Internalization of components of the host cell plasma membrane during infection by Trypanosoma cruzi

Epimastigote and trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi attach to the macrophage surface and are internalized with the formation of a membrane bounded vacuole, known as the parasitophorous vacuole (PV). In order to determine if components of the host cell membrane are internalized during formation of the PV we labeled the macrophage surface with fluorescent probes for proteins, lipids and sialic acid residues and then allowed the labeled cells to interact with the parasites. The interaction process was interrupted after 1 hr at 37ºC and the distribution of the probes analyzed by confocal laser scanning microscopy. During attachment of the parasites to the macrophage surface an intense labeling of the attachment regions was observed. Subsequently labeling of the membrane lining the parasitophorous vacuole containing epimastigote and trypomastigote forms was seen. Labeling was not uniform, with regions of intense and light or no labeling. The results obtained show that host cell membrane lipids, proteins and sialoglycoconjugates contribute to the formation of the membrane lining the PV containing epimastigote and trypomastigote T. cruzi forms. Lysosomes of the host cell may participate in the process of PV membrane formation.

Comparison between specific and multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for detection of hepatitis A virus, poliovirus and rotavirus in experimentally seeded oysters

Outbreaks of gastroenteritis have occurred among consumers of raw or undercooked shellfish harvested from faecally polluted waters. A multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was applied for the simultaneous detection of hepatitis A virus (HAV), poliovirus (PV) and simian rotavirus (RV-SA11) and compared with specific primers for each genome sequence. Three amplified DNA products representing HAV (192 bp), PV (394 bp) and RV (278 bp) were identified when positive controls were used. However, when tested on experimentally contaminated raw oysters, this method was not able to detect the three viruses simultaneously. This is probably due to the low concentration of viral RNAs present in oyster extract which were partially lost during the extracts preparation.

In vitro susceptibility characteristics of Cryptococcus neoformans varieties from AIDS patients in Goiânia, Brazil

Sixty clinical isolates of Cryptococcus neoformans from AIDS from Goiânia, state of Goiás, Brazil, were characterized according to varieties, serotypes and tested for antifungal susceptibility. To differentiate the two varieties was used L-canavanine-glycine-bromothymol blue medium and to separate the serotypes was used slide agglutination test with Crypto Check Iatron. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) of fluconazole, itraconazole, and amphotericin B were determined by the National Committee for Clinical Laboratory Standards macrodilution method. Our results identified 56 isolates as C. neoformans var. neoformans serotype A and 4 isolates as C. neoformans var. gattii serotype B. MIC values for C. neoformans var. gattii were higher than C. neoformans var. neoformans. We verified that none isolate was resistant to itraconazole and to amphotericin B, but one C. neoformans var. neoformans and three C. neoformans var. gattii isolates were resistant to fluconazole. The presence of C. neoformans var. gattii fluconazole resistant indicates the importance of determining not only the variety of C. neoformans infecting the patients but also measuring the MIC of the isolate in order to properly orient treatment.

First detection of Corynebacterium ulcerans producing a diphtheria-like toxin in a case of human with pulmonary infection in the Rio de Janeiro metropolitan area, Brazil

The frequency and severity of human infections associated with Corynebacterium ulcerans appear to be increasing in different countries. Here, we describe the first C. ulcerans strain producing a diphtheria-like toxin isolated from an elderly woman with a fatal pulmonary infection and a history of leg skin ulcers in the Rio de Janeiro metropolitan area.

Spontaneous stage differentiation of mouse-virulent Toxoplasma gondii RH parasites in skeletal muscle cells: an ultrastructural evaluation

Although the predilection for Toxoplasma gondii to form cysts in the nervous system and skeletal and heart muscles has been described for more than fifty years, skeletal muscle cells (SkMCs) have not been explored as a host cell type to study the Toxoplasma-host cell interaction and investigate the intracellular development of the parasite. Morphological aspects of the initial events in the Toxoplasma-SkMC interaction were analysed and suggest that there are different processes of protozoan adhesion and invasion and of the subsequent fate of the parasite inside the parasitophorous vacuole (PV). Using scanning electron microscopy,Toxoplasma tachyzoites from the mouse-virulent RH strain were found to be attached to SkMCs by the anterior or posterior region of the body, with or without expansion of the SkMC membrane. This suggests that different types of parasite internalization occurred. Asynchronous multiplication and differentiation of T. gondii were observed. Importantly, intracellular parasites were seen to display high amounts of amylopectin granules in their cytoplasm, indicating that tachyzoites of the RH strain were able to differentiate spontaneously into bradyzoites in SkMCs. This stage conversion occurred in approximately 3% of the PVs. This is particularly intriguing as tachyzoites of virulent Toxoplasma strains are not thought to be prone to cyst formation. We discuss whether biological differences in host cells are crucial to Toxoplasma stage conversion and suggest that important questions concerning the host cell type and its relevance in Toxoplasma differentiation are still unanswered.

Comparative study of two extraction methods for enteric virus recovery from sewage sludge by molecular methods

The aim of this study was to compare two nucleic acid extraction methods for the recovery of enteric viruses from activated sludge. Test samples were inoculated with human adenovirus (AdV), hepatitis A virus (HAV), poliovirus (PV) and rotavirus (RV) and were then processed by an adsorption-elution-precipitation method. Two extraction methods were used: an organic solvent-based method and a silica method. The organic-based method was able to recoup 20% of the AdV, 90% of the RV and 100% of both the PV and HAV from seeded samples. The silica method was able to recoup 1.8% of the AdV and 90% of the RV. These results indicate that the organic-based method is more suitable for detecting viruses in sewage sludge.

Malaria in pregnant women living in areas of low transmission on the southeast Brazilian Coast: molecular diagnosis and humoural immunity profile

Studies on autochthonous malaria in low-transmission areas in Brazil have acquired epidemiological relevance because they suggest continued transmission in what remains of the Atlantic Forest. In the southeastern portion of the state of São Paulo, outbreaks in the municipality of Juquitiba have been the focus of studies on the prevalence of Plasmodium, including asymptomatic cases. Data on the occurrence of the disease or the presence of antiplasmodial antibodies in pregnant women from this region have not previously been described. Although Plasmodium falciparum in pregnant women has been widely addressed in the literature, the interaction of Plasmodium vivax and Plasmodium malariae with this cohort has been poorly explored to date. We monitored the circulation of Plasmodium in pregnant women in health facilities located in Juquitiba using thick blood film and molecular protocols, as well as immunological assays, to evaluate humoural immune parameters. Through real-time and nested polymerase chain reaction, P. vivax and P. malariae were detected for the first time in pregnant women, with a positivity of 5.6%. Immunoassays revealed the presence of IgG antibodies: 44% for ELISA-Pv, 38.4% for SD-Bioline-Pv and 18.4% for indirect immunofluorescence assay-Pm. The high prevalence of antibodies showed significant exposure of this population to Plasmodium. In regions with similar profiles, testing for a malaria diagnosis might be indicated in prenatal care.

Índices de erosividade da chuva, perdas de solo e fator erodibilidade para dois solos da região dos cerrados - primeira aproximação

Os objetivos deste trabalho foram: testar a adequação de diferentes índices de erosividade das chuvas, comparar duas equações propostas para cálculo da energia cinética das chuvas e estimar o fator K (erodibilidade) da equação universal de perdas de solo (EUPS) para um latossolo vermelho-escuro (LE) álico muito argiloso e um podzólico vermelho-amarelo (PV) álico muito argiloso da região de Sete Lagoas (MG). Não houve diferença significativa entre as duas equações testadas para cálculo da energia cinética das chuvas. O índice EI30 mostrou ser um bom estimador da erosividade da chuva e pode continuar sendo utilizado como fator R (erosividade) da EUPS para a região estudada. Os valores do fator K, para o LE e o PV da região de Sete Lagoas, foram, respectivamente, 0,002 e 0,033 t h (MJ mm)-1.

Extratores de fósforo em solos da Amazônia tratados com fertilizantes fosfatados

Com o objetivo de avaliar a disponibilidade de fósforo em amostras de solos representativos da Amazônia, desenvolveu-se um experimento em casa de vegetação do Centro de Energia Nuclear na Agricultura, Piracicaba (SP), de outubro de 1993 a março de 1994, utilizando-se amostras da camada superficial de cinco solos (LA-médio, LA-argiloso, LA-muito argiloso, PV-argiloso e PV-muito argiloso). Foram usados, como fontes de P, superfosfato triplo, termofosfato yoorin em pó, termofosfato yoorin semi-acabado e fosfato natural da Carolina do Norte, nas doses de P equivalentes a 0, 40, 80 e 120 mg kg-1 de solo. Caupi e arroz foram usados como plantas-testes, e os resultados de produção de matéria seca e de P acumulado na parte aérea foram correlacionados com os de teores de P nas amostras de cada solo. A extração de P foi efetuada por meio dos métodos da resina trocadora de ânions, Mehlich-1, Mehlich-3 e Bray-I. Os resultados obtidos demonstraram que o extrator Mehlich-1 extraiu grandes quantidades de fósforo nos tratamentos com fosfato natural da Carolina do Norte. Independentemente da fonte de fósforo utilizada, o extrator Mehlich-3 apresentou as melhores correlações com o caupi e o arroz. Os extratores Mehlich-3 e Bray-I apresentaram maior sensibilidade às variações de solo. O extrator Mehlich-3 mostrou-se adequado na avaliação da disponibilidade de fósforo para as plantas, em diferentes condições de solos e fontes de fósforo.

Mobilidade de metais pesados em solo tratado com resíduo siderúrgico ácido

Amostras do horizonte Bt de um Podzólico Vermelho-Amarelo (PV), predominante no aterro-piloto de resíduos industriais (ARSI) da Companhia Siderúrgica Nacional (CSN), foram acondicionadas, em 1992, em colunas de vidro com 5,4 cm de diâmetro e 37 cm de altura. Sobre essas amostras de solo foram colocadas amostras de um resíduo ácido da CSN na proporção solo-resíduo de 4:1 (conforme a concepção básica do projeto do ARSI). Tal sistema resíduo-solo foi lixiviado com 50 volumes-poro de água deionizada, com pH 4,5, com o objetivo de avaliar a movimentação de Cr, Mn, Ni, Cu, Zn, Cd e Pb nas colunas. Depois da lixiviação, removeu-se o resíduo do topo das colunas, e seccionaram-se as amostras de solo em 4 partes iguais. Os metais pesados das amostras do resíduo e do solo foram extraídos seqüencialmente. 0 Pb, Cu e Cr mobilizados do resíduo ficaram retidos nos primeiros 5 cm da coluna de solo. 0 Zn, Mn, Ni e Cd tiveram aumento da concentração em profundidade. Nos efluentes das colunas com o resíduo, foram observadas concentrações de Mn e Ni bem superiores aos padrões permitidos pela Fundação Estadual de Engenharia do Meio Ambiente (FEEMA, 1985).

Persistência do fungicida triadimenol em solos

O grau de persistência do fungicida triadimenol, que é utilizado intensamente no controle da ferrugem do cafeeiro, foi avaliado em amostras de duas classes de solo, Podzólico Vermelho-Amarelo câmbico (PV) e Latossolo Vermelho-Amarelo variação Una (LU) da região de Viçosa, MG, com e sem adição de composto orgânico. Utilizou-se a técnica de bioautografia em camada fina. O triadimenol foi adicionado a 375 mg kg-1 de ingrediente ativo de solo, e as extrações dos resíduos fungitóxicos foram feitas 35, 70 e 115 dias após a incorporação aos solos, mantendo-se os tratamentos em condições de laboratório. A adição de composto orgânico não provocou variação significativa na degradação de triadimenol nos solos. Houve diferenças entre os solos na cinética de degradação do triadimenol, tendo no Podzólico ocorrido maiores taxas de degradação, possivelmente pela maior fertilidade natural, retenção de água e propriedades físicas e condições hídricas mais favoráveis à degradação microbiana. Nas condições do presente estudo e pela taxa de degradação verificada, o triadimenol pode ser considerado moderadamente persistente.

Boro total e solúvel e suas relações com alguns atributos dos solos do estado do Ceará

Foram avaliados os teores de boro total e solúvel, por meio de três extratores, usados como índices de disponibilidade para as plantas, e suas relações com as propriedades do solo em unidades de mapeamento representativas do estado do Ceará. Utilizaram-se 48 amostras compostas da camada superficial (0-20 cm) de solos classificados como: Areia Quartzosa (AQd), Aluvial (Ae), Planossolo (PL), Bruno Não-Cálcico (NC), Cambissolo (Ce), Podzólico Vermelho-Amarelo (PV), Latossolo Vermelho-Amarelo (LV) e Litossolo (Re). O boro total foi determinado após fusão com carbonato de sódio, e o boro solúvel por meio dos extratores: água quente, HCl 0,05 mol L-1 e Mehlich-1. O B total variou entre 8,3 e 52,2 mg kg-1, com média geral de 16,0 mg kg-1, verificando-se as menores médias nos solos NC, Re e AQd e as maiores nos solos LV, PL e PV. Os teores de B solúvel variaram entre 0,22 e 1,22 mg kg-1, com média de 0,60 mg kg-1, na água quente; entre 0,21 e 1,24 mg kg-1, com média de 0,53 mg kg-1, no HCl 0,05 mol L-1; e entre 0,50 e 1,81 mg kg-1, com média de 1,07 mg kg-1, no Mehlich-1, representando 3,76; 3,32 e 6,76% do B total, respectivamente. As menores médias foram apresentadas pelos solos AQd e LV, e as maiores pelo Ce. Os três extratores correlacionaram-se de forma positiva e altamente significativa. O B total e a matéria orgânica explicaram 28,8 e 38,3% do B extraído pela água quente, respectivamente. O conteúdo de argila, os óxidos de Mn e os sesquióxidos de Fe e Al amorfos e cristalinos influenciaram em menor proporção. A inclusão dessas características numa análise de regressão múltipla melhorou os coeficientes de correlação.

Fluxo difusivo de zinco em amostras de solo influenciado por textura, íon acompanhante e pH do solo

O fluxo difusivo (difusão) é a forma mais importante de transporte de zinco no solo, dada sua baixa concentração na solução. Este trabalho teve como objetivo avaliar o fluxo difusivo de Zn em amostras de um solo de textura argilosa (Latossolo Vermelho-Escuro - LE), outro de textura média (Podzólico Vermelho-Amarelo - PV) e um terceiro de textura arenosa (Latossolo Vermelho-Amarelo - LV), submetidos a níveis de pH: pH natural (4,38) e 5,40, para o LE; natural (4,87) e 6,00, para o PV, e somente pH natural (4,64), para o LV, e a três fontes de Zn (ZnCl2, ZnEDTA e ZnSO4) nas doses de 0, 20 e 40 mg dm-3 de Zn. As unidades experimentais constituíram-se de 400 cm³ de amostras de solo, colocadas em câmaras feitas de tubos de PVC, com 10 cm de diâmetro e 5 cm de altura, contendo, cada câmara, uma lâmina de resina trocadora de cátions ácido forte (modelo CR61CZR IONICS, Inc) como dreno de Zn, nas dimensões de 2,0 x 5,0 cm, colocada à profundidade de 2,5 cm no meio da câmara. As amostras, umedecidas até a capacidade de campo, foram incubadas por um período de 15 dias à temperatura de 24 ± 4ºC. Após esse período, as lâminas foram retiradas, realizando-se a extração do Zn adsorvido às lâminas de resina. O pH do solo demonstrou ser fator de grande importância no controle do fluxo difusivo do Zn, acarretando-lhe grande diminuição quando da elevação de pH. De modo geral, o fluxo difusivo de Zn foi menor com o aumento do teor de argila do solo. O fluxo difusivo de Zn foi maior, nos três solos, quando a fonte utilizada foi ZnCl2.

Relação entre o zinco "disponível", por diferentes extratores, e as frações de zinco em amostras de solos

Para determinar o zinco "disponível" do solo para plantas, vários procedimentos de extração têm sido desenvolvidos. Uma alternativa utilizada no estudo de extratores do Zn "disponível" refere-se ao fracionamento do Zn total do solo, com vistas em entender suas reações no solo e o comportamento dos extratores. Este trabalho objetivou avaliar a dependência existente entre o teor de Zn disponível, por diferentes extratores, e as frações deste elemento no solo e características dos solos. Para isto, amostras de doze solos da camada de 0-20 cm de profundidade, correspondendo aos grandes grupos de Latossolo Vermelho-Escuro (LE), Latossolo Vermelho-Amarelo (LV), Latossolo Amarelo (LA), Podzólico Vermelho-Amarelo (PV) e Areia Quartzosa (AQ), receberam as doses de 0 e 20 mg dm-3 de Zn e foram incubadas por 30 dias. O Zn extraível por DTPA-TEA-CaCL2, HCl (0,1 mol L-1), Mehlich-1 (M-1) e Mehlich-3 (M-3) foi determinado. Essas amostras dos solos foram também submetidas ao fracionamento de Zn, determinando-se Zn trocável (Zntr), ligado à matéria orgânica (Znmo), ligado a óxido de manganês (ZnMn), ligado a óxido de ferro amorfo (ZnFea) e ligado a óxido de ferro cristalino (ZnFec). Concluiu-se que os extratores DTPA e M-3 revelaram maior sensibilidade às características do solo relacionadas com o fator capacidade (poder tampão). Os extratores M-1 e HCl apresentaram menor sensibilidade e menor correlação com estas características, considerando seu maior poder de extração e conseqüente menor desgaste. A relação Zn recuperado pelo extrator/Zn aplicado ao solo demonstrou ser a característica que melhor se correlacionou com características do solo relacionadas com o fator capacidade de Zn. A fração de Zn trocável foi a maior responsável pela quantidade de Zn obtido pelos extratores testados. As frações de Zntr, Znmo, ZnMn, ZnFea e ZnFec não foram suficientes para explicar, em todos os casos, o zinco recuperado pelos extratores.

Suscetibilidade à compactação de um latossolo vermelho-escuro e de um podzólico vermelho-amarelo

A compactação de solos agrícolas resulta de interações máquina-solo que influenciam as propriedades físicas e biológicas do solo, bem como o crescimento e produtividade das plantas. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi determinar o índice de compressão, a pressão de preconsolidação e a deformação de um Latossolo Vermelho-Escuro (LE) e de um Podzólico Vermelho-Amarelo (PV), com diferentes estados iniciais de compactação e de grau de saturação em água. Para tal, foram utilizadas amostras indeformadas, coletadas em dois solos e em duas profundidades, em sistema plantio direto e preparo convencional de solo, em vários pontos e épocas, dentro de cada área e tipo de manejo. Com isso, obteve-se ampla variação natural dos valores de densidade do solo, correspondentes aos diferentes estados iniciais de compactação e grau de saturação. As amostras indeformadas foram submetidas ao ensaio de compressão uniaxial, realizado com aplicação de pressões estáticas de 12,5; 25; 50; 100; 200; 400 e 800 kPa, mantendo cada pressão constante por cinco minutos. Esse tempo foi determinado em pré-testes, observando-se que 99% da deformação máxima ocorreu nesse tempo. A deformação do solo apresentou comportamento diferenciado para cada solo. No LE, sob baixos graus de saturação (< 30%), a relação entre deformação e densidade inicial foi curvilínea, enquanto, para graus de saturação mais elevados, foi praticamente linear. Já no PV, aquela relação foi curvilinear para graus de saturação menores que 30% e maiores que 60%, enquanto, nas saturações intermediárias (30 a 60%), o comportamento observado foi linear. O índice de compressão relacionou-se negativamente com a densidade do solo inicial nos dois solos e com o grau de saturação no solo PV. Para níveis de densidade do solo inicial maiores que 1,45 Mg m-3, o LE apresentou maior suscetibilidade à compactação em grau de saturação próximo a 70%, enquanto, quando menos compactado (densidade do solo inicial < 1,30 Mg m-3), a maior suscetibilidade ocorreu sob menores saturações, próximas a 50%. As equações de regressão múltipla para a pressão de preconsolidação, utilizando somente valores de densidade do solo inicial e grau de saturação, apresentaram coeficientes de determinação (R²) baixos (0,28, para o PV, e 0,32, para o LE), apesar de significativos, indicando a necessidade de incorporação de outras variáveis nesses modelos.