Características das células parasitadas pelo Trypanosoma cruzi na parede da veia central das supra-renais de Chagásicos crônicos

Foram analisados os aspectos das células musculares parasitadas pelo Trypanosoma cruzi, na veia da supra-renal de chagásicos crônicos, através de exame ao microscópio óptico de lâminas coradas pela hematoxilina-eosina (HE), PAS, Feulgen e peroxidase-antiperoxidase (PAP) para antigenos do T. cruzi. Além das modificações nucleares descritas anteriormente, os leiomiócitos parasitados exibem alterações citoplasmáticas que podem ser vistas mesmo em células que albergam poucos parasitas. As formas amastigotas geralmente estão envoltas por halo claro e o citoplasma restante adquire aspecto granuloso ou reticular, basófilopelo HE, sendo sempre PAS e Feulgen negativos. Estes dados sugerem que o material basófilo no citoplasma deve ser RNA ribossômico. A periferia dos ninhos que mostram uma "membrana" com reação do PAP para antigenos do T. cruzi fortemente positiva, poderia ser devida a reação cruzada de material celular rechaçado para a periferia ou a difusão de antigenos do T. cruzi e sua adsorção à periferia celular. O material citoplasmático PAP positivo poderia resultar de artefato, de reação imunocitoquimica cruzada, de antigenos tripanossomóticos difundidos ou de antigenos tripanossoma-simile resultantes de interações entre o leiomiócito e o parasita.

New histochemical and morphological findings in the female genital tract of Boophilus microplus (Acari, Ixodidae): an attempt toward the elucidation of fertilization in ticks

At present not only is the site of fertilization in ticks still unknown but it is also unclear as to how this mystery can be solved. Signs of fertilization can be observed throughout the female genital tract and these can be clues for the elucidation of the unsolved questions relating to ticks fertilization. In Boophilus microplus (Canestrini, 1887) the most important signs are the following: the final eversion of the acrosomal canal in females ready for oviposition; the presence of small tubules, resembling the subplasmalemal process of the spermatozoon between the oviduct cells; budding nuclei throughout the female genital tract; and the two Feulgen and DAPI positive areas in the oocyte at vitelogenesis. These morphological characteristics suggest that fertilization takes place in the internal cylinder which extends from the uterus to the ovary itself.

Cytochemical study of Rhodnius neglectus and Rhodnius prolixus salivary gland cells (Hemiptera, Triatominae)

Triatomines are hematophagous bugs of medical interest in South and Central America, where they may act as invertebrate hosts of the hemoflagellate protozoa Trypanosoma cruzi (the causative of Chagas’ disease) and Trypanosoma rangeli (Tejera, 1920). Triatomines of Rhodnius genus have salivary gland formed by two close and independent units: the principal and the accessory. This gland secretes saliva that abounds in substances that facilitate and permit feeding. Despite this importance, there are few reports on its cytochemistry. In purpose of amplifying this understanding, in this work it was investigated the nuclear structures (chromatin and nucleolar corpuscles) of salivary gland cells of Rhodnius neglectus (Lent, 1954) and Rhodnius prolixus (Stål, 1859). The salivary glands were removed from adult insects, fixed and submitted to different cytochemical methods: lacto-acetic orcein, silver ion impregnation, Feulgen reaction, Toluidine Blue, Variant method of critical electrolyte concentration and C-banding. The results evidenced predominance of binucleated cells, with bulky and polyploid nucleus, decondensed chromatin and a large nucleolar area. In addition, cytoplasmic metachromasy and a clear association between nucleolar and heterochromatic corpuscles were observed. Such characteristics were associated with intense synthesis activity to produce saliva. Besides, the heterochromatic corpuscles observed with C Banding permitted the differentiation of sexes and species.

Toddia sp., "corpúsculo paranuclear" no sangue de Leptodactylus e Bufo do Brasil: desenvolvimento e citoquímica

O gênero Toddia, criado por França 1911, para um organismo encontrado em eritrõcitos de um anfíbio anuro, tem estrutura particular e o problema de sua natureza (protozoário ou vírus) é discutido. Nosso resultados mostram reações Feulgen e Verde Metila positivas, principalmente no início da infecção. Com o decorrer da infecção as partículas são, geralmente, maiores que aquelas observadas alguns dias após as inoculações, mas as reações citoquímicas citadas anteriormente são, em geral, negativas ou fracamente positivas. Os mesmos resultados foram obtidos quando empregamos Laranja de acridina para caracterização do DNA e esta técnica foi negativa para o RNA. Estudando o desenvolvimento deste organismo e seus efeitos infecciosos foram confirmados por inoculações experimentais. As alterações no sangue do hospedeiro foram observadas e notamos que o núclo dos eritrócitos é severamente alterado durante o desenvolvimento da infecção, que é geralmente, muito intensa, terminando com a morte do hospedeiro. As inoculações experimentais demonstraram a especificidade da infecção, e diante dos conhecimentos a respeito dos organismos deste gênero, discutimos o problema da criação de espécies.

Consideracões sobre a natureza, desenvolvimento e transmissão de Cytamoeba bacterifera Labbé, 1894 de Leptodactylus ocellatus

Com o objetivo de fornecer dados para o esclarecimento do controvertido problema da natureza de Cytamoeba bacterifera freqüentemente encontrada nos eritrócitos de Leptodactylus ocellatus, realizamos alguns testes citoquímicos. Demonstramos a presença do ácido ribonucleico e polissacarídeos não digeríveis pela ptialina em sua estrutura. Com o método de Feulgen, teste de referência para a caracterização do ácido desoxirribonucleico, obtivemos principlemnte resultados negativos; porém, um parasito com fraca e difusa positividade e algumas reações duvidosas também foram encontrados. Ao emrpegarmos o Verde Metila-Pironina, mesmo após o tratamento pela ribonuclease, e o Azul de Toluidina, também depois da ação desta enzima, não conseguimos confimar a presença de ADN. Como os elementos constituintes de C. bacterifera são minúsculos e, às vezes, não evidenciáveis, é possível que seu teor de ADN, porventura existente, seja muito pequeno e, conseqüentemente, de difícil demonstração por métodos cujos resultados são observados sob microscopia ótica, além de poder ficar facilmente encoberto por outras substâncias. Não estamos propensos a admitir uma provável natureza virótica para Cytamoeba baseados, principalmente, em alguns de seus aspectos estruturais (figs. 8, 15, 17 e 18) e na ausência de alteração no núcleo das células parasitadas. Apesar de não termos comprovado a presença de ADN, achamos possível que C. bacterifera seja um aglomerado intracitoplasmático de organismos modificados, cujas dimensões situam-se nas proximidades do limite de resolução do microscópio ótico, relacionados com as bactérias, assim como são, por exemplo, os Clamídios e as Riquétsias. Observamos o desenvolvimento de Cytamoeba em rã mantida em cativeiro por três meses e semanalmente examinada; constatamos decréscimo paulatino da parasitemia inicial e também que os seus tipos estruturais e medidas não estavam relacionadas com a etapa da infecção. Não conseguimos transmitir, por inoculação intra-peritoneal, Cytamoeba de L. ocellatus para Bufo crucifer.

Citogenética de Piper hispidinervum e Piper aduncum

O objetivo deste trabalho foi detectar diferenças entre duas espécies de pimenta-longa por meio de análise de cariótipos. Foram analisados cinco acessos de Piper hispidinervum (Piperaceae) C. DC. e Piper aduncum L. (Piperaceae) pertencentes à coleção de germoplasma da Embrapa Acre, utilizando-se o método de esmagamento e coloração de Feulgen. As duas espécies apresentaram número cromossômico 2n = 24 e cromossomos pequenos e metacêntricos com comprimento médio de 1,38 µm em P. hispidinervum e 1,32 µm em P. aduncum. Pelos descritores citogenéticos obtidos não há diferença entre as duas espécies.

Effects of the 2,4-D herbicide on gills epithelia and liver of the fish Poecilia vivipara

The 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, usually named 2,4-D is one of the most widely used herbicides in the world. Acute toxicity of 2,4-D herbicide was investigated through its effects on guppies (Poecilia vivipara Bloch et Schneider 1801). Fish were exposed to the herbicide at concentrations of 10, 20 and 40µl per liter of water for 24 hours to determine its effects on gills and liver epithelia. The estimated LC50 was 34.64µl of 2,4-D per liter of water. Histochemical analyses and Feulgen's reaction were conducted to detect glycoconjugates and DNA, respectively, in gills and liver epithelia. Histochemistry revealed qualitative variations of glycoconjugates present on mucous cells and granules. The four types of mucous cells contained neutral granules, acids, or both. Increasing amounts of syalomucins were observed from the control group to the group exposed to the highest concentration of 2,4-D, suggesting increased mucous viscosity and the formation of plaques that could inhibit gas exchange and osmoregulation. Lamellar fusion observed in the group exposed to 40µl of 2,4-D suggests a defense mechanism. Hepatocytes showed vacuolization in the 10 and 20µl/L groups. The 40 µl/L group showed normal hepatocytes as well as changed ones, many Ito cells, micronuclei, and nuclear swelling. These effects may be associated with toxicity or adaptative processes to cellular stress. The data from this study indicates the importance of assessing similar risks to aquatic species and suggests that Poecilia vivipara is an adequate biological model for analysis of environmental contamination.

Karyotype studies in Brazilian species of Lobelia L., subgenus Tupa (Campanulaceae)

Karyotypes of 14 populations including eight species of the genus Lobelia were studied using root tip mitotic metaphases. All populations were tetraploid with 2n = 28 chromosomes. The chromosome base number x = 7 was confirmed for the genus. Karyotype analysis showed that chromosome size varied from 1.05 µm to 2.02 µm with predominance of M and SM chromosome types. The karyotypes were similar among themselves with small intra- and interspecific variations on the size of haploid sets, symmetry indexes and centromere position of some chromosome pairs. These results showed that karyotypes of Brazilian lobelias of the subgenus Tupa were probably due to polyploidy associated with chromosomal rearrangements probably in small chromatin segments.

Concanavalin A-reactive nuclear matrix glycoprotein

The binding capacity of concanavalin A (Con A) to condensed euchromatin and heterochromatin was investigated in chicken erythrocyte nuclei (CEN), mouse liver cells, Zea mays mays meristematic cells and Drosophila melanogaster polytene chromosomes after 4 N HCl hydrolysis to determine whether binding was preferentially occurring in bands and heterochromatin. Dry mass (DM) variation was investigated in CEN by interference microscopy. Feulgen and Con A reactions were employed for all materials to correlate the loci of the two reactions. Quantifications and topological verifications were carried out by video image analysis (high performance cytometry). It was observed that 4 N HCl hydrolysis caused an important DM loss in CEN leaving a level corresponding to the average DNA DM content. In this material, Con A binding was restricted to the nuclear envelope, which reinforces the idea of the absence of a nuclear matrix in these cells. The other cell types exhibited a correspondence of Feulgen-positive and Con A-reactive areas. The Con A reaction was highly positive in the condensed chromatin areas and heterochromatin. This fact led us to speculate that Con A-positive proteins may play a role in the chromatin condensation mechanism, endowing this structure with physico-chemical stability towards acid hydrolysis and contributing to its rheological properties.