Études des rôles physiopathologiques de PTEN dans le tractus reproducteur femelle

La tumeur des cellules de la granulosa (GCT) représente 5% des cas de cancers ovariens chez la femme. Bien que considérées comme peu malignes, la mort survient dans 80% des cas suite à une recrudescence de la maladie. En dépit de ces statistiques sinistres, peu d’études ont été portées sur ce type de cancer. Le premier objectif de cette étude consistait à élucider les mécanismes moléculaires causant les GCT en démontrant l’implication de la voie de signalisation PI3K/AKT dans leur étiologie. Pour ce faire, nous avons employé la technologie Cre-Lox afin de cibler le gène Pten (antagoniste de cette voie) spécifiquement dans les cellules de la granulosa chez la souris. Ces souris (Ptenflox/flox;Amhr2cre/+) ont occasionnellement développé des GCT, soutenant notre hypothèse de l’importance de la voie PI3K/AKT dans leur étiologie. La voie WNT/CTNNB1 est une autre voie de signalisation qui a récemment été impliquée dans le développement des GCT. Dans le cadre de ce projet, nous avons également testé l’existence possible d’une synergie fonctionnelle entre les voies WNT/CTNNB1 et PI3K/AKT dans le développement de la maladie. Pour ce faire, nous avons créé le modèle transgénique Ptenflox/flox;Ctnnb1flox(ex3)/+;Amhr2cre/+, chez lequel les cellules de la granulosa présentant non seulement une désinhibition de la voie PI3K/AKT, mais aussi une suractivation de la voie WNT/CTNNB1. Tel que prédit, les souris Ptenflox/flox;Ctnnb1flox(ex3)/+;Amhr2cre/+ ont développé une forme de GCT beaucoup plus agressive que celle observée chez les femelles Ptenflox/flox;Amhr2cre/+. Spécifiquement, le développement des tumeurs se déclenchait plus tôt, leur croissance était beaucoup plus rapide, nous avons pu observer des métastases pulmonaires et la dissémination des cellules tumorales dans la cavité péritonéale, et la maladie était invariablement fatale avant l’âge de 8 semaines. Le modèle Ptenflox/flox;Ctnnb1flox (ex3)/+;Amhr2cre/+ a donc servi à démontrer l'existence d'une synergie entre les voies WNT/CTNNB1 et PI3K/AKT dans le développement de la GCT. De façon inattendue, les souris Ptenflox/flox;Amhr2cre/+ ont aussi présenté un phénotype de sous-fertilité qui n’était pas d’origine ovarienne. Il a récemment été démontré que la souche Amhr2cre dirige l’expression de Cre non seulement aux cellules de la granulosa, mais aussi au stroma utérin et au myomètre. Le second objectif de ce travail était donc de démontrer si et comment le phénotype d’infertilité chez les souris Ptenflox/flox;Amhr2cre/+ pouvait découler d’un défaut utérin. Lors de l'implantation, les cellules du stroma utérin se différencient en cellules déciduelles pour former la décidua maternelle (DM), qui se régresse ensuite par apoptose afin de faciliter l’invasion des cellules trophoblastiques. De plus, la DM, en collaboration avec le tissu foetal, recrute des uNKs dont le rôle est de remodeler les artères spiralées pour augmenter l’apport sanguin maternel vers le foetus en développement. Nous avons pu démontrer que l'utérus des femelles gestantes Ptenflox/flox;Amhr2cre/+ présentait une DM anormalement résistante à l'apoptose, moins de uNKs et des artères spiralées non-remodelées. Par conséquent, l’invasion des cellules du trophoblaste était restreinte, compromettant le développement et la survie de l'embryon. Nous avons donc établi pour la première fois l’importance de Pten lors de la décidualisation et de l’invasion du trophoblaste.

Nouvelle approche immunothérapeutique afin de traiter le neuroblastome réfractaire chez l’enfant

Malgré plusieurs chimiothérapies suivies d’une transplantation et d’une immunothérapie, 40% des patients avec un neuroblastome (NB) à haut risque subissent une progression de la maladie ou une rechute. L’échec de ces traitements est attribué à la présence de cellules initiatrices de tumeur (TIC) qui expriment le marqueur CD133 et qui sont souvent résistantes aux agents chimiothérapeutiques. Les cellules Natural Killer (NK), qui possèdent un effet anti-tumoral, peuvent être utilisées dans le cadre du développement de nouvelles approches immuno-thérapeutiques. Nous posons l’hypothèse que les cellules NK activées éliminent efficacement les TIC et contribuent à la réduction des risques de rechute. De plus, il est possible d’augmenter l’effet anti-tumoral des cellules NK contre le NB. L’activité cytotoxique des cellules NK est augmentée par des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) activées. A la suite de la stimulation de leurs récepteurs Toll-like les pDC produisent de grandes quantités d'interféron-alpha (IFN-α). Nous avons étudié les propriétés lytiques des cellules NK contre des lignées cellulaires de NB à la suite de leur activation par l’IFN-α ou des pDC activées. Nos résultats révèlent une augmentation de l’activité cytolytique des cellules NK contre ces lignées en réponse à une stimulation par les pDC activées. De plus, les cellules de NB CD133+ ou celles résistantes à l’immunothérapie dirigée contre le GD2 sont sensibles à la lyse médiée par les cellules NK stimulées par les pDC. Nous avons examiné les mécanismes cellulaires impliqués dans la lyse des cellules de NB. Nous montrons que cette cytotoxicité est médiée en partie par TRAIL induisant l'apoptose et en partie par la libération des granules cytotoxiques. Ainsi, ces résultats permettent de proposer une nouvelle approche immuno-thérapeutique complémentaire au traitement par l’anticorps anti-GD2 pour les patients atteints de NB à haut risque.

La petite GTPase Rab11 et ses interacteurs orchestrent la migration cellulaire collective et la cytocinèse chez la Drosophile

Le trafic vésiculaire permet un échange coordonné de molécules entre les différents organites de la cellule et dépend largement des petites GTPases de la famille des Rabs dont le nombre varie entre 27 chez la Drosophile et 70 chez l’Homme. Un des prochains défis consiste donc à élucider les mécanismes cellulaires qui coordonnent l’activité de ces Rabs, laquelle garantit un transport vésiculaire ordonné au sein de la cellule. Les Rabs agissent comme des interrupteurs moléculaires grâce à leur capacité à cycler entre un état actif et inactif. L’activité des Rabs est contrôlée par des protéines régulatrices puis des effecteurs en aval coordonnent leurs différentes fonctions. La petite GTPase Rab11 est essentielle au développement de plusieurs organismes incluant la Drosophile, C. elegans et la souris puisqu’elle se retrouve au cœur de différentes voies de transport. D’ailleurs, le trafic de molécules dépendant de Rab11 est perturbé dans plusieurs pathologies. Malgré son rôle central dans le trafic vésiculaire, la régulation de Rab11 reste peu comprise in vivo. Cette thèse se penche sur les mécanismes moléculaires contrôlant les fonctions de Rab11 et de ses effecteurs lors de la migration cellulaire collective et lors de la cytocinèse. Nous avons identifié Evi5 comme un nouvel acteur clé de la migration cellulaire collective, et nous montrons qu’elle possède une activité Rab11-GAP essentielle pour maintenir les récepteurs de guidance actifs de façon polarisée au front de migration. Nous avons ensuite déterminé que Rab11 régule la communication cellulaire lors de la migration collective par l’entremise de son interaction avec la Moésine. Une question reste toutefois en suspens : sachant que Rab11 compte plus de 13 effecteurs, quels sont les mécanismes assurant la spécificité de l’interaction entre cette GTPase et un effecteur particulier? Une partie de la réponse provient peut-être de nos observations que les membres des Rab11-FIPs de classe I, une famille d’effecteurs de Rab11, interagissent avec les protéines d’échafaudage 14-3-3. Chez la Drosophile, Rip11 est le seul représentant des Rab11-FIPs de classe I et nous montrons que Rip11 aurait des fonctions inattendues durant la cytocinèse qui seraient coordonnées par 14-3-3. Nos recherches permettent de dresser un portrait plus authentique des mécanismes moléculaires régulant les différentes fonctions de Rab11 et de ses effecteurs in vivo.

Neuropatia paraneoplásica associada ao mastocitoma canino

As síndromes paraneoplásicas compreendem um grupo diverso de alterações clínicas associadas a neoplasias e ocorrem em sítios distantes do tumor primário ou de suas metástases. As neuropatias paraneoplásicas são distúrbios raros em cães, mas representam morbidade significativa e servem como importantes indicadores diagnósticos e prognósticos. O presente trabalho relata a ocorrência de dois casos de neuropatia paraneoplásica em cães com mastocitoma, considerando a apresentação clínica, o diagnóstico e as formas de tratamento utilizadas.

Neoplasias de língua em cinco cães

Este trabalho tem como objetivo relatar a ocorrência de cinco casos de neoplasias de língua em cães. Os sinais clínicos mais observados foram ptialismo, halitose e hiporexia. Após biópsia excisional para exame histopatológico, os resultados revelaram dois casos de melanoma, um caso de histiocitoma, um caso de fibrossarcoma e um caso de mastocitoma grau II, sendo que neste o proprietário não autorizou qualquer forma de tratamento. O tratamento para os demais foi a glossectomia parcial e, no caso de fibrossarcoma, associou-se a quimioterapia. Dois animais apresentaram deiscência de sutura no pós-operatório, não havendo necessidade da realização de nova intervenção. em relação ao prognóstico, os pacientes com histiocitoma, fibrossarcoma e um com melanoma não apresentaram recidiva, nem metástase da doença 12 meses após a cirurgia. No outro caso de melanoma, o paciente apresentou metástase na pele e nos pulmões 30 dias após a ressecção cirúrgica.

Ultra-estrutura dos mastócitos de diferentes tipos histológicos de mastocitoma em cães

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Primary non-gestational choriocarcinoma of the uterine cervix: A case report

Background. Primary non-gestational choriocarcinoma of the female genital tract has been described in the ovaries and is very unusual in other genital sites.Case. Primary non-gestational uterine cervical choriocarcinoma was diagnosed in a patient, 32, single, without previous sexual contact nor antecedent pregnancy, admitted to the hospital with irregular vaginal hemorrhaging. Pelvic examination realized under anesthetic revealed a tumor mass occupying the uterine cervix. Metastases investigation was realized and the patient was accepted as FIGO IV: risk factor of 13. She was submitted to intensive chemotherapy and hysterectomy, showing general recovery, but died from drug-resistant disease 12 months later. Histological, immunohistochemical, and molecular genetics studies confirmed non-gestational choriocarcinoma.Conclusion. Primary non-gestational uterine cervical choriocarcinoma may arise from germ cell tumor or epithelial tissue. (c) 2005 Elsevier B.V. All rights reserved.

Relação da expressão de fatores de crescimento celular (IGF-1) e (SCF) com fatores prognósticos e o alvo da rapamicina em mamíferos (m-TOR) em mastocitomas cutâneos caninos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Distribution of NADPH-diaphorase-positive neurons in the prefrontal cortex of the Cebus monkey

We studied the distribution of NADPH-diaphorase (NADPH-d) activity in the prefrontal cortex of normal adult Cebus apella monkeys using NADPH-d histochemical protocols. The following regions were studied: granular areas 46 and 12, dysgranular areas 9 and 13, and agranular areas 32 and Oap. NADPH-d-positive neurons were divided into two distinct types, both non-pyramidal. Type I neurons had a large soma diameter (17.24 +/- 1.73 pm) and were densely stained. More than 90% of these neurons were located in the subcortical white matter and infragranular layers. The remaining type I neurons were distributed in the supragranular layers. Type II neurons had a small, round or oval soma (9.83 +/- 1.03 mu m), and their staining pattern varied markedly. Type II neurons were distributed throughout the cortex, with their greatest numerical density being observed in layers II and III. In granular areas, the number of type II neurons was up to 20 times that of type I neurons, but this proportion was smaller in agranular areas. Areal density of type II neurons was maximum in the supragranular layers of granular areas and minimum in agranular areas. Statistical analysis revealed that these areal differences were significant when comparing some specific areas. In conclusion, our results indicate a predominance of NADPH-d-positive cells in supragranular layers of granular areas in the Cebus prefrontal cortex. These findings support previous observations on the role of type II neurons as a new cortical nitric oxide source in supragranular cortical layers in primates, and their potential contribution to cortical neuronal activation in advanced mammals. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Ischaemia and reperfusion effects on skeletal muscle tissue: morphological and histochemical studies

This was a study on the oxidative stress due to ischaemia (I) and reperfusion (R) in skeletal muscle tissue. Using a tourniquet, groups of rats were submitted to ischaemia for 4 h, followed by different reperfusion periods. The animals were divided in four groups: control; 4 h of ischaemia (IR); 4 h of ischaemia plus 1 h reperfusion (IR-1 h); 4 h of ischaemia plus 24 h reperfusion (IR-24 h); and 4 h of ischaemia plus 72 h reperfusion (IR-72 h). At the end of the procedures, samples of soleus muscle were collected and frozen in n-hexane at -70 degrees C. Cryostat sections were submitted to haematoxylin-eosin, succinate dehydrogenase (SDH) and nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium reductase (NADH-TR) stains. An additional muscle sample was processed for electron microscopy. No alterations were found in control animals. IR group showed fibres had normal aspect besides some round, acidophilic and hypertrophic fibres. There were several fibres with angular outlines and smaller diameters in this group compared with control group. NADH-TR/SDH reaction was moderately intense in most fibres. In some fibres, cytoplasm showed areas without activity and other fibres had very intense reactivity. IR-1 h group showed oedema hypercontracted fibres with disorganized myofibrils, mitochondria with focal lesions and dilated sarcoplasmic reticulum. NADH-TR/SDH reaction was moderate to weak. IR-24 h showed intense inflammatory infiltrate in the endomysium and perimysium. NADH-TR/SDH reaction was similar to IR-1 h. IR-72 h showed necrotic fibres, areas with inflammatory infiltrate, reduced muscle fibres at different stages of necrosis and phagocytosis, and many small round and basophilic fibres characterizing a regeneration process. NADH-TR/SDH reaction was weak to negative. Our results suggest that ischaemia and the subsequent 1-, 24- and 72-h reperfusions induced progressive histological damage. Although progressive, it may be reversible because there were ultrastructural signs of recovery after 72-h reperfusion. This recovery could in part be due to the low oxidative stress identified by the morphological and histochemical analysis.

Structural basis for inhibition of human PNP by immucillin-H

Purine nucleoside phosphorylase (PNP) catalyzes the phosphorolysis of the N-ribosidic bonds of purine nucleosides and deoxynucleosides. PNP is a target for inhibitor development aiming at T-cell immune response modulation. This work reports on the crystallographic study of the complex of human PNP-immucillin-H (HsPNP-ImmH) solved at 2.6 Angstrom resolution using synchrotron radiation. Immucillin-H (ImmH) inhibits the growth of malignant T-cell lines in the presence of deoxyguanosine without affecting non-T-cell tumor lines. ImmH inhibits activated normal human T cells after antigenic stimulation in vitro. These biological effects of ImmH suggest that this agent may have utility in the treatment of certain human diseases characterized by abnormal T-cell growth or activation. This is the first structural report of human PNP complexed with immucillin-H. The comparison of the complex HsPNP-ImmH with recent crystallographic structures of human PNP explains the high specificity of immucillin-H for human PNP. (C) 2003 Elsevier B.V. All rights reserved.

Morphological Changes of the Epididymis and Description of the Excurrent Ducts of Phrynops geoffroanus (Testudines: Chelidae) During the Reproductive Cycle

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Rugged, Portable Tungsten Coil Atomic Emission Spectrometer

Tungsten coil atomic emission spectrometry is an ideal technique for field applications because of its simplicity, low cost, low power requirement, and independence from cooling systems. A new, portable, compact design is reported here. The tungsten coil is extracted from an inexpensive 24 V, 250 W commercial light bulb. The coil is housed in a small, aluminum cell. The emission signal exits from a small aperture in the cell, while the bulk of the blackbody emission from the tungsten coil is blocked. The resulting spectra exhibit extremely low background signals. The atomization cell, a single lens, and a hand-held charge coupled device (CCD) spectrometer are fixed on a 1 x 6 x 30 cm ceramic base. The resulting system is robust and easily transported. A programmable, miniature 400 W solid-state constant current power supply controls the temperature of the coil. Fifteen elements are determined with the system (Ba, Cs, Li, Rb, Cr, Sr, Eu, Yb, Mn, Fe, Cu, Mg, V, Al, and Ga). The precision ranges from 4.3% to 8.4% relative standard deviation for repetitive measurements of the same solution. Detection limits are in the 0.04 to 1500 mu g/L range. Accuracy is tested using standard reference materials for polluted water, peach leaves, and tomato leaves. For those elements present above the detection limit, recoveries range from 72% to 147%.

Seminal analysis, cryogenic preservation, and fertility in matrinxã fish, Brycon cephalus (Günther, 1869)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)