Screening for mutations in human alpha-globin genes by nonradioactive single-strand conformation polymorphism

Point mutations and small insertions or deletions in the human alpha-globin genes may produce alpha-chain structural variants and alpha-thalassemia. Mutations can be detected either by direct DNA sequencing or by screening methods, which select the mutated exon for sequencing. Although small (about 1 kb, 3 exons and 2 introns), the alpha-globin genes are duplicate (alpha2 and alpha1) and highy G-C rich, which makes them difficult to denature, reducing sequencing efficiency and causing frequent artifacts. We modified some conditions for PCR and electrophoresis in order to detect mutations in these genes employing nonradioactive single-strand conformation polymorphism (SSCP). Primers previously described by other authors for radioactive SSCP and phast-SSCP plus denaturing gradient gel electrophoresis were here combined and the resultant fragments (6 new besides 6 original per alpha-gene) submitted to silver staining SSCP. Nine structural and one thalassemic mutations were tested, under different conditions including two electrophoretic apparatus (PhastSystem™ and GenePhor™, Amersham Biosciences), different polyacrylamide gel concentrations, run temperatures and denaturing agents, and entire and restriction enzyme cut fragments. One hundred percent of sensitivity was achieved with four of the new fragments formed, using the PhastSystem™ and 20% gels at 15ºC, without the need of restriction enzymes. This nonradioactive PCR-SSCP approach showed to be simple, rapid and sensitive, reducing the costs involved in frequent sequencing repetitions and increasing the reliability of the results. It can be especially useful for laboratories which do not have an automated sequencer.

Characterization and oxygen binding properties of des-Arg human hemoglobin

The role of chloride in the stabilization of the deoxy conformation of hemoglobin (Hb), the low oxygen affinity state, has been studied in order to identify the nature of this binding. Previous studies have shown that arginines 141α could be involved in the binding of this ion to the protein. Thus, des-Arg Hb, human hemoglobin modified by removal of the α-chain C-terminal residue Arg141α, is a possible model for studies of these interactions. The loss of Arg141α and all the salt bridges in which it participates is associated with subtle structural perturbations of the α-chains, which include an increase in the conformational flexibility and further shift to the oxy state, increasing oxygen affinity. Thus, this Hb has been the target of many studies of structural and functional behavior along with medical applications. In the present study, we describe the biochemical characterization of des-Arg Hb by electrophoresis, high-performance liquid chromatography and mass spectroscopy. The effects of chloride binding on the oxygen affinity and on the cooperativity to des-Arg Hb and to native human hemoglobin, HbA, were measured and compared. We confirm that des-Arg Hb presents high oxygen affinity and low cooperativity in the presence of bound chloride and show that the binding of chloride to des-Arg does not change its functional characteristics as observed with HbA. These results indicate that Arg141α may be involved in the chloride effect on Hb oxygenation. Moreover, they show that these residues contribute to lower Hb oxygen affinity to a level compatible with its biological function.

(Des)fetichização do produtivismo acadêmico: desafios para o trabalhador-pesquisador

O trabalhador-pesquisador reclama fazer mais do que quer ou pode. Critica, porém acata. Análises sobre produtivismo acadêmico responsabilizam, não sem razão, organismos internacionais e nacionais e o sistema vigente. Observam-se, no entanto, mudanças escassas e resignação. Examinamos neste trabalho como se estruturou, a partir do século XIX, a complexa engenharia social que comanda o mundo, com a sobreposição de processos históricos de longa duração e decisivos no Ocidente. Destaca-se o surgimento das ciências humanas e sociais e seus compromissos cedo selados com governos e homens de negócio. A eleição de Educação, Ciência e Tecnologia como centrais para promover progresso econômico e social reduziram a Universidade, predominantemente, à executora e refém, não autônoma. Enquanto é o capital que precisa do conhecimento gerado pelos trabalhadores-pesquisadores para reproduzir-se, estes vivenciam a intensificação e alienação do seu trabalho; tal dependência aponta para o desafio de exercer seu poder.

A gestão do desenvolvimento local no Brasil: (des)articulação de atores, instrumentos e território

As ideias de desenvolvimento local são controversas, pouco consensuadas e, às vezes, até antagônicas entre si, tanto no Brasil quanto no debate internacional. Diante dessa polêmica, este artigo discute a gestão do desenvolvimento local a partir de instrumentos selecionados por meio de uma análise exploratória não apenas conceitual e teórica, mas sobretudo prática. Do ponto de vista metodológico, foi realizada uma análise comparada de experiências regionalmente distribuídas, levando-se em conta suas inserções em redes sociais e seus resultados econômicos na região em que está inserida (Sul, Sudeste e Nordeste). Percebe-se que refletir sobre o desenvolvimento local desdobra-se em duas frentes: uma de reprodução da lógica capitalista em escala localizada (tradicional) e outra de tentativas contra-hegemônicas (solidária). Assim, algumas questões centrais foram identificadas para orientar uma reflexão sobre a intervenção dos atores da sociedade civil e dos governos na formulação de propostas e iniciativas de desenvolvimento econômico local.

Mercado de trabalho: múltiplos (des)entendimentos

O termo mercado de trabalho permeia grande parte das discussões da sociologia e da economia na atualidade. Porém, mesmo sendo comum encontrar textos que utilizem o termo buscando dimensioná-lo, compreendê-lo, bem como explicar as mudanças que tem sofrido nas últimas décadas, são poucos os estudos que desenvolvem uma reflexão teórica do conceito e que destacam a vertente que estão seguindo. No presente trabalho busca-se analisar o conceito de mercado de trabalho em diferentes perspectivas da economia e a sociologia, a fim de aprofundar a discussão sobre o tema. Para tanto, procura apresentar algumas das principais abordagens do termo, destacando sua vertente teórica e possíveis limitações. Da economia são consideradas as construções das teorias clássica, keynesiana e da segmentação. A seguir são expostas a abordagem das redes sociais da sociologia econômica e a abordagem institucional. A partir das reflexões sobre o potencial e as limitações de cada vertente e dos conceitos de Bourdieu, apresenta-se um conceito para ampliar a compreensão e a discussão do termo. Acredita-se que, seguindo esta abordagem, será possível ampliar o debate sobre as estruturas econômicas da atualidade. Para finalizar, fazse um esboço de como seria possível a compreensão do mercado de trabalho em tempos de mundialização.

Secretion of five extracellular enzymes by strains of chromoblastomycosis agents

The gelatinase, urease, lipase, phospholipase and DNase activities of 11 chromoblastomycosis agents constituted by strains of Fonsecaea pedrosoi, F. compacta, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, Cladophialophora bantiana and Exophiala jeanselmei were analyzed and compared. All strains presented urease, gelatinase and lipase activity. Phospholipase activity was detected only on five of six strains of F. pedrosoi. DNase activity was not detected on the strains studied. Our results indicate that only phospholipase production, induced by egg yolk substrate, was useful for the differentiation of the taxonomically related species studied, based on their enzymatic profile.

Indicators of inflammation and cellular damage in chronic asymptomatic or oligosymptomatic alcoholics: correlation with alteration of bilirubin and hepatic and pancreatic enzymes

Biochemical and hematimetric indicators of inflammation and cell damage were correlated with bilirubin and hepatic and pancreatic enzymes in 30 chronic male alcoholics admitted into psychiatric hospital for detoxification and treatment of alcoholism. Aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, gamma-glutamyltransferase, alkaline phosphatase, and total bilirubin were altered, respectively, in 90%, 63%, 87%, 23% and 23% of the cases. None of the indicators of inflammation (lactic dehydrogenase, altered in 16% of the cases; alpha-1 globulin, 24%; alpha-2 globulin, 88%; leucocyte counts, 28%) was correlated with alterations of bilirubin or liver enzymes. Lactic dehydrogenase was poorly sensitive for detection of hepatocytic or muscular damage. Alterations of alpha-globulins seemed to have been due more to alcohol metabolism-induced increase of lipoproteins than to inflammation. Among indicators of cell damage, serum iron, increased in 40% of the cases, seemed to be related to liver damage while creatine phosphokinase, increased in 84% of the cases, related to muscle damage. Hyperamylasemia was found in 20% of the cases and significantly correlated with levels of bilirubin, alkaline phosphatase and gamma-glutamyltransferase. It was indicated that injuries of liver, pancreas, salivary glands, and muscle occurred in asymptomatic or oligosymptomatic chronic alcoholics.