly altering actin structure.

CONCLUSIONS: Increased RhoA/Rho kinase/myosin light chain pathway activity coupled with changes in actin cytoskeleton account for OGD-induced endothelial barrier breakdown.

Interacção do vanádio com a miosina de músculo esquelético de coelho

Relatório de projecto de licenciatura, Bioquímica, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa, 2009

Spatiotemporal mechanisms for actomyosin ring assembly and contraction in budding yeast cell division

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Molecular Medicine

Simple method for detection of MYH11 DNA rearrangements in patients with inv(16)(p13q22) and acute myeloid leukemia.

The pericentric inversion on chromosome 16 [inv(16)(p13q22)] and related t(16;16)(p13;q22) are recurrent aberrations associated with acute myeloid leukemia (AML) M4 Eo. Both abberations result in a fusion of the core binding factor beta (CBFB) and smooth muscle myosin heavy chain gene (MYH11). A selected genomic 6.9-kb BamHl probe detects MYH11 DNA rearrangements in 18 of 19 inv(16)/t(16;16) patients tested using HindIII digested DNA. The rearranged fragments were not detectable after remission in two cases tested, while they were present after relapse in one of these two cases tested.

Recueil de pièces relatives principalement à la Bourgogne, au Portugal et à l'Allemagne de 1343 à 1575.

Contient : 1 Lettre d'ANDRE DANDOLO, doge de Venise, à Louis, comte de Flandres, concernant un nommé Ange Guide, qui avait en gage certains joyaux appartenant audit comte. Palais des doges, 14 janvier 1343. En latin. Orig. sur parchemin ; 2 Lettre d'YOLANDE DE FLANDRE, comtesse de Bar et dame de Cassel, à Louis de Male, comte de Flandre, touchant les différends survenus entre lui et Robert, duc de Bar, fils d'Yolande. Signée : « La contesse de Bar et dame de Cassel,... Escript à Clermont, le XIIe jour de janvier » 1356 au plus tôt. Orig ; 3 Lettre de CHARLES V à Louis de Male, comte de Flandre, pour le prier de se trouver au traité de paix projeté avec l'Angleterre. Signée : « Charles ». Senlis, 25 octobre 1375. Orig. sur parchemin ; 4 Réponse de LOUIS DE MALE, comte DE FLANDRE, à la lettre de Charles V. Signée : « Loys, contes de Flandres ». Gand, 3 novembre 1375. Autographe ; 5 Lettre de CHARLES V à Marguerite de France, comtesse de Flandre et d'Artois, portant créance pour le duc de Bourgogne, qu'il envoyait vers elle pour quelques affaires secrètes. « Escrit de notre main le jour Saint Martin. Charles ». 1376. Autographe ; 6 Lettre de JEAN, duc DE BRETAGNE, au comte de Flandre, Louis de Male, lui demandant secours contre Charles de Blois. Signée : « Jehan, duc de Bretaigne, conte de Montfort et viconte de Limoges,... Escript à Kemperelé, le IIIIe jour de juign » 1364. Orig ; 7 Lettre de WENCESLAS, duc DE LUXEMBOURG et de Brabant, audit comte de Flandre, touchant un différend survenu entre eux au sujet de « ceaus de Cons ». Signée : « Li dux de Lucemburch et de Brabant,... Escrit à Lucemburch, XIIII jours, en avril ». Environ 1360. Orig ; 8 Lettre de FREDERIC DE SAARWERDEN, archevêque de Cologne, audit comte de Flandre, qui lui avait envoyé le seigneur de La Gruythuyse, chevalier, et le prévôt de l'église de Notre-Dame de Bruges. Il le félicite de ce qu'ils lui ont appris qu'il avait reconnu Urbain VI pour pape. Signée : « Fridericus, archiepiscopus Coloniensis... ». Francfort-sur-le-Mein, 17 septembre 1378. Orig. En latin ; 9 Lettre de CUNO DE FALKENSTEIN, archevêque de Trèves, au même comte de Flandre, sur le même sujet. Signée : « Cuno, archiepiscopus Treverensis ». Francfort-sur-le-Mein, 24 septembre 1378. Orig. En latin ; 10 Lettre de RUPERT Ier, comte palatin du Rhin, au même, sur le même sujet. Signée : « Rupertus senior, Dei gratia comes palatinus Reni, sacri imperii elector et Bavarie dux ». Francfort-sur-le-Mein, 17 septembre 1378. Orig. En latin ; 11 Lettre de JEAN Ier, roi D'ARAGON, à Philippe le Hardi, duc de Bourgogne, pour lui demander de vouloir bien favorablement traiter ses sujets trafiquant en Flandre. Signée : « Rex Aragonum ». « Dat. in Montesono, sub nostro sigillo secreto, XVa die aprilis, anno a Nativitate Domini MCCCLXXXIX ». Orig. En latin ; 12 Lettre de YOLANDE, reine d'Aragon, au même, sur le même sujet. Signée : « La reyna d'Arago ». Monzon, 13 avril 1389. Orig. En aragonais ; 13 « Offres faictes aux Anglois par les ambaxadeurs du roy au traictié fait à Arras ». Arras, 8 septembre 1435 ; 14 Déposition de RAOUL LE BOUVIER, chanoine d'Angers, de ce qu'il savait du traité d'Arras touchant les villes engagées au duc de Bourgogne. Signée : « Bouvier ». 6 novembre 1451. Orig ; 15 Lettre de PHILIPPE LE HARDI, duc DE BOURGOGNE, à son beau-père, Louis, comte de Flandres. Signée : « Vostre filz le duc de Bourgoingne ». Compiègne, 7 juillet. Orig ; 16 Autre lettre du même au même. Signée de même. Même date. Orig ; 17 Lettre de PHILIPPE LE BON, duc DE BOURGOGNE, aux baillis, prévôts et échevins de Courtrai. Signée : « Phelippe ». Lille, 22 août. Orig ; 18 Autre lettre du même aux mêmes. Signée : « Phelippe ». Mons, 14 novembre 1451 ? Orig ; 19 Lettre d'ISABELLE DE PORTUGAL, femme de Philippe le Bon, aux échevins, etc. de Courtrai. Signée : « Isabel ». Bruxelles, 26 décembre. Orig ; 20 Lettre de JEAN DE BOURGOGNE, comte DE NEVERS, aux mêmes. Arras, 31 mars. Orig ; 21 Lettre d'ISABELLE DE BOURBON, femme de Charles le Téméraire, aux mêmes. Signée : « Isabel ». Bruges, 4 janvier. Orig ; 22 Lettre de PHILIPPE LE BON, duc DE BOURGOGNE, aux mêmes, signée : « Phelippe ». Bruxelles, 7 décembre 1451. Orig ; 23 Autre lettre du même aux mêmes, signée : « Phelippe ». Bruxelles, 10 décembre 1451. Orig ; 24 Lettre d'EDOUARD IV, roi D'ANGLETERRE, au duc de Bourgogne selon Baluze, au roi Louis XI, selon une note ancienne placée au dos de la pièce, pour le porter à la paix avec le duc d'Autriche, 19 mars 1475 ou 1480. Copie ; 25 Lettre de PHILIPPE LE BON, duc DE BOURGOGNE, à Charles VII, signée : « Phelippe ». Lille, 29 décembre 1453. Orig ; 26 Voeu de Philippe le Bon, duc de Bourgogne, dit le Voeu du paon, précédé du récit du banquet où ce voeu fut prononcé. Lille, 17 et 22 février 1454 n. st. Copie ; 27 Lettre de « NICOLAS ROLIN », chancelier de BourGOGNE, à Charles VII. Bruges, 16 avril 1455. Orig ; 28 Lettre de PHILIPPE LE BON, duc DE BOURGOGNE, au même, signée : « Phelippe ». Leyde, 25 juillet 1456. Orig ; 29 Nouvelles de l'année 1457, relatives aux affaires de Bourgogne et d'Angleterre ; 30 Lettre d'appel adressée à Charles VII, relative à l'enlèvement d'une fille que le duc de Bourgogne voulait marier à un de ses archers, signée : « JEHAN BARBIN et SYMON ». Paris, 4 avril 1456 n. st. Orig ; 31 Lettre de PHILIPPE LE BON, duc DE BOURGOGNE, aux gens du conseil du roi, signée : « Phelippe », contresignée : « Gros ». Bruxelles, 23 octobre 1456. Orig ; 32 Lettre du même à Charles VII, signée : « Phelippe ». Mons, 8 janvier 1459 n. st. Orig ; 33 Lettre de CHARLES LE TEMERAIRE, alors comte DE CHAROLAIS, à Jean Il le Bon, duc de Bourbon et d'Auvergne, signée : « Charles », contresignée : « Gros ». Le Quesnoy, 13 juillet 1458. Orig ; 34 Réponse du conseil du duc de Bourgogne aux trois états de Bourgogne sur le fait de la gabelle. Lille, 1460 ; 35 Autre réponse. Dijon, 1460 ; 36 Lettre de CHARLES LE TEMERAIRE, alors comte DE CHAROLAIS, aux gens du conseil du roi, signée : « Charles », contresignée : « Gros ». Dinant, 19 août 1466. Orig ; 37 Promesse de PHILIPPE DE COMINES aux habitants de Courtrai, signée : « Phelippe de Comines ». 9 janvier 1468 n. st. Autogaphe ; 38 Lettre du « connestable de Flandres » au chancelier de Flandres. Lille, 1er août 1467. Orig ; 39 Lettre d'EDOUARD IV, roi D'ANGLETERRE, au duc de Bourgogne, signée : « Vostre bon cousin Edouard ». Londres, 20 avril. Orig ; 40 Lettre du duc DE BOURGOGNE, CHARLES LE TEMERAIRE, à Edouard IV, roi d'Angleterre, non signée. « Escript à Arras, le XIe jour d'avril ». Orig ; 41 Lettre de Charles le Téméraire, comte de Charolais, aux prévôt, échevins, etc., de Courtrai, signée : « Charles ». Lille, 15 juin 1464. Orig ; 42 Lettre du même aux mêmes, signée : « Charles ». Lille, 16 juin 1464. Orig ; 43 Double de la lettre précédente, adressée au premier échevin et au secrétaire de la ville de Courtrai. Même signature, même date. Orig ; 44 Lettre du même devenu duc de Bourgogne, au roi de France, signée : « Charles », contresignée : « Gros ». Gand, 16 octobre. Orig ; 45 Lettre du même aux prévôt, échevins, etc., de Courtrai, signée : « Charles ». Bruxelles, 3 février 1468 n. st. Orig ; 46 Lettre du même à Louis XI, signée : « Charles ». Bruxelles, 26 juillet 1467. Orig ; 47 Lettre du même aux prévôt, échevins, etc., de Courtrai, signée : « Charles ». Gand, 20 janvier 1470 n. st. Orig ; 48 Lettre du même aux mêmes, signée : « Charles ». La Haye, 27 septembre 1469. Orig ; 49 Lettre du même au doge de Venise. 19 juillet 1470. Copie. En latin ; 50 Lettre des président et autres conseillers du parlement de Paris à Louis XI. Paris, 25 octobre 1470. Orig ; 51 Les mêmes au même. Paris, 14 décembre 1470. Orig ; 52 Lettre de G. HUGONET, chancelier de Bourgogne, au chancelier de France, signée : « Le tout vostre, G. Hugonet, chancellier de monseigneur de Bourgogne ». Arras, 12 juillet 1476. Orig ; 53 Lettre de CHARLES LE TEMERAIRE, duc DE BOURGOGNE, à Julien de La Rovère, cardinal de Saint-Pierre ès Liens, signée : « Charles ». Luxembourg, 25 avril 1474. Orig. En latin ; 54 Lettre de G. HUGONET, chancelier de Bourgogne, aux prévôt, échevins, etc., de Courtrai, signée : « G. Hugonet ». Bruges, 31 mars 1475. Orig ; 55 Instructions données par FERDINAND LE CATHOLIQUE, roi de CASTILLE et de LEON, premier né d'ARAGON, à ses envoyés à la cour de Marie de Bourgogne. « Medina del Campo », 3 août 1477. Orig. En espagnol. Sceau plaqué ; 56 Lettre de CHARLES-QUINT, non encore empereur, aux prévôt, échevins, etc., de Courtrai, signée : « Charles ». Saragosse, 10 mai 1518. Orig ; 57 Lettre de l'empereur MAXIMILIEN Ier à sa fille Marguerite d'Autriche, signée : « Maxi. ». 22 décembre 1512. Orig ; 58 Lettre de THOMAS DE WOLSEY, cardinal d'York, à la même, signée : « T., cardinalis Ebor. ». Londres, 1er janvier 1521 n. st. Orig. En latin ; 59 Lettre de MARGUERITE D'AUTRICHE au président et aux gens de la cour des comptes de Lille, signée : « Marguerite ». Malines, 29 janvier 1523 n. st. Orig ; 60 Lettre de la même aux mêmes, signée : « Marguerite ». Anvers, 9 juin 1524. Orig. Cachet armorié ; 61 Lettres patentes de FERDINAND, roi DE PORTUGAL, s'engageant vis-à-vis des ambassadeurs de Louis, duc d'Anjou et de Touraine, venus vers lui pour conclure alliance au nom de leur maître, contre le roi d'Aragon, à ne pas traiter de paix avec ledit roi d'Aragon pendant l'espace de 15 jours, nécessaire à la perfection du traité d'alliance. Tentugal, 25 mars 1377. En latin. Orig. sur parchemin ; 62 Mémoire pour la défense de Pierre Barret, sujet du roi de Portugal. Envoyé en 1457 par le roi de Chypre vers le roi d'Aragon, il avait été fait prisonnier à son passage en France, en revenant de Rome, par Jean Leforestier, capitaine d'Aigues-Mortes. 21 janvier 1459 ; 63 « Responces pour la partie de Jehan Leforestier, contrerolleur pour le roy de la recepte generalle de Languedoc et lieutenant d'Aigues Mortes, deffendeur, à la demande baillée par escript par messire Pierre Barret, tant pour lui que autres Portugaloys prisonniers. demandeur ». 1459 ; 64 Lettre d'ALPHONSE, roi DE PORTUGAL, à Louis XI, signée : « El Rey ». Sceau plaqué. Elvas, 23 avril 1464. Orig. En latin ; 65 Lettre du même au même. « Vila de Arguedas », 11 mars 1464. Orig. En portugais ; 66 Mémoire donné par JACQUES DE GUARDIA, envoyé de don Pedro de Portugal, soi-disant roi d'Aragon, au comte de Candale, vice-roi de Roussillon et de Cerdagne. 1465. En aragonais ; 67 Lettre d'ALPHONSE, roi DE PORTUGAL, à Louis XI, signée : « El Rey ». Estremoz, 8 janvier 1475. En latin. Orig. sur parchemin ; 68 Copie de la lettre précédente ; 69 Traduction en français de la lettre précédente ; 70 Autre lettre d'Alphonse, roi de Portugal, à Louis XI, signée : « El Rey ». Estremoz, 30 janvier 1475. En latin. Orig ; 71 Lettre de LOUIS XI à Alphonse, roi de Portugal. Paris, avril 1475. En latin. Copie ; 72 « Minute au net des premières instructions données » par Louis XI à Olivier le Roux, envoyé en ambassade auprès du roi de Portugal, en 1475 ; 73 Lettre de JEAN, duc DE LUXEMBOURG, au duc de Bourbon, signée : « Johan, duc de Luccembourgh et de Gorlitz et marquis de Lusitz ». Luxembourg, 10 mars 1400 ? Orig ; 74 Lettre de PHILIPPE-MARIE, duc DE MILAN, au chancelier de France, Guillaume Juvénal Des Ursins, signée : « Filippus Maria Anglus... ». Cusago, 18 janvier 1447. En latin. Orig ; 75 Lettre de JEAN CARVAJAL, cardinal de Saint-Ange à Charles VII, signée : « Jo., cardinalis S. Angeli, apostolice sedis legatus ». Vienne, 2 décembre 1447. Autographe. En latin ; 76 Lettre de l'empereur FREDERIC III à Charles VII. 11 juin 1448. Orig. Parchemin. En latin ; 77 Autre lettre du même au même. 9 janvier 1454. Orig. En latin ; 78 Lettre de JEAN HUNYADE à Denis Szechy, cardinal archevêque de Strigonie. 23 juillet 1456. Copie ; 79 Lettre de GEORGES PODIEBRAD, roi DE BOHEME, à Louis XI. Prague, 4 janvier 1467. Orig. En latin. Parchemin ; 80 Lettre du même à Matthias Corvin, roi de Hongrie. 28 juillet 1468 ? En latin. Copie ; 81 Lettre de ROBERT DE BAVIERE, archevêque de Cologne, à Louis XI, signée : « Ropertus, Dei gratia archiepiscopus Coloniensis, princeps elector Westfalie... » Bonn, 26 août 1471. En latin. Orig ; 82 Lettre de SIGISMOND, archiduc D'AUTRICHE, à Pierre d'Oriole, chancelier de France. Innsprück, 24 janvier 1478. En latin. Orig ; 83 Lettre, en latin, du sénat et du magistrat de Nuremberg à François Ier. 9 mai 1519. Orig. Vélin. Cachet ; 84 Supplique, en latin, des princes protestants à l'empereur, en faveur de leurs coreligionnaires de Bavière, Savoie, Luccau, persécutés. Acte en latin, souscrit : « Wolffangus, comes palatinus Rheni ; Udalricus, dux Megapolensis ; Christophorus, dux Wirtembergicus ». 1566. Copie ; 85 Lettre de FREDERIC III, comte palatin du Rhin, à Emmanuel-Philibert, duc de Savoie, en faveur des protestants persécutés. Augsbourg, 23 mai 1566. Copie. En latin ; 86 Manifeste de la noblesse de Pologne au sujet de l'élection d'Étienne Bathori, roi de Pologne. Varsovie, 15 décembre 1575. Copie. En latin

Force potentiation in the MDX mouse

Large forces are the primary mechanism of injury in muscular dystrophy, and muscular dystrophy is especially damaging to type IIB muscle fibers. It was hypothesized that post-tetanic potentiation (PTP) would be down-regulated to prevent damage in Xlinked muscular dystrophy (mdx) mice since PTP increases force and PTP effects are greatest in IIB fibers. PTP experiments were performed on the extensor digitorum longus (EDL) of 50 day old mdx (YM) and C57BL/10 (YC) mice and 10 month old mdx (OM) and C57B1710 (OC) mice. Twitch and tetanic forces were lower in mdx than controls and lower in younger than older mice. Contrary to the hypothesis, PTP was higher in both mdx groups compared to controls. OM potentiated more than any other condition (OM: 29.8%, OC: 23.2%, YM: 21.9%, YC: 17.2%). In accordance with literature PTP increased in the older groups. To explain PTP changes, fiber typing and Western blots for myosin light chain kinase (MLCK) were performed. YM and YC had similar fiber type profiles (2% I, 58% IIX/D and 40% IIB). In accordance with literature but contrary to expected conditions for elevated PTP, OM had a slower fiber type profile (1.7% I, 69% IIX/D and 29% IIB) than OC (0.4% I, 61% IIX/D and 38% IIB). No differences were found in MLCK expression. It seems that PTP is up-regulated to maintain muscle function rather than being down-regulated to prevent muscle damage. Ca""^ transient and myosin phosphorylation measurements would be beneficial in explaining increased PTP seen in this study.

THE INFLUENCE OF LENGTH CHANGE SPEED AND DIRECTION ON DYNAMIC FUNCTION POTENTIATION IN FAST MOUSE MUSCLE

The purpose of this study was to test the hypothesis that the potentiation of dynamic function was dependent upon both length change speed and direction. Mouse EDL was cycled in vitro (25º C) about optimal length (Lo) with constant peak strain (± 2.5% Lo) at 1.5, 3.3 and 6.9 Hz before and after a conditioning stimulus. A single pulse was applied during shortening or lengthening and peak dynamic (concentric or eccentric) forces were assessed at Lo. Stimulation increased peak concentric force at all frequencies (range: 19 ± 1 to 30 ± 2%) but this increase was proportional to shortening speed, as were the related changes to concentric work/power (range: -15 ± 1 to 39 ± 1 %). In contrast, stimulation did not increase eccentric force, work or power at any frequency. Thus, results reveal a unique hysteresis like effect for the potentiation of dynamic output wherein concentric and eccentric forces increase and decrease, respectively, with work cycle frequency.

Force potentiation as a modulator of contractile performance: Implications for control of skeletal muscle force and energetics of work

This thesis investigated the modulation of dynamic contractile function and energetics of work by posttetanic potentiation (PTP). Mechanical experiments were conducted in vitro using software-controlled protocols to stimulate/determine contractile function during ramp shortening, and muscles were frozen during parallel incubations for biochemical analysis. The central feature of this research was the comparison of fast hindlimb muscles from wildtype and skeletal myosin light chain kinase knockout (skMLCK-/-) mice that does not express the primary mechanism for PTP: myosin regulatory light chain (RLC) phosphorylation. In contrast to smooth/cardiac muscles where RLC phosphorylation is indispensable, its precise physiological role in skeletal muscle is unclear. It was initially determined that tetanic potentiation was shortening speed dependent, and this sensitivity of the PTP mechanism to muscle shortening extended the stimulation frequency domain over which PTP was manifest. Thus, the physiological utility of RLC phosphorylation to augment contractile function in vivo may be more extensive than previously considered. Subsequent experiments studied the contraction-type dependence for PTP and demonstrated that the enhancement of contractile function was dependent on force level. Surprisingly, in the absence of RLC phosphorylation, skMLCK-/- muscles exhibited significant concentric PTP; consequently, up to ~50% of the dynamic PTP response in wildtype muscle may be attributed to an alternate mechanism. When the interaction of PTP and the catchlike property (CLP) was examined, we determined that unlike the acute augmentation of peak force by the CLP, RLC phosphorylation produced a longer-lasting enhancement of force and work in the potentiated state. Nevertheless, despite the apparent interference between these mechanisms, both offer physiological utility and may be complementary in achieving optimal contractile function in vivo. Finally, when the energetic implications of PTP were explored, we determined that during a brief period of repetitive concentric activation, total work performed was ~60% greater in wildtype vs. skMLCK-/- muscles but there was no genotype difference in High-Energy Phosphate Consumption or Economy (i.e. HEPC: work). In summary, this thesis provides novel insight into the modulatory effects of PTP and RLC phosphorylation, and through the observation of alternative mechanisms for PTP we further develop our understanding of the history-dependence of fast skeletal muscle function.