Inactivation of Staphylococcus aureus and Salmonella enteritidis in tryptic soy broth and caviar samples by high pressure processing

We studied the action of high pressure processing on the inactivation of two foodborne pathogens, Staphylococcus aureus ATCC 6538 and Salmonella enteritidis ATCC 13076, suspended in a culture medium and inoculated into caviar samples. The baroresistance of the two pathogens in a tryptic soy broth suspension at a concentration of 10(8)-10(9) colony-forming units/ml was tested for continuous and cycled pressurization in the 150- to 550-MPa range and for 15-min treatments at room temperature. The increase of cycle number permitted the reduction of the pressure level able to totally inactivate both microorganisms in the tryptic soy broth suspension, whereas the effect of different procedure times on complete inactivation of the microorganisms inoculated into caviar was similar.

Hospital strain colonization by Staphylococcus epidermidis

The skin and mucous membranes of healthy subjects are colonized by strains of Staphylococcus epidermidis showing a high diversity of genomic DNA polymorphisms. Prolonged hospitalization and the use of invasive procedures promote changes in the microbiota with subsequent colonization by hospital strains. We report here a patient with prolonged hospitalization due to chronic pancreatitis who was treated with multiple antibiotics, invasive procedures and abdominal surgery. We studied the dynamics of skin colonization by S. epidermidis leading to the development of catheter-related infections and compared the genotypic profile of clinical and microbiota strains by pulsed field gel electrophoresis. During hospitalization, the normal S. epidermidis skin microbiota exhibiting a polymorphic genomic DNA profile was replaced with a hospital-acquired biofilm-producer S. epidermidis strain that subsequently caused repetitive catheter-related infections.

The first report in Brazil of severe infection caused by community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus (CA-MRSA)

Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus (CA-MRSA) is an emergent pathogen in Brazil. However, there are no data on the prevalence of CA-MRSA. We report here the first well-characterized case of severe life-threatening CA-MRSA infection in a child living in Rio de Janeiro city. The patient had many complications including hematogenous osteomyelitis and involvement of multiple sites requiring drainage of soft-tissue abscess, and pleural and pericardial empyema. The MRSA isolates recovered were genotyped using PFGE, SCCmec typing and multilocus sequence typing. Disk diffusion tests were performed following Clinical and Laboratory Standards Institute recommendations. In addition, the presence of Panton-Valentine leukocidin (PVL) was assessed by PCR amplification, using specific primers for lukF-pv (encoding for the F subunit of the PVL). The bacterial isolates were related to the ST30-SCCmecIV lineage (Oceania Southwest Pacific clone), a PVL producer CA-MRSA previously detected in Porto Alegre, RS, Brazil. Also, the isolates analyzed were susceptible to all non-β-lactam antibiotics tested. The present report demonstrates that disseminated CA-MRSA disease is also occurring in Rio de Janeiro. Thus, the empirical treatment of moderate or severe infections suspected of being associated with CA-MRSA needs to be reviewed in order to allow prompt initiation of an effective therapy that also covers these microorganisms.

Genotyping of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates obtained in the Northeast region of Brazil

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is a major agent of hospital infections worldwide. In Brazil, a multiresistant MRSA lineage (ST239-SCCmecIIIA), the so-called Brazilian epidemic clone (BEC), has predominated in all regions. However, an increase in nosocomial infections caused by non-multiresistant MRSA clones has recently been observed. In the present study, 45 clinical isolates of MRSA obtained from a university hospital located in Natal city, Brazil, were identified by standard laboratory methods and molecularly characterized using staphylococcal chromosome cassette mec (SCCmec) typing and pulsed-field gel electrophoresis. Antimicrobial susceptibility testing was carried out using CLSI methods. The MRSA isolates studied displayed a total of 8 different pulsed-field gel electrophoresis patterns (types A to H) with predominance (73%) of pattern A (BEC-related). However, MRSA harboring SCCmec type IV were also identified, 3 (7%) of which were genetically related to the pediatric clone - USA800 (ST5-SCCmecIV). In addition, we found a considerable genetic diversity within BEC isolates. MRSA displaying SCCmecIV are frequently susceptible to the majority of non-β-lactam antibiotics. However, emergence of multiresistant variants of USA800 was detected.

Emergence of clonal complex 5 (CC5) methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates susceptible to trimethoprim-sulfamethoxazole in a Brazilian hospital

In this study, genotyping techniques including staphylococcal chromosomal cassette mec (SCCmec) typing, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST) and restriction-modification tests were used to compare the molecular characteristics of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates recovered at two times within a 10-year interval (1998 and 2008) from a tertiary Brazilian hospital. In addition, the antimicrobial susceptibility profiles were analyzed. All 48 MRSA isolates from 1998 and 85.7% from 2008 (48/56 isolates) displayed multidrug-resistance phenotypes and SCCmec III. All but one of the 13 representative SCCmec III isolates belonged to CC8 and had PFGE patterns similar to that of the BMB9393 strain (Brazilian epidemic clone of MRSA; BEC). In 2008, we found an increased susceptibility to rifampicin and chloramphenicol among the SCCmec III isolates. In addition, we detected the entrance of diverse international MRSA lineages susceptible to trimethoprim-sulfamethoxazole (SXT), almost all belonging to CC5. These non-SCCmec III isolates were related to the USA 300 (ST8-SCCmec IV; PFGE-type B), USA 800 (ST5-SCCmec IV; subtype D1), USA 100 (ST5-SCCmec II; subtype D2), and EMRSA-3/Cordobes (ST5-SCCmec I, type C) clones. To the best of our knowledge, this is the first report of the emergence of isolates genetically related to the EMRSA-3/Cordobes clone in southeast Brazil. In this regard, these isolates were the most common non-SCCmec III MRSA in our institution, accounting for 8.9% of all isolates recovered in 2008. Thus, despite the supremacy of BEC isolates in our country, significant changes may occur in local MRSA epidemiology, with possible consequences for the rationality of MRSA empiric therapy.

Optimization of the RNeasy Mini Kit to obtain high-quality total RNA from sessile cells of Staphylococcus aureus

Biofilm formed by Staphylococcus aureus is considered an important virulence trait in the pathogenesis of infections associated with implantable medical devices. Gene expression analyses are important strategies for determining the mechanisms involved in production and regulation of biofilm. Obtaining intact RNA preparations is the first and most critical step for these studies. In this article, we describe an optimized protocol for obtaining total RNA from sessile cells of S. aureus using the RNeasy Mini Kit. This method essentially consists of a few steps, as follows: 1) addition of acetone-ethanol to sessile cells, 2) lysis with lysostaphin at 37°C/10 min, 3) vigorous mixing, 4) three cycles of freezing and thawing, and 5) purification of the lysate in the RNeasy column. This simple pre-kit procedure yields high-quality total RNA from planktonic and sessile cells of S. aureus.

CONTROLE DE Staphylococcus aureus EM CHARQUES (JERKED BEEF) POR CULTURAS INICIADORAS

Jerked beef - JB - é um produto cárneo curado, salgado e seco ao sol, derivado de um típico produto cárneo brasileiro - o charque. Ambos carecem de estudos que orientem seu aprimoramento. Staphylococcus spp. têm sido reportado como o gênero predominante na microbiota do produto, o que evidencia o risco de desenvolvimento de linhagens enterotoxigênicas de S. aureus. Foram empregadas duas linhagens inócuas de estafilococos na elaboração de JB, a fim de avaliar sua influência sobre o desenvolvimento de S. aureus por mecanismo competitivo ou pela produção de bacteriocinas. Os resultados demonstraram que ambas inibiram o desenvolvimento do patógeno tanto in vitro como durante o processamento do produto. Não se observou produção de compostos inibitórios pelas linhagens iniciadoras, ficando a explicação para a inibição observada restrita ao mecanismo competitivo. Este trabalho permitiu demonstrar a possibilidade de aumentar a segurança e padronização de JB pelo emprego de culturas bacterianas selecionadas.

Staphylococcus enterotoxigênicos em alimentos in natura e processados no estado de Pernambuco, Brasil

A contaminação de alimentos tem aumentado a cada ano, e atualmente representa um risco potencial para a saúde humana. Staphylococcus spp. foi isolado de alimentos processados e in natura e identificados através dos teste de Gram, catalase, coagulase, DNAase, termonuclease, acetoína (VP) e metabolismo de carboidratos (glicose, maltose e manitol). Foram selecionadas cepas com evidente reação de termonuclease, e realizada análise de enterotoxinas estafilocócicas, por teste imunoenzimático (VIDAS - Staph Enterotoxin - bioMerieux). Reação positiva de enterotoxinas estafilocócicas foram produzidas por S. aureus em camarão, queijo de coalho e macarrão e S. intermedius em peixe cozido e pasta de alho. Observou-se SCP (EstafilococosCoagulase Positiva) em queijo de coalho. Contaminação por Staphylococcus spp.ocorreu durante os estágios de produção ou na estocagem dos alimentos, produzindo toxinas. Conclui-se que estes alimentos representam risco à saúde humana se não forem observadas práticas adequadas de higiene no seu manuseio e no armazenamento.

Enterotoxigenicidade de Staphylococcus spp. isolados de leite in natura

Os alimentos são passíveis de contaminação por diferentes agentes etiológicos, podendo levar a doenças manifestadas por ação de microorganismos patogênicos ou suas toxinas. Pesquisou-se a ocorrência de cepas de Staphylococcus, assim como a sua capacidade para produção de enterotoxinas em leite produzido e/ou comercializado no Estado de Pernambuco, Brasil. Foram isoladas e selecionadas 109 cepas de Staphylococcus coagulase positiva e negativa de leite in natura. A identificação das cepas isoladas foi realizada por meio de testes morfológicos e bioquímicos, como: testes de catalase, coagulase, hemólise, DNAse, termonuclease, produção de acetoína (VP) e metabolismo de carboidratos (glicose, maltose e manitol). Das 77 cepas coagulase positivas foram identificadas S. aureus (30), S. hyicus (3), S. intermedius (16), S. aureus identificação presuntiva (13) e Estafilococos Coagulase Positiva (SCP) (15). Das 32 cepas coagulase negativa foram identificadas S. capitis (2), S. carnosus (1), S. chromogenes (6), S. hyicus (1), S. schleiferi (1) e Estafilococos Coagulase Negativa (SCN) (21). Foram selecionadas 43 cepas que apresentaram reações de termonuclease evidentes, para análise de enterotoxinas estafilocócicas, realizada pelo teste imunoenzimático ELISA. Os resultados obtidos evidenciaram dez cepas com reação negativa para enterotoxinas: S. aureus (4), S. carnosus (1), S. chromogenes (2), S. hyicus (2) e S. intermedius (1). Entre as cepas enterotoxina positiva, foram encontrados: S. aureus (17), S. chromogenes (2), S. hyicus (1), S. intermedius (8), S. aureus identificado presuntivamente (2), cepas do grupo SCP (1) e as do SCN (2). As espécies que apresentaram maior número de linhagens enterotoxigênicas foram: S. aureus e S. intermedius. Esses resultados podem ser atribuídos à manipulação inadequada do leite e/ou à recontaminação durante o seu armazenamento e distribuição.

Quantificação de coliformes, Staphylococcus aureus e mesófilos presentes em diferentes etapas da produção de queijo frescal de leite de cabra em laticínios

O objetivo do presente estudo foi acompanhar a produção de queijo frescal de leite de cabra, avaliando a qualidade higiênica do processamento pela quantificação de coliformes, S. aureus e mesófilos totais. A produção de três diferentes lotes de queijo foi acompanhada, sendo coletadas amostras de várias etapas do processamento. Além disso, amostras de queijo pertencente ao lote acompanhado foram coletadas na prateleira de um estabelecimento comercial durante seu período de validade. Os suabes coletados foram semeados em ágar sangue ovino; as amostras de água foram submetidas à Colimetria; as demais amostras foram submetidas à contagem de S. aureus, coliformes e mesófilos totais por meio de protocolos de rotina. Verificou-se que, apesar da pasteurização ter diminuído consideravelmente as populações microbianas presentes no leite cru, a falta de sanificação adequada de um equipamento que entrava em contato com o leite cru e que dá acesso ao tanque de coagulação, resultou na recontaminação da matéria-prima. Ao final do processamento, o queijo encontrava-se dentro dos padrões exigidos pela legislação, contudo a elevada contagem de mesófilos totais sugere que sejam melhoradas as medidas de sanitização durante o processamento, a fim de garantir a qualidade higiênica e uma maior vida de prateleira ao queijo produzido.

Atividade de água, pH, umidade e desenvolvimento de Staphylococcus xylosus durante o processamento e armazenamento da paleta suína curada, maturada e fermentada

Dez peças de paletas suínas sem pele e sem osso, pesando em média 1,6 kg, receberam injeção de salmoura (20% p.v -1) contendo cultura de Staphylococcus xylosus e permaneceram dentro de uma câmara durante 30 dias à temperatura de 4 a 9 °C e umidade de 55 a 45% controladas. Em seguida, foram embaladas a vácuo e armazenadas durante 120 dias a 10 °C. Desde o início da produção até o final do armazenamento, as amostras foram coletadas da superfície e da parte interna das peças de paleta suína, em triplicata, para realização das análises de atividade de água, pH, umidade e contagem da cultura de S. xylosus, com objetivo de caracterizá-las e verificar as possíveis associações com ações exercidas em outros produtos cárneos fermentados. Durante a etapa de armazenamento, os valores de umidade e pH obtidos na parte interna dos tratamentos ficaram dentro dos parâmetros recomendados para presunto curado. A cultura adicionada apresentou melhor desenvolvimento na parte interna da paleta. A temperatura de armazenamento recomendada para a paleta seria entre 5 e 10 °C, uma vez que os valores de pH foram maiores que 5,2 e os de a w menores que 0,91.

Quality of mussels cultivated and commercialized in Ubatuba, SP, Brazil: monitoration Bacillus cereus and Staphylococcus aureus growth after post-harvest processing

Aiming at improving the quality of Perna perna mussels cultivated and commercialized in Ubatuba, SP, Brazil, the growth and elimination of Staphylococcus aureus and Bacillus cereus artificially inoculated in mussels were studied. The inoculation was carried out in "in natura" and pre-cooked mussels for 30 min, and after that the mussels were kept for 10 hours at room temperature (25 ± 1 °C) and under refrigeration (7 ± 1 °C). Six thermal treatments were evaluated: three using steam (5, 10 and 15 minutes) and three in boiling water (5, 10 and 15 minutes), in order to find the best time/temperature binomial to provide pathogenic control. Yield and physical-chemical and sensory characteristics were evaluated. All thermal treatments were efficient to eliminate microorganisms in 2 logarithmic cycles. However, the boiling water treatments presented better results than the steam treatments. The physical-chemical and sensory analyses did not show statistical differences among the thermal treatments studied. The best performances were reached in the shortest times of heat exposure. Overall, the treatments in boiling water presented better results than the steam treatments.

Theoretical modelling of Staphylococcus aureus growth in a cooked meat product kept at ambient temperature using temperature profiles of selected Mexican cities

A theoretical model is used to predict the growth of Staphylococcus aureus in a pasteurized meat product kept at ambient temperatures for several hours. For this purpose, the temperature profiles of some cities of Mexico were combined with literature data on the kinetics of S. aureus growth. As shown by theoretical predictions, if the food is kept at ambient temperature, the average daily temperature may not give accurate predictions.

Detecção de genes toxigênicos em amostras de Staphylococcus spp. isoladas de queijos de coalho

Objetivou-se com este trabalho isolar quantificar e investigar em amostras de Staphylococcus spp. isoladas de queijos de coalho, a presença dos genes toxigênicos sea-see, seg-sej, tst, eta e etb através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Foram verificadas contagens de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) variando de 10² a 10(6) UFC.g-1. Os genes toxigênicos tst, sec, sed, seg, seh, sei e sej foram identificados em 18 dos 20 isolados de Staphylococcus spp. com os seguintes percentuais 5, 11, 9, 20, 16, 25 e 14% respectivamente. A presença de elevado percentual de isolados contendo diferentes genes toxigênicos é preocupante para a saúde do consumidor pela possibilidade de produzirem toxinas responsáveis por intoxicações alimentares. A ocorrência de vários genes toxigênicos em amostras de Staphylococcus coagulase negativa é outro fato importante, pois no Brasil não existe legislação com determinação de limites para Staphylococcus coagulase negativa em alimentos.

Formação de biofilme em aço inoxidável por Aeromonas hydrophila e Staphylococcus aureus usando leite e diferentes condições de cultivo

O objetivo desta pesquisa consistiu em avaliar a formação de biofilme em aço inoxidável por Aeromonas hydrophila e Staphylococcus aureus usando leite e diferentes condições de cultivo. As variáveis em estudo consistem no cultivo monoespécie e combinado, dos referidos microrganismos e nas temperaturas de 4, 7 e 18 °C. Recipientes contendo 1000 mL de leite, densidade populacional de 10(5) UFC.mL-1 de cada microrganismo e 10 cupons de aço inoxidável (10 × 20 mm) foram lacrados e armazenados, sob agitação de 60 rpm, por um período de 10 dias. As análises ocorreram a cada 48 horas. Células sésseis de A.hydrophila e S. aureus foram enumeradas através do plaqueamento seletivo em ágar m-Aeromonas selective e Baird-Parker, respectivamente. Estudos sobre o tempo de geração, enumeração de células planctônicas e observação dos cupons através da microscopia eletrônica de varredura foram conduzidos. S. aureus, em monocultivo, formou biofilme a 18 °C e a 7 °C. Para 4 °C, foi observado um processo de adesão. A presença de A. hydrophila reduziu o desempenho de S. aureus. Nesta condição de cultivo multiespécie houve formação de biofilme a 18 °C. A. hydrophila, tanto em monocultivo quanto em presença de S. aureus, formou biofilme em todas as condições pesquisadas.