A morphologically distinct Phlebotomus argentipes population from active cutaneous leishmaniasis foci in central Sri Lanka

Although the reported aetiological agent of cutaneous leishmaniasis (CL) in Sri Lanka is Leishmania donovani, the sandfly vector remains unknown. Ninety-five sandflies, 60 females and 35 males, collected in six localities in the district of Matale, central Sri Lanka, close to current active transmission foci of CL were examined for taxonomically relevant characteristics. Eleven diagnostic morphological characters for female sandflies were compared with measurements described for Indian and Sri Lankan sandflies, including the now recognised Phlebotomus argentipes sensu lato species complex. The mean morphometric measurements of collected female sandflies differed significantly from published values for P. argentipes morphospecies B, now re-identified as Phlebotomus annandalei from Delft Island and northern Sri Lanka, from recently re-identified P. argentipes s.s. sibling species and from Phlebotomus glaucus. Furthermore, analysis of underlying variation in the morphometric data through principal component analysis also illustrated differences between the population described herein and previously recognised members of the P. argentipes species complex. Collectively, these results suggest that a morphologically distinct population, perhaps most closely related to P. glaucus of the P. argentipess. I. species complex, exists in areas of active CL transmission. Thus, research is required to determine the ability of this population of flies to transmit cutaneous leishmaniasis.

Molecular characterisation and disease severity of leptospirosis in Sri Lanka

Leptospirosis is a re-emerging zoonotic disease all over the world, important in tropical and subtropical areas. A majority of leptospirosis infected patients present as subclinical or mild disease while 5-10% may develop severe infection requiring hospitalisation and critical care. It is possible that several factors, such as the infecting serovar, level of leptospiraemia, host genetic factors and host immune response, may be important in predisposition towards severe disease. Different Leptospirastrains circulate in different geographical regions contributing to variable disease severity. Therefore, it is important to investigate the circulating strains at geographical locations during each outbreak for epidemiological studies and to support the clinical management of the patients. In this study immunochromatography, microscopic agglutination test and polymerase chain reaction were used to diagnose leptospirosis. Further restriction fragment length polymorphism and DNA sequencing methods were used to identify the circulating strains in two selected geographical regions of Sri Lanka.Leptospira interrogans, Leptospira borgpeterseniiandLeptospira kirschneristrains were identified to be circulating in western and southern provinces. L. interroganswas the predominant species circulating in western and southern provinces in 2013 and its presence was mainly associated with renal failure.

Polymerase chain reaction detection of LeishmaniaDNA in skin biopsy samples in Sri Lanka where the causative agent of cutaneous leishmaniasis is Leishmania donovani

Leishmania donovani is the known causative agent of both cutaneous (CL) and visceral leishmaniasis in Sri Lanka. CL is considered to be under-reported partly due to relatively poor sensitivity and specificity of microscopic diagnosis. We compared robustness of three previously described polymerase chain reaction (PCR) based methods to detectLeishmania DNA in 38 punch biopsy samples from patients presented with suspected lesions in 2010. Both, Leishmaniagenus-specific JW11/JW12 KDNA and LITSR/L5.8S internal transcribed spacer (ITS)1 PCR assays detected 92% (35/38) of the samples whereas a KDNA assay specific forL. donovani (LdF/LdR) detected only 71% (27/38) of samples. All positive samples showed a L. donovani banding pattern upon HaeIII ITS1 PCR-restriction fragment length polymorphism analysis. PCR assay specificity was evaluated in samples containing Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, and human DNA, and there was no cross-amplification in JW11/JW12 and LITSR/L5.8S PCR assays. The LdF/LdR PCR assay did not amplify M. leprae or human DNA although 500 bp and 700 bp bands were observed in M. tuberculosis samples. In conclusion, it was successfully shown in this study that it is possible to diagnose Sri Lankan CL with high accuracy, to genus and species identification, using Leishmania DNA PCR assays.

Factors associated to breastfeeding in the first hour of life: systematic review

OBJECTIVE To identify independent risk factors for non-breastfeeding within the first hour of life.METHODS A systematic review of Medline, LILACS, Scopus, and Web of Science electronic databases, till August 30, 2013, was performed without restrictions on language or date of publishing. Studies that used regression models and provided adjusted measures of association were included. Studies in which the regression model was not specified or those based on specific populations regarding age or the presence of morbidities were excluded.RESULTS The search resulted in 155 articles, from which 18 met the inclusion criteria. These were conducted in Asia (9), Africa (5), and South America (4), between 1999 and 2013. The prevalence of breastfeeding within the first hour of life ranged from 11.4%, in a province of Saudi Arabia, to 83.3% in Sri Lanka. Cesarean delivery was the most consistent risk factor for non-breastfeeding within the first hour of life. “Low family income”, “maternal age less than 25 years”, “low maternal education”, “no prenatal visit”, “home delivery”, “no prenatal guidance on breastfeeding” and “preterm birth” were reported as risk factors in at least two studies.CONCLUSIONS Besides the hospital routines, indicators for low socioeconomic status and poor access to health services were also identified as independent risk factors for non-breastfeeding within the first hour of life. Policies to promote breastfeeding, appropriate to each context, should aim to reduce inequalities in health.

Temporal distribution of dengue virus serotypes in Colombian endemic area and dengue incidence: re-introduction of dengue-3 associated to mild febrile illness and primary infection

We have investigated the temporal distribution of dengue (DEN) virus serotypes in the department (state) of Santander, Colombia, in relation to dengue incidence, infection pattern, and severity of disease. Viral isolation was attended on a total of 1452 acute serum samples collected each week from 1998 to 2004. The infection pattern was evaluated in 596 laboratory-positive dengue cases using an IgG ELISA, and PRNT test. The dengue incidence was documented by the local health authority. Predominance of DEN-1 in 1998 and DEN-3 re-introduction and predominance in 2001-2003 coincided with outbreaks. Predominance of DEN-2 in 2000-2001 coincided with more dengue hemorrhagic fever (DHF). DEN-4 was isolated in 2000-2001 and 2004 but was not predominant. There was an annual increase of primary dengue infections (from 13.7 to 81.4%) that correlated with frequency of DEN-3 (r = 0.83; P = 0.038). From the total number of primary dengue infections DEN-3 (81.3%) was the most frequent serotype. DHF was more frequent in DEN-2 infected patients than in DEN-3 infected patients: 27.5 vs 10.9% (P < 0.05). DEN-3 viruses belonged to subtype C (restriction site-specific-polymerase chain reaction) like viruses isolated in Sri-Lanka and other countries in the Americas. Our findings show the importance of continuous virological surveillance to identify the risk factors of dengue epidemics and severity.

Genetic characterization of dengue virus type 3 isolates in the State of Rio de Janeiro, 2001

The genetic characterization of dengue virus type 3 (DEN-3) strains isolated from autochthonous cases in the State of Rio de Janeiro, Brazil, in 2001 is presented. Restriction site-specific (RSS)-PCR performed on 22 strains classified the Brazilian DEN-3 viruses as subtype C, a subtype that contains viruses from Sri Lanka, India, Africa and recent isolates from Central America. Nucleic acid sequencing (positions 278 to 2550) of one DEN-3 strain confirmed the origin of these strains, since genotype III - classified by sequencing - and RSS-PCR subtype C are correlated. This genetic subtype has been associated with hemorrhagic dengue epidemics and the information provided here could be useful to implement appropriate prevention and control measures.

Adverse pregnancy outcome in rats following exposure to a Salacia reticulata (Celastraceae) root extract

The root extract of Salacia reticulata Wight (family: Celastraceae) is used in Sri Lanka by traditional practitioners as a herbal therapy for glycemic control even during pregnancy. It is recognized that some clinically used antidiabetic drugs have harmful effects on pregnancy but the effects of the S. reticulata root extract on reproductive outcome is unknown and deserves examination. We determined the effects of the S. reticulata root extract on the reproductive outcome of Wistar rats (250-260 g) when administered orally (10 g/kg) during early (days 1-7) and mid- (days 7-14) pregnancy. The root extract significantly (P<0.05) enhanced post-implantation losses (control vs treatment: early pregnancy, 4.7 ± 2.4 vs 49.3 ± 13%; mid-pregnancy, 4.7 ± 2.4 vs 41.7 ± 16.1%). Gestational length was unaltered but the pups born had a low birth weight (P<0.05) (early pregnancy, 6.8 ± 0.1 vs 5.3 ± 0.1 g; mid-pregnancy, 6.8 ± 0.1 vs 5.0 ± 0.1 g) and low birth index (P<0.05) (early pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 50.7 ± 12.9%; mid-pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 58.3 ± 16.1%), fetal survival ratio (P<0.05) (early pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 50.7 ± 12.9; mid-pregnancy, 95.2 ± 2.4 vs 58.3 ± 16.1), and viability index (P<0.05) (early pregnancy, 94.9 ± 2.6 vs 49.5 ± 12.5%; mid-pregnancy, 94.9 ± 2.6 vs 57.1 ± 16.1%). However, the root extract was non-teratogenic. We conclude that the S. reticulata root extract can be hazardous to successful pregnancy in women and should not be used in pregnancy complicated by diabetes.

Células de Langerhans no epitélio da prega vocal humana: estudo imunoistoquímico

Células de Langerhans (CL) são um tipo de células dendríticas que têm funções que envolvem apresentação de antígeno e a estimulação de resposta T dependente. Elas representam aproximadamente 4% das células do epitélio laríngeo. OBJETIVO: Identificar a presença de CL no epitélio das pregas vocais, comparar suas subpopulações, bem com comparar a capacidade de quatro marcadores imunoistoquímicos. FORMA DE ESTUDO: Experimental. CASUÍSTICA E MÉTODO: Seis cadáveres, 3 homens e 3 mulheres foram estudados. Foram analisadas amostras de pele e das pregas vocais coradas e imunomarcadas para vimentina, proteína S-100, CD-68 e fascina. Após análise histológica, foi realizado o teste t de Student e análise de variância no estudo estatístico. RESULTADOS E CONCLUSÕES: Foi possível identificar a presença de CL no epitélio das pregas vocais de humanos não fumantes de ambos os sexos. A fascina, a vimentina o CD-68 mostraram-se bons marcadores das CL, enquanto a proteína S-100 teve estatisticamente menor poder de marcação tanto na prega vocal (p=0,01) como na pele (p=0,02). Foi possível identificar três diferentes subpopulações de CL presentes tanto na prega vocal como na pele destes indivíduos, contudo apenas na pele observarmos maior quantidade estatisticamente significante na camada basal do epitélio.

Imunofluorescência para neuropeptídeos na mucosa nasal humana: avaliação de técnica para peptídeo intestinal vasoativo (VIP)

Os neuropeptídeos são neurotransmissores relevantes na fisiologia nasal e o conhecimento crescente acerca de seu papel na fisiopatologia de doenças nasais abre novas perspectivas. A sua investigação na mucosa nasal humana baseia-se em grande parte em marcação imunológica, método complexo e sujeito a inúmeros fatores de erro. Com o intuito de viabilizar este tipo de pesquisa em nosso meio, um método de imunofluorescência para peptídeo intestinal vasoativo (VIP) na mucosa nasal humana é proposto e avaliado. FORMA DE ESTUDO: Coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Oito pacientes submetidos a cirurgia funcional do nariz têm um fragmento de mucosa coletado da concha inferior. O tecido foi fixado em solução de Zamboni (paraformaldeído 4% tamponado e ácido pícrico 0,4%), congelado em nitrogênio líquido e armazenado. Cortes de 14 µm foram realizados e submetidos à reação de imunofluorescência para VIP (Península Laboratories). As imagens microscópicas foram documentadas em fotografia convencional. A especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade de execução foram avaliadas. A reprodutibilidade de interpretação de resultados foi avaliada através da comparação de graus de marcação (0 a 4) atribuídos às fotos por seis observadores. RESULTADOS: Os resultados mostraram ser o método suficientemente específico, sensível, além de reprodutível em sua execução. A interpretação de resultados mostrou depender do perfeito esclarecimento do observador no julgamento das imagens de imunofluorescência, mas mostrou uniformidade. CONCLUSÃO: O método proposto foi considerado útil na pesquisa de neuropeptídeos na mucosa nasal humana.

Imunohistoquímica como método de estudo das fibras elásticas em prega vocal humana

OBJETIVO: O objetivo deste trabalho é o de verificar a aplicabilidade do método imunohistoquímico na quantificação das diferentes formas das fibras elásticas em prega vocal humana. FORMA DE ESTUDO: coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Foram seguidos os seguintes critérios de inclusão: idade entre 25 e 40 anos, gênero masculino, cor branca, morte causada por ferimento de arma de fogo, menos de doze horas de morte, ausência de intubação traqueal e de trauma na região cervical e que, por análise microscópica, não apresentassem qualquer alteração da mucosa das pregas vocais. Por estes critérios dez pregas vocais foram obtidas e selecionou-se, aleatoriamente, uma prega vocal que pertencia a um indivíduo de 28 anos. A prega vocal foi transversalmente seccionada em nove regiões e três cortes de cada fragmento foram utilizados para a realização das colorações Verhoeff e resorcina-fuchsina de Weighert e para a realização do estudo imunohistoquímico. Realizou-se quantificação colorimétrica das fibras elásticas. RESULTADO: As camadas intermediária e profunda da prega vocal apresentam valores muito superiores aos da camada superficial, nas colorações histológicas. A quantidade de tropoelastina identificada pelos anticorpos não apresentou grandes diferenças entre os valores da camada superficial e os da camada intermediária e profunda. CONCLUSÃO: A imunohistoquímica é uma técnica que identifica, em prega vocal humana, todas as formas de fibras elásticas e que também possibilita a realização de medidas objetivas.

Rinossinusite crônica em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana: avaliação clínica e radiológica

O advento dos inibidores de protease, aumentando a sobrevida dos pacientes infectados com HIV aumentou a procura destes pacientes por médicos otorrinolaringologistas, já que 40% a 70% deles podem apresentar alguma alteração otorrinolaringológica. OBJETIVIVOS: Objetivamos, nesse estudo, comparar os achados radiológicos e sintomatologia nasossinusal entre pacientes infectados com HIV e pacientes com AIDS, com rinossinusite crônica. A literatura sobre o assunto é revisada e discutida. FORMA DE ESTUDO: clínico prospectivo com coorte transversal. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Prospectivamente, 39 pacientes em uso de drogas antiretrovirais foram divididos em 2 grupos: pacientes com diagnóstico de AIDS (grupo I) e aqueles apenas infectados pelo HIV (grupo II). Estes grupos foram comparados clinicamente, quanto à contagem de células CD4+ e avaliação tomográfica dos seios paranasais. RESULTADOS: Os pacientes dos grupos I e II apresentaram média de células CD4+ de 118 cél/10-9l e 377 cél/10-9l, respectivamente. Na comparação dos achados tomográficos pelo sistema de Lund e Mackay, o grupo I apresentou escore médio de 12 e o grupo II apresentou média de escore de 5,63 (p<0,001), sendo a febre e a secreção pós-nasal mais prevalente no grupo I (p<0,001). CONCLUSÃO: A prevalência da sinusite crônica nos pacientes infectados pelo HIV foi de 12%. Os sintomas da rinossinusite foram similares nos pacientes sem AIDS e com AIDS, com exceção da presença de febre. Os pacientes com AIDS apresentaram alterações radiológicas mais extensas do que os pacientes HIV positivos.

Detecção de receptor de ácido hialurônico em prega vocal humana por método imunohistoquímico

O receptor do ácido Hialurônico é uma glicoproteína da membrana plasmática, sendo o principal o CD44, e está expresso em vários tipos de células onde possui a função de adesão celular. OBJETIVO: Estudar a possibilidade de empregar o método imunohistoquímico para identificar a distribuição dos receptores de ácido hialurônico ao longo da prega vocal humana. MATERIAL E MÉTODOS: Foram ressecadas as pregas vocais normais de um indivíduo de 23 anos, sexo masculino, cor negra. As lâminas foram analisadas por meio de estudo histomorfométrico, comparando-se a intensidade das cores nas camadas superficial, média e profunda da lâmina própria. Nas lâminas silanizadas foi utilizado método imunohistoquímico, sendo avaliadas através de microscopia óptica com aumento 40 vezes, obtendo coloração marrom onde houve a reação com receptor para ácido hialurônico. RESULTADOS: Os achados imunohistoquímicos mostraram presença de receptores para ácido hialurônico no epitélio de cobertura da prega vocal tendo maior concentração na região central da prega vocal. CONCLUSÃO: A técnica de imunohistoquímica, utilizada para avaliar a distribuição dos receptores para ácido hialurônico na pregas vocais humanas, mostrou sua disposição em epitélio da prega vocal e predomínio no terço médio, em relação às demais regiões na prega vocal estudada.