Development of globular embryos from the hybridization between 'Pêra Rio' sweet orange and 'Poncã' mandarin

This research was undertaken to study the influence of different concentrations of the MT medium, sucrose, vitamins, activated charcoal and gibberellic acid (GA3) on the culture of immature embryos from the crossing between 'Pêra Rio' sweet orange and 'PONCÃ' mandarin. The embryos were excised under aseptic conditions and inoculated in 15 mL of the MT medium according to the following experiments: 1) MT concentrations (0%, 50%, 100%, 150% and 200%) supplemented with 0, 30, 60 and 90 g.L-1 of sucrose; 2) vitamins concentrations of the MT (0%, 50%, 100%, 150% and 200%) supplemented with 0, 30, 60 and 90 g.L-1 of sucrose; 3) activated charcoal concentrations (0, 0.5, 1, 1.5 and 2 g.L-1) supplemented with GA3 (0, 0.01, 0.1; 1 and 10 mg.L-1). After the inoculation, the embryos were kept in a growth room for 90 days at 27 ± 1ºC, in a 16-hour photoperiod with 32 µmol.m-2.s-1 of irradiance. The best development of embryos at the globular stage was achieved using 50% and 100% of the MT medium plus 60 g.L-1 and 90 g.L-1 of sucrose, respectively, supplemented with 0.01 mg.L-1 of GA3. The addition of activated charcoal or vitamins in the MT medium has shown to be unnecessary to the development of globular embryos.

Comparação do efeito do ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e da heparina sobre os eritrócitos de avestruzes (Struthio camelus L.)

Anticoagulantes com diferentes formas de ação têm sido utilizados na hematologia aviária. Entretanto, poucos estudos foram publicados sobre seu efeito e sobre os parâmetros hematológicos dos avestruzes. Visando a preencher essa lacuna, realizou-se um estudo em que foi comparado o efeito de dois anticoagulantes de rotina (EDTA - 2 mg/mL sangue e da Heparina -10U/mL sangue) sobre os eritrócitos de avestruzes. Para tanto, foram avaliados a integridade, o volume globular e a morfometria dos eritrócitos de amostras sanguíneas de 20 aves, tratadas com ambos os anticoagulantes. A integridade eritrocitária foi estimada pelo grau de hemoglobina livre no plasma, sendo o volume globular obtido pelo método de micro-hematócrito e os dados morfométricos (área, diâmetro maior e menor) calculados automaticamente em sistema computadorizado de imagem digital de alta resolução. A hemólise estimada pela dosagem de hemoglobina plasmática, o volume globular, a área e o diâmetro máximo dos eritrócitos foram significativamente maiores nas amostras tratadas com EDTA. Para melhor preservar a integridade e a morfometria dos eritrócitos, concluiuse que a heparina é um anticoagulante mais adequado que o EDTA para avaliar as discrasias eritrocitárias dos avestruzes.

Aglutinina anti-T (Thomsen-Friedenreich) na doença de Chagas

Uma amostra de soros de pacientes e controles de uma área endêmica da Doença de Chagas do País foi titulada contra hemácias de grupo O tratadas pela neuraminidase (células OT ativadas) e hemacias normais de grupo A e B (sistema ABO). Também foram feitos alguns testes de aglutinação de hemácias de pacientes com cardiomiopatia com as lectinas de amendoim (anti-T + anti-Tk) e com anticorpo humano anti-T. O escore médio da aglutinina anti-T dos pacientes foi similar ao do grupo controle. En- tretanto, o escore médio dos indivíduos com a forma cardíaca íoi significantemente maior que o dos pacientes assintomáticos e também maior que o do grupo controle. A comparação entre indivíduos com sorologia diagnóstica positiva versus negativa foi não significante. Nem a sorologia para Chagas nem as variáveis raça, sexo, idade, idade ao quadrado, in-fecção intestinal parasitária, teor de proteínas do soro, volume globular eritrocitário (hema-tócrito), grau de palidez da mucosa bucal, cardíomiopatia e os termos de interação sexo x idade, sexo x idade ao quadrado, estão associados significativamente com o logaritmo do título ou com o logaritmo do escore de aglutinação. Os escores de aglutinação das aglutininas anti-A e anti-B do sistema de grupo sangüíneo ABO estão dentro da faixa de variação normal. As hemácias de pacientes com a forma cardíaca não são aglutinadas nem pelas lectinas de amendoim (antiT + anti-Tk) e da soja (anti-T) nem pela aglutinina anti-T de origem humana. A prova de Coombs direta foi negativa em todos os pacientes, demonstrando a aparente ausência de imunoglobulinas IgG e IgM na superfície eritrocitária. O fato de que o aumento dos níveis de anti-T só foi detectado em uma das formas clínicas da doença em pacientes da mesma área endêmica constitui um argumento contra a possibilidade de que a variação observada seja produzida por uma infecção concomitante.

(Nota n.º 3) Nematódeos da aboboreira

In the State of S. Paulo, Brazil, squash plants (Cucurbita spp.) are attacked by the Javanese nematode (Meloidogyne javanica) and by M. incognita acrita. Squash belongs to that group of plants in which the root-knot nematodes break through the root surface, so that the egg-producing females protrude from the root, showing yellowish or brow nish egg masses attached to them. Washed roots show numerous small dark spots, each corresponding to an ootheca, which is adhering to a mature female. A curious abnormal female of M. i. acrita was obtained from a sample of squash roots. This female's body showed two globular parts, separated by a deep constriction. The convoluted ovaries were found to fill both portions of the body.

Pathogenia da anemia na Ancylostomose: II - causas determinantes dos phenomenos regenerativos e degenerativos nessa anemia e contribuições para elucidar o seu mechanismo intimo

Estudamos 25 casos escolhidos de Ancylostomose, procurando determinar quaes os factores que provocam a regeneração hematica, procurando o mechanismo desta regeneração e o desenvolver do processo anemiante. Preferimos seleccionar um numero pequeno de casos e acompanhal-o durante um largo tempo, observando alguns delles durante 1 a 1 anno e meio. A parte hematologica constou, além de 568 exames rotineiros (numeração das hematias, dosagem de Hb., determinação do hematocrito, e na maioria das vezes, determinação da taxa de reticulocytose verificação do aspecto morphologico do sangue em esfregaços), de pesquisas sobre a resistencia globular, sobre a taxa de proteinas no sôro, e em alguns casos, contagem de plaquetas, determinação da viscosidade, etc. Empregamos para estas pesquizas os methodos usuaes, a não ser na determinação da resistencia globular, para a qual descrevemos detalhadamente um processo pouco usado. Durante todo o transcorrer das observações, a actividade biologica dos helminthos parasitos foi controlada por numerosos exames de fezes, que constavam da pesquiza de ovos eliminados, de reacções chimicas que demonstrassem a presença de sangue. Exames de urina foram feitos periodicamente e outros exames foram praticados quando sobrevinha uma complicação ou qualquer facto inesperado. Observamos nos casos graves da doença, uma anemia de caracteristicas fixas. E' uma anemia hypochromica, microcytica, fracamente regenerativa. Verificamos que a degeneração dos indices hematicos, isto é, que o grau de hypochromia e micocytose, não se apresentam nestes casos extremos de modo variavel, mas sim, de maneira particularmente constante; e verificamos mais que estes indices assim degenerados (Ind. Vol. 53 uc., Ind. Hb. 13 yy, Ind. Sat. 23%) tambem são encontrados segundo observações de outros autores, em varias anemias hypochromicas humanas ou de outros mammiferos. No exame de esfregaços, são extremamente raros ou mesmo ausentes, os normoblastos, as hematias com restos nucleares e as hematias polychromaticas. A reticulose oscilla em torno de 3%. Este aspecto é constante nos casos graves, sendo entretanto variavel na unidade de volume o numero destas hematias acima caracterisadas. A média dessa ultima cifra em numerosos casos é de 2,50 M., o que determina uma taxa de Hb. egual a 23%. Ao analysarmos certas observações, que descrevem aspectos hematologicos differentes daquelles aqui descriptos, concluimos pela existencia nesses casos anomalos, de superposições de outras doenças, cuja etio-pathogenia nada tem a ver com os factores que determinam o apparecimento da anemia ancylostomotica. A regeneração hematica processa-se na Ancylostomose unicamente após a administração de ferro em dóses variaveis, conforme o sal empregado. Mostraram-se inactivas nos casos aqui observados, as administrações de figado crú, triptophano, hystidina, lecithina, Vit. B, saes de arsenico, manganez, cobalto, cobre e a alimentação com dietas ricas em ferro. Em virtude dos resultados que obtivemos com a administração isolada de ferro, concluimos pela inefficiencia da administração de substancias pyrrholicas, da fracção hepatica sensivel nas anemias hypochromicas, e da associação ao ferro de acido chlorhydrico. Todas essas substancias, e tambem a elimanação simples dos helminthos parasitos, não só mostraram-se isoladamente sem acção sobre o sangue, como não auxiliaram a regeneração provocada pelo ferro...

Pathogenia da anemia na Ancylostomose: III - modificações hematicas e organicas, provocadas pelas simples eliminação do Ancylostomo e do Necator, em individuos fortemente anemiados

Estudamos sob um ponto de vista hematologico, 10 casos puros de Ancylostomose, durante um largo tempo. Um dos doentes foi observado por mais de 2 annos, justificando esta larga observação a segurança que almejavamos alcançar de que a simples eliminação dos helminthos não trouxesse nenhuma modificação hematica, mesmo longiqua. O estudo hematologico constou de 200 exames rotineiros (determinação do numero de globulos, da taxa de Hb., do hematocrito, e, em muitos casos, da taxa dos reticulocytos e exame de esfregaços), praticados em todos os doentes, e de determinações da resistencia globular e outras pesquizas hematologicas praticadas em alguns delles. A grande parte do estudo constou de uma minuciosa (observação sanguinea e clinica dos casos, antes e após administração de vermifugos, até uma completa eliminação dos parasitos intestinaes. Procurou-se averiguar tambem, por meio da administração de diversas dietas, a influencia sobre o quadro hematico da dita eliminação combinada ao effeito de differentes factores nutritivos contidos nestas dietas. Procuramos verificar os phenomenos regenerativos com a administração de ferro, e tambem tivemos opportunidade de observar a marcha da anemia, e assim confirmar resultados que já publicamos. Os resultados mostraram a importancia da absorpção dos medicamentos vermicidas empregados, e por isso focalizamos varios factos similares, procurando relacional-os com aquelle aqui verificado. Discutimos a seguir o methodo therapeutico á luz dos resultados apresentados, e nos referimos á importancia destes na elucidação correcta de pathogenia da doença.

Intoxicação por veneno de cobra: necrose symetrica da cortex renal: uremia

Em um caso fatal de ophidismo, em individuo de 15 annos de edade, picado por uma cobra jararaca (Bothrops jararaca) na face externa da perna direita e que veio a fallecer 26 dias apoz o accidente, os A.A, descrevem as lesões anatomo-pathologicas encontradas e as modificações do metabolismo, evidenciadas pelos exames chimicos do sangue. As principaes alterações existentes, acham-se localisadas nos rins os quaes apresentam lesões de glomerulonephrite diffusa e o aspecto typico da necrose cortical symmetrica. Como alterações de maior significação observam-se ainda lesões vasculares de grande intensidade e constituidas essencialmente por processo de endoarterite productiva. A necrose symmetrica da cortex renal, a vista das intensas alterações vasculares (endoarterite productiva) que acarretaram a obliteração das arterías, é considerada como a consequencia immediata de taes lesões vasculares. Os vasos renaes, séde do processo inflammatorio, são as arterias interlobar, arciforme e interlobular, mas principalmente as arteriolares da camada cortical. O processo de endoarterite assume sempre o carater progressivo, de modo que a luz vascular vae sendo aos poucos, totalmente obstruida. Ao contrario do que se tem observado nos casos de necrose cortical symmetrica, citados na literatura, em que as alterações parenchymatosas são consequentes a thrombose dos vasos reanes, no caso presente esse aspecto não foi verificado mas tão sómente a existencia da endoarterite productiva obliterante. Consideram os A.A. as lesões renaes no caso que estudaram, como a resultante da actuação lenta e prolongada do veneno de cobra sobre as estructuras renaes, baseados nos seguintes factos já conhecidos e admittidos: eliminação do veneno de cobra pelos rins; capacidade do mesmo veneno, determinar a glomerulo-nephrite diffusa e acção do veneno de cobra sobre o endothelio vascular, facilitada essencialmente pela funcção especifica do orgão. As modificações do metabolismo se traduziram por alterações urinarias e sanguineas. As urinas foram emitidas em muito pequena quantidade (50 cc. em 24 horas) não havendo comtudo, anuria absoluta. Cylindros hyalinos e granulosos, bem como leucocytos e cellulas renaes, associadas á albuminoria, era presentes. Os exames chimicos do sangue, revelaram: Proteinas totaes 7,61 grs. em 1000 cc.; Albumina 2,39 grs em 1000 cc.; Globulina 5,22 grs. em 1000 cc.; Uréa 6,42 grs. em 1000 cc.; Fibrinogeneo 0,324 grs. em 1000 cc.; Indican +++; Cl. plasmatico 339 mgrs. em 100 cc.; Cl. globular 170 mgrs. em 100 cc.; Cholesterol 163 mgrs. em 100 cc.; Creatinia 260 mgrs. em 100 cc.; Ph. inorganico 13,4 mgrs. em 100 cc.; Calcio 10,3 mgrs em 100 cc.; Potassio 28 mgrs. em 100 cc.; Sodio 328 mgrs. em 100 cc.. O exame hematologico revelou 11% de hemoglobina; 960.000 hematias por mm.³; e 5.200 leucocytos por mm.³. A formula leucocytaria revelou augmento dos neutrophilos, com 74% dos segmentados. A proporção entre sôro o coagulo foi 9 x 3 cc. A reacção de Wassermann no sôro sanguineo foi negativa. A insufficiencia renal se traduziu no caso em estudo, por modificações humoraes, particularmente pela azotemia elevada, pelo augmento da creatinina, do phosphoro inorganico e do indican. Em contraste com a existencia de taes modificações, o doente não apresentou os signaes clinicos observados nos casos emque a azotemia se mantem elevada, reproduzindo tal facto, o quadro clinico descripto para a necrose symmetrica da cortex renal.

Transplantação de baço de coelho com mixoma infeccioso na câmara anterior do ôlho da cobaia: sôbre a degeneração mixomatosa: inclusões intranucleares

Heterotranplantability of myxoma of rabbits was formely demonstrated when grafts from subcutaneous tissue in skin were used (MARGARINOS TÔRRES & RITA CARDOSOS, 1949). Better results are reported in this paper when grafts from the spleen of infected rabbits were employed. While grafts from normal spleen are almost completely absorbed in sixteen days, those from infected rabbits give origin to full-grown and vascularised tissue in which typical myxoma cells are predominant elements. Progressive growth of heterotransplantated myxoma cells is another similarity between infectious myxoma and malignant tumors. Formation of clear areas of circular contour (interference of a diffusible substance?) associated to myxomatous degeneration is very conspicuous. Peculiar changes of the ground substance, reticular and collagenous fibers (globular swelling, rosary and bulb formation) apparently related to myxomatous degeneration are described. An unexpected finding was the presence of typical intranuclear inclusion bodies in five among forty-eight grafts examined in the sixth day.

Prova da hemodispersão sedimentar

Os autores analisam pormenorizadamente o sistema soro-hematia formolizada no qual se processa a aglutino-sedimentação (Fenômeno de Rubino). Cada fase do referido sistema é investigada do ponto de vista físico-químico. Os dados obtidos são aproveitados pelos autores na elaboração de um sistema análogo, porém, com parâmetros próprios diferentes dos fixados por Rubino. Escolheu-se como evidência do fenômeno não a alutino-sedimentação função do tempo, porém, o aspecto da massa globular sedimentada após 24 horas a ± 10ºC (Hemodispersão sedimentar). A nova técnica proposta, aplicada sistematicamente, permitiu aos autores concluírem a) não há 'especificidade" correlacionada com enfermidades; b) o fenômeno resulta da atividade combinada de gamaglobulinas como dipolos, íons positivos do meio e polaridade propícia das hematias formolizadas; c)o aumento das gamaglobulinas séricas, sobretudo daquelas de ponto iso-elétrico do pH sanguíneo, determina o fenômeno, independentemente da causa mórbida que originou a hipergamaglobulinemia; d) sobretudo na lepra lepromatosa, o aumento das referidas gamaglobulinas é muito freqüente, e mantém-se muito tempo mesmo após regressão clínica da doença. É sugerida uma explicação para este último fato; e)os autores também referem uma atividade especial do formol sobre os soros reatores, propondo uma hipótese para a mesma.

Proterodiplostome Parasites (Digenea, Proterodiplostomidae) of the Caiman, Caiman crocodilus yacare (Reptilia, Crocodylia) in the Pantanal mato-Grossense, Brazil, with the description of two new species

Two new species are described from the caiman. Caiman crocodilus yacare. Proterodiplostomum breve n. sp. differs from all other species in the genus by the following chacacteristics: (1) the paraprostate gland is shorter and club-shaped; (2) the genital cone is, in average, eight times longer than that of P. medusae; (3) the genital atrium is larger and without pseudosuckers; (4) the oral sucker and pharynx are longer; and (5) there are larger numbers of papillae surrounding the tribocytic organ (40) against 20 in P. longum, 16 in p. tumidilum, 8 in P. ophidum, and 16-18 in P. medusae. Proterodiplostomum globulare n. sp. differs from all the other species in the fenus by the following characteristics: (1) from P. tumidilum, P. lomgum, P. medusae, and P. breve n. sp. for the absense of pseudosuckers or muscular bunches in the inferior wall of the genital atrium; (2) the shape of the paraprostate gland, which is globular and not cylindrical as in P. longum, P. tumidilum, P. medusae, and P. ophidum; (3) the size of the tribocytic organ 201-407 long, 183-495 wide, while is 138-270 long, 102-292 wide in P. medusae, and 138-270 long, 255 wide in P. ophidum; (4) the number of papillae in the tribocytic organ (18-20) in P. globulare and 16-18 in P. medusae, and 8 in P. ophidum. Specimens belonging to six other species of proterodiplostomes are recorded for the first time infecting the caiman, C. c. yacare in the Pantanal Mato-grossense, Brazil, namely: Proterodiplostomum medusae, P. tumidilum, Cystodiplostomum hollyi, Prolecithodiplostomum constrictum, Paradiplostomum abbreviatum, and Herpetodiplostomum caimancola.

Morphological Study of the Larval Spiracular System in Eight Lutzomyia Species (Diptera: Psychodidae)

The morphology of the spiracles of fourth instar larva in eight sandfly species were examined by light and scanning electron microscopy. Species studied were: Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), L. ovallesi (Ortiz), L. youngi Feliciangeli & Murillo, L. evansi (Nuñez-Tovar), L. trinidadensis (Newstead), L. migonei (França), L. absonodonta Feliciangeli, and L. venezuelensis (Floch & Abonnenc). In larvae of all eight species both thoracic and abdominal spiracles are located at the top of a globular bulge. Their structure consists of a spiracular plate with a sclerotized central portion and a rose-like peripheral portion. The latter has circularly arranged papillae, separated from each other by elongated septa. Each papilla is longitudinally crossed by a fine cleft dividing it into two identical parts. The taxonomic and adaptative value of spiracular morphology is discussed

Senescent stem-galls in trees of Eremanthus erythropappus as a resource for arboreal ants

Senescent stem-galls in trees of Eremanthus erythropappus as a resource for arboreal ants. Members of the dipteran families Tephritidae and Cecidomyiidae are inducers of stem-galls in Eremanthus erythropappus (DC.) MacLeish (Asteraceae), a tree common in the state of Minas Gerais, Brazil. When senescent, these galls become available to other organisms, such as ants. The present study describes a community of ants having benefitted from this process of ecosystem-engineering. The colonies in question inhabit the senescent stem-galls of trees of E. erythropappus and were examined in view of answering the following questions: i) whether the presence of stem-galls had any bearing on the richness, composition, or size of the ant colonies therein; and ii) whether the ants displayed any preferences regarding the shape and/or size of the galls. The study was conducted in populations of E. erythropappus trees near the city of Ouro Preto, MG. A total of 227 galls were collected, 14% of which were occupied by ants, belonging to eight different species. Half of the species occupied galls of both morphotypes (fusiform and globular), although we observed a marked preference for larger, globular shapes. Overall, our results showed the galls to be an effective and abundant resource, helping to maintain the diversity of the ants in the canopy. We also observed the occurrence of outstations and polydomic nests, although an in-depth examination of the influence of galls on this type of structuring has not been investigated.

Estádios de desenvolvimento embrionário e localização do embrião zigótico em sementes de citros

Objetivou-se estudar o comportamento de embriões zigóticos e nucelares aos 120, 130, 140 e 150 dias após serem efetuadas hibridações controladas entre a laranjeira 'Natal' (Citrus sinensis Osb.) e o parental masculino Poncirus trifoliata (L.) Raf. Em cada data, as sementes foram removidas, e os embriões excisados foram caracterizados em estádios de desenvolvimento (globular, cordiforme, torpedo e cotiledonar); coloração (clorofilado ou não); e localização na semente (próximo à micrópila ou mais interiormente). A partir dessas características, foram construídas tabelas de contingência para testar hipóteses de independência entre elas, mediante o teste exato de Fisher e chi² (qui-quadrado). Relações de dependência foram verificadas entre as características: estádios de desenvolvimento embrionário com a localização na semente; estádios de desenvolvimento embrionário com a natureza da plântula (zigótica ou nucelar); e entre natureza da plântula com a localização do embrião na semente. Verificou-se que os embriões zigóticos excisados de frutos com 130 a 150 dias da hibridação controlada, localizam-se, em grande maioria, próximos à região micropilar da semente, em estádio globular e cordiforme de desenvolvimento.

ESTÁDIOS DE DESENVOLVIMENTO DE EMBRIÕES NA OBTENÇÃO DE PLANTAS EM CRUZAMENTOS ENTRE GENITORES APIRENOS DE VIDEIRA

Pesquisou-se o efeito do estádio de desenvolvimento de embriões resgatados na obtenção de plantas em cruzamentos entre genitores apirenos de videira, utilizando dois métodos de cultivo in vitro de sementes-traço. No método 1 (M1), as sementes-traço foram cultivadas 60 dias em meio-de-cultura ER e no método 2 (M2) 60 dias em ER, mais 30 dias em meio-de-cultura MS. O estádio de desenvolvimento do embrião foi identificado no final destes períodos, quando do resgate e transferência para meio-de-cultura WP. Quatro tipos de embriões foram identificados: globular, cordiforme, torpedo e indefinido. O estádio globular foi encontrado com maior freqüência, levando à obtenção de maior número de plantas, mesmo tendo apresentado menor capacidade de gerar plantas. A maior eficiência em gerar plantas foi obtida com o estádio torpedo. No M2, ocorreu maior número de embriões germinados e de plantas desenvolvidas. Como o estádio de desenvolvimento do embrião influencia na obtenção de plantas, o resgate de embriões em estádio mais avançado do seu desenvolvimento leva a tem maior capacidade de gerar plantas. Portanto, uso de técnicas que favoreçam o resgate de embriões mais desenvolvidos pode aumentar o número de plantas obtidas.

Embriogênese somática do caquizeiro

O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo para a embriogênese somática do caquizeiro. Como explantes, foram utilizados embriões zigóticos em diversos estádios de desenvolvimento, retirados de frutos coletados de plantas adultas a campo, a partir de quatro semanas após o pleno florescimento até 22 semanas. O meio básico para os experimentos foi o MS½NO3. O meio inicial de indução foi suplementado com 20µM de 2,4-D e 2µM de cinetina. Os calos escuros obtidos foram repicados para outro meio de indução, com concentrações 10 ou 20 µM de 2,4-D e 2 µM de cinetina. Os calos com massas pró-embriogênicas obtidos foram transferidos para meio de manutenção e multiplicação com 2 µM de cinetina e 2,4-D nas concentrações 2,5; 5,0 e 10 µM. As massas embriogênicas formadas foram transferidas para meio de maturação suplementado com 0,5 µM de AIB e as concentrações 5; 10 e 20 µM de 2-iP. Os embriões formados foram isolados em dois meios de conversão, sendo o primeiro com 5 µM de 2-iP, 5 µM de AG3 e 0,5 µM de AIB e o segundo com 0,5 µM de AG3 e BAP, nas concentrações 0; 0,25; 0,5 e 1,0 µM. Como resultados, obteve-se o padrão indireto de embriogênese somática a partir de embriões zigóticos maduros, com mais de 22 semanas de formação, quando cultivados em meio de cultura com 10 µM de 2,4-D combinado com 2 µM de cinetina. A manutenção e a multiplicação das culturas embriogênicas foram mais eficientes com 5 µM de 2,4-D, na qual os pró-embriões avançaram para o estádio globular. Na fase de maturação, as concentrações de 2-iP testadas atuaram promovendo os embriões globulares a estádios mais avançados da ontogenia como cordiforme, torpedo e cotiledonar. A suplementação do meio de cultura com 1 µM de BAP e 0,5 µM de AG3 gerou a formação de plantas mais desenvolvidas, com maior número e tamanho de folhas.