Effects of the conditioned medium of mesenchymal stem cells on mouse oocyte activation and development

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been reported to secrete a variety of cytokines and growth factors acting as trophic suppliers, but little is known regarding the effects of conditioned medium (CM) of MSCs isolated from femurs and tibias of mouse on the artificial activation of mouse oocytes and on the developmental competence of the parthenotes. In the current study, we investigated the effect of CM on the events of mouse oocyte activation, namely oscillations of cytosolic calcium concentration ([Ca²+]i), meiosis resumption, pronucleus formation, and parthenogenetic development. The surface markers of MSCs were identified with a fluorescence-activated cell sorter. The dynamic changes of the spindle and formation of pronuclei were examined by laser-scanning confocal microscopy. Exposure of cumulus-oocyte complexes to CM for 40 min was optimal for inducing oocyte parthenogenetic activation and evoking [Ca²+]i oscillations similar to those evoked by sperm (95 vs 100%; P > 0.05). Parthenogenetically activated oocytes immediately treated with 7.5 µg/mL cytochalasin B (CB), which inhibited spindle rotation and second polar body extrusion, were mostly diploid (93 vs 6%, P < 0.01) while CB-untreated oocytes were mostly haploid (5 vs 83%, P < 0.01). Consequently, the blastocyst rate was higher in the CB-treated than in the CB-untreated oocytes. There was no significant difference in developmental rate between oocytes activated with CM and 7% ethanol (62 vs 62%, P > 0.05), but the developmental competence of the fertilized oocytes was superior to that of the parthenotes (88 vs 62%, P < 0.05). The present results demonstrate that CM can effectively activate mouse oocytes, as judged by the generation of [Ca²+]i oscillations, completion of meiosis and parthenogenetic development.

Desfolha artificial simulando danos de pragas na cultura do girassol (Helianthus annuus L., Asteraceae)

O girassol está sujeito às perdas de área foliar por diferentes fatores, dentre eles os insetos desfolhadores, contra aos quais geralmente são dirigidas aplicações de inseticidas na cultura. A desfolha artificial em plantas de importância econômica é uma metodologia útil na simulação de ataques dessas pragas em lavouras na determinação dos níveis de dano econômico. O objetivo deste estudo foi avaliar componentes de produção das plantas de girassol submetidas a níveis crescentes de desfolha de 0, 10, 25, 50, 75 e 100%, realizada em três distintos estádios fenológicos da cultura, a saber: V6 (seis folhas com no mínimo 4,0 cm de comprimento), R1 (quando a inflorescência circundada pela bráctea imatura torna-se visível) e R5.5 (50% das flores do disco estão fertilizadas ou em antese), perfazendo um total de 18 tratamentos, os quais foram dispostos em blocos ao acaso, com quatro repetições. Para todos os componentes de produção avaliados (diâmetro do capítulo, biomassa total de sementes da planta e biomassa de 100 aquênios) houve efeito significativo da interação dos tratamentos, evidenciando que o efeito da desfolha será dependente do estágio fenológico da planta. O estádio R5.5 foi mais sensível à desfolha, ocasionando perdas em todos os componentes de produção avaliados.

Dose inseminante utilizada na fertilização artificial de ovócito de piracanjuba (Brycon orbignyanus)

A piracanjuba (Brycon orbignyanus Valenciennes, 1849) é uma espécie de peixe migratória, ameaçada de extinção. O objetivo do presente estudo foi determinar a dose inseminante na fertilização artificial de ovócitos de piracanjuba. Para isso, utilizou-se delineamento em blocos casualizados, com quatro tratamentos e três repetições. Três casais de piracanjuba, selecionados dos tanques de reprodutores da Estação Ambiental de Itutinga (EAI - CEMIG), no período de piracema 2006/2007, receberam aplicação de hormônio extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC) para obtenção dos gametas. Adotaram-se quatro tratamentos diferentes para a fertilização de 0,1 grama de ovócitos: 10µL, 20µL, 30µL e 40µL de sêmen. As amostras foram ativadas com 5 mL de água do próprio tanque e, em seguida, levadas para incubadoras, dotadas de renovação constante de água, à temperatura de 28ºC. Após 8 e 16 horas, analisaram-se as taxas de fertilização (ovos viáveis) e de eclosão dos ovos, respectivamente. Os resultados obtidos foram comparados pelo teste de Tukey a 5%. As relações sêmen-ovócitos testadas não alteraram as taxas de fertilização e eclosão (P>0,05). O número de espermatozoides-ovócitos, variando de 10,4 x10(5) a 41,6 x10(5), foi eficiente para obtenção de boas taxas de fertilidade.

Applications of artificial intelligence to condition-based maintenance

In this paper we discuss interesting developments of expert systems for machine diagnosis and condition-based maintenance. We review some elements of condition-based maintenance and its applications, expert systems for machine diagnosis, and an example of machine diagnosis. In the last section we note some problems to be resolved so that expert systems for machine diagnosis may gain wider acceptance in the future.

Aspectos ecológicos da leishmaniose tegumentar americana: 2. ecótopo artificial como abrigo de Psychodopygus intermedius e observações sobre alimentação e reprodução sob influência de fatores físicos naturais

As observações levadas a cabo em um galinheiro experimental mostraram que Psychodopygus intermedius tem a capacidade de nele abrigar-se. Para se chegar a este resultado, a metodologia utilizada consistiu na coleta total diurna e exame do estado de alimentação e digestão sangüínea dos Ps. intermedius como parâmetro da sua maior ou menor permanência no ecótopo estudado. Além disso, observou-se paralelamente, os tempos para o repasto sangüíneo, digestão completa, oviposição, sobrevivência e cópula sob a influência direta dos fatores físicos naturais. A importância epidemiológica dos resultados reside em novas elucidações experimentais sobre a viabilidade da transmissão da leshmaniose tegumentar ocorrer em ambiente domiciliar.

Opinião de médicos brasileiros sobre fecundação artificial do ponto de vista ético

Foi realizado levantamento da opinião dos médicos que compareceram ao "XIV Congresso Brasileiro de Reprodução Humana", sob o ponto de vista ético, a respeito da fecundação artificial. Foram analisados os resultados, chegando-se a selecionar alguns itens comportamentais como preliminarmente aceitos. Propõe-se a realização de estudos mais profundos que objetivam abordar os vários aspectos aceitos ou não pela sociedade.

Duration of larval and pupal development stages of Aedes albopictus in natural and artificial containers

Aedes albopictus were reared in different containers: a tree hole, a bamboo stump and an auto tire. The total times from egg hatching to adult emergence were of 19.6,27.3 and 37.5 days, respectively, according to the container. The first, second and third-instar larvae presented growth periods with highly similar durations. The fourth-instar larvae was longer than the others stages. The pupation time was longer than the fourth-instar larvae growth period. The temperature of the breeding sites studied, which was of 18° C to 22° C on average, was also taken into consideration. The mortality of the immature stages was analysed and compared as between the experimental groups; it was lower in the natural containers than in the discarded tire. The average wing length of adult females emerging from tree hole was significantly larger (p < 0.05) than that of those emerging from the tire.

Encontro de Aedes scapularis (Diptera: Culicidae) em criadouro artificial em localidade da região Sul do Brasil

Duas larvas de Aedes scapularis foram encontradas em um criadouro artificial, no Município de Sertaneja, Norte do Estado do Paraná, Brasil, durante atividade de rotina para o controle de vetores da dengue.

Rede neural artificial para detecção de sobremortalidade atribuível à cólera no Ceará

OBJETIVO: Avaliar as redes neurais recorrentes enquanto técnica preditiva para séries temporais em saúde. MÉTODOS: O estudo foi realizado durante uma epidemia de cólera ocorrida no Estado do Ceará, em 1993 e 1994, a partir da sobremortalidade tendo como causa básica as infecções intestinais mal definidas (CID-9). O número mensal de óbitos por essa causa, referente ao período de 1979 a 1995 no Estado do Ceará, foram obtidos do Sistema de Informação de Mortalidade (SIM) do Ministério da Saúde. Estruturou-se uma rede com dois neurônios na camada de entrada, 12 na camada oculta, um neurônio na camada de saída e um na camada de memória. Todas as funções de ativação eram a função logística. O treinamento foi realizado pelo método de backpropagation, com taxa de aprendizado de 0,01 e momentum de 0,9, com dados de janeiro de 1979 a junho de 1991. O critério para fim do treinamento foi atingir 22.000 epochs. Compararam-se os resultados com os de um modelo de regressão binomial negativa. RESULTADOS: A predição da rede neural a médio prazo foi adequada, em dezembro de 1993 e novembro e dezembro de 1994. O número de óbitos registrados foi superior ao limite do intervalo de confiança. Já o modelo regressivo detectou sobremortalidade a partir de março de 1992. CONCLUSÕES: A rede neural se mostrou capaz de predição, principalmente no início do período, como também ao detectar uma alteração concomitante e posterior à ocorrência da epidemia de cólera. No entanto, foi menos precisa do que o modelo de regressão binomial, que se mostrou mais sensível para detectar aberrações concomitantes à circulação da cólera.

Effect of b-Propiolactone treatment on the complement activation mediated by equine antisera

Reduction of complement activation through an alteration of the Fc fragment of immunoglobulins by b-propiolactone treatment was carried out in equine antisera raised against rabies virus, Bothrops venoms and diphtherial toxin. Results were evaluated by means of an anaphylactic test performed on guinea-pigs, and compared to the ones obtained with the same sera purified by saline precipitation (ammonium sulfate), followed or not by enzymatic digestion with pepsin. Protein purity levels for antibothropic serum were 184.5 mg/g and 488.5 mg/g in b-propiolactone treated and pepsin-digested sera, respectively. The recovery of specific activity was 100% and 62.5% when using antibothropic serum treated by b-propiolactone and pepsin digestion, respectively. The antidiphtherial and anti-rabies sera treated with b-propiolactone and pepsin presented protein purity levels of 5,698 and 7,179 Lf/g, 16,233 and 6,784 IU/g, respectively. The recovery of specific activity for these antisera were 88.8%, 77.7%, 100% and 36,5%, respectively. b-propiolactone treatment induced a reduction in complement activation, tested "in vivo", without significant loss of biological activity. This treatment can be used in the preparation of heterologous immunoglobulins for human use.

Trypanosoma cruzi parasitemia observed in immunocompromised patients: the importance of the artificial xenodiagnosis

Trypanosoma cruzi parasitemia observed in immunocompromised patients (transplant or positive HIV) occurred more frequently by the artificial xenodiagnosis method (10/38) compared with hemoculture (2/38), given the same quantity of blood. Other ways of diagnosis, like mice inoculation (5/38), QBC and buffy coat (2/38), were evaluated also. This result showed the importance of the artificial xenodiagnosis. The other techniques increased only one more patient positive.

In vitro and in situ activation of the complement system by the fungus Lacazia loboi

Since there are no studies evaluating the participation of the complement system (CS) in Jorge Lobo's disease and its activity on the fungus Lacazia loboi, we carried out the present investigation. Fungal cells with a viability index of 48% were obtained from the footpads of BALB/c mice and incubated with a pool of inactivated serum from patients with the mycosis or with sterile saline for 30 min at 37 ºC. Next, the tubes were incubated for 2 h with a pool of noninactivated AB+ serum, inactivated serum, serum diluted in EGTA-MgCl2, and serum diluted in EDTA. The viability of L. loboi was evaluated and the fungal suspension was cytocentrifuged. The slides were submitted to immunofluorescence staining using human anti-C3 antibody. The results revealed that 98% of the fungi activated the CS by the alternative pathway and no significant difference in L. loboi viability was observed after CS activation. In parallel, frozen histological sections from 11 patients were analyzed regarding the presence of C3 and IgG by immunofluorescence staining. C3 and IgG deposits were observed in the fungal wall of 100% and 91% of the lesions evaluated, respectively. The results suggest that the CS and immunoglobulins may contribute to the defense mechanisms of the host against L. loboi.

Xenodiagnóstico artificial "post-mortem" em chagásicos crônicos

A fim de obter metodologias que permitam estabelecer, com segurança, o diagnóstico "post-mortem " da infecção chagásica, adaptou-se o xenodiagnóstico artificial a necropsiados com diferentes tempos de óbito. O testefoi positivo em três (30%) de dez chagásicos autopsiados. O tempo decorrido entre o êxito letal e o início do repasto pelos triatomineos destes chagásicos foi de duas horas, duas horas e quinze minutos e sete horas, respectivamente. Discutem-se os fatores que podem explicara sobrevivência do Trypanosoma cruzi no hospedeiro morto bem como as aplicações práticas do achado.