Obten����o de extratos de agaricus bisporus com ergosterol para incorpora����o em iogurtes e procedimentos de microencapsula����o

Al��m de ser o cogumelo mais consumido no mundo, Agaricus bisporus �� um dos cogumelos mais ricos em ergosterol, representando esta mol��cula quase 90% da sua fra����o de ester��is. V��rios estudos t��m atribu��do ao ergosterol diferentes bioatividades, incluindo efeitos hipocolesterol��micos semelhantes aos exibidos pelos fitoester��is. Isto torna o ergosterol uma mol��cula interessante para ser estudada como composto nutrac��utico. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de utiliza����o dos extratos de A. bisporus ricos em ergosterol na produ����o de bebidas l��cteas funcionais. Para o efeito, foram realizados testes de incorpora����o do extrato e do ergosterol puro em iogurtes que se compararam com bebidas l��cteas funcionais comerciais (aditivadas com fitoester��is). As amostras de A. bisporus foram submetidas a uma extra����o assistida por ultrassons e os extratos obtidos (IEXT), bem como a mol��cula de ergosterol em diferentes concentra����es (IERG1 e IERG2), foram incorporados em iogurtes, e comparadas com amostras controlo (amostras de iogurte sem aditivos) (ICN) e iogurtes comerciais contendo fitoester��is (ICP). Todas as amostras foram analisadas imediatamente ap��s a incorpora����o (T0), e ap��s sete dias de armazenagem a 4��C (T1), em rela����o aos par��metros nutricionais, atividade antioxidante e propriedades citot��xicas em linhas celulares tumorais humanas e numa cultura prim��ria de c��lulas de f��gado de porco (n��o tumoral) para avalia����o da toxicidade. O teor de ergosterol incorporado na forma pura, ou presente nos extratos, foi monitorizado por HPLC-UV. Adicionalmente, foi realizado um estudo de microencapsula����o utilizando a t��cnica de coacerva����o, tendo o quitosano e o isolado proteico de soro como materiais encapsulantes. Num ensaio preliminar determinou-se o pH conducente a um maior rendimento de encapsula����o e, seguidamente, verificou-se a influ��ncia da raz��o prote��na:quitosano (P/Q) e da temperatura utilizada, no rendimento de encapsula����o (Y1), na efici��ncia de encapsula����o (Y2) e na carga (teor de ergosterol nas microesferas) (Y3). Posteriormente, o estudo foi realizado baseando-se nas melhores condi����es para encapsular ergosterol, sendo tamb��m avaliadas as respostas Y1, Y2 e Y3. Al��m de ser o cogumelo mais consumido no mundo, Agaricus bisporus �� um dos cogumelos mais ricos em ergosterol, representando esta mol��cula quase 90% da sua fra����o de ester��is. V��rios estudos t��m atribu��do ao ergosterol diferentes bioatividades, incluindo efeitos hipocolesterol��micos semelhantes aos exibidos pelos fitoester��is. Isto torna o ergosterol uma mol��cula interessante para ser estudada como composto nutrac��utico. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de utiliza����o dos extratos de A. bisporus ricos em ergosterol na produ����o de bebidas l��cteas funcionais. Para o efeito, foram realizados testes de incorpora����o do extrato e do ergosterol puro em iogurtes que se compararam com bebidas l��cteas funcionais comerciais (aditivadas com fitoester��is). As amostras de A. bisporus foram submetidas a uma extra����o assistida por ultrassons e os extratos obtidos (IEXT), bem como a mol��cula de ergosterol em diferentes concentra����es (IERG1 e IERG2), foram incorporados em iogurtes, e comparadas com amostras controlo (amostras de iogurte sem aditivos) (ICN) e iogurtes comerciais contendo fitoester��is (ICP). Todas as amostras foram analisadas imediatamente ap��s a incorpora����o (T0), e ap��s sete dias de armazenagem a 4��C (T1), em rela����o aos par��metros nutricionais, atividade antioxidante e propriedades citot��xicas em linhas celulares tumorais humanas e numa cultura prim��ria de c��lulas de f��gado de porco (n��o tumoral) para avalia����o da toxicidade. O teor de ergosterol incorporado na forma pura, ou presente nos extratos, foi monitorizado por HPLC-UV. Adicionalmente, foi realizado um estudo de microencapsula����o utilizando a t��cnica de coacerva����o, tendo o quitosano e o isolado proteico de soro como materiais encapsulantes. Num ensaio preliminar determinou-se o pH conducente a um maior rendimento de encapsula����o e, seguidamente, verificou-se a influ��ncia da raz��o prote��na:quitosano (P/Q) e da temperatura utilizada, no rendimento de encapsula����o (Y1), na efici��ncia de encapsula����o (Y2) e na carga (teor de ergosterol nas microesferas) (Y3). Posteriormente, o estudo foi realizado baseando-se nas melhores condi����es para encapsular ergosterol, sendo tamb��m avaliadas as respostas Y1, Y2 e Y3. As bebidas funcionalizadas com o extrato (IEXT) e com ergosterol na mesma concentra����o existente no extrato (IERG1) revelaram uma atividade antioxidante similar ��s bebidas comerciais com fitoester��is. No entanto, as bebidas com ergosterol na mesma concentra����o do extrato de A. bisporus e de fitoester��is (IERG2) revelaram uma atividade antioxidante superior. Al��m disso, apenas IEXT, IERG1 e IERG2 apresentaram um aumento na atividade antioxidante de T0 para T1, com destaque para a atividade exibida por IERG2, significando que o ergosterol e os extratos foram capazes de proteger a bebida l��ctea da oxida����o, aumentando a vida de prateleira do produto. IERG2 foi a amostra que revelou a maior citotoxicidade para as linhas celulares tumorais, enquanto as bebidas com fitoester��is mostraram a menor atividade, sem diferen��as significativas entre T0 e T1. Os estudos de microencapsula����o revelaram ainda que a t��cnica de coacerva����o permite obter c��psulas de distintos tamanhos e que as condi����es ��timas do processo ocorrem a pH 5,5, com temperatura de 55��C e raz��o P/Q de 0,5, com um menor rendimento de encapsula����o, mas com uma maior carga em ergosterol. Este trabalho contribuiu para o estudo do potencial da utiliza����o de extratos de A. bisporus com ergosterol no desenvolvimento de novas bebidas funcionais. Constituiu um primeiro passo que necessita de estudos subsequentes relacionados com a avalia����o da viabilidade da sua utiliza����o ao n��vel industrial e demonstra����o clara da sua bioatividade in vivo.

A prospective study on bioactive properties of wild mushrooms mycelium grown in vitro under different conditions

Wild mushrooms have been extensively studied for their value as sources of high quality nutrients and of powerful physiologically bioactive compounds [1,2]. The present study was designed to evaluate the in vitro development of two wild edible mushroom species: Pleurotus eryngii (DC.) Qu��l. and Suillus belinii (Inzenga) Watling, by testing different solid (Potato Dextrose Agar medium ���PDA and Melin-Norkans medium- MMN) and liquid culture media (Potato dextrose broth- PDB and Melin-Norkans medium- MMN). Each strain of mushroom produces a special type of mycelium and this range of characteristics varies in form, color and growth rate. S. bellinii presents a pigmented and rhizomorphic mycelia, whereas, P. eryngii has depigmented and cottony mycelia. The mycelium isolated and grown in PDA showed a faster radial growth compared to the mycelium isolated and grown in both solid and liquid incomplete MMN medium. P. eryngii exhibited a rapid growth and a higher mycelia biomass in both medium compared to S. belinii. Moreover, the obtained mycelia will be characterized in terms of well-recognized bioactive compounds namely, phenolic acids and mycosterols (mainly ergosterol), by using high performance liquid chromatography coupled to diode array and ultraviolet detectors, respectively. These compounds will be correlated to mycelia bioactivity: i) antioxidant activity, evaluated through free radicals scavenging activity, reducing power and lipid peroxidation inhibition in vitro assays; ii) anti-inflammatory activity, assessed through nitric oxide production inhibition in murine macrophages (RAW 264.7 cell line); iii) cytotoxic activity, evaluated either in human tumor cell lines (MCF-7- breast adenocarcinoma, NCIH460- non-small cell lung cancer, HeLa- cervical carcinoma and HepG2- hepatocellular carcinoma) as also in a non-tumor porcine primary liver cells culture established in-house (PLP2). Overall, our expectation is that the bioactive formulations obtained by in vitro culture can be applied as nutraceuticals or incorporated in functional foods.

HPLC-DAD-ESI/MS phenolic characterization and biological activity of Equisetum giganteum L.

Naturally-occurring phytochemicals have received a pivotal attention in the last years, due to the increasing evidences of biological activities. Equisetum giganteum L., commonly known as ���giant horsetail���, is a native plant from Central and South America, being largely used in dietary supplements as diuretic, hemostatic, antiinflammatory and anti-rheumatic agents [1,2]. The aim of the present study was to evaluate the antioxidant (scavenging effects on 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radicals- RSA, reducing power- RP, ��-carotene bleaching inhibition- CBI and lipid peroxidation inhibition- LPI), anti-inflammatory (inhibition of NO production in lipopolysaccharidestimulated RAW 264.7 macrophages) and cytotoxic (in a panel of four human tumor cell lines: MCF-7- breast adenocarcinoma, NCI-H460- non-small cell lung cancer, HeLa- cervical carcinoma and HepG2- hepatocellular carcinoma; and in non-tumor porcine liver primary cells- PLP2) properties of E. giganteum, providing a phytochemical characterization of its extract (ethanol/water, 80:20, v/v), by using highperformance liquid chromatography coupled to diode array detection and electrospray ionisation mass spectrometry (HPLC-DAD���ESI/MS). E. giganteum presented fourteen phenolic compounds, two phenolic acids and twelve flavonol glycoside derivatives, mainly kaempferol derivatives, accounting to 81% of the total phenolic content, being kaempferol-O-glucoside-O-rutinoside, the most abundant molecule (7.6 mg/g extract). The extract exhibited antioxidant (EC50 values = 123, 136, 202 and 57.4 ��g/mL for RSA, RP, CBI and LPI, respectively), anti-inflammatory (EC50 value = 239 ��g/mL) and cytotoxic (GI50 values = 250, 258, 268 and 239 ��g/mL for MCF-7, NCI-H460, HeLa and HepG2, respectively) properties, which were positively correlated with its concentration in phenolic compounds. Furthermore, up to 400 ��g/mL, it did not revealed toxicity in non-tumor liver cells. Thus, this study highlights the potential of E. giganteum extracts as rich sources of phenolic compounds that can be used in the food, pharmaceutical and cosmetic fields.