Utilização, em politransfundidos, da pesquisa de anticorpos igm anti-trypanosoma cruzi e anti-toxoplasma gondii para detectar infecções pós-transfusionais recentes

Consideram os Autores que a pesquisa de anticorpos IgM no soro é tática capaz de revelar recentes infecções pós-transfusionais. Por isso, decidiram usar esse tipo de mensuração relativamente a grupo constituído por 101 politrans-fundidos, tendo abordado especificamente as aquisições de doença de Chagas e toxoplasmose. Através da investigação que realizaram, só em duas oportunidades encontraram anticorpos IgM anti-Trypanosoma cruzi ou anti-Toxoplasma gondii e, portanto, não evidenciaram expressivo panorama tradutor de processos há pouco tempo contraídos, como ainda, por meio de anticorpos IgG não identificaram números expressivos de pessoas com essas protozooses. No entanto, detectaram a expressiva taxa de 4,9% de casos de doença de Chagas muito provavelmente decorrentes da hemoterapia. A despeito da relevância não acentuada dos resultados que obtiveram, julgaram os Autores ser válido estimular a efetivação de outros estudos congêneres e correlatos, aptos a contribuir para aqui-latamento de riscos pertinentes à prática hemoterápica.

Pesquisa de anticorpos IgM anti-Toxoplasma gondii por meio de técnica imunoenzimática reversa

Um teste imunoenzimático reverso foi padronizado utilizando-se como fase sólida, microplacas de polivinil sensibilizadas com anticorpos anti-IgM.7 Estas foram incubadas seqüencialmente com alíquotas de soros de pacientes com suspeita de toxoplasmose aguda, antígeno solúvel de Toxoplasma gondii, conjugado peroxidase F (ab')2 anti-toxoplasma e substrato enzimático. A atividade enzimática foi determinada por leitura espectrofotométrica, considerando-se como títulos dos soros a máxima diluição fornecendo valores de absorbância maiores que os obtidos com a menor diluição do soro padrão não-reativo. Em 69 amostras de soros de pacientes com toxoplasmose aguda, a média geométrica dos títulos no teste ELISA-Reverso IgM foi superior à de todos os outros testes para anticorpos IgM, não se observando resultados negativos falsos devidos a altos títulos de IgG específica. Não foi encontrada, também, reatividade cruzada em nenhuma das 104 amostras de soros de pacientes com outras patologias, inclusive em amostras contendo fator reumatóide IgM.

Efeito da talidomida sobre os níveis séricos de imunoglobulinas IgM e IgA, fator reumatóide e isohemaglutinina anti-A e anti-B em pacientes com lepra lepromatosa: um estudo duplo-cego

Um estudo duplo-cego foi conduzido em pacientes portadores de lepra lepromatosa estável, para avaliar a resposta à administração de talidomida 100 mg por dia, por 18 dias, dos níveis séricos de IgM e IgA e dos títulos de fator reumatóide e isohemaglutininas anti-A e anti-B. Nenhum efeito significativo foi detectado ao fim deste período.

Detecção de anticorpos IgM nas infecções primárias e secundárias pelo citomegalovírus em pacientes submetidos a transplante renal

Foram acompanhados 27 pacientes submetidos a transplante renal para avaliação do comportamento dos anticorpos IgM e IgG CMV-específicos. Dos 27 casos estudados, 17 (63,0%) tinham anticorpos IgG, detectados pela reação de fixação de complemento (RFC), antes de serem submetidos ao transplante, e 10 (37,0%) eram soro negativos. A pesquisa de anticorpos IgM (técnica de imunofluorescência indireta) foi negativa em todas as amostras pré transplante. Num período de acompanhamento que variou de 28 a 425 dias (média de 115 dias) após o transplante, observou-se que 20 dos 27 (74,1%) apresentaram evidências sorológicas de infecçáo pelo CMV, ocorrendo a maioria dos casos (14/20, 70%) em pacientes que já tinham anticorpos para o CMV antes do transplante. A pesquisa de anticorpos IgM CMV-específicos foi positiva em 12 dos 14 pacientes com evidências sorológicas de reinfecção ou reativação da infecção pelo CMV, e em 100% (6/6) dos pacientes com infecção primária. Dentre os 10 pacientes acompanhados por mais de 4 meses, somente 1 (10%) negativou o IgM neste período.

Lectins for the detection of IgM antibodies to T. gondii in the diagnosis of acute toxoplasmosis by immunofluorescence test

Lectins were labeled with fluorescein and tried as conjugates in the immunofluorescence (IP) test for the detection of IgM antibodies to T. gondii, in the diagnosis of acute toxoplasmosis. This approach was an attempt to find alternative reagents for anti-human IgM fluorescent conjugates (AHIgMFC), which contain quite frequently anaibcdies to toxoplasma, as contaminants, due to natural T. gondii infections among animals used for imunization. Lentil (Lens culinaris) lectin fluorescence conjugates (LcFC) provided most satisfactory results. The evaluation of LcFC carried out in a total of 179 sera from patients with acute and chronic toxoplasmosis, with non-related infections or healthy subjects, gave high values of relative efficiency, co-positivity and co-negativity indices, respectively 0.989, 0.969 and 1.000, in reference to the conventional AHIgMFC. Moreover, three batches of LcFC successively prepared gave reproducible test results. The advantage of LcFC as an alternative reagent for the serodiagnosis of acute toxoplasmosis is supported by practical aspects of its preparation.

Teste imunoenzimático (ELISA) para detecção de anticorpos circulantes da classe IgM na leptospirose humana

Foi avaliado o teste imunoenzimático (ELISA), para detecção de anticorpos da classe IgM na leptospirose humana. Nas amostras de soros analisadas, o teste ELISA demonstrou ser mais sensível, específico e precoce, quando comparado ao teste de soroaglutinação microscópica. A análise dos resultados obtidos nesta avaliação demonstra que o teste ELISA permite detectar níveis baixos de anticorpos circulantes, e também anticorpos não aglutinantes. não detectáveis através do teste de soroaglutinação microscópica.

Toxoplasmosis serology: an efficient hemagglutination procedure to detect IgG and IgM antibodies

In search of an efficient but simple, low cost procedure for the serodiagnosis of Toxoplasmosis, especially suited for routine laboratories facing technical and budget limitations as in less developed countries, the diagnostic capability of Hematoxo® , an hemagglutination test for toxoplasmosis, was evaluated in relation to a battery of tests including IgG- and IgM-immunofluorescence tests, hemagglutination and an IgM-capture enzymatic assay. Detecting a little as 5 I.U. of IgG antitoxoplasma antibodies, Hematoxo® showed a straight agreement as to reactivity and non-reactivity for the 443 non-reactive and the 387 reactive serum samples, included in this study. In 23 cases presenting a serological pattern of acute toxoplasmosis and showing IgM antibodies, Hematoxo® could detect IgM antibodies in 18, indicated by negativation or a significant decrease in titers as a result of treating samples with 2-mercapto-ethanol. However, a neat increase in sensitivity for IgM specific antibodies could be achieved by previously removing IgG from the sample, as demonstrated in a series of acute toxoplasmosis sera. A simple procedure was developed for this purpose, by reconstituting a lyophilized suspension of Protein A - rich Staphylococcus with the lowest serum dilution to be tested. Of low cost and easy to perform, Hematoxo® affords not only a practical qualitative procedure for screening reactors and non-reactors, as in prenatal services, but also quantitative assays that permit to titrate antibodies as well as to identify IgM antibodies.

Toxoplasmose aguda: avaliação da técnica de imunoensaio em camada delgada para a detecção de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii

Um método de reação antígeno-anticorpo denominado IMUNOENSAIO EM CAMADA DELGADA (ICD) foi padronizado e avaliado para o imunodiagnóstico da toxoplasmose aguda, através da detecção de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii (ICD-IgM). Um total de 300 amostras de soros, tendo ou não o perfil sorológico da toxoplasmose aguda, foi estudado pelo ICD-IgM e os resultados analisados quanto aos aspectos qualitativos e quantitativos em relação aos testes convencionais de imunofluorecência indireta para a detecção de IgM, (IFI-IgM) e de hemaglutinação pré e após tratamento com 2-mercaptoetanol (HA-2ME). Foram calculados os coeficientes de correlação entre os resultados fornecidos pelo ICD-IgM e as técnicas convencionais, de acordo com as concentrações do antígeno, assim como, foi verificada a influência dessas concentrações antigênicas nos índices relativos de sensibilidade e de especificidade. O estudo estatístico mostrou reprodutibilidades significativas dos resultados inter e intra testes, assim como no reaproveitamento do antígeno por 10 vezes. Os resultados de ICD-IgM mostraram que as concentrações antigênicas ideais foram de 70 a 100µg/ml, para o ensaio em questão, para se obter máximas sensibilidade e especificidade. Portanto, ICD-IgM, por fornecer resultados tão sensíveis e específicos quanto aqueles dos testes convencionais referidos, poderá ser empregado para fins diagnósticos.

Chagas' disease: IgA, IgM and IgG antibodies to T. cruzi amastigote, trypomastigote and epimastigote antigens in acute and in different chronic forms of the disease

In an attempt to find a better T. cruzi antigen and possible immunological markers for the diagnosis of different clinical forms of Chagas' disease, amastigote and trypomastigote antigens obtained from immunosuppressed mice infected with T. cruzi (Y strain) were assessed in comparison with conventional epimastigote antigens. A total of 506 serum samples from patients with acute and with chronic (indeterminate, cardiac and digestive) forms, from nonchagasic infections, and from healthy individuals were assayed in immunofluorescence (IF) tests, to search for IgG, IgM and IgA antibodies. Amastigote proved to be the most convenient antigen for our purposes, providing higher relative efficiency indexes of 0.946, 0.871 and 0.914 for IgG, IgM and IgA IF tests, respectively. Anti-amastigote antibodies presented higher geometric mean titers (GMT) than anti-trypomastigote and anti-epimastigote. Anti-amastigote IgG antibodies were found in all forms of Chagas' disease, and predominantly IgA antibodies, in chronic digestive and in acute forms, as well as IgM antibodies, in latter forms. Thus, tests with amastigote antigen could be helpful for screening chagasic infections in blood banks. Practical and economical aspects in obtaining amastigotes as here described speak in favour of its use in developing countries, since those from other sources require more complex system of substruction, specialized personnel or equipment.

Imunodiagnóstico da leptospirose humana através do teste ELISA-IgM, empregando-se diferentes preparações antigênicas a partir de sorotipos prevalentes de Leptospira interrogans

Realizou-se estudo comparativo de diferentes sorotipos de Leptospira interrogans utilizados na preparação de antígenos empregados no teste ELISA, para a detecção de anticorpos da classe IgM, em amostras de soro na fase precoce e tardia da leptospirose humana. Foram utilizados dez sorotipos, escolhidos entre os que apresentaram maior reatividade na soroaglutinação microscópica (SAM), na cidade de São Paulo. Os cinco sorotipos que apresentaram melhores resultados individualmente no teste ELISA-IgM (canicola, hebdomadis, icterohaemorrhagiae, cynopteri e brasiliensis), foram também estudados em mistura antigênica. Os antígenos não tratados apresentaram maior reatividade do que os antígenos tratados com Triton X - 100 (4%) à temperatura de 50ºC, durante 4 horas. O teste ELISA-IgM empregando os sorotipos não tratados, isoladamente, e em mistura antigênica, mostrou-se altamente sensível, podendo ser empregado como teste de triagem para o diagnóstico precoce da leptospirose humana. Outra aplicação do teste é permitir a detecção do início de situações epidêmicas ou de surtos, possibilitando acionar medidas de vigilância epidemiológica.

UltramicroELISA para la detección de anticuerpos IgM anti M. leprae

La disponibilidad del sistema Ultramicroanalítico (SUMA) y de un antígeno especie-específico del M. leprae obtenido mediante síntesis química, permitió la normalización y validación de un ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgM específicos a esta micobacteria. El análisis de 433 sueros de banco de sangre y 265 sueros usados para validar el método y clasificados en un grupo control de donantes de banco de sangre (100), un grupo de pacientes tuberculosos (50), un grupo de enfermos de lepra (65) y un grupo de contactos de estos enfermos (50), mostró la especificidad del ensayo para evidenciar la infección con el M. leprae. Los resultados obtenidos del estudio adicional de 140 muestras de suero de contactos de enfermos estuvieron estrechamente correlacionados (r = 0,98) con los resultados obtenidos por la técnica de microELISA convencional. La utilización del SUMA no solo permite un notable ahorro de reactivos si no además facilita la lectura, cálculo, validación y almacenamiento automático de los resultados.

Malaria serology: performance of six Plasmodium falciparum antigen extracts and of three ways of determining serum titers in IgG and IgM-ELISA

The study evaluated six Plasmodium falciparum antigen extracts to be used in the IgG and IgM enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), for malaria diagnosis and epidemiological studies. Results obtained with eighteen positive and nine negative control sera indicated that there were statistically significant differences among these antigen extracts (Multifactor ANOVA, p< 0.0001). Urea, sodium deoxycholate and Zwittergent antigen extracts performed better than did the three others, their features being very similar for the detection of IgG antibodies. Urea, alkaline and sodium deoxycholate antigen extracts proved to be better than the others for the detection of IgM antibodies. A straight line relationship was found between the optical densities (or their respective log 10) and the log 10 of antibody dilutions, with a very constant slope. Thus serum titers could be determined by direct titration and by two different equations, needing only one serum dilution. For IgM antibody detections, log 10 expression gave results that better correlated with direct titration (95% Bonferroni). For IgG antibody detections, the titer differences were not significant. The reproducibility of antibody titers and antigen batches was also evaluated, giving satisfactory results.

UltramicroELISA para la deteccion de anticuerpos IgM al Mycobacterium leprae utilizando muestras de sangre seca

En este trabajo se establecen las condiciones optimas para la detección de anticuerpos IgM al glicolipido fenólico-I (GF-I) en muestras de sangre en papel de filtro utilizando el UltramicroELISA HANSEN y la tecnologia SUMA. Se estudiaron 300 donantes de sangre y 58 pacientes leprosos. Para estas dos poblaciones se compararon los resultados de muestras de sangre seca colectadas en papel de filtro SS-2992 con los de suero, y se obtuvo una correlación de 0.919 para donantes de sangre, 0.969 para pacientes y 0.954 para el total de las dos poblaciones. Se obtuvo una coincidencia de 98% en pacientes y 96% en donantes. En la población de pacientes la sensibilidad fue de 93% y la especificidad de 100% para las muestras de sangre seca evaluadas por el UMELISA HANSEN, con respecto a las muestras de suero analizadas por esta misma tecnica.

Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva. Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl. In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution. In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Dot-ELISA for the detection of IgM and IgG antibodies to Schistosoma mansoni worm and egg antigens, associated with egg excretion by patients

Human schistosomiasis, caused by Schistosoma mansoni, is highly prevalent in Brazil and usually diagnosed by time consuming stool analysis. Serological tests are of limited use in this disease, mainly for epidemiological studies, showing no discrimination between previous contact with the parasite and active infections. In the present study, we standardized and compared a Dot-ELISA for IgM and IgG antibodies against S. mansoni antigens from eggs and worms with a routine IgG and IgM immunofluorescence assay using similar antigens, in the study of sera from 27 patients who had quantified egg stool excretion. The positivity obtained for IgG Dot-ELISA was 96.3% and 88.9% for IgM Dot-ELISA with worm antigen and 92.6% and 90.9% with egg antigen. The IFI presented similar positivities using worm antigen, 92.6% (IgG) and 96.3% (IgM),and lower results with egg antigen, 77.8% (IgG and IgM). The patients studied were divided into two groups according to their egg excretion, with greater positivity of serological tests in higher egg excreters. When comparing the quantitative egg excretion and the serological titers of the patients, we detected a correlation only with IgM Dot-ELISA, with r=0.552 (p=0.0127). These data show that Dot-ELISA can be used for the detection of specific antibodies against S. mansoni in sera from suspected patients or in epidemiological studies and, with further purification of egg antigen and larger samples, IgM Dot-ELISA could be a possible tool for rough estimates of parasite burden in epidemiological studies.