Lipocalina associada à gelatinase de neutrófilos (NGAL) e calprotectina no tecido laminar de equinos após obstrução jejunal, tratados ou não com hidrocortisona

A laminite é uma doença podal grave que acomete os equídeos, sendo responsável por intenso sofrimento. Neste estudo foram pesquisadas a presença de calprotectina por meio da imunoistoquímica, e de lipocalina associada à gelatinase de neutrófilos (NGAL), por zimografia, no tecido laminar do casco de equinos após obstrução intestinal. Os animais foram divididos em quatro grupos: Grupo controle (Gc), contendo sete animais normais, sem procedimento cirúrgico; Grupo Instrumentado (Gi), contendo cinco animais, os quais passaram por todo o procedimento cirúrgico sem sofrerem obstrução intestinal; Grupo Não Tratado (Gnt), contendo quatro equinos submetidos a obstrução intestinal do jejuno por distensão de balão intraluminal, sem tratamento; e Grupo Tratado (Gt), contendo quatro equinos submetidos a obstrução intestinal, e tratados preventivamente com hidrocortisona. Houve imunomarcação de calprotectina em todos os grupos experimentais, com aumento nos equinos do grupo distendido em relação ao Gc. Com relação ao NGAL, houve aumento também do Gnt e do Gi em relação ao Gc. O Gt não diferiu dos demais. Conclui-se que a distensão do intestino delgado pode promover acúmulos de leucócitos nos cascos de equinos e que o NGAL é um método viável para se detectar infiltração neutrofílica em equinos. Novos estudos deverão ser realizados para se verificar possível benefício anti-inflamatório da hidrocortisona no casco de equinos com obstrução intestinal.

Papel da lipocalina associada à gelatinase neutrofílica (NGAL) urinária na nefrotoxicidade da cisplatina em pacientes com câncer de cabeça e pescoço

Introdução: A injúria renal aguda (IRA) em pacientes que recebem a cisplatina é comum, portanto, a avaliação da função renal em pacientes utilizando drogas nefrotóxicas é fundamental. Objetivo: Avaliar a incidência da IRA e o papel da lipocalina associada à gelatinase neutrofílica (NGAL) na avaliação da função renal em pacientes com câncer de cabeça e pescoço (CCP) que receberam a cisplatina. Métodos: Foram avaliados prospectivamente 50 pacientes com CCP, tratados com três sessões de cisplatina. Foram coletados sangue e urina 24 horas antes da cisplatina, 24 horas após a infusão, 48 horas após cada aplicação e 35 dias após o término do tratamento (NGAL urinária, proteína C reativa, creatinina e taxa de filtração glomerular, desidrogenase lática e magnésio plasmáticos). Resultados: A IRA foi observada em 78% dos pacientes. Houve aumento na creatinina, ureia e queda na TFG após cada ciclo de cisplatina, e aumento da NGAL urinária. Foi observada associação positiva entre os níveis de NGAL e a creatinina e PCR. Evidenciou-se um aumento dos níveis de creatinina, NGAL, PCR e diminuição da TFG nos pacientes com IRA em relação aos pacientes sem IRA. Conclusão: Observamos IRA em 78% dos pacientes avaliados com CCP tratados com a cisplatina e correlação da NGAL com a creatinina e a TFG em demonstrar lesão renal. Os níveis de NGAL podem estar elevados em relação aos níveis basais, mesmo antes da utilização da cisplatina.

Secretion of five extracellular enzymes by strains of chromoblastomycosis agents

The gelatinase, urease, lipase, phospholipase and DNase activities of 11 chromoblastomycosis agents constituted by strains of Fonsecaea pedrosoi, F. compacta, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, Cladophialophora bantiana and Exophiala jeanselmei were analyzed and compared. All strains presented urease, gelatinase and lipase activity. Phospholipase activity was detected only on five of six strains of F. pedrosoi. DNase activity was not detected on the strains studied. Our results indicate that only phospholipase production, induced by egg yolk substrate, was useful for the differentiation of the taxonomically related species studied, based on their enzymatic profile.

Neutralization of bitis parviocula (Ethiopian mountain adder) venom by the south african institute of medical research (SAIMR) antivenom

BACKGROUND: The Ethiopian mountain adder (Bitis parviocula) is a viperid known only from a few locations in southwestern Ethiopia. METHODS: a total of 30 µg of B. arietans and B. parviocula venoms were run on a 10-20% Tricine gel. To assay lethality dose fifty (LD50), five groups of eight mice for each venom were used. Hemorrhagic activity for crude venom was tested. Fibrinogenolytic activity of crude venom was measured using (2.5 mg/mL) of fibrinogen solution and (0.03 mg/mL) of crude venom. Gelatinase activity of the venom was tested on a Kodak X-OMAT TM film. Crude venoms of B. parviocula and B. arietans were tested for their abilities to affect clotting time, clotting rate and platelet function on whole human blood. RESULTS: The (SAIMR) antivenom was confirmed in this study to neutralize the lethal activity of venom from Bitis parviocula. The ED50s of SAIMR antivenom on B. parviocula and B. arietans neutralized half of 18.2 and 66.7 mg of venom, respectively. The hemorrhagic activities (MHDs) of B. parviocula and B. arietans were 0.88 and 1.7 µg, respectively. Bitis arietans and B. parviocula venoms degradated α and β chains at different times. The γ chains remained unaffected. Bitis parviocula venom did not exhibit gelatinase activity, while B. arietans had a MGD of 6.9 µg. At 3 mg/mL, the crude venoms of B. parviocula and B. arietans did not significantly affect clotting time or clotting rate. CONCLUSIONS: The SAIMR antivenom is very effective in neutralizing the venom of B. parviocula and should be considered in treating envenomations by these snakes.

Experimental ophitoxemia produced by the opisthoglyphous lora snake (Philodryas olfersii) venom

Several colubrid snakes produce venomous oral secretions. In this work, the venom collected from Venezuelan opisthoglyphous (rear-fanged) Philodryas olfersii snake was studied. Different proteins were present in its venom and they were characterized by 20% SDS-PAGE protein electrophoresis. The secretion exhibited proteolytic (gelatinase) activity, which was partially purified on a chromatography ionic exchange mono Q2 column. Additionally, the haemorrhagic activity of Philodryas olfersii venom on chicken embryos, mouse skin and peritoneum was demonstrated. Neurotoxic symptoms were demonstrated in mice inoculated with Philodryas olfersii venom. In conclusion, Philodryas olfersii venom showed proteolytic, haemorrhagic, and neurotoxic activities, thus increasing the interest in the high toxic action of Philodryas venom.

Phenotypic and molecular characterization of antimicrobial resistance and virulence factors in Pseudomonas aeruginosa clinical isolates from Recife, State of Pernambuco, Brazil

INTRODUCTION: The emergence of carbapenem resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa has been outstanding due to the wide spectrum of antimicrobial degradation of these bacteria, reducing of therapeutic options. METHODS: Sixty-one clinical strains of P. aeruginosa isolated from five public hospitals in Recife, Pernambuco, Brazil, were examined between 2006 and 2010, aiming of evaluating the profiles of virulence, resistance to antimicrobials, presence of metallo-β-lactamase (MBL) genes, and clonal relationship among isolates. RESULTS: A high percentage of virulence factors (34.4% mucoid colonies; 70.5% pyocyanin; 93.4% gelatinase positives; and 72.1% hemolysin positive) and a high percentage of antimicrobial resistance rates (4.9% pan-resistant and 54.1% multi-drug resistant isolates) were observed. Among the 29 isolates resistant to imipenem and/or ceftazidime, 44.8% (13/29) were MBL producers by phenotypic evaluation, and of these, 46.2% (6/13) were positive for the blaSPM-1 gene. The blaIMP and blaVIM genes were not detected. The molecular typing revealed 21 molecular profiles of which seven were detected in distinct hospitals and periods. Among the six positive blaSPM-1 isolates, three presented the same clonal profile and were from the same hospital, whereas the other three presented different clonal profiles. CONCLUSIONS: These results revealed that P. aeruginosa is able to accumulate different resistance and virulence factors, making the treatment of infections difficult. The identification of blaSPM-1 genes and the dissemination of clones in different hospitals, indicate the need for stricter application of infection control measures in hospitals in Recife, Brazil, aiming at reducing costs and damages caused by P. aeruginosa infections.

Presence of virulence factors in Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium susceptible and resistant to vancomycin

Despite the increasing importance of Enterococcus as opportunistic pathogens, their virulence factors are still poorly understood. This study determines the frequency of virulence factors in clinical and commensal Enterococcus isolates from inpatients in Porto Alegre, Brazil. Fifty Enterococcus isolates were analysed and the presence of the gelE, asa1 and esp genes was determined. Gelatinase activity and biofilm formation were also tested. The clonal relationships among the isolates were evaluated using pulsed-field gel electrophoresis. The asa1, gelE and esp genes were identified in 38%, 60% and 76% of all isolates, respectively. The first two genes were more prevalent in Enterococcus faecalis than in Enterococcus faecium, as was biofilm formation, which was associated with gelE and asa1 genes, but not with the esp gene. The presence of gelE and the activity of gelatinase were not fully concordant. No relationship was observed among any virulence factors and specific subclones of E. faecalis or E. faecium resistant to vancomycin. In conclusion, E. faecalis and E. faecium isolates showed significantly different patterns of virulence determinants. Neither the source of isolation nor the clonal relationship or vancomycin resistance influenced their distribution.

Cylindrocladium spathiphylli de espatifilo (Spathiphyllum wallisii Rengel): detecção de enzimas extracelulares em isolados normais e alterados por temperatura

O fungo Cylindrocladium spathiphylli causa podridão no colo e nas raízes de espatifilo, induzindo amarelecimento e murcha nas folhas da parte aérea. Há poucos estudos com o fungo quanto às enzimas extracelulares. Assim, delineou-se ensaio inteiramente casualizado in vitro, com três tratamentos (dois isolados normais: LFEEI016 - EPAGRI/SC e MMBF 01/01 - IB/SP; mais testemunha) e seis repetições, visando a detecção de enzimas. A amilase (AM), lipase (LP), carboximetilcelulase (CMC) e lacase (LC) foram mensuradas pelo cálculo da área da coroa circular, local de atividade das enzimas. A catalase (CT) e gelatinase (GL) foram mensuradas por símbolos, depois transformados em notas (1 a 4, de ausência à intensa produção). O isolado MMBF 01/01 produziu as maiores áreas e com mais intensidade as enzimas. Das enzimas, a maior área foi a da LC e depois a LP. LFEEI016 e MMBF 01/01 não apresentaram área para AM e CMC e exibiram intensidade fraca e igual para CT. A intensidade de GT foi moderada no MMBF 01/01 (nota média 3,0) e ausente para o LFEEI016 (nota média 1,0). Após a produção das enzimas extracelulares, os isolados foram alterados vegetativamente por temperatura. Instalou-se ensaio inteiramente ao acaso, em fatorial contendo disco de micélio dos isolados do fungo versus três temperaturas [23ºC (T1); 33ºC (T2) e de 33ºC para 23ºC (T3)] versus quatro períodos (3; 6; 9 e 12 dias), com oito repetições, em placa de Petri com BDA mantida em BOD. O diâmetro das colônias foi medido diariamente (mm) em dois sentidos. As alterações de temperatura vistas foram: inócuo, fungistático (FS) e fungicida (FC). Aplicou-se estatística nas temperaturas T1 e T3 dos isolados para checar efeito FS e escolher aqueles com maior e menor efeito. O isolado LFEEIO16 mostrou efeito FS com três dias às temperaturas 33ºC e de 33ºC para 23ºC. Nos demais períodos, o isolado sofreu efeito FC. O MMBF 01/01 mostrou efeito FS em todos os períodos. Ambos isolados sofreram, estatisticamente, efeito FS. O MMBF 01/01 mostrou maior efeito FS aos nove dias, nas temperaturas referidas e menor com três dias. Após a constatação de alteração na taxa de crescimento micelial dos isolados, procurou-se verificar, novamente, a produção de enzimas extracelulares. Os isolados alterados e utilizados foram o MMBF 01/01 com três e nove dias e o LFEEIO16 com três dias. A produção e a avaliação das enzimas foram realizadas da mesma maneira para os isolados normais. O isolado MMBF 01/01 - três dias produziu as maiores áreas e com mais intensidade as enzimas. Das enzimas, a maior área foi a da LC. Após LC, a área da LP foi maior que a da CMC nos isolados. Não se detectou área de AM nos isolados. A intensidade de GL foi maior que a da CT nos isolados MMBF 01/01 com três e nove dias. Para LFEEI016 - três dias, a intensidade média de CT foi nota 2,0 e ausência de GL (nota média 1,3). Sugere-se investigar a severidade da doença na planta entre os isolados e em condições naturais investigar a evolução da LC em comparação as demais enzimas na patogênese do fungo na cultura.

Produção in vitro de enzimas extracelulares por fungos e sua relação com os sintomas descritos em planta hospedeira

RESUMOOs fungos fitopatogênicos habitantes de solo causam perdas econômicas em muitas culturas e são difíceis de serem controlados. Esses fungos podem ser agrupados pelos sintomas comuns que causam nas plantas, bem como pelas enzimas extracelulares que podem produzir. O objetivo do trabalho foi verificar a produção in vitro de enzimas extracelulares por fungos de solo e tentar relacionar essas enzimas com os sintomas que cada fungo causa em planta hospedeira. O ensaio foi delineado em esquema inteiramente casualizado, com dois fatores, sete fungos (Cylindrocladium spathiphylli, Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Ceratocystis fimbriata, Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium oxysporum f. sp. dianthi e Verticillium dahliae) mais testemunha e seis enzimas (amilase, carboximetilcelulase, lipase, lacase, catalase e gelatinase) com 10 repetições. Catalase e gelatinase foram mensuradas por escala de notas, enquanto que as demais pelo cálculo da área da coroa circular. O ensaio foi repetido e a análise foi realizada com os dados de dois ensaios. Os fungos que causam podridão na raiz ou no colo da planta apresentaram maior produção de lacase, enquanto os que causam obstrução, fendas ou até a destruição do sistema vascular demonstraram a prevalência da lipase.

Increased expression of keratinase and other peptidases by Candida parapsilosis mutants

Keratinases are enzymes of great importance involved in pathogenic processes of some fungi. They also have a widespread ecological role since they are responsible for the degradation and recycling of keratin. On the one hand, studying them furthers our knowledge of pathogenicity mechanisms, which has important implications for human health, and on the other hand, understanding their ecological role in keratin recycling has biotechnological potential. Here, a wild-type keratinolytic Candida parapsilosis strain isolated from a poultry farm was treated with ethyl methanesulfonate in order to generate mutants with increased keratinase activity. Mutants were then cultured on media with keratin extracted from chicken feathers as the sole source of nitrogen and carbon. Approximately 500 mutants were screened and compared with the described keratinolytic wild type. Three strains, H36, I7 and J5, showed enhanced keratinase activity. The wild-type strain produced 80 U/mL of keratinolytic activity, strain H36 produced 110 U/mL, strain I7, 130 U/mL, and strain J5, 140 U/mL. A 70% increase in enzyme activity was recorded for strain J5. Enzymatic activity was evaluated by zymograms with proteic substrates. A peptidase migrating at 100 kDa was detected with keratin, bovine serum albumin and casein. In addition, a peptidase with a molecular mass of 50 kDa was observed with casein in the wild-type strain and in mutants H36 and J5. Gelatinase activity was detected at 60 kDa. A single band of 35 kDa was found in wild-type C. parapsilosis and in mutants with hemoglobin substrate.

Aterações químicas e microbiológicas em PACU (piaractus mesopotamicus) armazenado sob refrigeração a 5°c

A pesquisa foi conduzida com o objetivo de analisar a vida útil e o processo de deterioração do pacu (Piaractus mesopotanicus) armazenado sob refrigeração em temperatura inadequada (5°C). Amostras do pescado, imediatamente após a captura, foram armazenadas a 5°C e analisadas nos intervalos de 0-7-14 e 21 dias, com relação a características sensoriais e de natureza química (bases nitrogenadas voláteis - BNV, nitrogênio não protéico - NNP, aminoácidos livres totais, histidina livre e histamina) e microbiológicos (contagem padrão, produtores de histamina em ágar Niven, contagem de microrganismos gelatinase e H2S positivos, nas temperaturas de 35°C, 20° e 5°C). Os resultados obtidos confirmaram que, a exemplo de outros peixes fluviais de regiões tropicais, o pacu revelou-se bastante resistente ao armazenamento, somente evidenciando uma alteração marcante após 14 dias de estocagem. Assim mesmo, a rejeição do pescado foi baseada principalmente em características sensoriais (odor, aspecto, textura) uma vez que com relação aos índices químicos (BNV) e mesmo microbiológicos, não se caracterizava uma situação definitiva de deterioração e rejeição. Observou-se, também, que o processo de deterioração pareceu concentrar-se principalmente no muco superficial, sendo que as características químicas do tecido muscular não evidenciaram alterações marcantes, mesmo após 21 dias de armazenamento. A presença de histamina não foi positivada nas amostras e os níveis de histidina livre, embora relativamente elevadas, não sugerem maiores riscos desta espécie de peixe como eventual veículo de intoxicação por histamina. No entanto, bactérias his+ foram isoladas das amostras iniciais, entre elas cepas de Plesiomonas shigelloides e Vibrio fluvialis. A microbiota contaminante natural foi reduzida, predominando microrganismos mesófilos/psicrotrófilos, com baixas contagens iniciais a 5°C. Ao longo do armazenamento a 5°C esta microbiota mostrou uma lenta multiplicação, somente sendo alcançadas populações compatíveis com o processo de deterioração (> log7,0 UFC/cm²) após 14 dias de estocagem.