O líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites por Cryptococcus neoformans

A criptococose, conhecida desde 1905, é doença grave, causada pelo Cryptococcus neoformans. Nesta entidade o estudo do líquido cefalorraquiano é muito importante visto que o sistema nervoso está envolvido em 81% dos casos5. O propósito do presente trabalho é o de evidenciar as alterações do líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites criptocócicas e demonstrar a importância de exame minucioso do líquido cefalorraquiano para o diagnóstico precoce desta doença. O material é constituído por 46 observações de pacientes com diagnóstico de meningencefalite criptocócica. O quadro inflamatório crônico, caracterizado por pleocitose predominantemente linfocitária, hiperproteinorraquia e glicose diminuída foi observado em 54% das amostras de líquido cefalorraquiano. Em 69% dos casos o líquido cefalorraquiano mostrava hipertensão. A glicose estava diminuída em 61% dos pacientes e a taxa de cloretos em 16%. Eosinófilos em baixa percentagem foram observados em 48% dos casos. O criptococo foi identificado no líquido cefalorraquiano de 98% dos pacientes; é salientada a importância da pesquisa a fresco do fungo pelo método da tinta da China, sempre que uma amostra de líquido cefalorraquiano revelar pleocitose. Esta é uma conduta básica para o diagnóstico precoce da criptococose do sistema nervoso.

Isolation of human fungi from soil and identification of two endemic areas of Cryptococcus neoformans and Coccidioides immitis

The present study was carried out in two different areas of Province of Cordoba, Argentina, where there was a suspicious of endemic mycosis. The previous data were the presence of a clinical case of pulmonary cryptococcosis in one area (Alta Gracia) and the previous findings of a high incidence of coccidioidin and cryptococcin reactors in the population of the second one (Villa Dolores). In both areas soil samples for fungi were studied and Cryptococcus neoformans was found in 2/25 samples from Alta Gracia. In Villa Dolores Coccidioides immitis was isolated in 2/40 samples, and C. neoformans in 1/40 samples. Delayed hypersensitivity test with cryptococcin was determined in the population from Alta Gracia and it was found to be 5.3%. Positive cutaneous tests with coccidioidin (33.8%) and cryptococcin (31.9%) in Villa Dolores were obtained. With these findings two endemic areas of systemic mycoses in Cordoba, Argentina were delimited.

Susceptibilidad "in vitro" de cepas de Cryptococcus a 5 drogas antifungicas

Se estudió la susceptibilidad "in vitro" de 24 cepas de 3 especies del género Cryptococcus a 5 drogas antifúngicas (anfotericina B, 5 fluorocitosina, ketoconazol, itraconazol y miconazol). Las mismas se agruparon según su especie, variedad y origen de aislamiento. Para determinar la concentración inhibitoria mínima (C.I.M.) de cada droga se empleó el método de dilución en agar con el medio básico nitrogenado para levaduras, adicionado de glucosa. Se obtuvo además la media geométrica de estos valores para cada grupo y se comparó cada uno de ellos. Los resultados obtenidos fueron homogéneos con la sola excepción de las cepas de Cryptococcus sp (no neoformans), en las cuales se detectaron elevados valores de C.I.M. para la 5 fluorocitosina.

Método fluorescente (diacetato de fluoresceína e brometo de etídeo) para o estudo da viabilidade de Cryptococcus neoformans em líquor

Padronizou-se método de fluorescência (solução de diacetato de fluoresceína DF e brometo de etídio BE) para análise de viabilidade de células fúngicas, em 40 amostras de liquor, provenientes de casos comprovados de neurocriptococose. A utilização de solução aquosa de saponina a 0,3% eliminou fluorescências interferentes emitidas por hemácias e leucócitos. Após o processamento dos materiais biológicos, foram retiradas alíquotas de 0,1 ml das supensões obtidas e misturadas a volumes iguais da solução DF-BE preparada pouco antes do uso. O tempo de coloração ideal foi de 30 minutos, resultando perfeita diferenciação entre microrganismos viáveis (fluorescência verde) e não viáveis (fluorescência vermelha).

Pesquisa do antígeno circulante de Cryptococcus neoformans em líquido cefalorraqueano pelo teste de coaglutinação

Foram utilizadas 82 LCR de transplantados renais (24 pacientes), 43 LCR de pacientes com críptococose comprovada (controles positivos), 35 LCR de pacientes com outras doenças (histoplasmose, paracoccidioidomicose e infecções bacterianas) como controles negativos. Os primeiros foram cultivados em ágar Sabouraud com sementes de girassol e juntamente com os demais examinado pelo teste de látex para pesquisa de antígeno circulante de C. neoformans, qualitativamente. O teste de Coaglutinação foi realizado qualitativamente e quantitativamente, encontrando-se títulos até a diluição 1:2048. Não foram detectadas reações falso-positivas ou falso-negativas entre os controles. Como prova de valor diagnóstico demonstrou: sensibilidade - 92,1%; especificidade - 92,6% e eficiência - 92,3%. Provou também ser um teste rápido, exato e econômico, embora sua escolha dependa do pré-tratamento de LCR (80ºC por 3 a 5 minutos) e soros (diluição ou álcali-precipitação) para evitar autoaglutinação e aumentar a sensibilidade da reação.

Deteccion de antigeno del polisacarido capsular de Cryptococcus neoformans en pacientes con SIDA y neurocriptococosis en São Paulo, Brasil

Antígeno del polisacárido capsular (Ag PC) de Cryptococcus neoformans fue detectado por la técnica de aglutinación de latex (AL) en LCR y suero de pacientes con Sindrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y primer episodio de neurocriptococosis, usando como patrón el examen micológico (examen directo y cultivo) de LCR. Se obtuvo una sensibilidad del 100% de AL para detectar AgPC de C. neoformans, el cual por su rápidez permite tratamiento específico precoz. Títulos iniciales de AgPC de la levadura en esos pacientes pueden ser > 1.000.000, pareciendo que cuando esos títulos están presentes en suero, se relacionan con mortalidad durante el tratamiento. En los pacientes que sobrevivieron se observó que el examen micológico directo y AgPC de C. neoformans, en LCR y suero, permanecen positivos aún después de tratamiento y mejoría clínica del paciente.

Possibility of in-hospital infection by Cryptococcus neoformans in patients with AIDS

The objective of the present work was to carry out a survey of soil samples taken from different areas of a hospital of infectious disease located in the city of Cordoba, where three AIDS patients were hospitalized during different periods in the same ward. The three of them returned with meningeal cryptococcosis between three or five months after having been discharged. Cryptococcus neoformans was isolated in 8/10 samples collected outside the hospital, near the pigeon house. The samples collected from the AIDS patients ward and its surroundings were negative. These findings suggest that the patients may have been infected by the fungus during their first stay in hospital.

Cryptococcus neoformans var. neoformans isolado do solo

Na tentativa de identificar a possível fonte de infecção, inquiriu-se, na história epidemiológica de 42 pacientes portadores de criptococose, o contato com pombos. Informações compatíveis com nicho ecológico do Cryptococcus neoformans foram positivas em 16. Foram colhidas 59 amostras de solo contendo fezes de pombos, penas e material orgânico. O C. neoformans foi detectado em 4. Uma das amostras era originada da capital e três do interior do estado. O sorotipo A do C. neoformans isolado de um liquor coincidiu com o sorotipo da amostra isolada do centro de Porto Alegre, local apontado pelo paciente como possível fonte de infecção, caracterizando caso de Cryptococcus neoformans var. neoformans.

Quimiotipagem do Cryptococcus neoformans. Revisão da literatura. Novos dados epidemiológicos sobre a criptococose. Nossa experiência com o emprego do meio de C.G.B. no estudo daquela levedura

O presente trabalho, além da revisão da literatura sobre quimiotipagem do C. neoformans, com novos dados sobre a epidemiologia da criptococose, teve por finalidade principal a caracterização das duas variedades desta levedura em pacientes com neurocriptococose, HIV + e HIV -. As variedades neoformans e gattii estão hoje bem definidas bioquimicamente, com o emprego do meio C.G.B., proposto por KWON-CHUNG et al. (1982) 24. O isolamento do C. neoformans var. gattii das flores e folhas do Eucalyptus camaldulensis e do Eucalyptus tereticornis, na Austrália, através dos trabalhos de ELLIS & PFEIFFER (1990)16 e PFEIFFER & ELLIS (1992)41, possibilitou investigações epidemiológicas das mais interessantes sobre este microrganismo, levedura capsulada a qual SANFELICE50, 51, na Itália, em 1894 e 1895 despertou a atenção do meio médico. BUSSE8, em 1894, descrevia o primeiro caso de criptococose humana sob a forma de lesão óssea, simulando sarcoma. As pesquisas nacionais sobre o assunto em foco foram destacadas, seguindo-se a experiência dos Autores com o meio de C.G.B. (L - canavanina, glicina e azul de bromotimol). Foi possível, através deste meio o estudo de 50 amostras de líquor, sendo 39 procedentes de aidéticos (78%) e 11 de não aidéticos (22%). De pacientes HIV+, 37 (74%) foram identificados como C. neoformans var. neoformans e 2 (4%) como C. neoformans var. gattii. Dos HIV- 8 ( 16%) foram classificados como C. neoformans var. neoformans e 3 (6%) como C. neoformans var. gattii. Através deste trabalho, evidencia-se a importância da neurocriptococose, principalmente entre os aidéticos, demonstrando-se mais uma vez o interesse do meio CGB na quimiotipagem do C. neoformans em suas duas variedades, ganhando em importância a demonstração de que duas espécies de eucalipto podem funcionar como "árvores-hospedeiras" para o Cryptococcus neoformans var. gattii.

Asociacion de leveduras del genero Cryptococcus con especies de Eucalyptus en Santafe de Bogota

El aislamiento de Cryptococcus neoformans var. gattii, serotipo B, a partir del medio ambiente se estableció inicialmente en Australia en 1989, en asocio con el Eucalyptus camaldulensis y posteriormente con E. tereticornis. Con estos hallazgos se postuló que desde allí, el hongo se ha podido exportar, por medio de las semillas contaminadas, a otras regiones geográficas, incluyendo Colombia. El objetivo de éste estudio fue identificar las levaduras del género Cryptococcus asociadas con especies de Eucalyptus sp., como primera evaluación en la ecología de C. neoformans var. gattii en nuestro país. Se realizó en Santafé de Bogotá, con una población de 100 árboles ubicados al centro, nororiente, oriente y occidente de la ciudad, recolectando de cada uno de ellos flores, frutos, hojas, cortezas y detritos; el procesamiento de las muestras incluyó extracción del material con una solución salina con antibióticos, siembra en medios selectivos e identificación de las especies con base en las características morfológicas, macro y microscópicas y bioquímicas. Se aislaron 27 cepas de Cryptococcus pertenecientes a 9 especies de Cryptococcus, a partir de 21 árboles ubicados en 5 zonas diferentes de la ciudad. Se aisló C. neoformans y se identificó como C. neoformans var. neoformans serotipo A. Estos datos iniciales son importantes como primera evaluación de la asociación de Cryptococcus sp. con los Eucalyptus en nuestro país.

Detection of Cryptococcus neoformans capsular polysaccharide antigen in asymptomatic HIV-infected patients

Serum samples from 242 HIV-positive persons were studied for the detection of capsular polysaccha-ride antigen of Cryptococcus neoformans; 193 of these patients presented less than 300 CD4+ cells/µl of blood and 49 patients had more than 300 CD4+ cells/µl. None of them had symptoms or signs characteristic of cryptococcosis. The capsular antigen of C. neofarmans was detected by latex agglutination technique with pronase pre-treatment (IMMY, Crypto-Latex Antigen Detection System, Immunomycologics Inc., OK, USA); in 61% of the samples, ELISA technique was also used (Premier, Cryptococcal Antigen, Meridian Diagnostic Inc., Cincinatti, Oh, USA). The comparative study of both methods showed that the results obtained were similar in 96.9% of the cases. The capsular antigen was detected in 13 out of 193 (6.7%) patients with less than 300 CD4+ cells/µl. Cryptococcosis was confirmed mycologically in 3 of these 13 cases (23%) by the isolation of C. neoformans in CSF or blood cultures. Three patients, who had presented negative results of both tests for capsular antigen, suffered disseminated cryptococcosis 4 to 8 months later. The predictive diagnostic value of capsular antigen detection of C. neoformans seems tobe low and we believe that it should not be done routinely in asymptomatic HIV-positive persons.

Development of Secondary Resistance to Fluconazole in Cryptococcus neoformans Isolated from a Patient with AIDS

Cryptococcus neoformans is the fifth most common opportunistic agent of infection in patients with AIDS in the USA, exceeded only by Candida species, Pneumocystis carinii, cytomegalovirus and Mycobacterium avium1, 2, 6, 10, 11. In Brazil is the sixth, exceeded by Candida species, P. carinii, Mycobacterium species, Toxoplasma gondii, and herpes simplex virus (AIDS, Boletim Epidemiológico, set/nov 96, Ministério da Saúde, Brasil). During 30 years, the treatment of C. neoformans meningitis was based on the use of amphotericin B with or without flucytosine13. Nowadays, with the immunodepression caused by human immunodeficiency virus (HIV) infection and the availability of new antifungal drugs as the triazoles, the concept related to cure and relapses of cryptococcosis has been altered7, 20. Patients are treated with amphotericin B with or without flucytosine as initial therapy, but maintenance therapy is always necessary in AIDS patients with C. neoformans infections

In vitro susceptibility to antifungal agents of clinical and environmental Cryptococcus neoformans isolated in Southern of Brazil

The purpose of the present study was to compare the susceptibility to four antifungal agents of 69 Cryptococcus neoformans strains isolated from AIDS patients with that of 13 C. neoformans strains isolated from the environment. Based on the NCCLS M27-A methodology the Minimal Inhibitory Concentrations (MICs) obtained for amphotericin B, itraconazole and ketoconazole were very similar for clinical and environmental isolates. Clinical isolates were less susceptible to fluconazole than environmental isolates. The significance of these findings and aspects concerning the importance, role and difficulties of C. neoformans susceptibility testing are also discussed.

Primary cutaneous cryptococcosis due to Cryptococcus neoformans var. gattii serotype B, in an immunocompetent patient

The authors report a male patient, a seller with no detected immunosuppression, with an extensive ulcerated skin lesion localized on the left forearm, caused by Cryptococcus neoformans var. gattii serotype B. Oral treatment with fluconazole was successful. A review of the literature showed the rarity of this localization in HIV-negative patients. In contrast, skin lesions frequently occurs in HIV-positive patients, with Cryptococcus neoformans var. neoformans serotype A predominating as the etiological agent. In this paper, the pathogenicity of C. neoformans to skin lesions in patients immunocompromised or not, is discussed, showing the efficacy of fluconazole for the treatment of these processes.