Human single-chain Fv intrabodies counteract in situ huntingtin aggregation in cellular models of Huntington's disease

This investigation was pursued to test the use of intracellular antibodies (intrabodies) as a means of blocking the pathogenesis of Huntington's disease (HD). HD is characterized by abnormally elongated polyglutamine near the N terminus of the huntingtin protein, which induces pathological protein–protein interactions and aggregate formation by huntingtin or its exon 1-containing fragments. Selection from a large human phage display library yielded a single-chain Fv (sFv) antibody specific for the 17 N-terminal residues of huntingtin, adjacent to the polyglutamine in HD exon 1. This anti-huntingtin sFv intrabody was tested in a cellular model of the disease in which huntingtin exon 1 had been fused to green fluorescent protein (GFP). Expression of expanded repeat HD-polyQ-GFP in transfected cells shows perinuclear aggregation similar to human HD pathology, which worsens with increasing polyglutamine length; the number of aggregates in these transfected cells provided a quantifiable model of HD for this study. Coexpression of anti-huntingtin sFv intrabodies with the abnormal huntingtin-GFP fusion protein dramatically reduced the number of aggregates, compared with controls lacking the intrabody. Anti-huntingtin sFv fused with a nuclear localization signal retargeted huntingtin analogues to cell nuclei, providing further evidence of the anti-huntingtin sFv specificity and of its capacity to redirect the subcellular localization of exon 1. This study suggests that intrabody-mediated modulation of abnormal neuronal proteins may contribute to the treatment of neurodegenerative diseases such as HD, Alzheimer's, Parkinson's, prion disease, and the spinocerebellar ataxias.

Radiometal labeling of recombinant proteins by a genetically engineered minimal chelation site: technetium-99m coordination by single-chain Fv antibody fusion proteins through a C-terminal cysteinyl peptide.

We describe a method to facilitate radioimaging with technetium-99m (99mTc) by genetic incorporation of a 99mTc chelation site in recombinant single-chain Fv (sFv) antibody proteins. This method relies on fusion of the sFv C terminus with a Gly4Cys peptide that specifically coordinates 99mTc. By using analogues of the 26-10 anti-digoxin sFv as our primary model, we find that addition of the chelate peptide, to form 26-10-1 sFv', does not alter the antigen-binding affinity of sFv. We have demonstrated nearly quantitative chelation of 0.5-50 mCi of 99mTc per mg of 26-10-1 sFv' (1 Ci = 37 GBq). These 99mTc-labeled sFv' complexes are highly stable to challenge with saline buffers, plasma, or diethylenetriaminepentaacetic acid. We find that the 99mTc-labeled 741F8-1 sFv', specific for the c-erbB-2 tumor-associated antigen, is effective in imaging human ovarian carcinoma in a scid mouse tumor xenograft model. This fusion chelate methodology should be applicable to diagnostic imaging with 99mTc and radioimmunotherapy with 186Re or 188Re, and its use could extend beyond the sFv' to other engineered antibodies, recombinant proteins, and synthetic peptides.

Anti-melanoma antibodies from melanoma patients immunized with genetically modified autologous tumor cells: selection of specific antibodies from single-chain Fv fusion phage libraries.

Fusion phage libraries expressing single-chain Fv antibodies were constructed from the peripheral blood lymphocytes of two melanoma patients who had been immunized with autologous melanoma cells transduced the gamma-interferon gene to enhance immunogenicity, in a trial conducted at another institution. Anti-melanoma antibodies were selected from each library by panning the phage against live cultures of the autologous tumor. After two or three rounds of panning, clones of the phage were tested by ELISA for binding to the autologous tumor cells; > 90% of the clones tested showed a strong ELISA reaction, demonstrating the effectiveness of the panning procedure for selecting antimelanoma antibodies. The panned phage population was extensively absorbed against normal melanocytes to enrich for antibodies that react with melanoma cells but not with melanocytes. The unabsorbed phage were cloned, and the specificities of the expressed antibodies were individually tested by ELISA with a panel of cultured human cells. The first tests were done with normal endothelial and fibroblast cells to identify antibodies that do not react, or react weakly, with two normal cell types, indicating some degree of specificity for melanoma cells. The proportion of phage clones expressing such antibodies was approximately 1%. Those phage were further tested by ELISA with melanocytes, several melanoma lines, and eight other tumor lines, including a glioma line derived from glial cells that share a common lineage with melanocytes. The ELISA tests identified three classes of anti-melanoma antibodies, as follows: (i) a melanoma-specific class that reacts almost exclusively with the melanoma lines; (ii) a tumor-specific class that reacts with melanoma and other tumor lines but does not react with the normal melanocyte, endothelial and fibroblast cells; and (iii) a lineage-specific class that reacts with the melanoma lines, melanocytes, and the glioma line but does not react with the other lines. These are rare classes from the immunized patients' repertoires of anti-melanoma antibodies, most of which are relatively nonspecific anti-self antibodies. The melanoma-specific class was isolated from one patient, and the lineage-specific class was isolated from the other patient, indicating that different patients can have markedly different responses to the same immunization protocol. The procedures described here can be used to screen the antibody repertoire of any person with cancer, providing access to an enormous untapped pool of human monoclonal anti-tumor antibodies with clinical and research potential.

Estudo da durabilidade de painéis de partículas de bagaço de cana de açúcar e resina poliuretana a base de óleo de mamona para aplicação na construção civil

O presente trabalho tem por objetivo avaliar o desempenho físico-mecânico e a durabilidade de painéis de partículas de bagaço de cana-de-açúcar com resina bicomponente a base de mamona (BCP) e compará-los com painéis de partículas de madeira comerciais (Medium Density Particleboard - MDP). Os painéis de bagaço de cana de açúcar foram fabricados com um teor de resina poliuretana a base de óleo de maona de 15%. O desempenho físico e mecânico dos painéis particulados foi analisado com base nas prescrições dos documentos normativos vigentes. Ambos os materiais foram revestidos superficialmente com resina poliuretana bicomponente à base de óleo de mamona. Avaliou-se a influência do tratamento das bordas na deterioração e no desempenho dos painéis. O acompanhamento das propriedades físico-mecânicas foi realizado antes e após os ensaios de envelhecimento por exposição natural durante 3, 6 e 12 meses, envelhecimento acelerado e de intemperismo artificial. Foi feita a avaliação, da suscetibilidade ao crescimento gerada pelo ataque de fungos emboloradores e apodrecedores nos materiais durante o envelhecimento natural e no ensaio acelerado. Foi realizada a análise colorimétrica para a identificação de mudanças de cor e brilho nos materiais após os ensaios de deterioração. Foram utilizadas as técnicas de densitometria de raios X, espectroscopia por infravermelho próximo (NIR). Os resultados obtidos indicaram a selagem lateral permitiu avaliar a superfície exposta do material permitindo a entrada da água pela superfície avaliando o efeito dos agentes de deterioração. A porcentagem de retenção para o Módulo de ruptura após o ensaio de envelhecimento por imersão em agua e secagem (APA D1) foi de 87% e 3% para BCP e MDP sem revestimento respectivamente e de 90% e 3% para BCP e MDP com revestimento. A porcentagem de retenção das propriedades mecânicas em ambos os submetidos à exposição natural diminuiu em função do tempo. Entretanto o porcentagem de retenção para os materiais BCP e MDP com revestimento superficial foi de 76% e 60% para MOR. A exposição natural mostrou que os fungos emboloradores foram predominantes em ambos os materiais. Ambos os materiais com revestimento superficial apresentaram entre 1-10% de colonização com um 70% de probabilidade. Revestimento de resina de óleo de mamona reduz o crescimento de fungos em ambos os materiais no ensaio acelerado. O perfil de densitometria permitiu analisar o processo de fabricação dos painéis e permitiu identificar a deterioração gradativa do ambos os materiais após os ensaios de envelhecimento. A intepretação mediante a analise de componentes principais (ACP) na aplicação do NIR comportou a classificação das características relacionadas a cada ensaio de deterioração de ambos os materiais sem revestimento superficial. Com base nos resultados deste trabalho, foram propostas contribuições para ajustes de metodologias para a avaliação da durabilidade e do desempenho físico e mecânico dos painéis particulados, tendo em vista a sua viabilidade técnica, em sistemas construtivos da construção civil.

Painéis de partículas de saco de cimento e embalagem longa vida aplicados como forro em protótipos de aviários

No presente trabalho, considerou o estudo do potencial de utilização de sacos de cimento e embalagens de longa vida com o intuito de agregar valor a esses resíduos, mediante a fabricação de painéis de partículas para uso como forro em protótipos de galpões avícolas. Para fabricação desse material foi utilizado sacos de cimento descartados nas obras civis, embalagens longa vida residuais e resina poliuretana bicomponente à base de óleo de mamona. O estudo foi dividido em quatro etapas: 1) Caracterização da matéria-prima (sacos de cimento); 2) Efeito da densidade e teor de resina nas propriedades físicas, mecânicas e térmicas de painéis de partículas de saco de cimento; 3) Avaliação do desempenho de embalagens longa vida e verniz como revestimentos dos painéis selecionados na etapa anterior; 4) Determinação do desempenho térmico de protótipos de aviários executados em escala reduzida e distorcida com forro de painel de saco de cimento e embalagem longa vida. Os resultados obtidos indicaram: Em razão do painel com 0,6 g.cm-3 e 12% de resina ter apresentado melhor desempenho nas propriedades investigadas, essa combinação foi selecionada para avaliar o desempenho do material (físicas, mecânicas e térmicas) quando revestido com embalagens longa vida, adotando a testemunha e o verniz como um revestimento comparativo. Dentre os revestimentos avaliados, os painéis com embalagens de longa vida, foram superiores aos revestidos com verniz, quando comparados as suas propriedades físicas, mecânicas e térmicas. Dessa maneira, painéis com 0,6 g.cm-3 e 12% de resina revestidos embalagens longa vida, foram testados como forro quanto ao desempenho térmico (primavera, verão, outono e inverno) em protótipos em escala reduzida e distorcida, mediante a determinação de índices de conforto térmico (Entalpia e IAPfc) para aves de corte. A associação do forro sob o protótipo permitiu reduzir a temperatura interna do ar e dos índices de conforto térmico na primavera, verão e outono, enquanto que no inverno não foi constatado eficácia do material. Dentre as estações estudadas, o verão e a primavera, demonstraram serem as épocas mais críticas para criação de aves corte em instalações avícolas que apresentem características semelhantes aos protótipos experimentais.

Painéis de partículas homogêneas cimento-bagaço de cana-de-açúcar curados por carbonatação acelerada

O presente estudo teve como objetivo produzir e avaliar o desempenho de painéis de partículas homogêneas de cimento-bagaço de cana-de-açúcar curados por carbonatação acelerada. Para atingir os resultados foram realizados ensaios de caracterizações morfológica e físico-química das partículas de bagaço de cana-de-açúcar, bem como ensaio de termometria para identificar a compatibilidade da matéria prima (bagaço) com o cimento. Os painéis de partículas cimento-bagaço produzidos foram submetidos a dois processos de cura distintos: 1- cura por 48 h em câmara climática, seguida por 24 h em ambiente com concentração de 15% ±0.6 de CO2, seguida por 24 dias em ambiente saturado ao ar; 2- cura em câmara climática por 48 h, seguida por 25 dias em ambiente saturado ao ar. Ao final dos 28 dias de cura e após ensaio de envelhecimento acelerado de imersão e secagem foram realizadas as caracterizações físico-mecânicas seguindo as recomendações das normativas DIN: 310; 322 e 323, bem como caracterização microestrutural e de condutividade térmica do painel de partículas cimento-bagaço. Os resultados obtidos indicaram que os painéis de partículas cimento-bagaço curados por carbonatação acelerada apresentaram melhor desempenho físico-mecânico quando comparados aos painéis não carbonatados, pois a carbonatação melhorou a interface entre as partículas e a matriz cimentícia, proporcionando maior adesividade entre as fases. E, além disso, reduziu o pH do meio alcalino em que as partículas de bagaço de cana-de-açúcar estão inseridas, minimizando o processo de degradação da lignina, celulose e hemicelulose.

Projeto de um sistema de conversor multinível para painéis fotovoltaicos

A produção de energia elétrica a partir de fontes de energia renovável está gradualmente a ser uma alternativa à energia produzida a partir de combustíveis fósseis. A técnica de conversão dessas mesmas energias para energia elétrica, para entrega na Rede de Energia Elétrica (REE), é cada vez mais estudada para que se obtenha uma maior eficiência assim como qualidade. Neste trabalho desenvolve-se um projeto de conversão de energia fotovoltaica, para produção de energia elétrica para a rede utilizando um conversor multinível, otimizando a transferência de potência assim como melhorando a forma da corrente AC. A conversão multinível é uma topologia que tem algumas vantagens relativamente à topologia de 2 níveis, permitindo trabalhar com níveis de tensão mais elevados, melhorando a qualidade de energia. O conversor multinível de díodos ligados ao ponto neutro utiliza condensadores para criar os níveis de tensão, que neste trabalho vão ser usados para ligar os painéis, otimizando a transferência de potência. Aplica-se um método de controlo das correntes AC para terem a forma a alternada e sinusoidal e em fase com a tensão da rede. Os resultados experimentais mostram que a utilização do algoritmo de procura do ponto de máxima potência dos painéis permitem a extrair a máxima potência, de acordo com as condições de irradiação solar e temperatura dos painéis.

Aspetos do dimensionamento de painéis prefabricados de fachada em GRC do tipo nervurado

O recurso a sistemas de fachadas prefabricadas no ramo da Construção Civil tem-se revelado uma opção eficaz, apresentando-se como uma solução de vanguarda no sentido de garantir vantagens ao nível da qualidade e da produtividade. A introdução de painéis de GRC (Glassfibre Reinforced Concrete) no mercado da construção trouxe vantagens ao sector uma vez que compatibiliza as vantagens da prefabricação leve, elevados níveis de desempenho e uma grande latitude em termos de formas e acabamentos. Este compósito é formado por uma matriz de argamassa reforçada com fibra de vidro. A incorporação das fibras permite melhorar as propriedades mecânicas da argamassa, principalmente ao nível da resistência de tração e flexão, fazendo com que os elementos possam ter menores espessuras e consequentemente menor peso, comparativamente com peças de betão armado. No mercado são comercializados três tipos de painéis de GRC, os do tipo nervurado, os do tipo stud frame e os do tipo sanduiche. Estes vários tipos de painéis tem as suas particularidades e a seleção depende das exigências e das características da obra. O estudo teve como alvo diferentes formas e dimensões de painéis de fachada em GRC do tipo nervurado. No presente trabalho faz-se um estudo comparativo da aplicação de dois métodos de dimensionamento. Comparam-se os resultados obtidos pela teoria clássica da flexão (TCF) e pelo método dos elementos finitos (MEF) e confrontam-se estes valores com os resultados obtidos em ensaios. Com o estudo efetuado conclui-se pela validade e utilidade da análise através da TCF, cujos resultados se aproximam bastante da análise pelo MEF. Sugerem-se coeficientes de ajustamento no sentido de adaptar a pratica de projeto em conformidade com os resultados verificados.

La historia di Gineura de gl' Almieri, che fv seppellita per morta, nella città di Fiorenza : nella quale si contiene vn bel caso d'amore : opera veramente degna d'essere letta da ogni gentile spirito.

Ascribed to Agostino Velletti--Cf. BM cat., vol. 4, col. 28.

Principes usuels de nomographie avec applications à divers problémes concernant l'artillerie et l'aviation : conférences faites à la Section technique de l'artillerie, (fv́rier 1919) /

Includes tables.

Discours servant d'introduction à l'histoire de France; lu dans la séance tenue par l'Académie Française pour la réception de M. le duc Mathieu de Montmorency, le 9 fév, 1826.

Mode of access: Internet.

Delle Historie Bresciane Di M. Helia Cavriolo Libri Dodeci; Ne' Qvali Si Vede L'Origine Et Antichità Della Città Di Brescia, Come Fv Delle Prime Che Venesse Alla Fede ... Le Gverre ... Et come peruenne sotto il ... Dominio Venetiano, Fatti Volgari Dal Molto Rev. D. Patritio Spini.

"Il Svplimento Delle Historie Bresciane Di D. Patritio Spini," p. 257-344.

Painéis compósitos de betão leve: comportamento estrutural

Os sucessivos avanços tecnológicos permitem a criação de novos materiais de construção com características otimizadas ao uso que lhes é designado. Nesta categoria enquadram-se os materiais compósitos e mais concretamente os painéis compósitos de betão aligeirado de EPS com revestimento superficial de placas Megapan® estudados neste documento. Neste documento faz-se uma abordagem aos conceitos de material compósito e uma breve análise histórica do seu uso. Descreve-se também sucintamente as características gerais dos painéis em estudo e exemplifica-se algumas aplicações do material até à presente data. São analisados testes de resistência efetuados ao material estudado e efetua-se a caracterização mecânica do mesmo. Verifica-se neste estudo que os painéis de betão aligeirado de EPS com revestimento superficial de placas Megapan® possuem resistências mecânicas que permitem a sua utilização como parte integrante de um sistema estrutural. Sugere-se uma solução construtiva para uma estrutura que utilize os painéis estudados como elemento estrutural e os respetivos pormenores construtivos. É também sugerida uma metodologia de cálculo para dimensionar a estrutura analisada.