310 resultados para Scaffolding
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IQGAPs are cytoskeletal scaffolding proteins which collect information from a variety of signalling pathways and pass it on to the microfilaments and microtubules. There is a well-characterised interaction between IQGAP and calmodulin through a series of IQ-motifs towards the middle of the primary sequence. However, it has been shown previously that the calponin homology domain (CHD), located at the N-terminus of the protein, can also interact weakly with calmodulin. Using a recombinant fragment of human IQGAP1 which encompasses the CHD, we have demonstrated that the CHD undergoes a calcium ion-dependent interaction with calmodulin. The CHD can also displace the hydrophobic fluorescent probe 1-anilinonaphthalene-8-sulphonate from calcium-calmodulin, suggesting that the interaction involves non-polar residues on the surface of calmodulin. Molecular modelling identified a possible site on the CHD for calmodulin interaction. The physiological significance of this interaction remains to be discovered.
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The IQ-motif is an amphipathic, often positively charged, a-helical, calmodulin binding sequence found in a number of eukaryote signalling, transport and cytoskeletal proteins. They share common biophysical characteristics with established, cationic a-helical antimicrobial peptides, such as the human cathelicidin LL-37. Therefore, we tested eight peptides encoding the sequences of IQ-motifs derived from the human cytoskeletal scaffolding proteins IQGAP2 and IQGAP3. Some of these peptides were able to inhibit the growth of Escherichia coli and Staphylococcus aureus with minimal inhibitory concentrations (MIC) comparable to LL-37. In addition some IQ-motifs had activity against the fungus Candida albicans. This antimicrobial activity is combined with low haemolytic activity (comparable to, or lower than, that of LL-37). Those IQ-motifs with anti-microbial activity tended to be able to bind to lipopolysaccharide. Some of these were also able to permeabilise the cell membranes of both Gram positive and Gram negative bacteria. These results demonstrate that IQ-motifs are viable lead sequences for the identification and optimisation of novel anti-microbial peptides. Thus, further investigation of the anti-microbial properties of this diverse group of sequences is merited.
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Teachers communication of musical knowledge through physical gesture represents a valuable pedagogical field in need of investigation. This exploratory case study compares the gestural behaviour of three piano teachers while giving individual lessons to students who differed according to piano proficiency levels. The data was collected by video recordings of one-to-one piano lessons and gestures were categorized using two gesture classifications: the spontaneous co-verbal gesture classification (McNeill, 1992; 2005) and spontaneous co-musical gesture classification (Simones, Schroeder & Rodger, 2013). Poisson regression analysis and qualitative observation suggest a relationship between teachers didactic intentions and the types of gesture they produced while teaching, as shown by differences in gestural category frequency between teaching students of higher and lower levels of proficiency. Such reported agreement between teachers gestural approach in relation to student proficiency levels indicates a teachers gestural scaffolding approach whereby teachers adapted gestural communicative channels to suit students specific conceptual skill levels.
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A Doena de Alzheimer (AD) a maior doena neurodegenerativa a nvel mundial, e a principal causa de demncia na populao idosa. O processamento da protena precursora de amilide (APP) pelas - e g- secretases origina o peptdeo A, que agrega em oligmeros neurotxicos e em placas senis. Estes so eventos-chave na patognese da DA que levam rutura da neurotransmisso sinptica, morte neuronal e inflamao neuronal do hipocampo e crtex cerebral, causando perda de memria disfuno cognitiva geral. Apesar dos grandes avanos no conhecimento do papel do processamento da APP na DA, a sua funo fisiolgica ainda no foi totalmente elucidada. Os mapas de interaes protena-protena (PPI) humanos tm desempenhado um papel importante na investigao biomdica, em particular no estudo de vias de sinalizao e de doenas humanas. O mtodo dois-hbrido em levedura (YTH) consiste numa plataforma para a produo rpida de redes de PPI em larga-escala. Neste trabalho foram realizados vrios rastreios YTH com o objetivo de identificar protenas especficas de crebro humano que interagissem com a APP, ou com o seu domnio intracelular (AICD), tanto o tipo selvagem como com os mutantes Y687F, que mimetizam o estado desfosforilado do resduo Tyr-687. De facto, a endocitose da APP e a produo de A esto dependentes do estado de fosforilao da Tyr-687. Os rastreios YTH permitiram assim obter de redes protenas que interagem com a APP, utilizando como isco a APP, APPY687F e AICDY687F. Os clones positivos foram isolados e identificados atravs de sequenciao do cDNA. A maior parte dos clones identificados, 118, correspondia a sequncias que codificam para protenas conhecidas, resultando em 31 protenas distintas. A anlise de protemica funcional das protenas identificadas neste estudo e em dois projetos anteriores (AICDY687E, que mimetiza a fosforilao, e AICD tipo selvagem), permitiram avaliar a relevncia da fosforilao da Tyr-687. Trs clones provenientes do rastreio YTH com a APPY687F foram identificados como um novo transcrito da protena Fe65, resultante de splicing alternativo, a Fe65E3a (GenBank Accession: EF103274), que codifica para a isoforma p60Fe65. A p60Fe65 est enriquecida no crebro e os seus nveis aumentam durante a diferenciao neuronal de clulas PC12, evidenciando o potencial papel que poder desempenhar na patologia da DA. A RanBP9 uma protena nuclear e citoplasmtica envolvida em diversas vias de sinalizao celulares. Neste trabalho caracterizou-se a nova interao entre a RanBP9 e o AICD, que pode ser regulada pela fosforilao da Tyr-687. Adicionalmente, foi identificada uma nova interao entre a RanBP9 e a acetiltransferase de histonas Tip60. Demonstrou-se ainda que a RanBP9 tem um efeito de regulao inibitrio na transcrio mediada por AICD, atravs da interao com a Tip60, afastando o AICD dos locais de transcrio ativos. O estudo do interactoma da APP/AICD, modelado pela fosforilao da Tyr-687, revela que a APP poder estar envolvida em novas vias celulares, contribuindo no s para o conhecimento do papel fisiolgico da APP, como tambm auxilia a revelar as vias que levam agregao de A e neurodegenerao. A potencial relevncia deste trabalho relaciona-se com a descoberta de algumas interaes proteicas/vias de sinalizao que podem que podem ser relevantes para o desenvolvimento de novas estratgias teraputicas na DA.
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The convenience sample for this study was taken from an A.E.C. (Attestation of Collegial Studies) Communication course of the Continuing Education Technical Support Program. A key component of this course competency is for students to develop the skill to write business letters for various purposes and to apply the three-step writing process during the crafting of the correspondence. This is achieved with a number of writing assignments which are carried out by students working in teams and completing the writing assignments out-of-class. the out-of-class work was convened using the PrimaryPad program to complete two of the writing assignments, which formed the basis of the research. This research uses a case study design that employed a repeated measures method with two conditions (teacher scaffolding vs. no teacher scaffolding). The possibility of an order effect was controlled for by using a counterbalancing of treatment design. A post-treatment questionnaire was used to gather descriptive statistics.
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In response to stress or injury the heart undergoes a pathological remodeling process, associated with hypertrophy, cardiomyocyte death and fibrosis, that ultimately causes cardiac dysfunction and heart failure. It has become increasingly clear that signaling events associated with these pathological cardiac remodeling events are regulated by scaffolding and anchoring proteins, which allow coordination of pathological signals in space and time. A-kinase anchoring proteins (AKAPs) constitute a family of functionally related proteins that organize multiprotein signaling complexes that tether the cAMP-dependent protein kinase (PKA) as well as other signaling enzymes to ensure integration and processing of multiple signaling pathways. This review will discuss the role of AKAPs in the cardiac response to stress. Particular emphasis will be given to the adaptative process associated with cardiac hypoxia as well as the remodeling events linked to cardiac hypertrophy and heart failure. This article is part of a Special Issue entitled: Cardiomyocyte Biology: Cardiac Pathways of Differentiation, Metabolism and Contraction.
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DNA assembly is among the most fundamental and difficult problems in bioinformatics. Near optimal assembly solutions are available for bacterial and small genomes, however assembling large and complex genomes especially the human genome using Next-Generation-Sequencing (NGS) technologies is shown to be very difficult because of the highly repetitive and complex nature of the human genome, short read lengths, uneven data coverage and tools that are not specifically built for human genomes. Moreover, many algorithms are not even scalable to human genome datasets containing hundreds of millions of short reads. The DNA assembly problem is usually divided into several subproblems including DNA data error detection and correction, contig creation, scaffolding and contigs orientation; each can be seen as a distinct research area. This thesis specifically focuses on creating contigs from the short reads and combining them with outputs from other tools in order to obtain better results. Three different assemblers including SOAPdenovo [Li09], Velvet [ZB08] and Meraculous [CHS+11] are selected for comparative purposes in this thesis. Obtained results show that this thesis work produces comparable results to other assemblers and combining our contigs to outputs from other tools, produces the best results outperforming all other investigated assemblers.
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La transcription, la maturation dARN, et le remodelage de la chromatine sont tous des processus centraux dans l'interprtation de l'information contenue dans lADN. Bien que beaucoup de complexes de protines formant la machinerie cellulaire de transcription aient t tudis, plusieurs restent encore identifier et caractriser. En utilisant une approche protomique, notre laboratoire a purifi plusieurs composantes de la machinerie de transcription de lARNPII humaine par double chromatographie daffinit "TAP". Cette procdure permet l'isolement de complexes protiques comme ils existent vraisemblablement in vivo dans les cellules mammifres, et l'identification de partenaires d'interactions par spectromtrie de masse. Les interactions protiques qui sont valides bioinformatiquement, sont choisies et utilises pour cartographier un rseau connectant plusieurs composantes de la machinerie transcriptionnelle. En appliquant cette procdure, notre laboratoire a identifi, pour la premire fois, un groupe de protines, qui interagit physiquement et fonctionnellement avec lARNPII humaine. Les proprits de ces protines suggrent un rle dans l'assemblage de complexes plusieurs sous-units, comme les protines d'chafaudage et chaperonnes. L'objectif de mon projet tait de continuer la caractrisation du rseau de complexes protiques impliquant les facteurs de transcription. Huit nouveaux partenaires de lARNPII (PIH1D1, GPN3, WDR92, PFDN2, KIAA0406, PDRG1, CCT4 et CCT5) ont t purifis par la mthode TAP, et la spectromtrie de masse a permis didentifier de nouvelles interactions. Au cours des annes, lanalyse par notre laboratoire des mcanismes de la transcription a contribu apporter de nouvelles connaissances et mieux comprendre son fonctionnement. Cette connaissance est essentielle au dveloppement de mdicaments qui cibleront les mcanismes de la transcription.
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Il est reconnu, depuis une centaine dannes, que des dsordres de la coagulation, regroups sous le terme de coagulopathies, sont souvent associs au dveloppement noplasique. Pendant de nombreuses annes, ces coagulopathies furent souvent reconnues comme une simple consquence du dveloppement du cancer. Dailleurs, pour les cliniciens, lapparition de ces anomalies sanguines constitue souvent le premier signe clinique dun cancer occulte. Toutefois, ltude approfondie du lien existant entre le systme hmostatique et le cancer indique que diffrents facteurs hmostatiques vont interagir avec soit lenvironnement tumoral ou soit la tumeur elle-mme et influencer le dveloppement du cancer. Au cours de nos travaux, nous avons port une attention particulire deux protines jouant un rle primordial dans lhmostase. Le facteur tissulaire (TF) et linhibiteur du facteur tissulaire (TFPI) peuvent jouer des rles pro- ou anti-noplasique, et ce indpendamment de leurs fonctions hmostatiques normales. Dans le premier volet de cette thse, nous avons tudi les proprits antiangiogniques de TFPI. Langiogense, soit la formation de nouveaux vaisseaux sanguins partir du rseau pr-existant, est reconnue comme tant une tape cle du dveloppement tumoral. Daprs nos travaux, le TFPI peut inhiber la formation de structures de type capillaire des cellules endothliales (CEs) de la veine ombilicale humaine (HUVEC), et ce une IC 50 de 5 nM, soit la concentration physiologique de linhibiteur. De plus, le TFPI bloque la migration des cellules endothliales lorsque ces dernires sont stimules par la sphingosine-1-phosphate (S1P), une molcule relche lors de lactivation des plaquettes sanguines. Cette inhibition de la migration cellulaire sexplique par leffet du TFPI sur ladhsion des CEs. En effet, TFPI inhibe la phosphorylation de deux protines cles participant la formation des complexes dadhsion focales soit FAK (focal adhesion kinase) et PAX (paxilin). Linhibition de ces deux protines suggre quil y ait une rorganisation des complexes focaux, pouvant expliquer la perte dadhrence. Finalement, des tudes de microscopie confocale dmontrent que les cellules traites au TFPI changent de morphologie au niveau du cytosquelette dactine provoquant une dsorganisation des structures migratoires (pseudopodes). Les effets du TFPI au niveau de la migration, de ladhsion et de la morphologie cellulaire sont strictement spcifiques aux cellules endothliales humaines, puisque aucun neffet nest observ en traitant des cellules cancreuses de glioblastomes (GB) humains, qui sont normalement des tumeurs hautement vascularises. En rsum, cette premire tude dmontre que le TFPI est un inhibiteur de langiogense. Dans le second volet de cette thse, nous nous sommes intresss aux diffrents rles de TF, le principal activateur de la coagulation. Cette protine est galement implique dans le dveloppement noplasique et notamment celui des mdulloblastomes (MB) chez lenfant via des fonctions hmostatiques et non-hmostatiques. Nos travaux dmontrent que lexpression de TF est induite par la voie de signalisation de HGF (hepatocyte growth factor) et de son rcepteur Met. Cet effet de HGF/Met semble spcifique aux MB puisque HGF ne peut stimuler lexpression de TF au niveau des cellules cancreuses de glioblastomes. TF, exprim la surface des cellules mdulloblastiques (DAOY), est responsable de lactivit pro-thrombognique de ces cellules, ainsi quun acteur important de la migration de ces cellules en rponse au facteur VIIa (FVIIa). De plus, en tudiant 18 spcimens cliniques de MB, nous avons tabli un lien entre lintensit dexpression de TF et de Met. Limportance de cette corrlation est galement suggre par lobservation que les cellules exprimant les plus forts taux de TF et de Met sont galement les plus agressives en termes dindex de prolifration et de dissmination mtastatiques. En rsum, ces travaux reprsentent le point de dpart pour la mise au point de TF comme un marqueur diagnostique clinique dans les cas de tumeurs du cerveau pdiatriques. De plus, llucidation de la voie de signalisation molculaire responsable de lexpression de TF permet de mieux comprendre la biologie et le fonctionnement de ces tumeurs et de relier le profil dexpression de TF aux phnotypes agressifs de la maladie. Il est reconnu que HGF peut galement jouer un rle protecteur contre lapoptose. Dans le troisime volet de cette thse, nous avons remarqu que cette protection est corrle lexpression de TF. En rduisant nant lexpression de TF laide de la technologie des ARN silencieux (siRNA), nous dmontrons que HGF ne protge plus les cellules contre lapoptose. Donc, TF mdie lactivit anti-apoptotique de HGF. TF assume cette protection en inactivant la phosphorylation de p53 sur la srine 15, empchant ainsi la translocation de p53 au noyau. Finalement, lexpression de TF et son interaction avec le FVIIa, au niveau des cellules mdulloblastiques favorise la survie de ces dernires et ce mme si elles sont soumises de fortes concentrations de mdicaments couramment utilises en cliniques. Ce troisime et dernier volet dmontre limplication de TF en tant que facteur impliqu dans la survie des cellules cancreuses, favorisant ainsi le dveloppement de la tumeur. Dans son ensemble, cette thse vise dmontrer que les facteurs impliqus normalement dans des fonctions hmostatiques (TFPI et TF) peuvent contribuer rguler le dveloppement tumoral. Tout systme physiologique et pathologique est dpendant dun quilibre entre activateur et inhibiteur et la participation de TF et de TFPI la rgulation du dveloppement noplasique illustre bien cette balance dlicate. Par sa contribution anti- ou pro-noplasique le systme hmostatique constitue beaucoup plus quune simple consquence du cancer; il fait partie par laction de TF des stratgies labores par les cellules cancreuses pour assurer leur croissance, leur dplacement et leur survie, alors que TFPI tente de limiter la croissance tumorale en diminuant la vascularisation.
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Le GABA est le principal neurotransmetteur inhibiteur du SNC et est impliqu dans le dveloppement du cerveau, la plasticit synaptique et la pathognse de maladies telles que lpilepsie, les troubles de lanxit et la douleur chronique. Le modle actuel de fonctionnement du rcepteur GABA-B implique lhtrodimrisation GABA-B1/B2, laquelle est requise au ciblage la surface membranaire et au couplage des effecteurs. Il y est cependant des rgions du cerveau, des types cellulaires et des priodes du dveloppement crbral o la sous-unit GABA-B1 est exprime en plus grande quantit que GABA-B2, ce qui suggre quelle puisse tre fonctionnelle seule ou en association avec des partenaires inconnus, la surface cellulaire ou sur la membrane rticulaire. Dans le cadre de cette thse, nous montrons la capacit des rcepteurs GABA-B1 endognes activer la voie MAPK-ERK1/2 dans la ligne drive de la glie DI-TNC1, qui nexprime pas GABA-B2. Les mcanismes qui sous-tendent ce couplage demeurent mal dfinis mais dpendent de Gi/o et PKC. Limmunohistochimie de rcepteurs endognes montre par ailleurs que des anticorps GABA-B1 dirigs contre la partie N-terminale reconnaissent des protines localises au RE tandis des anticorps C-terminaux (CT) marquent une protine intranuclaire. Ces donnes suggrent que le domaine CT de GABA-B1 pourrait tre relch par protolyse. Lintensit des fragments potentiels est affecte par le traitement agoniste tant en immunohistochimie quen immunobuvardage de type western. Nous avons ensuite examin la rgulation du clivage par le protasome en traitant les cellules avec linhibiteur epoxomicine pendant 12 h. Cela a rsult en laugmentation du marquage intranuclaire de GABA-B1-CT et dun interacteur connu, le facteur de transcription pro-survie ATF-4. Dans des cellules surexprimant GABA-B1-CT, linduction et la translocation nuclaire dATF-4, qui suit le traitement epoxomicine, a compltement t abolie. Cette observation est associe une forte diminution du dcompte cellulaire. tant donn que les trois derniers rsidus de GABA-B1-CT (LYK) codent un ligand pseudo-PDZ et que les protines domaines PDZ sont impliques dans la rgulation du ciblage nuclaire et de la stabilit de protines, en complment de leur rle dchaffaud la surface cellulaire, nous avons mut les trois derniers rsidus de GABA-B1-CT en alanines. Cette mutation a compltement annul les effets de GABA-B1-CT sur linduction dATF-4 et le dcompte cellulaire. Cette deuxime srie dexpriences suggre lexistence possible de fragments GABA-B1 intranuclaires rguls par le traitement agoniste et le protasome dans les cellules DI-TNC1. Cette rgulation dATF-4 dpend des rsidus LYK de GABA-B1-CT, qui modulent la stabilit de GABA-B1-CT et favorisent peut-tre la formation dun complexe multiprotique incluant GABA-B1-CT, ATF-4, de mme quune protine dchaffaudage inconnue. En somme, nous dmontrons que les sous-units GABA-B1 localises au RE, lorsque non-htrodimrises avec GABA-B2, demeurent capables de moduler les voies de signalisation de la prolifration, la diffrentiation et de la survie cellulaire, via le couplage de protines G et possiblement la protolyse rgule. Les mcanismes de signalisation proposs pourraient servir de nouvelle plate-forme dans la comprhension des actions retardes rsultant de lactivation des rcepteurs 7-TMs.
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La prsente recherche collaborative vise tudier les pratiques de lecture haute voix denseignantes expertes et leur influence sur le dveloppement de lhabilet des lves du prscolaire faire des infrences. Plus prcisment, nous dcrivons les interventions, lors des lectures haute voix, de quatre enseignantes expertes que nous avons formes pour travailler la comprhension infrentielle et les comparons celles de deux enseignantes expertes non formes (objectif 1). Puis, nous examinons linfluence de leurs pratiques de lecture haute voix sur le dveloppement de lhabilet faire des infrences de leurs lves (n=92) (objectif 2). Enfin, nous nous intressons, titre exploratoire, au potentiel de la recherche collaborative comme voie de dveloppement professionnel des enseignants (objectif 3). Afin datteindre nos objectifs, nous avons observ les enseignantes quatre reprises, lors de lectures dalbums de littrature de jeunesse. Les donnes obtenues partir de ces pratiques observes ont t compltes par celles issues des pratiques dclares des enseignantes pour toute la dure de la recherche (neuf semaines). De plus, nous avons valu lhabilet raliser des infrences des lves de ces six enseignantes deux reprises, au dbut et la fin de la recherche. Finalement, les enseignantes ont rempli deux questionnaires crits sur limpact de cette recherche sur leurs pratiques, lun la fin de la recherche et lautre deux ans aprs celle-ci. Nos rsultats indiquent que si toutes les enseignantes travaillaient les infrences, il existe cependant des diffrences notables dans leur faon de mener ce travail. Trois des enseignantes formes (enseignantes 1, 2 et 3) ont majoritairement privilgi la co-laboration du sens des pisodes implicites et se sont montres trs efficaces pour soutenir leurs lves dans ce travail de construction du sens. Lautre enseignante forme (enseignante 4), en raison dune appropriation difficile du contenu de la formation, nest pas parvenue offrir ses lves un tayage adquat, malgr ses nombreuses tentatives pour les amener faire des infrences. Les enseignantes non formes (enseignantes 5 et 6) ont, quant elles, mis plus frquemment sur la transmission du sens des pisodes implicites et ont galement soutenu moins efficacement leurs lves dans llaboration du sens. Ces diffrences dans la faon de travailler les infrences se sont rpercutes sur la progression des lves entre le dbut et la fin de la recherche. Ceux des enseignantes 1, 2 et 3 obtiennent des rsultats significativement suprieurs ceux des trois autres enseignantes. Ainsi, il ne suffit pas de travailler les infrences lors des lectures haute voix pour assurer la progression des lves. Dautres facteurs revtent aussi une grande importance : le choix doeuvres de qualit, lengagement des lves dans les discussions pour co-laborer le sens et ltayage adquat de lenseignant. Enfin, il semblerait que lactivit rflexive suscite lors dune participation une recherche collaborative et le soutien offert par ltudiante-chercheuse aient donn aux enseignantes la possibilit dapporter des changements durables dans leurs pratiques. En ce sens, la recherche collaborative parat tre une voie prometteuse pour contribuer au dveloppement professionnel des enseignants.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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La prsente recherche vise dcrire les pratiques denseignement de la littratie au premier cycle du primaire en contexte montralais denseignants considrs experts. Plus prcisment, les trois objectifs de recherche consistent dcrire les pratiques denseignement de la langue crite au premier cycle du primaire en contexte montralais privilgies par certains enseignants considrs experts (N=6) (objectif 1); dcrire les diffrentes formes de diffrenciation pdagogique privilgies pour lenseignement de la lecture et de lcriture en contexte montralais de certains enseignants considrs experts afin de rpondre aux besoins varis de tous leurs lves (objectif 2) et tudier les liens possibles entre les pratiques denseignement de la langue crite denseignants considrs experts et la progression de leurs lves (N=100) du premier cycle du primaire en contexte montralais, au regard de leur connaissance des correspondances phonographiques et de la norme orthographique (objectif 3). Afin de rpondre aux objectifs, deux entretiens ont t mens auprs des enseignantes, de mme que deux observations en classe, une lautomne et une au printemps. Pour leur part, les lves ont t soumis deux tches dcriture deux reprises durant lanne (une tche de production de mots et une tche de production de texte) permettant de mesurer leur progression en cours danne relativement leurs connaissances des correspondances phonographiques et de la norme orthographique. Nos rsultats nous ont permis de recueillir des pratiques trs diversifies et conduites avec une frquence fort diffrente dune enseignante lautre. La densit des contenus abords en classe diffre galement beaucoup entre les enseignantes. En lien avec le modle du multi-agenda de Bucheton et Soul (2009), les cinq composantes constituant la matrice de lactivit de lenseignant se retrouvent dans toutes les classes, mais ces proccupations noccupent pas toutes la mme place dans les pratiques des enseignantes de la recherche. Nos rsultats indiquent aussi que toutes les enseignantes diffrencient leur enseignement, mais de faon variable. Il semble que ce soit la diffrenciation des processus, des contenus et des structures qui soit la plus aise mettre en place en classe. En lien avec notre adaptation du modle de diffrenciation pdagogique de Caron (2008), il semble que ce soit la diversification et loffre de choix qui sont mobilises le plus frquemment. Les mesures dadaptation sont rarement mises en avant dans les pratiques de classe, tandis que les mesures dindividualisation nont pas t constates. En ce qui a trait aux rsultats des lves aux tches en criture, nos rsultats indiquent que deux groupes se dmarquent parmi les six. En effet, cest dans ces deux classes que la plus forte progression est constate. Les pratiques des enseignantes de ces deux classes sont trs diversifies et elles sont les seules mettre en avant dans leurs pratiques tous les dispositifs dont il est question en entretiens. De plus, les contenus enseigns sont denses, ce qui est rput pour caractriser les pratiques des enseignants efficaces (Hall, 2003). De mme, ces deux enseignantes offrent un tayage de grande qualit leurs lves et matrisent parfaitement le pilotage des tches. La prsente recherche peut servir apporter un clairage nouveau sur les pratiques de littratie des enseignants considrs experts afin de mieux comprendre leurs pratiques, de mme que la place quils accordent la diffrenciation pdagogique.
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Les rcepteurs coupls aux protines G (RCPG) constituent la plus grande famille de protines membranaires du gnome humain. Ils transmettent les signaux extracellulaires provenant de plusieurs stimuli comme les odeurs, les ions, les hormones et les neurotransmetteurs, l'intrieur des cellules. En se liant aux RCPGs, ces molcules contribuent la stabilisation des changements conformationnels activateurs qui se propagent jusqu'au domaine intracellulaire des rcepteurs. Ces derniers engagent ensuite un ou plusieurs effecteurs, comme les protines G htrotrimriques et les -arrestines (arrs), qui activent une cascade d'vnements molculaires menant la rponse cellulaire.Rcemment, la publication de structures cristallines de RCPGs liant des ligands diffusibles a offert une opportunit de raffiner une rsolution atomique les modles des mcanismes de transduction des signaux. Dans la premire partie de cette thse, nous avons donc explor les dterminants de la signalisation du rcepteur prototypique 2-adrnergique (2AR), induite par les -bloqueurs. En ne tenant compte que de leur efficacits sur le 2AR dans les voies de l'adnylate cyclase (AC) et des protines kinases actives par les facteurs mitogniques (MAPK), les -bloqueurs peuvent tre classs en 3 groupes distincts (agoniste inverse AC / agoniste MAPK, antagoniste neutre AC / agoniste MAPK et agoniste inverse AC / agoniste inverse MAPK). Afin de dterminer le lien entre leur efficacit et leur mode de liaison, nous avons ralis des expriences d'arrimages molculaires in silico entre des -bloqueurs de chacun des groupes et la structure cristalline du 2AR lie au carazolol. De manire intressante, les ligands l'intrieur d'un groupe partagent un mode de liaison, alors que ceux des ligands entre les groupes divergent, suggrant que le mode de liaison des -bloqueurs pourrait tre utilis pour prdire leur l'efficacit. En accord avec cette hypothse, nous avons prdit et confirm l'efficacit agoniste MAPK du carazolol, un inverse agoniste AC du 2AR se liant au rcepteur de manire similaire au groupe inverse agoniste AC / agoniste MAPK. De manire intressante, le groupement aryl des ligands agonistes inverses agonistes AC / agoniste MAPK, le seul groupement chimique variable de ce groupe, est prdite pour lier la rgion des 3e et 5e hlices transmembranaires (TM3 et TM5). Nous avons donc mis l'hypothse que cette rgion pourrait tre un dterminant de l'efficacit de ces ligands. En accord avec cette dernire, la mutation de 2 rsidus (T118I, S203A) localiss proches du site de liaison des groupements aryls des -bloqueurs, prvient l'efficacit agoniste inverse de l'ICI-118551 sur la voie de l'AC sans affecter l'efficacit d'un agoniste, indiquant que cette rgion est importante pour la transmission de l'effet agoniste inverse, du moins sur la voie de l'AC. Les arrs sont des protines d'chafaudage qui coordonnent la formation de complexes avec plusieurs dizaines d'effecteurs de signalisation. Originalement identifies pour leur rle dans la dsensibilisation et l'internalisation des RCPGs, elles sont aussi d'importants effecteurs de la signalisation des RCPGs indpendante des protines G htrotrimriques. Cependant, contrairement aux protines G htrotrimriques, il n'existe que peu d'outils pour les tudier. Ainsi, la deuxime partie de la thse est ddie au dveloppement d'outils pour l'tude des arrs. cette fin, nous avons d'abord tent de transposer une mthode de mesure de l'interaction entre 2 protines par la technologie de transfert d'nergie de bioluminescence par rsonance (BRET) en microscopie et chez des souris transgniques afin de mesurer de manire subcellulaire et dans un contexte natif l'engagement de la arr des RCPGs. Ainsi, nous avons tabli les preuves de principe que le BRET peut tre utilis pour localiser l'interaction entre la arr et le rcepteur de la vasopressine de type 2 (V2R) sur une cellule au microscope et pour dtecter l'interaction entre la arr et le 2AR sur des tissus de souris transgniques exprimant ces protines fusionnes avec des partenaires BRET. Finalement, il n'existe aucun inhibiteur pharmacologique ciblant les arrs. Ainsi, grce la combinaison d'approches de criblage virtuel sur un modle de la structure des arrs et d'essais de validation cellulaire, nous avons dvelopp un inhibiteur pharmacologique des arrs. l'aide de cet outil, nous avons confirm l'implication des arrs dans l'activation des MAPK par le V2R, mais aussi montr un nouveau rle des arrs dans le recyclage du 2AR. Les connaissances et outils dvelopps dans cette thse permettront de mieux comprendre les dterminants molculaires de la signalisation des RCPGs et entre autres, grce des nouvelles approches pour tudier le rle cellulaire et physiologique des arrs.
Resumo:
La division cellulaire est un processus fondamental des tres vivants. chaque division cellulaire, le matriel gntique d'une cellule mre est dupliqu et sgrg pour produire deux cellules filles identiques; un processus nomm la mitose. Tout d'abord, la cellule doit condenser le matriel gntique pour tre en mesure de sparer mcaniquement et galement le matriel gntique. Une erreur dans le niveau de compaction ou dans la dynamique de la mitose occasionne une transmission ingale du matriel gntique. Il est suggr dans la littrature que ces phnomnes pourraient caus la transformation des cellules cancreuses. Par contre, le mcanisme molculaire gnrant la coordination des changements de haut niveau de la condensation des chromosomes est encore incompris. Dans les dernires dcennies, plusieurs approches exprimentales ont identifi quelques protines conserves dans ce processus. Pour dterminer le rle de ces facteurs dans la compaction des chromosomes, j'ai effectu un criblage par ARNi coupl de l'imagerie haute-rsolution en temps rel chez l'embryon de C. elegans. Grce cette technique, j'ai dcouvert sept nouvelles protines requises pour l'assemblage des chromosomes mitotiques, incluant la Ribonuclotide rductase (RNR) et Topoisomrase II (topo-II). Dans cette thse, je dcrirai le rle structural de topo-II dans l'assemblage des chromosomes mitotiques et ces mcanismes molculaires. Lors de la condensation des chromosomes, topo-II agit indpendamment comme un facteur d'assemblage local menant par la suite la formation d'un axe de condensation tout au long du chromosome. Cette localisation est l'oppos de la position des autres facteurs connus qui sont impliqus dans la condensation des chromosomes. Ceci reprsente un nouveau mcanisme pour l'assemblage des chromosomes chez C. elegans. De plus, j'ai dcouvert un rle non-enzymatique la protine RNR lors de l'assemblage des chromosomes. Lors de ce processus, RNR est impliqu dans la stabilit des nuclosomes et alors, permet la compaction de haut niveau de la chromatine. Dans cette thse, je rapporte galement des rsultats prliminaires concernant d'autres nouveaux facteurs dcouverts lors du criblage ARNi. Le plus important est que mon analyse rvle que la dpltion des nouvelles protines montre des phnotypes distincts, indiquant la fonction de celles-ci lors de l'assemblage des chromosomes. Somme toute, je conclus que les chromosomes en mtaphase sont assembls par trois protines ayant des activits diffrentes d'chafaudage: topoisomrase II, les complexes condensines et les protines centromriques. En conclusion, ces tudes prouvent le mcanisme molculaire de certaines protines qui contribuent la formation des chromosomes mitotiques.
