Use of nonradioactive labeling to detect large gene rearrangements in 21-hydroxylase deficiency

PURPOSE: To establish the Southern blotting technique using hybridization with a nonradioactive probe to detect large rearrangements of CYP21A2 in a Brazilian cohort with congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency (CAH-21OH). METHOD: We studied 42 patients, 2 of them related, comprising 80 non-related alleles. DNA samples were obtained from peripheral blood, digested by restriction enzyme Taq I, submitted to Southern blotting and hybridized with biotin-labeled probes. RESULTS: This method was shown to be reliable with results similar to the radioactive-labeling method. We found CYP21A2 deletion (2.5%), large gene conversion (8.8%), CYP21AP deletion (3.8%), and CYP21A1P duplication (6.3%). These frequencies were similar to those found in our previous study in which a large number of cases were studied. Good hybridization patterns were achieved with a smaller amount of DNA (5 mug), and fragment signs were observed after 5 minutes to 1 hour of exposure. CONCLUSIONS: We established a non-radioactive (biotin) Southern blot/hybridization methodology for CYP21A2 large rearrangements with good results. Despite being more arduous, this technique is faster, requires a smaller amount of DNA, and most importantly, avoids problems with the use of radioactivity.

The Rio de Janeiro HIV Vaccine Site: I. Recruitment Strategies and Socio-demographic Data of a HIV Negative Homosexual and Bisexual Male Cohort in Rio de Janeiro, Brazil

The initial effort of the Brazilian Ministry of Health to be an active partner in the world effort in the preparation of future accurate human immune deficiency virus (HIV) efficacy trials was the establishment of a multi-centered cohort of homosexual and bisexual men. An open cohort was established to determine the HIV incidence and the socio-behavioral aspects involved in Rio de Janeiro. A total of 318 potential participants, originated from multiple sources (health units, public information, snowball recruitment), were screened and recruitment became effective through the direct involvement of target communities (with the support of Non Governmental Organizations) and the population. Among this group, seropositivity for sexually transmitted diseases was high with 23, 32 and 46% for HIV, syphilis and hepatitis B, respectively. The socio-demographic data from the first 200 participants of this HIV negative cohort suggests that the cohort volunteers are an appropriate sample of the general male population of the State of Rio de Janeiro

Evidence for the presence of a kininogen-like species in a case of total deficiency of low and high molecular weight kininogens

Low and high molecular weight kininogens (LK and HK), containing 409 and 626 amino acids with masses of ~65 and 120 kDa after glycosylation, respectively, are coded by a single gene mapped to the human chromosome 3 by alternative splicing of the transcribed mRNA. The NH2-termini Glu1-Thr383 region, identical in LK and HK, contains bradykinin (BK) moieties Arg363-Arg371. LK, HK and their kinin products Lys-BK and BK are involved in several biologic processes. They are evolutionarily conserved and only 7 patients, all apparently normal, have been reported to lack them. In one of these patients (Williams' trait), a codon mutation (Arg178 ® stop) has been blamed for the absence of LK and HK. However, using Western blots with 2 monoclonal anti-HK antibodies, one that recognizes the region common to LK and HK and the other that recognizes only HK, I detected ~110-kDa bands in the plasma of this LK/HK-deficient patient vs ~120-kDa bands in normal human and ape plasmas. With polyclonal anti-Lys-BK antibody, which strongly detects BK cleaved at its COOH-terminus in purified HK, I detected ~110-kDa bands in the normal and the deficient plasmas. Western blots with a monoclonal anti-prekallikrein (PK) antibody showed that surface activation of PK and distribution of PK activation products, both dependent on HK, were similar in these plasmas. These findings suggest that a mutant gene yielded a kininogen-like species possibly involving aberrant mRNA splicing - structurally different from normal HK, but apparently with the capacity to carry out seemingly vital HK functions.

Relation of the disaccharidases in the small intestine of the rat to the degree of experimentally induced iron-deficiency anemia

Hypolactasia associated with severe iron-deficiency anemia has been reported in several studies. The objective of the present study was to determine whether hypolactasia is associated with the degree and duration of iron-deficiency anemia. Newly weaned male Wistar rats were divided into a control group receiving a diet supplemented with iron (C) and an experimental group (E) receiving a diet not supplemented with iron (iron-deficiency diet). The animals were studied on the 3rd, 5th, 7th, 14th, 21st, 28th and 35th days of the experiment, when overall and iron nutritional status and disaccharidase activity in the small intestine were determined by the Dahlqvist method. A reduction in weight occurred in the anemic animals starting on the 5th day of the study. Anemia was present in the experimental animals, with a progressive worsening up to the 14th day (hemoglobin: C = 13.27 and E = 5.37) and stabilizing thereafter. Saccharase and maltase activities did not differ significantly between groups, whereas lactase showed a significant reduction in total (TA) and specific activity (SA) in the anemic animals starting on the 21st day of the study. Median lactase TA for the C and E groups was 2.27 and 1.25 U on the 21st day, 2.87 and 1.88 U on the 28th day, and 4.20 and 1.59 U on the 35th day, respectively. Median lactase SA was 0.31 and 0.20 U/g wet weight on the 21st day, 0.39 and 0.24 U/g wet weight on the 28th day, and 0.42 and 0.23 U/g wet weight on the 35th day, respectively. These findings suggest a relationship between the enzymatic alterations observed and both the degree and duration of the anemic process. Analysis of other studies on intestinal disaccharidases in anemia suggests that the mechanism of these changes may be functional, i.e., that the enterocytes may suffer a reduction in their ability to synthesize these enzymes.

21-Hydroxylase deficiency in Brazil

We determined the frequency of large rearrangements and point mutations in 130 Brazilian patients with 21-hydroxylase deficiency and correlated genotype with phenotype. The frequency of CYP21 deletions was lower (4.4%) than in most of the previous series described, whereas the frequency of large gene conversions was similar to the frequency reported in the literature (6.6%). The most frequent point mutations were I2 splice (41.8% in salt wasting - SW), I172N (32.6% in simple virilizing - SV) and V281L (40.2% in the late onset form - LO). The frequency of the nine most common point mutations was similar to that reported for other countries. The 93 fully genotyped patients were classified into 3 mutation groups based on the degree of enzymatic activity (A<2%, B @ 2%, C>20%). In group A, 62% of cases presented the SW form; in group B, 96% the SV form, and in group C, 88% the LO form. We diagnosed 80% of the affected alleles after screening for large rearrangements and 15 point mutations. To diagnose these remaining alleles we sequenced the CYP21 gene of one patient with the SV form and identified a heterozygous G->A transition in codon 424. This mutation leads to a substitution of glycine by serine in a conserved region and was also found in a compound heterozygous state in 4 other patients. The mutation G424S presented a linkage disequilibrium with CYP21P and C4A gene deletions and HLA DR17, suggesting a probable founder effect. Search for the G424S mutation in other populations will reveal if it is restricted to the Brazilian patients or if it has a wider ethnic distribution.

Reabilitação vestibular personalizada: levantamento de prontuários dos pacientes atendidos no ambulatório de otoneurologia da I.S.C.M.S.P.

O OBJETIVO: o objetivo deste trabalho foi verificar a eficácia da reabilitação vestibular personalizada (RVP) em diferentes quadros otoneurológicos. FORMA DE ESTUDO: clínico retrospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Foi realizado um estudo retrospectivo que constou de uma descrição do programa de reabilitação vestibular de 37 pacientes, com idade entre 21 a 87 anos, vinte e seis do sexo feminino, onze do sexo masculino, com quadros otoneurológicos variados, atendidos no Ambulatório de Otoneurologia do Departamento de Otorrinolaringologia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo, no período de 2002 a 2003. Estes foram submetidos à avaliação otoneurológica e depois de realizado o diagnóstico pelo otorrinolaringologista, encaminhados para a reabilitação vestibular, realizada semanalmente no ambulatório, e em casa diariamente. Cada paciente seguiu programas específicos de exercícios, considerando-se os achados ao exame vestibular, o quadro clínico e, principalmente, os sintomas apresentados. Os exercícios foram baseados em diferentes protocolos descritos na literatura. Foi realizada uma análise individual da evolução clínica e em conjunto, a fim de verificar a eficácia da RVP em diferentes quadros clínicos. CONCLUSÃO: Pudemos concluir que o programa de RVP mostrou-se um recurso terapêutico efetivo na diminuição e extinção dos sintomas e conseqüente melhora na qualidade de vida de pacientes portadores de diferentes quadros clínicos.

Manifestações vestibulococleares em pacientes com diabetes melito tipo I

Ometabolismo da glicose tem muita influência na fisiologia da orelha interna e pequenas variações glicêmicas podem provocar alterações na audição e no equilíbrio corporal. OBJETIVO: Verificar as manifestações vestibulococleares em pacientes com diabetes melito tipo I. FORMA DE ESTUDO: Coorte contemporânea com corte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Avaliaram-se 30 pacientes (17 homens e 13 mulheres) encaminhados do Hospital de Clínicas da UFPr para o Laboratório de Otoneurologia da Universidade Tuiuti do Paraná no período de março/2004 a fevereiro/2005. Realizaram-se os seguintes procedimentos: anamnese, inspeção otológica, avaliação audiológica convencional, medida de imitância acústica e avaliação vestibular. RESULTADOS: Observaram-se entre as queixas otoneurológicas a prevalência de cefaléia (23,3%), tontura rotatória (16,6%) e zumbido (13,3%). Nas queixas associadas e hábitos, a prevalência foi do abuso de cafeína (20,0%), álcool e alergia (10,0%), em cada. Houve prevalência de limiares auditivos normais (90,0%). A medida de imitância acústica mostrou-se sem alteração. O exame vestibular esteve alterado em 60,0%. Houve predomínio das síndromes vestibulares periféricas deficitárias. CONCLUSÕES: Verificou-se um maior número de alteração do sistema vestibular (60,0%) em relação ao sistema auditivo (10,0%). Houve predomínio da normalidade no exame auditivo. Houve prevalência de alteração no sistema vestibular periférico e da síndrome vestibular periférica deficitária.

Processo de adaptação de próteses auditivas em usuários atendidos em uma instituição pública federal - parte I: resultados e implicações com o uso da amplificação

A adaptação de próteses auditivas abrange vários aspectos a serem analisados, desde o fornecimento da mesma até os resultados da protetização, o que possibilitaria uma melhoria do planejamento das ações em Atenção à Saúde Auditiva. OBJETIVOS: Verificar as dificuldades relacionadas ao uso e manuseio de pilhas e moldes auriculares e as características da amplificação, e discutir os aspectos envolvidos no processo de adaptação das próteses auditivas, orientação e acompanhamento deste grupo de estudo. MATERIAL E MÉTODO: 31 indivíduos, de 12 a 77 anos de idade, portadores de perdas auditivas bilaterais simétricas, neurossensoriais ou mistas, de graus moderado a moderadamente severo e usuários de próteses digitais ou analógicas programáveis. Foi realizada uma entrevista com tópicos relacionados ao uso e manuseio das pilhas, moldes e próteses auditivas, assim como sobre as características da amplificação. RESULTADOS: Dos indivíduos entrevistados 12,90%, 58,06% e 67,74% apresentaram dificuldades relacionadas às pilhas, aos moldes ou cápsulas auriculares, e às características da amplificação, respectivamente. CONCLUSÃO: A maioria dos usuários apresentou algum tipo de queixa relacionado ao funcionamento das próteses auditivas e os resultados da intervenção estão diretamente relacionados às expectativas, necessidades de comunicação e preocupações financeiras do usuário e ao suporte fornecido por sua rede municipal de saúde.

A administraçao publica para a democracia: alguns aspectos estratégicos - I

O autor registra, neste trabalho, a ser publicado em três partes, reflexões sobre as bases que sustentam a modernização administrativa no setor público espanhol. Destaca o papel que cabe aos recursos humanos desempenhar neste processo, considerando um contexto definido: a Administração Pública deve atender às necessidades dos cidadãos, em um regime de liberdades, com recursos escassos e limitados, onde as novas tecnologias de informação têm relevância substantiva.

Modelos quantitativos de apoio às decisões - I

Modelagem Quantitativa para Apoio às Decisões teve um grande desenvolvimento a partir da década de 60. Chegou-se a um processo normativo, dentro da tradição da Pesquisa Operacional. Dentro desta mesma tradição, os resultados foram cuidadosamente analisados por meio de análises de sensibilidade que criaram as condições para as suas implementações práticas. A evolução natural e necessária para Decisões com multicritérios tem sido substancialmente mais controvertida. O processo "teoricamente correto" se revelou de difícil implementação prática. Surgiram "desafiantes" norte-americanos e europeus que, abandonando a estrutura normativa, procuram servir de Apoio às Decisões. O presente artigo apresenta e comenta este panorama com seus contrastes.

Políticas de governo e planejamento estratégico como problemas de escolha pública - I

Este artigo aborda as políticas públicas como decisões condicionadas pela estrutura constitucional-institucional e influenciada pela ação de grupos de pressão rent-seeking. Inicialmente recupera a tradição de escolha racional aplicada à política para discutir os limites da escolha coletiva, pública e democrática de acordo com o resultado clássico do Teorema de Arrow. Posteriormente, o artigo aborda as teorias econômicas da escolha pública e da política, dando especial destaque à escola de Public Choice de Buchanan e Tullock. Por fim, conclui que as políticas públicas devem ser restritas por um conjunto de regras e instituições que criem incentivos contratuais destinados a minimizar a ação dos agentes caçadores-de-renda.