Novel polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism assay to determine internal transcribed spacer-2 group in the Chagas disease vector, Triatoma dimidiata (Latreille, 1811)

Triatoma dimidiata is the most important Chagas disease insect vector in Central America as this species is primarily responsible for Trypanosoma cruzi transmission to humans, the protozoan parasite that causes Chagas disease. T. dimidiata sensu lato is a genetically diverse assemblage of taxa and effective vector control requires a clear understanding of the geographic distribution and epidemiological importance of its taxa. The nuclear ribosomal internal transcribed spacer 2 (ITS-2) is frequently used to infer the systematics of triatomines. However, oftentimes amplification and sequencing of ITS-2 fails, likely due to both the large polymerase chain reaction (PCR) product and polymerase slippage near the 5' end. To overcome these challenges we have designed new primers that amplify only the 3'-most 200 base pairs of ITS-2. This region distinguishes the ITS-2 group for 100% of known T. dimidiata haplotypes. Furthermore, we have developed a PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) approach to determine the ITS-2 group, greatly reducing, but not eliminating, the number of amplified products that need to be sequenced. Although there are limitations with this new PCR-RFLP approach, its use will help with understanding the geographic distribution of T. dimidiata taxa and can facilitate other studies characterising the taxa, e.g. their ecology, evolution and epidemiological importance, thus improving vector control.

Morphology of the larvae, male genitalia and DNA sequences of Anopheles (Kerteszia) pholidotus (Diptera: Culicidae) from Colombia

Since 1984, Anopheles (Kerteszia) lepidotus has been considered a mosquito species that is involved in the transmission of malaria in Colombia, after having been incriminated as such with epidemiological evidence from a malaria outbreak in Cunday-Villarrica, Tolima. Subsequent morphological analyses of females captured in the same place and at the time of the outbreak showed that the species responsible for the transmission was not An. lepidotus, but rather Anopheles pholidotus. However, the associated morphological stages and DNA sequences of An. pholidotus from the foci of Cunday-Villarrica had not been analysed. Using samples that were caught recently from the outbreak region, the purpose of this study was to provide updated and additional information by analysing the morphology of female mosquitoes, the genitalia of male mosquitoes and fourth instar larvae of An. pholidotus, which was confirmed with DNA sequences of cytochrome oxidase I and rDNA internal transcribed spacer. A total of 1,596 adult females were collected in addition to 37 larval collections in bromeliads. Furthermore, 141 adult females, which were captured from the same area in the years 1981-1982, were analysed morphologically. Ninety-five DNA sequences were analysed for this study. Morphological and molecular analyses showed that the species present in this region corresponds to An. pholidotus. Given the absence of An. lepidotus, even in recent years, we consider that the species of mosquitoes that was previously incriminated as the malaria vector during the outbreak was indeed An. pholidotus, thus ending the controversy.

The identification and differentiation of the Candida parapsilosis complex species by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism of the internal transcribed spacer region of the rDNA

Currently, it is accepted that there are three species that were formerly grouped under Candida parapsilosis: C. para- psilosis sensu stricto, Candida orthopsilosis, andCandida metapsilosis. In fact, the antifungal susceptibility profiles and distinct virulence attributes demonstrate the differences in these nosocomial pathogens. An accurate, fast, and economical identification of fungal species has been the main goal in mycology. In the present study, we searched sequences that were available in the GenBank database in order to identify the complete sequence for the internal transcribed spacer (ITS)1-5.8S-ITS2 region, which is comprised of the forward and reverse primers ITS1 and ITS4. Subsequently, an in silico polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was performed to differentiate the C. parapsilosis complex species. Ninety-eight clinical isolates from patients with fungaemia were submitted for analysis, where 59 isolates were identified as C. parapsilosis sensu stricto, 37 were identified as C. orthopsilosis, and two were identified as C. metapsilosis. PCR-RFLP quickly and accurately identified C. parapsilosis complex species, making this method an alternative and routine identification system for use in clinical mycology laboratories.

Tri-sector partnerships in social entrepreneurship: discourse and practice of the actors from the circles of action and reflection

This article discusses the construction of tri-sector partnerships in three projects conducted in Brazil in different fields of intervention of public policy (access to water, basic education and performance of boards of rights of children and adolescents). Collaborative articulations involving the players from three sectors (the State, civil society and the market) are practices that are little studied in the Brazilian and even in the international context, as tri-sector partnerships are rare, despite the proliferation of lines of discourse in support of alliances between governments and civil society or between companies and NGOs in the management of public policy. As a research strategy, this study resorted to cooperative inquiry, a method that involves breaking down the boundaries between the subjects and the objects of the analysis. Besides working toward a better understanding of the challenges of building tri-sector partnerships in the Brazilian context, the article also tries to show the relevance to public policy studies of investigative methods based on the subjects studied, as a means of developing an understanding of the practices, lines of discourse and dilemmas linked to social action in social programs.

A new species of Homalocerus Schoenherr from the Atlantic coast of the State of São Paulo, Brazil (Coleoptera, Belidae, Belinae), with notes on color pattern and on the sclerites of the internal sac

A new species of Homalocerus Schoenherr from the Atlantic coast of the State of São Paulo, Brazil (Coleoptera, Belidae, Belinae), with notes on color pattern and on the sclerites of the internal sac. Homalocerus bimaculatus sp. nov. (type locality: Brazil, São Paulo) is described and illustrated, and comments on the sclerites of the internal sac of aedeagus and on color pattern are provided. The new species is compared to other similar species of the genus, being distinguished by having three clusters of carmine pubescence on pronotum and two lateral whitish oval spots located slightly before the middle of each elytron. Six species of Homalocerus, including the new one, are known from the State of São Paulo. The previously published identification key for species of Homalocerus is updated to include H. bimaculatus.

Clearing and dissecting insects for internal skeletal morphological research with particular reference to bees

ABSTRACT A detailed protocol for chemical clearing of bee specimens is presented. Dry specimens as well as those preserved in liquid media can be cleared using this protocol. The procedure consists of a combined use of alkaline solution (KOH or NaOH) and hydrogen peroxide (H2O2), followed by the boiling of the cleared specimens in 60–70% EtOH. Clearing is particularly useful for internal skeletal morphological research. This procedure allows for efficient study of internal projections of the exoskeleton (e.g., apodemes, furcae, phragmata, tentoria, internal ridges and sulci), but this process makes external features of the integument, as some sutures and sulci, readily available for observation as well. Upon completion of the chemical clearing process the specimens can be stored in glycerin. This procedure was developed and evaluated for the preparation of bees and other Apoidea, but modifications for use with other insect taxa should be straightforward after some experimentation on variations of timing of steps, concentration of solutions, temperatures, and the necessity of a given step. Comments on the long-term storage, morphological examination, and photodocumentation of cleared specimens are also provided.

Boro total e solúvel e suas relações com alguns atributos dos solos do estado do Ceará

Foram avaliados os teores de boro total e solúvel, por meio de três extratores, usados como índices de disponibilidade para as plantas, e suas relações com as propriedades do solo em unidades de mapeamento representativas do estado do Ceará. Utilizaram-se 48 amostras compostas da camada superficial (0-20 cm) de solos classificados como: Areia Quartzosa (AQd), Aluvial (Ae), Planossolo (PL), Bruno Não-Cálcico (NC), Cambissolo (Ce), Podzólico Vermelho-Amarelo (PV), Latossolo Vermelho-Amarelo (LV) e Litossolo (Re). O boro total foi determinado após fusão com carbonato de sódio, e o boro solúvel por meio dos extratores: água quente, HCl 0,05 mol L-1 e Mehlich-1. O B total variou entre 8,3 e 52,2 mg kg-1, com média geral de 16,0 mg kg-1, verificando-se as menores médias nos solos NC, Re e AQd e as maiores nos solos LV, PL e PV. Os teores de B solúvel variaram entre 0,22 e 1,22 mg kg-1, com média de 0,60 mg kg-1, na água quente; entre 0,21 e 1,24 mg kg-1, com média de 0,53 mg kg-1, no HCl 0,05 mol L-1; e entre 0,50 e 1,81 mg kg-1, com média de 1,07 mg kg-1, no Mehlich-1, representando 3,76; 3,32 e 6,76% do B total, respectivamente. As menores médias foram apresentadas pelos solos AQd e LV, e as maiores pelo Ce. Os três extratores correlacionaram-se de forma positiva e altamente significativa. O B total e a matéria orgânica explicaram 28,8 e 38,3% do B extraído pela água quente, respectivamente. O conteúdo de argila, os óxidos de Mn e os sesquióxidos de Fe e Al amorfos e cristalinos influenciaram em menor proporção. A inclusão dessas características numa análise de regressão múltipla melhorou os coeficientes de correlação.

Culturas de cobertura, acúmulo de nitrogênio total no solo e produtividade de milho

A associação de preparos conservacionistas com culturas de cobertura é importante estratégia de melhoria da qualidade do solo. Quando leguminosas são utilizadas, verifica-se incremento na disponibilidade de nitrogênio (N) para a primeira cultura em sucessão (efeito imediato). Todavia, o uso de leguminosas por vários anos pode se refletir no incremento da capacidade do solo em suprir N (efeito residual). Com o objetivo de distinguir o efeito residual do efeito imediato do uso de culturas de cobertura foi realizada esta pesquisa. Utilizou-se um experimento de longa duração (1985 a 1995) instalado na Estação Experimental Agronômica da UFRGS, RS. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados com parcelas subsubdivididas e três repetições. As parcelas principais incluíram três sistemas de preparo: convencional, reduzido e direto; as subparcelas abrangeram três sistemas de cultura: aveia/milho (A/M), aveia + ervilhaca/milho (A + E/M) e aveia + ervilhaca/milho+caupi (A + E/M + C) e as subsubparcelas doses de N. O solo da área experimental é um Podzólico Vermelho-Escuro. No ano desta pesquisa (1995), os sistemas de cultura utilizados foram aveia/milho, ervilhaca/milho e aveia + ervilhaca/milho. Visando avaliar o efeito residual do uso de culturas de cobertura, um segmento da parcela foi mantido descoberto durante o inverno que antecedeu o cultivo do milho. A associação de preparos conservacionistas (reduzido e direto) com o uso de leguminosas aumentou o estoque de N total na camada superficial do solo. O efeito residual das leguminosas no sistema A + E/M + C promoveu incrementos de 26 e 19% na quantidade de N absorvido e rendimento de grãos, respectivamente, em relação ao histórico de uso de A/M. Contudo, a presença de resíduos de ervilhaca ainda foi a principal responsável pelo fornecimento de N ao milho (efeito imediato).

C-orgânico, N-total e substâncias húmicas sob influência da introdução de pastagens (Brachiaria sp.) em áreas de cerrado e floresta amazônica

O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da intervenção humana na remoção da cobertura original e seu posterior uso agrícola, pela introdução de pastagem (Brachiaria sp) na região do cerrado (Senador Canedo-GO), junto à Empresa Goiana de Pesquisa Agropecuária (EMGOPA), e da floresta amazônica (Porto Velho-RO), junto à Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), tendo como atributos principais de análises modificações nos teores de nitrogênio total, carbono orgânico, relação C/N e frações de ácidos fúlvicos, ácidos húmicos e humina. As amostras foram coletadas em setembro de 1995, em Latossolo Vermelho-Amarelo argiloso, ao longo de uma transeção que continha 24 pontos: 12 sob vegetação natural e 12 sob pastagem plantada, em duas profundidades, em ambos os ecossistemas. Os resultados permitiram observar uma diminuição nas concentrações de ácido fúlvico e humina e nos teores de N-total e C-orgânico na mudança da condição de vegetação natural para pastagem; os maiores valores foram encontrados no horizonte Ao, principalmente no solo sob floresta amazônica, revelando uma queda brusca deste para o subjacente, evidenciando o efeito do tipo da cobertura vegetal sobre o teor e sobre a distribuição dos componentes orgânicos em solos tropicais.

Teor total e capacidade máxima de adsorção de chumbo em Latossolos brasileiros

O teor total e a capacidade máxima de adsorção de chumbo (Pb) dos solos são influenciados pelos seus atributos físicos, químicos e mineralógicos e o seu conhecimento é de fundamental importância para estudos da dinâmica do Pb no meio ambiente. Neste estudo, determinaram-se o teor total e a capacidade máxima de adsorção de Pb (CMAPb) de Latossolos de várias regiões geográficas do Brasil e correlacionaram-se os valores de CMAPb com os seus atributos físicos, químicos e mineralógicos. O teor total variou de 6,14 a 30,55 mg kg-1, com média de 18,00 mg kg-1, verificando-se os maiores teores em solos das regiões sul e sudeste. A CMAPb variou de 2.115 a 19.465 mg kg-1, com média de 11.296 mg kg-1, apresentando correlação negativa com as relações Al2O3/Fe2O3 e Gt/(Gt + Hm) e correlação positiva com Si e Fe, extraídos por ataque sulfúrico, Fe, extraído pelo oxalato ácido de amônio e ditionito-citrato-bicarbonato de sódio, caulinita e hematita, bem como com os valores de CTC e superfície específica. Os solos estudados apresentaram grande capacidade de retenção de Pb, tendo os Latossolos Roxos e Latossolos Vermelho-Escuros apresentado maiores CMAPb que os Latossolos Vermelho-Amarelos e Latossolo Amarelo. Adicionalmente, a maioria dos solos apresentou CMAPb maior que a CTC a pH 7,0, o que pode ser um indicativo de que parte do Pb é adsorvido como complexo de esfera interna.

Importância das espécies minerais no potássio total da fração argila de solos do Triângulo Mineiro

Poucos trabalhos relacionam a reserva de K em solos desenvolvidos sob clima tropical úmido com os minerais presentes na fração argila. Com esse propósito, coletaram-se amostras de 19 solos no Triângulo Mineiro, originados de diferentes materiais de origem e estádios de desenvolvimento. Dada a significativa ocorrência, tomou-se maior número de amostras no Grupo Bauru, abrangendo todas as formações geológicas encontradas na região. Os teores totais de K foram determinados após digestão das amostras de terra fina e das frações areia, silte e argila com ácidos concentrados (HF, HNO3 e H2SO4). Para avaliar a contribuição de cada espécie mineral nos teores totais de K, amostras da fração argila saturadas por Na foram submetidas a extrações seqüenciais e seletivas de minerais, na seguinte ordem: extração de Al e óxidos de Fe de baixa cristalinidade; extração de óxidos de Fe mais cristalinos; extração de gibbsita e caulinita; extração de minerais do tipo 2:1; extração de feldspatos e minerais resistentes. A composição mineralógica da fração argila refletiu o intenso grau de intemperismo e lixiviação dos solos do Triângulo Mineiro, com baixos teores de minerais de baixa cristalinidade, predomínio de caulinita e presença de outros minerais secundários resistentes. Mesmo com essa mineralogia, a fração argila apresentou o maior teor de K total, principalmente para os solos mais intemperizados. Considerando a abundância de caulinita na fração argila, este mineral foi uma importante fonte de formas não-trocáveis do nutriente. Por outro lado, a contribuição dos óxidos de Fe e de Al de baixa cristalinidade e dos óxidos de Fe mais cristalinos nos teores totais de K da fração argila foi inexpressiva. Em geral, os minerais primários facilmente intemperizáveis (mica e feldspato) contribuíram em grande proporção para o K total da fração argila, principalmente para os solos mais jovens desenvolvidos de arenito da Formação Uberaba, migmatito/micaxisto do Grupo Araxá e basalto da Formação Serra Geral.

A software to calculate soil hydraulic conductivity in internal drainage experiments (SHC, Version 2.00)

A software for the calculation of unsaturated soil hydraulic conductivity K(theta) is presented for commonly used methods found in the literature, based on field experiments in which a soil profile is submitted to water infiltration followed by internal drainage. The software is available at: dourado@esalq.usp.br.

Correlação linear e espacial entre a produtividade de forragem, a porosidade total e a densidade do solo de Pereira Barreto (SP)

Em relação aos sistemas de manejo adotados pelo homem, a porosidade total e a densidade do solo são atributos ativamente alterados, refletindo decisivamente sobre a produtividade vegetal agrícola. No ano agrícola de 2005, na Fazenda Bonança, no município de Pereira Barreto, Estado de São Paulo, Brasil, foram analisadas a produtividade de forragem do milho outonal (MSF) no sistema plantio direto irrigado, a porosidade total (PT) e a densidade do solo (DS) em profundidade, em um Latossolo Vermelho distrófico. O objetivo foi estudar a variabilidade e as correlações lineares e espaciais entre os atributos da planta e do solo, visando selecionar um indicador da qualidade física do solo de boa representatividade para produtividade da forragem. Foi instalada a malha geoestatística, para coleta de dados do solo e planta, contendo 125 pontos amostrais, numa área de 2.500 m². Os atributos estudados, além de não terem variado aleatoriamente, apresentaram variabilidade dos dados entre média e baixa e seguiram padrões espaciais bem definidos, com alcance entre 6,8 e 23,7 m. Por sua vez, a correlação linear entre o atributo da planta e os do solo, em razão do elevado número de observações, foi baixa. As observações de melhor correlação com a MSF foram a DS1 e a PT1. Entretanto, do ponto de vista espacial, houve excelente correlação inversa entre a MSF e a DS1, assim como entre a DS1 e a PT1. Nos sítios onde a DS1 aumentou (1,45-1,64 kg dm-3) a MSF variou entre 11.653 e 14.552 kg ha-1; já naqueles onde diminuiu (1,35-1,45 kg dm-3) a MSF, ficou entre 14.552 e 17.450 kg ha-1. Portanto, a densidade global, avaliada na camada de 0-0,10 m (DS1), apresentou-se como satisfatório indicador da qualidade física do solo de Pereira Barreto (SP), quando destinado à produtividade de forragem do milho outonal.

Comparação de métodos de determinação de carbono orgânico total no solo

O teor de C orgânico total do solo (COT) pode ser determinado por métodos que se baseiam nos princípios de combustão a seco e combustão úmida. Ambos apresentam inconvenientes, principalmente o de combustão úmida, que exige grande quantidade de reagentes, gerando, por conseqüência, alta quantidade de resíduos tóxicos que contêm Cr. O método denominado Mebius no bloco de digestão (Mebius no bloco) permite a diminuição do uso de dicromato de potássio em análises de solo. Nesse sentido, o presente estudo objetivou verificar a precisão e exatidão do método Mebius no bloco em relação a outros de combustão úmida e o de combustão a seco. O trabalho foi realizado na Universidade Federal de Santa Maria, em duas etapas: os teores de COT foram determinados em 18 amostras de duas camadas (0-5 e 5-10 cm) de um Latossolo Vermelho distrófico típico com diferentes usos. Os métodos usados foram Walkley-Black, Mebius modificado, Mebius no bloco e por captura de CO2; os teores de COT foram determinados por combustão a seco e Mebius no bloco em 75 amostras coletadas nos horizontes A1 (0-7,5 e 7,5-15 cm), A2, E e Bt de um Argissolo Vermelho-Amarelo distrófico abrúptico submetido a cinco sistemas de manejo e três repetições. A precisão apresentada pelos métodos de combustão úmida é similar e com coeficiente de variação abaixo de 10 %, com exceção do método de captura de CO2, que apresentou valores de COT inferiores aos dos demais e com maior coeficiente de variação. O método Mebius no bloco permite processar maior número de amostras por tempo, com menor consumo de reagentes, e seus resultados apresentam boa precisão (coeficiente de variação menor que 2,60 %) entre os métodos de combustão úmida testados. Um fator de correção de 1,14 deverá ser aplicado aos resultados obtidos pelo método Mebius no bloco para equivaler aos obtidos por combustão a seco (analisador elementar de carbono).