Diterpenos de Copaifera reticulata Ducke com atividade larvicida contra Aedes aegypti (L.) (Diptera, Culicidae)

The objective of this study was to evaluate the larvicidal activity of diterpenoids obtained from the oil-resin of Copaifera reticulata against Aedes aegypti larvae, the principal vector of dengue and urban yellow fever. Four diterpenes were obtained from oil-resin extraction with organic solvents and subsequent chromatographic and spectroscopic procedures allowed to isolation and identification of these compounds as 3-b-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-oic acid (1), alepterolic acid (2), 3-b-hidroxylabdan-8(17)-en-15-oic acid (3), and ent-agatic acid (4). Each compound was previously dissolved in dimethylsulphoxide, and distilled water was added to obtain the desired concentrations. Twenty larvae of third instars were placed into plastic beckers, containing the solution test (25 mL), in a five repetitions scheme, and their mortality, indicated by torpor and darkening of the cephalic capsule, was recorded after 48h. Probit analyses were used to determine lethal concentrations (LC50 and LC90) and their respective 95% confidence intervals. This study showed that only diterpenoids 1 and 2 exhibited larvicidal properties with LC50 of 0.8 ppm and 87.3 ppm, respectively, revealing the former as the most toxic compound against third instars of Ae. aegypti. Therefore, this compound seems to be an interesting source for new metabolite to be exploited.

Larvicidal activity of oil-resin fractions from the Brazilian medicinal plant Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae-Caesalpinoideae) against Aedes aegypti (Diptera, Culicidae)

Oil-resin fractions from Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae-Caesalpinoideae) were evaluated for larvicidal activity on third larval instars of Aedes aegypti, in searching for alternative control methods for this mosquito. The bioactive fractions were chemically monitored by thin-layer chromatography, ¹H and 13C nuclear magnetic resonance and mass spectrometry. Bioassays were performed using five repetitions, at a temperature of 28 ± 1°C, relative humidity of 80 ± 5% and light and dark cycles of 12h. Mortality was indicated by darkening of the cephalic capsule after 24h of exposure of the larvae to the solutions. The most active fractions were CRM1-4 (sesquiterpenes) and CRM5-7 (labdane diterpenes), which showed LC50 values of 0.2 and 0.8ppm, respectively.

Alterações ultraestruturais em larvas de Aedes aegypti submetidas ao diterpeno labdano, isolado de Copaifera reticulata (Leguminosae), e à uma fração rica em taninos de Magonia pubescens (Sapindaceae)

INTRODUÇÃO: Dengue é um importante problema de saúde pública, em vários países, e tem como principal vetor o Aedes aegypti, mosquito mais adaptado às áreas urbanizadas. Apresenta-se, pela primeira vez, as alterações ultraestruturais em larvas de 3º estádio, desse mosquito, causadas pelos larvicidas naturais, um diterpeno labdano, extraído de Copaifera reticulata, e uma fração rica em taninos catéquicos, extraída de Magonia pubescens, evidenciando o mecanismo de ação dessas substâncias. MÉTODOS: Os experimentos foram realizados com larvas de 3º estádio em solução de 0,9ppm, do diterpeno (3-β-acetoxylabdan-8(17)-13-dien-15-óico) e de 3,7ppm, da fração majoritária de tanino catéquico de massa molecular 864Da. Obtiveram-se as substâncias através de fracionamentos cromatográficos sucessivos, identificadas por ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas. As larvas que atingiram estado letárgico foram coletadas e dissecadas e seus tubos digestórios fixados, desidratados, emblocados e polimerizados. Cortes ultrafinos foram feitos e contrastados com acetato de uranila 3% e citrato de chumbo, posteriormente, levados ao microscópio eletrônico. RESULTADOS: As principais alterações ultraestruturais provocadas pelos diterpeno e tanino sobre larvas de Aedes aegypti foram vacuolização citoplasmática, desorganização e degeneração celular, mudança estrutural dos microvilos e deslocamento das células da lâmina basal. CONCLUSÕES: O diterpeno e a fração rica em taninos catéquicos provocaram a morte das larvas de Aedes aegypti através da destruição celular no intestino médio.

FOOD CONCENTRATION AND TEMPERATURE EFFECTS ON LIFE CYCLE CHARACTERISTICS OF TROPICAL CLADOCERA (Daphnia gessneri Herbst, Diaphanosoma sarsi Richard, Moina reticulata (Daday)): I. DEVELOPMENT TIME

The effects of food concentration and temperature on embryonic and postem-bryonic duration of three tropical species, Daphnia gessneri(1.5mm), Diaphanosoma sarsi(1.2mm) and Moina reticulata(0.8mm), were investigated as part of life cycle studies which included growth, body size and reproduction. These are the very first experimental studies undertaken on these species. The long-term growth experiments were performed under controlled laboratory conditions at all combinations of temperature (22"C, 27"C and 32"C) and constant food concentration (0.03, 0.05, 0.10, 0.25, 0.50 and 1.00 mgC/L) of the unicellular green alga Scenedesmus acutus.Animals were examined twice daily throughout their life cycle from the neonate to third adult instar. In all three species, temperature exerted the most powerful influence on embryonic duration but there was also a smaller food effect. In D. gessneri,postembry-onic durations remained more or less the same at food levels 0.25 mgC/L but were influenced by temperature. At food concentrations of 0.1 mgC/L or lower, postembryonic durations became increasingly prolonged, particularly at high temperatures. This threshold concentration is affected by temperature: in D. gessneri,it was 0.1 mgC/L at 22oC and 27oC but higher at 32oC (between 0.25 and 0.50 mgC/L). At the same temperature of 27oC, the food threshold level varied between species: it was higher (0.25 mgC/L) for D. sarsiand lower (0.05 mgC/L) for M. reticulatacompared with D. gessneri(0.1 mgC/L). In both embryonic and postembryonic durations there is a body size effect as the absolute durations were longest in the largest species and shortest in the smallest species In all three species, prolongation of postembryonic duration at combinations of high temperature and lowered food levels was accompanied by increased number of juvenile instars.

Ophionereis reticulata (Echinodermata, Ophiuroidea)

This study compared the arm regeneration frequencies in two different populations of Ophionereis reticulata (Say, 1825) in São Sebastião, Southeast Brazil and observed arm regeneration between age classes (juvenile and adults) and sexes (male and female). From the 1,170 individuals sampled, 1,089 (92.2%) showed signs of arm regeneration. The relative frequencies of regenerating arms in the two areas were not different (Baleeiro Isthmus: 91.3% and Grande Beach: 99.5%). Both areas also presented similar values for the number of arms regenerating/individual and in the frequency of regenerating individuals. The major part of the regenerating scars was concentrated in the distal portion of the arm. Sub-lethal predation is most likely the cause to the high rates of arm regeneration in O. reticulata. There was no significant differences in the regeneration rates between females (3.57 ± 1.36 arms regenerating/individual) and males (3.47 ± 1.42).

Intraspecific ecomorphological variations in Poecilia reticulata (Actinopterygii, Cyprinodontiformes): comparing populations of distinct environments

ABSTRACT Morphological variations, according to the principles of ecomorphology, can be related to different aspects of the organism way of life, such as occupation of habitats and feeding behavior. The present study sought to examine the intraspecific variation in two populations of Poecilia reticulata Peters, 1859, that occur in two types of environments, a lotic (Maringá Stream) and a lentic (Jaboti Lake). Due to a marked sexual dimorphism, males and females were analyzed separately. Thus, the proposed hypotheses were that the populations that occur in distinct environments present morphological differences. The morphological variables were obtained using morphometric measurements and the ecomorphological indexes. The data were summarized in a Principal Component Analysis (PCA). A Multivariate Analysis of Variance (Manova) was made to verify significant differences in morphology between the populations. Males and females showed similar ecomorphological patterns according to the environment they occur. In general the population from Maringá Stream had fins with major areas, and the Jaboti Lake population eyes located more dorsally. Additionally, others morphological differences such as wider mouth of the males from Maringá Stream, wider heads on Jaboti Lake females and more protractible mouths on males from Jaboti Lake suggest a set of environmental variables that can possibly influence the ecomorphological patterns of the populations, as the water current, availability of food resources and predation. In summary, the initial hypotheses could be confirmed, evidencing the occurrence of distinct ecomorphotypes in the same species according to the environment type.

Efficacy of Citrus reticulata and Mirazid in treatment of Schistosoma mansoni

This work has been carried out to investigate the effect of Schistosoma mansoni infection on mice livers after treatment with the ethanolic extract of Citrus reticulata root or the oleo-resin extract from Myrrh of Commiphora molmol tree (Mirazid), as a new antishistosomal drug. Marker enzymes for different cell organelles were measured; succinate dehydrogenase (SDH); lactate dehydrogenase (LDH) and its isoenzymes; glucose-6-phosphatase (G-6-Pase); acid phosphatase (AP) and 5'- nucleotidase. Liver function enzymes; aspartate aminotransferase (AST); alanine aminotransferase (ALT), and alkaline phosphatase (ALP) were also estimated. Parasitological studies through ova count and worm burden will also be taken into consideration. The results showed a marked reduction in SDH, LDH, AST, and ALT enzyme activities and a significant increase in G-6-Pase, AP, 5'- nucleotidase, and ALP after S. mansoni infection. A noticeable alteration in LDH subunits were also noticed. Treatment with C. reticulata or Mirazid improved all the previous enzyme activities with a noticeable reduction in ova count and worm burden.

CARACTERÍSTICAS DO FRUTO DA VARIEDADE SPAN AMERICANA (Citrus reticulata Blanco): UMA TANGERINA DO TIPO 'PONCÃ' DE MATURAÇÃO PRECOCE

A tangerina-'Poncã' é bastante apreciada pelo consumidor brasileiro. No Estado de São Paulo, a maturação de seus frutos ocorre nos meses de abril a agosto. Com o mercado ávido por frutas de mesa e agravado pelo problema da ocorrência da clorose variegada dos citros (CVC), que afeta principalmente as variedades de laranjas-doces, tem havido um aumento considerável no plantio dessa variedade. Dessa forma, um excesso de produção, num mesmo período, faz com que os preços caiam, desestimulando assim os produtores. O Centro de Citricultura Sylvio Moreira (CCSM) vem buscando outras alternativas no sentido de obter, durante o ano todo, esse tipo de tangerina. Assim sendo, foram realizados estudos de caracterização de frutos, em diversas épocas do ano, com o acompanhamento dos níveis de maturação, envolvendo acessos do Banco de Germoplasma do CCSM. Dentre as variedades estudadas, quanto à precocidade e qualidade dos frutos, destacou-se a Span Americana. A tangerina-'Poncã' tem seu período de maturação para as condições edafoclimáticas do CCSM, nos meses de maio e junho. Já a variedade Span Americana, que apresenta frutos similares à 'Poncã' tradicional, tem maturação bastante precoce, podendo ser iniciada a sua colheita no mês de março.

Indução do florescimento e crescimento de tangerineira 'Poncã' (Citrus reticulata Blanco) em função da irrigação e da aplicação de paclobutrazol

O experimento foi conduzido na Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP/Câmpus de Botucatu (SP), com o objetivo de avaliar o florescimento fora de época e o crescimento vegetativo da tangerineira 'Poncã'. Nesse contexto, adotou-se o delineamento estatístico em blocos casualizados, em parcelas subdivididas, com duas repetições, na instalação do ensaio. Os dois tratamentos de -0,03 e -0,05 MPa, como potenciais mínimos da água no solo, constituíram as parcelas e as quatro doses de paclobutrazol: 0; 4; 8 e 12 g por planta, nas subparcelas. No segundo ano de pesquisa, foram mantidas as mesmas parcelas e foram aplicadas nas plantas das subparcelas as doses de 0; 500; 1000 e 2000 mg l-1 de paclobutrazol, via foliar. Cada parcela foi constituída de 16 plantas, sendo oito destinadas à avaliação. Utilizou-se, em ambas as combinações, de um tratamento sem irrigação (-0,07 MPa) e sem aplicação de paclobutrazol, como testemunha. Foram avaliados parâmetros, como a altura, diâmetro médio, volume e área de projeção da copa e condutância estomática para caracterizar a resposta das plantas aos tratamentos empregados. Concluiu-se que a aplicação do paclobutrazol e a variação do potencial da água no solo não proporcionaram a indução do florescimento fora de época das tangerineiras, e que os níveis de paclobutrazol influenciaram no desenvolvimento das plantas.

Comportamento fisiológico de sementes de tangerina (Citrus reticulata Blanco) submetidas à desidratação

O objetivo desta pesquisa foi o de estudar os efeitos imediatos da desidratação sobre o comportamento fisiológico das sementes de tangerina (Citrus reticulata Blanco var. Cleópatra). Assim, sementes extraídas manualmente de frutos maduros foram lavadas em água corrente e drenadas à sombra. Em seguida, uma porção representativa de sementes foi removida a fim de constituir o tratamento com o maior grau de umidade (49%) a ser estudado. As sementes remanescentes foram submetidas à desidratação em equipamento com circulação forçada de ar (28±2°C), visando à obtenção dos tratamentos (39; 32; 24; 13; 10 e 7% H2O) referentes aos demais graus de umidade desejados. Foram realizadas avaliações do grau de umidade, da germinação, da taxa e da velocidade de emergência das plântulas, dos comprimentos da raiz, do hipocótilo e da plântula. Concluiu-se que o potencial fisiológico das sementes, considerando o intervalo de 49 a 7% para o grau de umidade, é favorecido pela desidratação até 39% H2O.

Crescimento de frutos da tangerineira 'Poncã' (Citrus reticulata Blanco)

Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desenvolvimento de frutos da tangerineira Poncã, desde o pegamento até a colheita dos frutos, em Viçosa - Minas Gerais. O desenvolvimento do fruto seguiu uma curva do tipo sigmóide simples, sendo a fase I compreendida da antese até o 85º dia após o pleno florescimento, com um período de transição na fase II, que foi até o 101º dia após o pleno florescimento. A fase II teve início logo após a fase de transição, prolongando-se até o 251º dia após o pleno florescimento. A fase III, de amadurecimento do fruto, iniciou-se no 251º dia após o pleno florescimento e prolongou-se até a colheita dos frutos, a qual foi realizada no 276º dia após o pleno florescimento.

Florescimento de tangerineiras 'Ponkan' (Citrus reticulata Blanco) submetidas a diferentes períodos de temperatura invernal

O trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito do acúmulo de temperaturas abaixo de 20° C, sobre a floração de tangerineiras 'Ponkan' (Citrus reticulata Blanco). Foi adotado o delineamento inteiramente casualizado, com seis tratamentos e quatro repetições. Os tratamentos foram formados por sete datas de transferência das mudas, mantidas a céu aberto, para a câmara de crescimento. Foram utilizadas plantas de tangerineira 'Ponkan' enxertadas sobre limoeiro 'Cravo', cultivadas em recipientes, que inicialmente foram mantidas a céu aberto. O experimento foi iniciado no dia 16-05-2007 (início do período de redução da temperatura na região) e conduzido até 17-08-2005. Quinzenalmente, quatro plantas que estavam a céu aberto foram transferidas para câmara de crescimento, com temperaturas de 27°C/20°C (dia/noite), umidade relativa de 75%, fotoperíodo de 12 horas e radiação fotossinteticamente ativa de 170 µmol m-2 s-1. Foram avaliados a data do florescimento e o número total de flores de todas as plantas. Quanto maior foi o tempo de permanência das plantas a céu aberto em temperaturas inferiores a 20° C, maiores foram a antecipação do florescimento e o número de flores produzidas.

Constituintes químicos do caule de Senna reticulata Willd. (Leguminoseae): Chemical constituents isolated from the wood of Senna reticulata Willd.

The phytochemical investigation of the wood extracts of Senna reticulata (Leguminoseae) yielded six anthraquinones: chrysophanol, physcion, aloe-emodin, 1,3,8-trihydroxyanthraquinone, 3-methoxy-1,6,8-trihydroxyanthraquinone, emodin and the chrysophanol-10,10' bianthrone. The triterpenes a and b-amirin, the steroids b-sitosterol and stigmasterol as well as the flavonoid kaempferol were also identified. The structures were established by spectral analysis, including two-dimensional NMR techniques. It is the first report of 1,3,8-trihydroxyanthraquinone and 3-methoxy-1,6,8-trihydroxyanthraquinone in higher plants.

TRIAGEM METABÓLICA POR PKS E NRPS EM ACTINOBACTÉRIAS ENDOFÍTICAS DE Citrus reticulata

Polyketides and non-ribosomal peptides are natural products widely found in bacteria, fungi and plants. The biological activities associated with these metabolites have attracted special attention in biopharmaceutical studies. Polyketide synthases act similarly to fatty acids synthetases and the whole multi-enzymatic set coordinating precursor and extending unit selection and reduction levels during chain growth. Acting in a similarly orchestrated model, non-ribosomal peptide synthetases biosynthesize NRPs. PKSs-I and NRPSs enzymatic modules and domains are collinearly organized with the parent gene sequence. This arrangement allows the use of degenerated PCR primers to amplify targeted regions in the genes corresponding to specific enzymatic domains such as ketosynthases and acyltransferases in PKSs and adenilation domains in NRPSs. Careful analysis of these short regions allows the classifying of a set of organisms according to their potential to biosynthesize PKs and NRPs. In this work, the biosynthetic potential of a set of 13 endophytic actinobacteria from Citrus reticulata for producing PKs and NRP metabolites was evaluated. The biosynthetic profile was compared to antimicrobial activity. Based on the inhibition promoted, 4 strains were considered for cluster analysis. A PKS/NRPS phylogeny was generated in order to classify some of the representative sequences throughout comparison with homologous genes. Using this approach, a molecular fingerprint was generated to help guide future studies on the most promising strains.

Biometria de frutos e sementes e germinação de Plathymenia reticulata benth. e Plathymenia foliolosa benth. (Fabaceae - mimosoideae)

Este estudo objetivou comparar características biométricas de frutos e sementes e o efeito de diferentes escarificações, temperaturas e luz na germinação de Plathymenia reticulata Benth. e Plathymenia foliolosa Benth. Foram registrados comprimento, largura, espessura, massa da matéria seca e fresca de frutos (n = 100) e sementes (n = 100) de cada espécie. Os diferentes tratamentos foram escarificações mecânica e química e temperaturas (fotoperíodo/nictoperíodo) de 20, 30 e 35/15 °C (12/12 e 0/24) e 25 e 35 °C (12/12). Os frutos de P. foliolosa mostraram-se mais largos, espessos e pesados e as sementes, mais compridas e espessas do que as de P. reticulata. As sementes de ambas as espécies não apresentaram fotoblastismo. A escarificação ácida não aumentou significativamente a germinabilidade das sementes em relação ao grupo-controle, enquanto a escarificação mecânica incrementou significativamente a germinabilidade apenas de P. foliolosa. As germinabilidades a 25 °C das sementes de P. reticulata intactas, escarificadas com ácido e lixa foram, respectivamente, de 55%, 60% e 89%. Para as sementes de P. foliolosa esses valores foram 48%, 37,5% e 83%, respectivamente.Esses resultados apontam limitações na germinação de P. foliolosa impostas pelo tegumento, entretanto o efeito deste restringindo a germinação das sementes intactas decresceu com a elevação da temperatura.