Análise eletroforética de proteínas recombinantes obtidas de Pichia pastoris

A glicerol quinase é uma proteína tetramérica que cataliza a fosforilação do glicerol a glicerol-3-fosfato, composta por quatro subunidades - sua análise eletroforética fornecerá apenas uma banda se for constatada a sua pureza num gel não desnaturante - e sua reação com o glicerol é dependente de magnésio e de ATP. A eletroforese de proteínas utiliza como suporte um gel de poliacrilamida, que é formado pela polimerização de monômeros de acrilamida ao longo da sua cadeia e ligações cruzadas de cadeias pela inclusão de um co-monômero bifuncional apropriado, usualmente a N,N’ – metileno-bis-acrilamida ou apenas Bis . A eletroforese de proteínas mais comum é a que utiliza SDS para um gel de poliacrilamida desnaturante. O SDS é um sal chamado Dodecil Sulfato de Sódio que tem por característica se ligar a cadeia proteína nos resíduos de aminoácidos apolares, deixando com a carga negativa, sendo assim, toda proteína fica com carga total negativa, migrando para o anodo na eletroforese. As técnicas de purificação utilizadas foram ultrafiltração e precipitação com ácido tricloro acético, etanol gelado e sulfato de amônio. A dupla precipitação com etanol resultou na recuperação de maior quantidade de proteínas. A coloração do gel com prata foi mais sensível do que Comassie blue. O gel de eletroforese mostrou quatro bandas, correspondentes às quatro subunidades da glicerol quinase quando revelados com prata em gel de SDS-PAGE.

Efeito da ingestão aguda de taurina sobre o desempenho físico e metabolismo lipídico de nadadores de elite de Ribeirão Preto

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Crude glycerin in the supplement for beef cattle on pasture

Pós-graduação em Zootecnia - FCAV

Produção de 1,3-propanodiol por Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli: otimização de meio e clonagem de genes

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do desponte de panículas de sorgo sacarino sobre a qualidade da matéria-prima e produção de bioetanol

Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária - FCAV

Filmes de gelana e pectina reticuladas ionicamente para liberação colônica

O cólon tem sido explorado nas últimas décadas como sítio de liberação de fármacos. A goma gelana e a pectina são polissacarídeos hidrofílicos naturais promissores para a obtenção de sistemas de liberação cólon-específica de fármacos, uma vez que são degradados especificamente por enzimas produzidas pela microbiota deste órgão. Filmes poliméricos apresentam grande aplicação no revestimento de formas farmacêuticas sólidas e podem permitir o controle das taxas de liberação de fármacos e/ou seu direcionamento para um órgão específico. Além disso, modificações químicas como a reticulação iônica podem alterar propriedades físico-químicas como reduzir a hidrofilia do sistema. Neste trabalho foram obtidos e caracterizados filmes de goma gelana e pectina reticuladas ionicamente com cátion trivalente (Al3+). Os efeitos da concentração de polímeros, agente reticulante e plastificante (glicerol) utilizados na preparação das amostras foram avaliados a partir da caracterização das propriedades mecânicas, físicas e químicas dos filmes. A análise macroscópica revelou filmes flexíveis, homogêneos e translúcidos e a análise por microscopia eletrônica de varredura mostrou que a reticulação contribuiu para a formação de filmes com superfícies rugosas. Os baixos valores de transmissão de vapor d'água obtidos indicam a possibilidade de uma importante proteção contra a umidade. A absorção de líquido pH-dependente dos filmes foi demonstrada e a menor absorção de líquido em meio ácido deve garantir uma proteção da forma farmacêutica, quando em contato com o meio gástrico. Os filmes se mostraram bastante mucoadesivos, o que deve favorecer a retenção da forma farmacêutica no sítio alvo e as características mecânicas se mostraram favoráveis para a elaboração de filmes para revestimento de formas farmacêuticas sólidas

Estudo de interação entre um hormônio estrógeno e modelos simples de membrana biológica

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Criopreservação de sêmen equino: uma revisão

A utilização do sêmen resfriado na espécie equina é amplamente difundida, no entanto, quando se trata do sêmen congelado existem certos entraves, os quais tornam o emprego desta biotécnica limitado. Porém seu uso está crescendo e com isso pesquisas com meios diluidores e protocolos de congelação têm sido realizados, a fim de se estabelecer um protocolo que seja eficiente para a congelação do sêmen da maioria dos garanhões. Essa revisão sistemática tem como objetivo a análise de estudos que tratam da congelabilidade do sêmen equino, bem como os principais componentes de um meio diluidor, a fim de demonstrar suas funções e fornecer alternativas para a substituição ou associação, principalmente de crioprotetores. Para tanto, foram utilizadas bases de dados com a seguinte estratégia: criopreservação, congelamento, diluentes, crioprotetores, glicerol, leite, sêmen e equino, presentes no título ou resumo. Dentre os artigos encontrados foram selecionados 15 artigos nas línguas portuguesa, espanhola e inglesa, publicados em revistas científicas ou teses de mestrado, doutorado e trabalhos de conclusão de curso. Tais artigos permitiram concluir que não existem protocolos de congelamento definidos para grupos de animais, mas que deve ser observado cada indivíduo, ressaltando sua peculiaridade e estabelecendo o melhor diluente e protocolo

Lipases microbianas: produção, propriedades e aplicações biotecnológicas

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico(CNPq)

Produção de bioetanol a partir da fermentação de caldo de sorgo sacarino e cana-de-açúcar

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Otimização dos parâmetros para obtenção de nanotubos em Ti-Cp por anodização eletroquímica e aplicação na liga experimental Ti-35Nb-7Zr

Pós-graduação em Engenharia Mecânica - FEG

Determinação de fósforo em biodiesel utilizando eletrodo quimicamente modificado com nanopartículas de ferro

Once petroleum is na exhaustible source of energy, alternative fuels are having more prominence. A much discussed option for replacing fossil fuels is the use of biofuels derived from oils or fats, especially biodiesel. The biodiesel preparation is through a reaction named transesterification, a reaction of triglycerides with a short chain alcohol with a catalyst, producing a mixture of fatty acid esters and glycerol. According to ANP (National Petroleum Agency) specifications, biodiesel can have contaminants due to the catalyst or oil used on its synthesis, such as phosphorus, wich can damage the catalytic converter and cause significant increase in the particles emission. This project aims to develop na alternative method using chemically modified electrodes with iron nanoparticles for determination of phosphorus in biodiesel. For the formation of the iron nanoparticles film on the surface of a glassy carbon electrode, was used a iron sulfate solution. The film was formed after 10 successive cycles, with a scanning speed of 50 mV s-1 and a potential range of -0,9 to -1,25 V. To reduce possible oxides on the surface and activate the electrode, it has been subjected to a cathodic polarization with a potential of -1,25 V for 15 minutes in a sodium hydroxide solution. In cyclic voltammograms obtained in the study of the speed of scanning, there is an increase in the intensity of the anodic and cathodic current peaks. The cathodic peak current varied linearly with the square root of scan rate, showing that the electrode is controlled by diffusion. After successive additions of phosphate there is a linear variation in the current peak in the concentration range of 1,0 x 10-7 a 1,0 x 10-6 mol L-1. To determine if the concentration of phosphorus in real sample, the method of adding standard was used by adding aliquots of phosphate ions in the solution containing soy biodiesel extracted with ....

Lipid structural information from a single equine embryo by MALDI-MS

O objetivo deste trabalho foi relatar o potencial da técnica de MALDI-MS para caracterizar espécies de lipídios presentes em um único embrião equino e estudar algumas estruturas lipídicas detectadas por dissociação induzida por colisão (CID). No espectro de modo íon positivo, pudemos observar espécies, principalmente, protonadas e sodiadas de esfingomielinas (SM), fosfatidileolinas (PC) e triacilgliceróis (TAG). No modo negativo, observamos fosfatidiletanolaminas (PE) e fosfatidilinositos (PI). Espectros de íons de lípidos com maior intensidade foram utilizados para demonstrar o potencial da informação estrutural por MALDI-MS/MS. O espectro no modo positivo de m/z (massa sobre carga) 760,6 (atribuída como PC34:1) apresentou características de fragmentos PC de m/z 184,1 (denominada cabeça polar de colina), além de perda neutral (NL) de m/z 183 (fosforilcolina). Para o íon de m/z 766,6 (atribuída como PE38:5), observou-se a NL de 140, característica do PE. Para o íon de m/z 808,7 (38,5 atribuído como PC), além do fragmento m/z 184,1 na NL de 183, foi possível observar a perda de trimetilamina (íon de m/z 749,6) e o ciclofosfano (íon de m/z 147,0). Finalmente, para o modo de íon negativo, foram isolados e fragmentados o íon de m/z 863,6 que foi atribuído como PI36:1, devido à presença de m/z 153 (fosfato de glicerol – H2O-H ), 223 (inositol fosfo - 2H2O-H) , 241 (fosfoinositol – H2O-H), 281 (ácido oleico) e 581,3 (lisofosfoinositol – H2O+H). Concluímos que a MALDI - MS permite a detecção de uma ampla gama de espécies de PC, SM, PE, PI e TAG lipídicas, bem como a caracterização rápida e confiante de estruturas lipídicas a partir de um único embrião equino.

Wettability behavior of nanotubular TiO2 intended for biomedical applications

Nanotubes have been subject of studies with regard to their ability to promote differentiation of several cells lines. Nanotubes have been used to increase the roughness of the implant surfaces and to improve bone tissue integration on dental implant. In this study TiO2 nanotube layer prepared by anodic oxidation was evaluated. Nanotube formation was carried out using Glycerol-H2O DI(50-50 v/v)+NH4F(0,5 a 1,5% and 10-30V) for 1-3 hours at 37ºC. After nanostructure formation the topography of surface was observed using field-emission-scanning-microscope (FE-SEM). Contact angle was evaluated on the anodized and non-anodized surfaces using a water contact angle goniometer in sessile drop mode with 5 μL drops. In the case of nanotube formation and no treatment surface were presented 39,1° and 75,9°, respectively. The contact angle describing the wettability of the surface is enhanced, more hydrophilic, on the nanotube surfaces, which can be advantageous for enhancing protein adsorption and cell adhesion.

Using Pichia pastoris to produce recombinant glycerol kinase

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)