A high-copy T7 Escherichia coli expression vector for the production of recombinant proteins with a minimal N-terminal His-tagged fusion peptide

We report here the construction of a vector derived from pET3-His and pRSET plasmids for the expression and purification of recombinant proteins in Escherichia coli based on T7 phage RNA polymerase. The resulting pAE plasmid combined the advantages of both vectors: small size (pRSET), expression of a short 6XHis tag at N-terminus (pET3-His) and a high copy number of plasmid (pRSET). The small size of the vector (2.8 kb) and the high copy number/cell (200-250 copies) facilitate the subcloning and sequencing procedures when compared to the pET system (pET3-His, 4.6 kb and 40-50 copies) and also result in high level expression of recombinant proteins (20 mg purified protein/liter of culture). In addition, the vector pAE enables the expression of a fusion protein with a minimal amino-terminal hexa-histidine affinity tag (a tag of 9 amino acids using XhoI restriction enzyme for the 5'cloning site) as in the case of pET3-His plasmid and in contrast to proteins expressed by pRSET plasmids (a tag of 36 amino acids using BamHI restriction enzyme for the 5'cloning site). Thus, although proteins expressed by pRSET plasmids also have a hexa-histidine tag, the fusion peptide is much longer and may represent a problem for some recombinant proteins.

Determination du niveau d'anticorps antitetaniques en donneurs de sang au moyen du test ELISA-TÉTANOS (São Paulo, SP, Bresil)

Le test ELISA-TÉTANOS (Biosys, France) a été utilisé pour le titrage des anti-corps tétaniques (sensibilité = 0,0025 UI/ml) en sérums humains de donneurs de sang, 566 hommes et 108 femmes, âges de 18 à 58 ans, moyenne de 29 ans, provenant de São Paulo, SP, Brésil. L'OMS, acceptant seulement la séroneutralisation sur souris (NT), la méthode de référence, pour les études sur la protection contre le tétanos, préconise le titre de 0,01 UI/ml comme minimum protecteur. BOURLEAUD & HUET ont proposé la limite de 0,06 UI/ml quand s'emploie le test ELISA, en attendant à une certaine discordance inévitable entre les méthodes. Parmi les 674 sérums étudiés, 178 (26,41%) n'ont pas présenté d'anticorps (< 0,0025 UI/ml); 413 (61,28%) ont présenté des résultats égaux ou supérieurs à 0,01 UI/ml et en 232 (34,42%) les titres ont été égaux ou supérieurs à 0,06 UI/ml. Le pourcentage d'individus protégés a été inversement proportionnel à 1'âge: environ 50% dans le groupe le plus jeune (hommes de 18 à 35 ans et femmes de 18 à 23 ans) contre environ 10% dans le groupe de plus de 42 ans ont présenté des titres sûrement protecteurs (> 0,06 UI/ml).

Progression of Salmonella Enteritidis phage type 4 strains in São Paulo State, Brazil

A total of 574 S. Enteritidis strains (383 from human sources and 191 from non-human sources) isolated between 1975-95, in São Paulo State, Brazil, were phagetyped. Among the strains isolated during the period of 1975-92, 80.9% of them belonged to phage type 8 (PT-8), but in 1993 strains of PT-4 accounted for 65.2% of all the S. Enteritidis isolates. In the following years, PT-4 strains accounted for 99.7% and 98.4% of phagetyped S. Enteritidis strains. The results obtained suggested that the current epidemic of S. Enteritidis in São Paulo State is clearly associated with the progression of PT-4 strains.

Phage types of Salmonella Enteritidis isolated from clinical and food samples, and from broiler carcasses in Southern Brazil

272 isolates of Salmonella Enteritidis (111 isolated from frozen broiler chicken carcasses, 126 from human food and other biological materials involved in food poisoning outbreaks and 35 from different poultry materials) were selected for phage typing. From these, 111 were phage typed, 57.65% being classified as phage type 4, 32.43% as phage type 4a, 3.60% as phage type 6a and 0.90% as phage type 7, whereas 5.40% samples were not phage typeable. The predominance of phage type 4 is in agreement with the results published worldwide, and reinforces the need for studies related to the epidemiological meaning of these findings.

Theranostic applications of phage display to control leishmaniasis: selection of biomarkers for serodiagnostics, vaccination, and immunotherapy

AbstractPhage display is a high-throughput subtractive proteomic technology used for the generation and screening of large peptide and antibody libraries. It is based on the selection of phage-fused surface-exposed peptides that recognize specific ligands and demonstrate desired functionality for diagnostic and therapeutic purposes. Phage display has provided unmatched tools for controlling viral, bacterial, fungal, and parasitic infections, and allowed identification of new therapeutic targets to treat cancer, metabolic diseases, and other chronic conditions. This review presents recent advancements in serodiagnostics and prevention of leishmaniasis -an important tropical parasitic disease- achieved using phage display for the identification of novel antigens with improved sensitivity and specificity. Our focus is on theranostics of visceral leishmaniasis with the aim to develop biomarker candidates exhibiting both diagnostic and therapeutic potential to fight this important, yet neglected, tropical disease.

Contribution à l'étude des infusoires parasites du coecum de l'hydrocheire (Hydrocheirus capybara L.): I. La famille des cycloposthiidae

Os autores referem inicialmente que os ciliados da capivara (Hydrochoerus capibara L.) são conhecidos pelos estudos de MARQUES DA CUNHA & MUNIZ bem como de FLÁVIO DA FONSECA. Fazem o estudo em material recentemente colhido em viagem ao Brasil e agradecem às pessoas que facilitaram êstes estudos. Dizem das técnicas usadas na coleta e estudo do material. Trabalhando o material colecionado em uma capivara sacrificada em Ribeirão Prêto estudam os representantes da família Cycloposthidae. Dividem as espécies do gênero Cycloposthium em três secções: a primeira com C. hydrochoeri Cunha, 1915; a segunda com C. minutum Cunha & Muniz, 1927; C. lenticularis sp. n. e C. elongatum sp. n.; a terceira com C. caudatum Cunha & Muniz, 1927 e C. compressum Cunha 1915 incluidas em novo subgênero: Diplolophus. Estudam pormenorisadamente C. hydrochoeri fazendo numerosas observações da morfologia em exemplares de preparação total, bem como em cortes. Na segunda secção dão a diagnose das 3 espécies nela incluídas, das quais duas novas para a ciência: C. lenticularis, com corpo quase tão largo como longo, 40 a 60 μ de comprimento por 40 a 45 μ de largura e processos caudais muito curtos ora acuminados ora arredondados. C. elongatum, de tamanho relativamente grande, medindo de comprimetno 160 a 200 μ por 60 a 90 μ de largura. Para a terceira secção estabelecem um novo subgênero - Diplolophus - com D.(D.) compressum e D.(D.) caudatum. O subgênero é caracterisado, principalmente, por serem os cirros adorais distribuídos em duas espirais: uma interna e outra mais externa. Finalisando o trabalho fazem comentários sôbre os componentes da família Cycloposthidae.

Trématodes parasites de poissons marins du littoral de Rio de Janeiro, Brésil

Les Trématodes de 35 espèces de poissons marins, d'importance commerciale, collectés dans le littoral de Rio de Janeiro, ont été étudiés. Dix-sept espèces de Trématodes appartenant à 13 familles ont été recensées. Quatre de ces espèces sont référés pour la première fois au Brésil: Diphtherostomum americanum, Diplomonorchis floridensis, Pancreadium otagoensis et Neomegasolena chaetodipteri, neuf dans de nouveaux hôtes: D. americanum, Diplangus paxillus, Hurleytrema shorti, Lecithochirium microstomum, Morascus filiformis, Neolebouria multilobatus, P. otagoensis, Pleorchis mollis et Opechona bacillaris, une a été recontrée dans un hôte mentionné pour la première fois au Brésil: Vitellibaculum spinosum et cinq autres espècies sont déjà répertoriées: Acanthocollaritrema umbilicatum, Bucephalopsis calliocotyle, Bucephalus varicus, Parahemiurus merus et Tergestia pauca. Tergestia selenei est consideré synonyme de T. pauca. Les principales mesures sont données pour chaque espèce.

Phlébotomes du Nicaragua: I. Description de la femelle de Lutzomyia zeledoni Young et Murillo, 1984 (Diptera, Psychodidae), et implication épidémiologique de la présence de Lutzomyia longipalpis sur la façade Pacifique

Les auteurs décrivent la femelle de Lutzomyia zeledoni Young et Murillo, 1984 du Groupe Vespertilionis Theodor, 1965. Cette espèce a été capturée en milieu péridomestique en compagnie de Lutzomyia longpalpis Lutz et Neiva, 1912 répertorié pour la première fois du Nicaragua. Il est mis l'accent sur l'importance épidémiologique de cette dernière espèce récoltée en abondance dans plusieurs stations de la façade pacifique.

Phlébotomes de Bolivie: VII. Répartition des deux morphotypes du phlébotome lutzomyia longipalpis (Lutz et Neiva, 1912) (Diptera: Psychodidae) dans le piémont andin de Bolivie

Deux morphotypes de Lytzomyia longipalpis (Lutz et Neiva, 1912) ont été décrits au Brésil, l'un avec une seule paire de taches tergales, l'autre avec deux paires de taches. Ce caractère est propre aux mâles. En Bolivie, la forme à une tache existe seule dans le foyer de leishmaniose viscérale des Yungas (alt. 1000-2000 m) dans l'envirionnement péridomicilliaire; c'est le vecteur confirmé de cette maladie. Le second morphotype à deux taches a été récemment découvert sous le porche de grottes dans le région de Cochabamba (alt. 2700 m); il était absent dans et autour des habitations de cette région, où la leishmaniose vicérale est inconnue. Les deux morphotypes de Lu. longipalpis ont, en Bolivie, une distribution allopatrique, et leurs écologies respectives sont très différentes.