CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE ISOLADOS DE Colletotrichum spp. ASSOCIADOS A PODRIDÃO FLORAL DOS CITROS

RESUMO A podridão floral dos citros (PFC) é uma importante doença dessa cultura, responsável por elevadas perdas de produção. Normalmente, essa doença mostra-se limitante quando ocorrem prolongados períodos chuvosos durante o florescimento das plantas ou quando existe intenso molhamento foliar. Duas espécies de Colletotrichum estão associadas à doença: C. acutatum e C. gloeosporioides. Entretanto, recentemente, tem-se verificado que, mesmo sob condições não tão propícias, a doença tem ocorrido com relativa frequência, suspeitando-se do envolvimento de outras espécies de Colletotrichumou de novas condições de adaptação das espécies descritas. Este trabalho teve como objetivo determinar se há ou não outra espécie de Colletotrichum associada a PFC e avaliar a viabilidade do emprego de marcadores moleculares ISSR na caracterização taxonômica de isolados de Colletotrichum spp. associados a sintomas de PFC em flores, assim como de tecidos foliares e frutos cítricos assintomáticos. Para tanto, foi empregada uma combinação de iniciadores específicos, levando em conta a região ITS e marcadores moleculares ISSR. Os marcadores ISSR mostraram-se eficientes na caracterização taxonômica dos isolados de Colletotrichum analisados. A população avaliada foi constituída apenas por C. acutatum e C. gloeosporioides, descartando o envolvimento de uma espécie adicional. Foi constatada alta diversidade genética entre os isolados analisados, o que também se mostra convergente quanto às diferenças fenotípicas observadas sob condições de campo. Entretanto, não foi encontrada relação quanto à origem e as espécies de Colletotrichum spp. associadas. De modo inédito, ainda que assintomaticamente, foi detectada a presença de um isolado de C. acutatum associado a frutos cítricos.

Caracterização enzimática e patogenicidade cruzada de Colletotrichum spp. associados a doenças de pós-colheita

A antracnose, causada por Colletotrichum spp., pode ocasionar grandes perdas a nível de campo e em pós-colheita sobre diversas culturas e seus produtos. O presente trabalho teve por objetivos testar a patogenicidade cruzada de isolados de C. gloeosporioides do caju (Anacardium occidentale) (CAJ), manga (Mangifera indica) (MG), mamão (Carica papaya) (MM), maracujá (Passiflora edulis) (MR) e C. musae da banana (Musa spp.) (BAJ); avaliar a produção de enzimas extracelulares (amilolítica, celulolítica, lipolítica e proteolítica) produzidas pelos isolados em substratos sólidos específicos; e detectar padrões eletroforéticos de proteínas totais e isoenzimas (alfa-esterase, beta-esterase, fosfatase ácida e leucina aminopeptidase). Na análise da patogenicidade cruzada, todos os isolados de Colletotrichum spp. induziram lesões necróticas, deprimidas sobre os frutos, exceto em maracujá que foi suscetível tão somente ao isolado MR. Quanto à produção de enzimas extracelulares hidrolíticas, os isolados de C. gloeosporioides produziram amilase, lipase, protease e celulase, sendo que esta última enzima não foi detectada em C. musae. Com relação à análise eletroforética de proteínas totais e isoenzimas, os isolados apresentaram variações no número e posição das bandas no gel de poliacrilamida em todos os sistemas, com exceção de leucina aminopeptidase, onde bandas monomórficas foram formadas, sem variação na intensidade e pouca variação na mobilidade relativa.

Geoestatística como metodologia para estudar a dinâmica espaço-temporal de doenças associadas a Colletotrichum spp. transmitidos por sementes

Objetivou-se no presente trabalho caracterizar o progresso espaço-temporal da severidade da antracnose do feijoeiro comum e da ramulose do algodoeiro por meio da Geoestatística. Os experimentos foram conduzidos no campo, durante o período das águas, em diferentes épocas. Sementes inoculadas pelo método da restrição hídrica foram semeadas no centro de parcelas experimentais constituindo fonte de inóculo do tipo ponto. Foram realizadas semanalmente seis avaliações da severidade das doenças com base em escalas de notas. Pelos modelos de semivariograma isotrópicos esféricos e gaussianos ajustados aos dados, verificou-se o padrão de distribuição agregado e a dependência espacial de ambos os patossistemas. Com o mapeamento da severidade das doenças pelo método da krigagem ordinária em blocos, verificou-se menor severidade das doenças nos primeiros estádios, com aumento gradual ao longo do tempo. A antracnose apresentou formação inicial de focos de inóculo secundário, além do foco com inóculo inicial, que coalesceram com o tempo. A severidade da ramulose diminuiu gradualmente de forma radial e contínua do centro da parcela para as extremidades, com maior capacidade de infecção de plantas vizinhas, quando comparada à antracnose, possivelmente pela maior agressividade do patógeno e hábito de crescimento arbustivo do algodoeiro.

Estudos histopatológicos de Colletotrichum spp. em plântulas de cafeeiro

Objetivou-se neste trabalho, acompanhar pela microscopia eletrônica de varredura, os processos de infecção, colonização e reprodução de diferentes isolados de Colletotrichum spp. em plântulas de cafeeiro. Plântulas da cultivar Rubi produzidas por cultura de embrião foram inoculadas com 5µL de suspensão de esporos ajustada para 10(6) conídios mL-1, na região do hipocótilo e folhas, após ferimento com agulha entomológica. Os isolados avaliados foram Colletotrichum gloeosporioides (IH), obtido de ramos e (IF) de folhas de planta de café com sintomas de mancha manteigosa, C. dematium (ID) de cafeeiro sadio e C. gloeosporioides (IM) de casca de manga com sintomas de antracnose. Duas horas após as inoculações (HAI), fragmentos de folhas e hipocótilos foram transferidos para microtubos de 1,5mL contendo solução fixadora de Karnovsky modificado. As demais amostras foram coletadas 3, 5, 12, 16, 24, 48, 72, 96, 114 e 144 HAI. Os conídios de todos os isolados aderiram preferencialmente nas depressões dos órgãos inoculados, formando um septo e germinando cinco HAI (C. gloeosporioides) e doze HAI (C. dematium) emitindo tubos germinativos, tanto nas extremidades como lateralmente. Apressórios globosos, trilobulados, em forma de pé e de vírgula foram produzidos apenas por C. dematium (ID), 12 HAI; enquanto que C. gloeosporioides (IF), produziu apressórios globosos 24 HAI; os demais isolados não produziram apressórios. C. gloeosporioides isolados IH, IF e IM produziram células conidiogênicas 48 HAI. Acérvulos foram produzidos 72 HAI, por C. gloeosporioides (IH) e 96 horas por C. dematium. O isolado IM colonizou tecidos de plantas de cafeeiro, produzindo conidióforos, no entanto, sem produção de acérvulo. Os isolados mais agressivos foram IH e IF.

Caracterização de isolados de Colletotrichum spp. associados às frutíferas no Estado de São Paulo

RESUMOO Estado de São Paulo é um dos maiores produtores de frutas no Brasil. A competitividade no comércio internacional de frutas demanda a minimização de danos pós-colheita, especialmente os causados pela antracnose. Para o controle eficaz da antracnose em uma região é necessário conhecer quais espécies estão associadas a cada hospedeiro e qual a variabilidade dos agentes causais. Este trabalho objetivou caracterizar e identificar isolados de Colletotrichum de frutíferas cultivadas no Estado de São Paulo, Brasil. Foram analisados 93 isolados obtidos de abacate, manga, maracujá e pêssego, por meio de morfometria de conídios e colônias e análise molecular (amplificação por PCR com oligonucleotídeos espécie-específicos e análise de sequências de nucleotídeos das regiões ITS e β-tubulina). Alta variabilidade morfométrica foi observada entre os isolados. A análise molecular indicou que, no Estado de São Paulo, as antracnoses do abacate, manga, maracujá e pêssego podem ser causadas por diferentes espécies do complexo C. gloeosporoides, revelando também a presença de C. boninense associada à antracnose do maracujá e de espécies não identificadas dos complexos C. acutatum e C. gloeosporioides causando antracnose em pêssego.

Morphological and molecular characterization of Colletotrichum spp. from citrus orchards affected by postbloom fruit drop in Brazil

Brazilian isolates of Colletotrichum spp. from citrus orchards affected by postbloom fruit drop were examined for colony colour, mycelial growth, benomyl-resistance, pathogenicity, and genetic variability by random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. All isolates were obtained from flowers and persistent calyxes from different citrus hosts from São Paulo, Brazil. DNA polymorphisms detected after amplification with random 10-mer primers were used to classify the isolates into two groups. Group I isolates grew rapidly on potato-dextrose agar (PDA) and were sensitive to benomyl, and group II isolates grew slowly on PDA and were benomyl-resistant. Colletotrichum acutatum was analyzed by RAPD and had high genetic similarity with group II isolates of Colletotrichum from citrus. Probably, the group I is C, gloeosporioides and group II is C. acutatum.

Identification and characterization of Colletotrichum spp. affecting fruit after harvest in Brazil

Colletotrichum spp. cause anthracnose in various fruits post-harvest and are a particularly important problem in tropical and subtropical fruits. The disease in fruits of avocado, guava, papaya, mango and passion fruit has been reported to be caused by C. gloeosporioides, and in banana by C. musae. In subtropical and temperate crops such apple, grape, peach and kiwi, the disease is caused by C. acutatum. The variation in pathogenic, morphological, cultural and molecular characteristics of Brazilian isolates of Colletotrichum acutatum Simmonds and isolates from post-harvest decays of avocado, banana, guava, papaya, mango and passion fruit was evaluated. The fruits were inoculated with mycelium of C. acutatum, Colletotrichum spp. and C. musae on a disc of potato dextrose agar. The morphological, cultural and molecular characteristics studied were conidia morphology, colony growth at different temperatures, colony coloration and PCR with primers CaInt2 and ITS4 for C. acutatum and CgInt and ITS4 for C. gloeosporioides. C. acutatum was pathogenic to avocado, guava, papaya, mango and passion fruit, but it was not pathogenic to banana. The morphological, cultural and molecular studies indicated that the avocado, papaya, mango and passion fruit isolates were C. gloeosporioides. The natural guava isolate was identified as C. acutatum, which had not been found previously to produce anthracnose symptoms on guava in Brazil.

Lack of host specificity of Colletotrichum spp. isolates associated with anthracnose symptoms on mango in Brazil

The aim of the present study was to analyse the genetic and pathogenic variability of Colletotrichum spp. isolates from various organs and cultivars of mango with anthracnose symptoms, collected from different municipalities of São Paulo State, Brazil. Colletotrichum gloeosporioides isolates from symptomless citrus leaves and C. acutatum isolates from citrus flowers with post-bloom fruit drop symptoms were included as controls. Sequencing of the ITS region allowed the identification of 183 C. gloeosporioides isolates from mango; only one isolate was identified as C. acutatum. amova analysis of ITS sequences showed larger genetic variability among isolates from the same municipality than among those from different populations. fAFLP markers indicated high levels of genetic variability among the C. gloeosporioides isolates from mango and no correlation between genetic variability and isolate source. Only one C. gloeosporioides mango isolate had the same genotype as the C. gloeosporioides isolates from citrus leaves, as determined by ITS sequencing and fAFLP analysis. Pathogenicity tests revealed that C. gloeosporioides and C. acutatum isolates from either mango or citrus can cause anthracnose symptoms on leaves of mango cvs Palmer and Tommy Atkins and blossom blight symptoms in citrus flowers. These outcomes indicate a lack of host specificity of the Colletotrichum species and suggest the possibility of host migration. © 2012 British Society for Plant Pathology.

Caracterização molecular e patogênica de isolados de Colletotrichum spp. associados a sintomas de antracnose em mangueiras

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Caracterização e controle de colletotrichum spp. em seringueira (Hevea brasiliensis)

Pós-graduação em Agronomia (Proteção de Plantas) - FCA

Caracterização morfocultural e molecular de isolados de Colletotrichum spp. provenientes de diferentes frutas tropicais

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Caracterização morfocultural e molecular de Colletotrichum spp. associados a antracnose em manga, mamão e goiaba

Pós-graduação em Agronomia (Produção Vegetal) - FCAV

Conservação de Colletotrichum spp. associado a frutos de açaí.

2015

Ocorrência de Colletotrichum spp. em frutos de açaí (Euterpe oleraceaMart.).

2015

ANTRACNOSE DO CAQUIZEIRO CAUSADA POR Colletotrichum horii: INCIDÊNCIA EM RAMOS, FOLHAS, FLORES E FRUTOS EM CAMPO

O objetivo deste trabalho foi avaliar a incidência em várias partes da planta e o desenvolvimento da antracnose do caquizeiro causada por Colletotrichum horiinas cultivares Fuyu e Kakimel produzidas sob os sistemas orgânico e convencional, respectivamente, nas safras de 2010/2011 e 2011/2012, em Campina Grande do Sul, Paraná, Brasil. Em cada pomar, 10 plantas foram selecionadas aleatoriamente, e 10 ramos do ano por planta, distribuídos ao redor dacopa, foram marcados para as avaliações de incidência de antracnose em ramos e folhas, a cada 15 dias. A quantificação de frutos caídos com ou sem sintomas da doença foi a cada 15 dias, durante o período de crescimento de frutos até a colheita, relacionada com a produção total. C. horii em flores foi avaliada em campo e também após incubação no laboratório. Infecção latente foi observada em frutos verdes coletados aos 90; 120 e 150 dias após a floração. Em ambas as safras, observou-se a queda de frutos com sintomas de antracnose entre os meses de janeiro e abril. C. horii é capaz de infectar flores, permanecer latente e provocar sintomas de antracnose em frutos imaturos. Frutos colhidos sadios apresentaram sintomas em pós-colheita após a incubação.