Análise e identificação de produtos do catabolismo de heme nas formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi

O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, possui um ciclo de vida complexo, deve lidar com diversas condições do ambiente e depende dos hospedeiros para suprir suas necessidades nutricionais. Uma delas é a necessidade de captar a molécula de heme (Fe-protoporfirina IX) que será utilizada como fator de crescimento. Os mecanismos envolvendo o metabolismo de heme são cruciais para a sobrevivência do T. cruzi pois o parasito não possui várias enzimas de biossíntese dessa porfirina e o heme livre pode apresentar citotoxicidade para célula. Na tentativa de perseguir o destino final do heme no parasito, nós estudamos essa via inexplorada no T. cruzi. Nessa tese, nós demonstramos que epimastigotas cultivados com heme, produziram os compostos, α-meso hidroxiheme, verdoheme e biliverdina (identificados por HPLC acoplado á espectrofotômetria). Além disso, nós observamos através de análise dos extratos de epimastigotas no espectrômetro de massas (LQT Orbitrap), espécies iônicas de m/z 583,4 e m/z 619,3. A fragmentação subsequente desses íons originaram espécies filhas típicas das moléculas de biliverdina e verdoheme, respectivamente. Nós observamos também, espécies iônicas de m/z 1397,4 e m/z 1135,4. A fragmentação dessas espécies produziram íons, sendo um deles com a mesma massa molecular de heme (m/z 616,3). Essa espécie iônica por sua vez, gerou fragmentos iônicos idênticos a uma molécula de heme, confirmando que esses intermediários são produtos da modificação da porfirina. Baseado nesses resultados, nós propomos um modelo onde o catabolismo de heme em T. cruzi, envolveria a conjugação da bis(glutationil)spermina, um derivado da tripanotiona presente em tripanossomatídeos, à porfirina (m/z 1137,4), seguido da remoção de dois resíduos de ácidos glutâmicos (m/z 1135,4). Embora o significado bioquímico e fisiológico da adição desse resíduo tiol na molécula de heme ainda é pouco compreendido, alguns trabalhos demonstram a abilidade desses compostos em ligar na porfirina, sem contar também, que esse heme conjugado poderia resultar em uma forma efetiva de prevenção de danos à membrana e a célula ocasionados pelo acúmulo de heme livre. Em conjunto, esses resultados fornecem novas abordagens do metabolismo de heme em T. cruzi, revelando possíveis alvos de intervenção quimioterápica futuros. Nossa proposta está direcionada para uma via ativa de catabolismo de heme que inclui a adição de grupos tiol (derivado da tripanotiona) à heme e a clivagem do anel porfirínico originando a molécula de biliverdina.

Elemental signatures in otoliths of larval walleye pollock (Theragra chalcogramma) from the northeast Pacific Ocean

The population structure of walleye pollock (Theragra chalcogramma) in the northeastern Pacific Ocean remains unknown. We examined elemental signatures in the otoliths of larval and juvenile pollock from locations in the Bering Sea and Gulf of Alaska to determine if there were significant geographic variations in otolith composition that may be used as natural tags of population affinities. Otoliths were assayed by using both electron probe microanalysis (EPMA) and laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS). Elements measured at the nucleus of otoliths by EPMA and laser ablation ICP-MS differed significantly among locations. However, geographic groupings identified by a multivariate statistical approach from EPMA and ICP-MS were dissimilar, indicating that the elements assayed by each technique were controlled by separate depositional processes within the endolymph. Elemental profiles across the pollock otoliths were generally consistent at distances up to 100 μm from the nucleus. At distances beyond 100 μm, profiles varied significantly but were remarkably consistent among individuals collected at each location. These data may indicate that larvae from various spawning locations are encountering water masses with differing physicochemical properties through their larval lives, and at approximately the same time. Although our results are promising, we require a better understanding of the mechanisms controlling otolith chemistry before it will be possible to reconstruct dispersal pathways of larval pollock based on probe-based analyses of otolith geochemistry. Elemental signatures in otoliths of pollock may allow for the delineation of fine-scale population structure in pollock that has yet to be consistently revealed by using population genetic approaches.

不同年代推出的冬小麦(Triticun aestivum L)品种农艺性状以及光合生理生态特性

本文探讨了五十年来北京地区广泛推广的17个冬小麦(Triticun aestivum L)品种在品种改良的过程中农艺性状和某些光合特性的变化趋势。从中选出形态、产量和推出年代差异最大的3个冬小麦品种：京冬8号、农大139和燕大1817，种植在相同的环境条件下，进一步研究与冬小麦产量提高有关的生理生态特性，以及它们的气体交换特性对于外界环境变化的响应。本试验于1999-2001年在北京农林科学院试验农场（39o09’N, 116o04’E）进行。结果如下： 1. 在冬小麦品种改良的过程中，小麦品种的经济产量、收获指数、千粒重提高，而生物产量、株高、单株穗数、单株籽粒产量和穗长降低。籽粒产量与株高、穗数极显著负相关，与穗粒重、收获指数、千粒重极显著正相关。株高与穗长、单株籽粒产量、穗数显著正相关，而与收获指数和千粒重极显著负相关。收获指数与穗数极显著负相关，而与千粒重极显著正相关。说明株高降低、收获指数提高和千粒重的提高对于冬小麦品种改良过程中产量的提高起重要作用。 2. 随品种推出年代的延迟，各品种苗期-拔节期的净光合速率（PN）、 气孔导度（gs）、蒸腾速率（ E）、量子产率（Fv/Fm）均呈增加的趋势，水分利用率（WUE）呈降低的趋势。在孕穗期-蜡熟期，旗叶的PN也随品种推出年代而呈增大的趋势，而在成熟期呈减小的趋势。gs在孕穗期-灌浆期增大，在蜡熟期和成熟期减小;各个时期的E均呈递增趋势;而WUE呈降低趋势。旗叶的Fv/Fm在孕穗期和开花期呈递增的趋势，而在成熟期下降。在苗期至孕穗期，PN、 E均与产量显著正相关;在拔节始期和孕穗期gs与产量显著正相关（R=0.616, 0.499, P<0.05），在苗期-拔节期、开花期和成熟期，WUE与历史产量和试验产量显著负相关（P<0.05, 或P<0.001），在苗期和拔节期Fv/Fm与产量正相关（P<0.05）。在冬小麦品种的改良过程中，其光合作用的改良不仅表现在净光合速率上，而且还表现在荧光动力学参数Fv/Fm上， 即PSII的原初光能转化效率有所提高。 3. 孕穗期至灌浆期，高产品种京冬8号旗叶的PN、gs、E、叶绿素含量和水分含量均最高，而水分利用率（WUE）较低，且具有较高的光呼吸和较低的暗呼吸，其旗叶的叶比重也较高。京冬8号（上世纪90年代推出）叶片气体交换的日变化表现为：在拔节期，全天的净光合速率均最高，而后随生育进程差异变小，通常上午较高，而在中午和下午较低。其旗叶Fv/Fm的变化趋势与净光合速率相似。燕大1817（上世纪40年代推出）的光合作用的午休现象较不明显，且在下午恢复较快，说明它可能具有一定的抗光抑制能力。孕穗至灌浆期是冬小麦籽粒形成和充实的关键时期，此时，叶片光合产物充足与否直接影响千粒重。进一步研究它们“源库”关系的结果表明，京冬8号“源库”关系协调，能够充分发挥“源“和“库”的潜力，且具有最高的收获指数、穗粒重和千粒重，而其它两个品种燕大1817和农大139都存在提高其品种产量潜力的限制因素。因此我们认为，高产品种的高产不仅因为其叶片具有较高的光合速率和较低的暗呼吸消耗，而且有较大的“库”容量和收获指数。 4. 当CO2浓度从360增加到720 µmol.mol-1时，单位叶面积的净光合速率和叶片的水分利用率 随CO2浓度升高而升高。但不同品种差异很大，京冬8号PN 和WUE最高，增加最多，分别提高了173 %和81 %;其次为农大139（上世纪70年代推出），燕大1817增加最少，分别提高了76 %和65 %。E随CO2 浓度的增加而提高;农大139和燕大1817的gs随CO2浓度的增大而减小，而京冬8号则增大。京冬8号和农大139旗叶胞间CO2浓度（Ci） 随CO2 浓度的增加而增大，而燕大1817 的Ci先增大，而后又急剧降低，且京冬8号的Ci最低，燕大1817 最高。在高CO2浓度下，京冬8号的光合速率显著高于其它两个品种，而Ci却低于其它两个品种，说明京冬8号的光合潜力高于其它两个品种。灌浆期高产品种京冬8号旗叶在田间不同自然光强下，净光合速率都是最高的（差异最大时，比燕大1817提高24.8 %）。因此，冬小麦光合作用的潜力，也在一定程度上得到改良。

大蹼铃蟾缓激肽及其制备方法和其基因

本发明涉及大蹼铃蟾缓激肽及其制备方法和其基因，属于生物医学领域。其缓激肽为从中国两栖类动物大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离得到的由19个氨基酸组成的一种单链多肽，分子量2180，等电点11.7，多肽氨基酸全序列一级结构为：DLPKINRKGPRPPGFSPFR。制备方法是收集大蹼铃蟾皮肤分泌物，离心去除沉淀、冷冻干燥后，经凝胶过滤、高压液相反相柱层析分离纯化后即得到。编码大蹼铃蟾缓激肽基因核苷酸序列由cDNA由829个核苷酸组成，编码成熟大蹼铃蟾缓激肽为第140-196，224-280，308-364，392-448，476-532，560-616位6个核苷酸重复单元片断，从两栖类动物皮肤中得到的缓激肽基因作为基因工程制备缓激肽的应用。

无指盘臭蛙蛙皮肽及其基因和在制药中的应用

本发明涉及一种无指盘臭蛙蛙皮肽及其基因和在制药中的应用，属于生物医学领域。该活性多肽是中国两栖类动物无指盘臭蛙基因编码的一种单链多肽，分子量3355.95道尔顿，等电点10.14，多肽全序列一级结构为： Gly Leu Gly Gly Ala Lys Lys Asn Phe Ile Ile Ala Ala Asn Lys Thr Ala Pro Gln Ser Val Lys Lys Thr Phe Ser Cys Lys Leu Tyr Asn Gly。编码无指盘臭蛙蛙皮肽的基因由 731个核苷酸组成，其中编码成熟无指盘臭蛙蛙皮肽为第520-616位核苷酸。人工合成的无指盘臭蛙蛙皮肽具有显著的抑制细菌和真菌生长的作用，可以作为制备病原微生物感染疾病的治疗药物被应用。本发明的无指盘臭蛙蛙皮肽具有结构简单、人工合成方便、抗菌谱系广的有益特点。

Trade-off between reciprocal mutualists: local resource availability-oriented interaction in fig/fig wasp mutualism

The mechanisms that prevent competition (conflict) between the recipient and co-operative actor in co-operative systems remain one of the greatest problems for evolutionary biology. Previous hypotheses suggest that self-restraint, dispersal or spatial con

Purif ication and Characterization of Jerdonitin ,a Non2hemorrhagic Metalloproteinase fromTrimeresurus jerdonii Venom

以前从菜花烙铁头蛇毒中分离纯化到J erdonitin 。与其他Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶相比, J erdonitin 由金属蛋白酶和去整合素两个结构域组成。但没有检测到其出血和纤维蛋白原降解活性, 推测可能高压液相色谱的有机溶液影响了其酶活性。采用不含高压液相色谱柱层析的新分离手段分离得到J erdonitin 。J erdonitin 在还原和非还原SDS2PAGE 电泳中分别呈现一条表观分子量为38 和36 kDa 的条带。像其他典型的蛇毒金属蛋白酶一样, J erdonitin 优先降解人纤维蛋白原的alpha 链, 并且该活性能被EDTA 完全抑制, 而PMSF 对其没有影响。J er2 donitin 不诱导小白鼠皮下出血。