Utilização do picro-sirius para corar o Paracoccidioides brasiliensis

A solução do picro-sirius foi usada para corar o Paracoccidioides brasiliensis em tecidos humanos fixados em formol. À luz comum, o fungo mostra uma faixa periférica avermelhada e, à luz polarizada, apresenta um ou mais anéis birrefringentes esverdeados. A imersão prévia em solução de hidróxido de sódio a 1%, por alguns minutos, melhora a coloração, sendo o fungo visualizado com mais nitidez à luz polarizada. Por outro lado, a diferenciação dos cortes corados, com picro-sirius em hidróxido de sódio a 0,5%, elimina a birrefringência do colágeno mais rapidamente que a do Paracoccidioides.

Tipos de colágeno nas áreas de fibrose da cardiopatia chagásica crônica com lesão vorticilar esquerda e insuficiência cardíaca

Foi feita a identificação dos tipos de colágeno em cortes histológicos de fragmentos de 15 corações de indivíduos portadores de doença de Chagas crônica com lesão vorticilar esquerda e ICC. As preparações coradas pelo Sirius Supra Red F3BA, preconizada por Junqueira e cols e examinadas em microscópio de polarização (Leitz) revelaram colágeno de tipo I e III nas zonas de fibrose. As primeiras preponderaram nos dois terços externos da região vorticilar, nas áreas de fibrose endomisial e perimisial do miocárdio sem ou com escasso infiltrado inflamatório e na região subendocárdica dos músculos papilares. O tipo III foi mais freqüente no terço interno da região vorticilar, no endocárdio da parede ventricular, em certas áreas do miocárdio onde a inflamação ainda estava em atividade e nas porções mais centrais dos músculos papilares. Os AA fazem um breve comentário sobre o possível mecanismo patogenético da fibrose na doença de Chagas.

Zero-Time Kidney Histology Predicts Early Graft Function

Our purposes are to determine the impact of histological factors observed in zero-time biopsies on early post transplant kidney allograft function. We specifically want to compare the semi-quantitative Banff Classification of zero time biopsies with quantification of % cortical area fibrosis. Sixty three zero-time deceased donor allograft biopsies were retrospectively semiquantitatively scored using Banff classification. By adding the individual chronic parameters a Banff Chronic Sum (BCS) Score was generated. Percentage of cortical area Picro Sirius Red (%PSR) staining was assessed and calculated with a computer program. A negative linear regression between %PSR/ GFR at 3 year post-transplantation was established (Y=62.08 +-4.6412X; p=0.022). A significant negative correlation between arteriolar hyalinosis (rho=-0.375; p=0.005), chronic interstitial (rho=0.296; p=0.02) , chronic tubular ( rho=0.276; p=0.04) , chronic vascular (rho= -0.360;P=0.007), BCS (rho=-0.413; p=0.002) and GFR at 3 years were found. However, no correlation was found between % PSR, Ci, Ct or BCS. In multivariate linear regression the negative predictive factors of 3 years GFR were: BCS in histological model; donor kidney age, recipient age and black race in clinical model. The BCS seems a good and easy to perform tool, available to every pathologist, with significant predictive short-term value. The %PSR predicts short term kidney function in univariate study and involves extra-routine and expensive-time work. We think that %PSR must be regarded as a research instrument.

Estereologia do miocárdio de ratos jovens e idosos

OBJETIVO: Comparar as diferenças quantitativas na composição e estrutura do miocárdio de ratos jovens e idosos utilizando a estereologia. MÉTODOS: Foram estudados 30 ratos machos da raça Wistar (15 animais jovens de 3 meses de idade e 15 animais idosos de 15 meses). Os corações foram retirados, pesados, perfundidos com solução de Bouin e posteriormente fixados em formol tamponado a 10% por 24h, processados por técnica histológica, incluídos em parafina, seccionados e corados pelo HE e picro-sirius. Foram analisados 15 campos aleatórios por grupo e foram determinados os seguintes parâmetros estereológicos: densidade de volume do miócito (Vv[miócito]) e densidade de volume do interstício cardíaco (Vv[interstício]) e densidade numérica dos miócitos (Nv[miócito]) (1/mm³), estimados pelo método disector. O número total de miócitos (N[miócitos]) e a média do volume do miócito (Vol[miócito]) dos corações dos dois grupos também foram determinados. As diferenças estatísticas entre os animais jovens e idosos foram testadas pelo teste não paramétrico de Mann-Whitney. RESULTADOS: Comparando os animais dos grupos jovem e idoso temos, respectivamente, os seguintes dados: o peso cardíaco aumentou de 1,1 para 1,7g, o Vv(miócito) diminuiu de 76,7 para 72,2%, Vv(interstício) aumentou de 23,3 para 27,8%, enquanto o Nv(miócito) diminuiu de 14,76x10(4) para 6,19x10(4)/mm³. O Vol(miócito) aumentou de 5,42x10³ para 13,26x10³mm³ e o N(miócito) diminuiu de 15,64x10(4) para 10,72x10(4) miócitos. Estas diferenças foram estatisticamente significativas (p<0,05). CONCLUSÃO: Os resultados obtidos mostram que no envelhecimento ocorre perda de miócitos cardíacos e hipertrofia das células remanescentes.

Morfologia e estereologia do miocárdio em ratos hipertensos. Correlação com o tempo de inibição da síntese do óxido nítrico

OBJETIVO: Estudar mudanças estruturais do miocárdio decorrentes do tempo de inibição da síntese do óxido nítrico. MÉTODOS: Estudaram-se 4 grupos de 10 ratos: controle e L-Name (50mg/kg/dia) com 25 e 40 dias de experimentação. Os animais foram sacrificados e os corações processados tecnicamente para estudo em microscopia de luz, onde cortes corados pelo picro-sirius foram estudados com e sem luz polarizada para análise do colágeno do interstício cardíaco. Determinaram-se densidades de volume de miócitos (Vv[m]) e interstício cardíaco (Vv[int]), densidade numérica de miócitos (Nv[m]) e área transversal dos miócitos (A[m]). RESULTADOS: Compararam-se os animais L-Name com os respectivos controles. Nos L-Name a pressão da cauda aumentou 74,5 e 90,2% aos 25 e 40 dias, respectivamente. O peso cardíaco aumentou 50% e 28% aos 25 e 40 dias, respectivamente. O miocárdio dos animais L-Name apresentou hipertrofia de miócitos com aumento da A(m), fibrose perivascular e intersticial, espessamento das túnicas íntima e média das artérias intramiocárdicas. Aos 40 dias diminuíram Vv(m) e Nv(m) e aumentou Vv(int). CONCLUSÃO: Inibição da síntese do óxido nítrico provoca modificações miocárdicas que progridem com o tempo de administração de L-Name. A estereologia é uma metodologia útil para determinar e avaliar as modificações miocárdicas decorrentes deste modelo experimental de hipertensão arterial.

Morphological aspects of the myocarditis and myositis in Calomys callosus experimentally infected with Trypanosoma cruzi: fibrogenesis and spontaneous regression of fibrosis

Calomys callosus a wild rodent, is a natural host of Trypanosoma cruzi. Twelve C. callosus were infected with 10(5) trypomastigotes of the F strain (a myotropic strain) of T. cruzi. Parasitemia decreased on the 21 st day becoming negative around the 40th day of infection. All animals survived but had positive parasitological tests, until the end of the experiment. The infected animals developed severe inflammation in the myocardium and skeletal muscle. This process was pronounced from the 26 th to the 30th day and gradually subsided from the 50 th day becoming absent or residual on the 64 th day after infection. Collagen was identified by the picro Sirius red method. Fibrogenesis developed early, but regression of fibrosis occurred between the 50th and 64th day. Ultrastructural study disclosed a predominance of macrophages and fibroblasts in the inflammatory infiltrates, with small numbers of lymphocytes. Macrophages had active phagocytosis and showed points of contact with altered muscle cells. Different degrees of matrix expansion were present, with granular and fibrilar deposits and collagen bundles. These alterations subsided by the 64th days. Macrophages seem to be the main immune effector cell in the C. callosus model of infection with T. cruzi. The mechanisms involved in the rapid fibrogenesis and its regression deserve further investigation.

Fibrogenesis and collagen resorption in the heart and skeletal muscle of Calomys callosus experimentally infected with Trypanosoma cruzi: immunohistochemical identification of extracellular matrix components

Intense inflammatory lesions and early development of interstitial fibrosis of the myocardium and skeletal muscle with spontaneous regression, have been described in Calomys callosus infected with Trypanosoma cruzi. The genetic types of collagen present in this model were investigated through immunohistochemistry using specific antibodies, combined with histopathology and Picro-Sirius staining of collagen. Thirty-five calomys were infected with the Colombian strain of T. cruzi and sacrificed at 24, 30, 40, 60 and 90 days post-infection. Inflammatory lesions and fibrogenesis were prominent at the early phase of infection and significantly decreased during late infection. Immunoisotyping of the matrix components was performed by indirect immunofluorescence on 5 µm thick cryostat sections using specific antibodies against laminin, fibronectin and isotypes I, III and IV of collagen. In the early phase, positive deposits of all the matrix components were present, with predominance of fibronectin, laminin and collagens types I and III in the myocardium and of types III and IV in the skeletal muscles. From the 40th day, type IV collagen predominates in the heart. At the late phase of infection (60th to 90th day), a clear fragmentation and decrease of all the matrix components were detected. Findings of the present study indicate that a modulation of the inflammatory process occurs in the model of C. callosus, leading to spontaneous regression of fibrosis independent of the genetic types of collagen involved in this process.

Estudo da cicatrização nas lesões traumáticas esplênicas utilizando octil-2-cianoacrilato e fio de poliglecaprone 25

OBJETIVO: Estudar comparativamente a cicatrização e a formação de aderências em baço de ratos submetidos à trauma operatório e corrigidos utilizando octil-2-cianoacrilato (DE) e fio de poliglecaprone 25 (CA). MÉTODO: 30 ratos machos Wistar foram separados em três grupos de 10 animais, anestesiados de acordo com as normas do COBEA, submetidos à laparotomia xifopúbica e com uma tesoura Metzenbaum, foi realizada uma lesão esplênica com 4mm de profundidade, na borda anti-hilar do pólo inferior do baço. No Grupo CA, suturou-se a lesão com pontos contínuos de poliglecaprone 25; no Grupo DE, com octil-2-cianoacrilato e no Grupo CO, não houve sutura. Após 14 dias, os ratos foram submetidos à eutanásia e as aderências anotadas em protocolo próprio. O estudo anatomopatológico foi realizado nas colorações hematoxilina-eosina e Picro-Sirius, sendo do tipo fechado, duplo-cego. RESULTADOS: O Grupo DE apresentou menos aderências e menor reação de cicatrização tipo corpo estranho que o CA. Ambos mostram quantidade semelhante de colágeno jovem e maduro. CONCLUSÕES: O octil-2-cianoacrilato provocou menos aderências macroscópicas que o fio de poliglecaprone corado e não induziu cicatrização com reação de corpo estranho, mostrando-se efetivo no reparo das lesões traumáticas esplênicas, em ratos.

Estudo histológico e histoquímico da pele de jurará Kinosternon scorpioides scorpioides (Testudines: Kinosternidae)

O objetivo do presente trabalho foi analisar histológica e histo- químicamente a pele do jurará (Kinosternon scorpioides scorpioides). Foram utilizados seis animais (três machos e três fêmeas). Os animais foram eutanasiados com dose letal de tiopental sódico a 2,5%, para colheita de fragmentos de pele mole das patas e pescoço do animal, que após a fixação em líquido de Bouin, foram incluídos em parafina e corados pelas técnicas de hematoxilina-eosina, Giemsa, Sirius red, Reticulina de Gomori e Fucsina-resorcina de Weigert. Os resultados revelaram que a pele do jurará é delgada e composta de epiderme e derme. A epiderme é formada por estrato germinativo constituído por uma única camada de células cilíndricas; estrato espinhoso apresentando duas ou três camadas de células poliédricas; o estrato granuloso não foi observado nos exemplares estudados O estrato córneo apresenta uma delgada camada de queratina mole. Na derme, os fibroblastos foram as células mais freqüentes e as fibras colágenas formavam feixes espessos dispostos em várias direções. No método do Picro Sirius Red sob luz polarizada observou-se que, independente da região analisada, há predomínio de fibras colágenas tipo I em relação ao colágeno tipo III. Foi também observados mastócitos em pequena quantidade e fibras elásticas na região subepidérmica. Concluiu-se que a pele de Kinosternon scorpioides scorpioides possui características semelhantes a dos demais vertebrados (anfíbios, aves e mamíferos), apresenta peculiaridades, como por exemplo, a ausência de papilas dérmicas e glândulas.

Étude in vitro de l’implication des cytokines de type Th17 dans la fibrose hépatique

Introduction: L’activation des cellules stellaires hépatiques (CSHs) est un point clé du processus de fibrose hépatique. Les lymphocytes T CD4+ intra-hépatiques sont une source majeure de cytokines anti-inflammatoires comme l’IL-10 et pro-inflammatoire (IL-17A), hépatoprotectrice (IL-22) produites par les Th17. Les Th17 sont impliqués dans de nombreuses pathologies inflammatoires mais l’effet de ces cellules sur les CSHs n’est pas encore élucidé. Objectif: Comprendre le rôle des cytokines de type Th17 dans le processus d’activation des CSHs. Méthodes: La lignée de CSHs humaine LX2 a été stimulée par l’IL-17A ou l’IL-22 puis comparée à des cellules traitées par le TGF-b et le tampon phosphate salin (PBS). L’activation des CSHs a été évaluée en examinant les molécules profibrotique alpha-smooth muscle actin (a-SMA), collagène de type I (COL1A1) et inhibiteur produits par les tissus des métalloprotéases matricielles I (TIMP-I) par q-PCR. L’expression protéique a été validée par immunobuvardage ou coloration au rouge de picro Sirius. L’expression membranaire de l’IL-10Rb, du TGF-b-RII et de l’IL-17RA a été mesurée par cytométrie en flux. Résultats: L’IL-17A et l’IL-22 n’activent pas les cellules LX2, car aucune induction d’a-SMA, de COL1A1 et de TIMP-I n’a été observée. Cependant, l’IL-17A et l’IL-22 sensibilisent les CSHs à l’action du TGF-b, tel que démontré par une forte expression et production d’a-SMA, collagène type I et TIMP-I. L’IL-17A, mais pas l’IL-22, induit la surexpression à la surface cellulaire du TGF-b-RII et inhibe partiellement la baisse d’expression du TGF--RII après stimulation au TGF-b. Conclusion: Nos résultats démontrent une fonction pro-fibrotique de l’IL-17A et de l’IL-22, car les deux cytokines sensibilisent les CSHs à l’action du TGF-b. L’IL-17A agit via la surexpression et la stabilisation du TGF-b-RII tandis que l’IL-22 agit probablement par des mécanismes intracellulaires.

Effects of the basic fibroblast growth factor and its anti-factor in the healing and collagen maturation of infected skin wound

PURPOSE: The infection is one of the main factors that affect the physiological evolution of the surgical wounds. The aim of this work is to evaluate the effects of fibroblast growth factor (FGFâ) and anti-FGFâ in the healing, synthesis and maturation of collagen when topically used on infected skin wounds of rats. METHODS: An experimental study was perfomed in 60 male Wistar rats. All animals were divided in two groups (A and B). Each group was divided in three subgroups A1, B1; A2, B2 and A3, B3. After anesthesia with pentobarbital, two open squared wounds (1cm2), 4cm distant to each other, were done in the dorsal skin of all the rats. In group A (n=30) the wounds were contaminated with multibacterial standard solution, and in group B(n=30) the wounds were maintained sterile. These wounds were named F1 (for inflammation analysis) and F2 (for collagen study). The open wounds of A1 and B1 rats were topically treated with saline solution, A2 and B2 were treated with FGFâ and subgroups A3 and B3 were treated with FGFâ and anti-FGFâ. The rats were observed until complete epitelization of F2 wounds for determination of healing time and the expression of types I and III collagen, using Picro Sirius Red staining. Inflammatory reaction in F1 wounds was studied using hematoxilineosin staining. The three variable was measured by the Image Pro-Plus Média Cybernetics software. The statistical analysis was performed by ANOVA and Tukey test, considering p<0.05 as significant. RESULTS: It was observed that infection retarded significantly (p<0.05) the time of wound scarring and the topical application of FCFb reverted the inhibition of healing caused by bacteria. The inflammatory reaction was greater in the subgroup B2 than in B1 and A3, and the difference was significant (p<0.05). It was observed greater expression of type I collagen in all the subgroups treated with FCFb, when compared with the untreated subgroups. Type III collagen was significantly decreased in wounds of B3 rats, comparing to the other subgroups. CONCLUSIONS: The FCFb accelerated the healing of open infected wounds and contributed with maturation of collagen, enhancing the type I collagen density. The anti-FCFb antibody was able to attenuate the production of both type I and III collagen

Alterações do colágeno e do sistema elástico induzidas pela hiperatividade do detrusor em coelhos: ação da oxibutinina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Caracterização morfológica, bioquímica e molecular do músculo esquelético sóleo de ratos espontaneamente hipertensos com insuficiência cardíaca

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Ação de biomateriais e laser de baixa intensidade na reparação tecidual óssea: estudo histológico em ratos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Influência da exposição à fumaça de cigarro e da suplementação da dieta com β-caroteno sobre a comunicação interceluar em cardiomiócitos de ratos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)