Efeitos de resíduos da parte aérea de sorgo, milho e aveia na emergência e no desenvolvimento de plântulas de leiteiro (Euphorbia heterophylla) resistentes a inibidores da ALS

Populações de Euphorbia heterophylla resistentes (R) aos herbicidas inibidores da enzima acetolactato sintase encontram-se amplamente disseminadas em várias regiões do Brasil. Resíduos culturais de várias espécies apresentam elevado potencial para suprimir o desenvolvimento de plantas daninhas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de diferentes níveis de resíduos das partes aéreas de sorgo, milho e aveia na supressão de E. heterophylla resistente a herbicidas. Foram realizados dois experimentos em vasos com delineamento experimental completamente casualizado, com quatro repetições. No primeiro, os tratamentos foram arranjados em fatorial 4x6, em que o fator A representou três híbridos de sorgo (AG-2501, Dow 1P-400 e BR-501) e um de milho (AG-3010); e o fator B, seis níveis de resíduos na superfície do solo (0, 3,25, 6,5, 9,75, 13 e 26 t ha-1). Os tratamentos do segundo experimento foram arranjados em fatorial 2 x 6, em que A representou as espécies (sorgo e aveia) e B os níveis de resíduos (0, 1,12, 3,25, 6,5, 13 e 26 t ha-1). A emergência das plantas de E. heterophylla foi atrasada e reduzida. Estimou-se que seriam necessárias 28,6 t ha-1 de palha de sorgo para causar redução de 50% na emergência de plântulas. O número de folhas diminuiu com a elevação dos níveis de resíduos da parte aérea de sorgo e milho. Níveis intermediários de resíduos de Dow 1P-400 reduziram mais o IVE do que os outros híbridos de sorgo, entretanto não houve diferenças entre genótipos quanto à emergência de plântulas. Resíduos da parte aérea de aveia não foram eficazes em reduzir a emergência de E. heterophylla.

Impacto da temperatura, irradiância e profundidade das sementes na emergência e germinação de Conyza bonariensis e Conyza canadensis resistentes ao glyphosate

O uso intenso de glyphosate em sistemas de produção de frutíferas e soja - em especial no sistema de semeadura direta da soja - favoreceu a seleção de biótipos resistentes ao glyphosate em Conyza bonariensis e C. canadensis (buva). Estudos da biologia destas espécies subsidiariam a proposição de estratégias visando o seu manejo integrado. Um programa de pesquisa foi desenvolvido com o objetivo de avaliar como a germinação das duas espécies foi influenciada pelas populações, composição do substrato de semeadura, profundidade da semente no perfil do substrato, temperatura e luz. Num primeiro experimento, os tratamentos foram organizados em esquema fatorial, em que o fator A consistiu das populações (duas de cada espécie), o fator B foi atribuído à composição do substrato (terra, areia e terra:areia) e o fator C foram as profundidades no perfil do substrato (0, 0,5, 1, 2 e 5 cm). No segundo experimento, foram testados o fator A; o fator B, que foi a temperatura (constante de 20, 25 ou 30 ºC, e alternada: 20/30 ºC); e o fator C, a condição luminosa (luz, escuro). No terceiro experimento, os fatores consistiram de espécies e temperatura (10, 15, 20, 25 e 30 ºC). Avaliaram-se a emergência de plântulas ou a germinação de sementes aos 12 dias após a instalação do experimento. De acordo com os resultados, chegou-se às seguintes conclusões: todos os biótipos das duas espécies tiveram emergência semelhante em relação ao perfil do solo; o aumento da profundidade da semente no perfil do solo reduziu a emergência de plântulas; o substrato arenoso favoreceu a germinação de sementes posicionadas a 0,5 e a 1,0 cm de profundidade; as duas espécies são fotoblásticas positivas; a temperatura ótima para germinação das espécies foi de 20 ºC, mas C. canadensis apresentou germinação melhor em temperaturas inferiores à ótima e C. bonariensis germinou melhor em temperaturas superiores a esta.

Prospección de las combinaciones de herbicidas para prevenir malezas tolerantes y resistentes al glifosato

El intenso empleo de glifosato contribuyó a la difusión de malezas con tolerancia a este herbicida, incluyendo especies como Ipomoea nil, bejuco en Argentina, o corriola, o corda-de-viola en Brasil. A su vez, el uso intensivo de imadozolinonas en ciertas regiones de Argentina contribuyó a la aparición de biotipos resistentes a herbicidas que actúan inhibiendo la enzima ALS como Amaranthus quitensis, yuyo colorado o ataco, conocido como carurú en Brasil. En ese país, también, aumentó la difusión de malezas con resistencia a glifosato como en Euphorbia heterophylla, leiteiro o amendoim-bravo y en Lolium multiflorum, azevém. El objetivo de esta investigación fue evaluar el antagonismo o el sinergismo de todas las combinaciones posibles entre dos de los siguientes herbicidas: glifosato, imazetapir, clomazone y lactofen, en el control de las malezas mencionadas. Biotipos susceptibles para todos herbicidas fueran usados en la investigación. Plántulas de yuyo colorado juveniles con dos cm de altura y de las otras malezas mencionadas con siete cm, fueron tratadas con los siguientes herbicidas en g ha-1 i.a.: glifosato 108; imazetapir 10; clomazone 160 y lactofen 30, aplicados solos. Otros seis tratamientos fueron incluidos en todas las combinaciones posibles entre dos de los herbicidas y dosis mencionados. También se empleó un testigo sin tratar. El efecto de la combinación de los herbicidas dependió de la especie evaluada y también de los herbicidas utilizados. Se obtuvo sinergismo solamente para la mezcla glifosato más imazetapir en ataco. Clomazone fue el herbicida con más antagonismo, y lactofen tuvo efecto neutro en la mayoría de las mezclas. Las combinaciones son consideradas potencialmente útiles en el control de malezas tolerantes o resistentes a glifosato.

Herbicidas alternativos para controle de biótipos de Conyza bonariensis e C. canadensis resistentes ao glyphosate

Após sucessivos anos, aplicações do herbicida glyphosate em pomares de citros no Estado de São Paulo selecionaram biótipos resistentes de Conyza bonariensis e C. canadensis. Na ocorrência de plantas daninhas resistentes em uma área agrícola, tornam-se necessárias mudanças nas práticas de manejo para obtenção de adequado controle das populações resistentes, bem como para a redução da pressão de seleção sobre outras espécies. Assim, este trabalho foi realizado com o objetivo de identificar herbicidas alternativos para controle de biótipos de Conyza spp. resistentes ao herbicida glyphosate, com aplicações em diferentes estádios fenológicos da planta daninha. Três experimentos foram conduzidos em campo, em pomares de citros em formação, sobre plantas de buva em estádio fenológico de dez folhas e no pré-florescimento. Para plantas no estádio de dez folhas, controle satisfatório foi obtido com aplicações de glyphosate + bromacil + diuron (1.440 + 1.200 + 1.200 g ha-1), glyphosate + atrazina (1.440 + 1.500 g ha-1) e glyphosate + diuron (1.440 + 1.500 g ha-1). Quando em estádio de pré-florescimento de Conyza spp., a aplicação do herbicida amônio-glufosinato, na dose de 400 g ha-1, isolado ou associado a MSMA, bromacil+diuron, metsulfuron, carfentrazone e paraquat, foi a alternativa viável para controle dos biótipos resistentes ao glyphosate.

Aspectos morfofisiológicos de biótipos de azevém (Lolium multiflorum) sensíveis e resistentes ao glyphosate

O azevém é uma gramínea com elevado potencial de infestação em lavouras e pomares, e seu controle com glyphosate tem sido limitado devido à existência de biótipos resistentes a esse herbicida. Objetivou-se comparar quatro biótipos de azevém coletados em diferentes regiões do Rio Grande do Sul, com o intuito de testar a hipótese de que aspectos morfofisiológicos e fenológicos estejam vinculados à resistência. O experimento foi conduzido em casa de vegetação, onde um biótipo suscetível (B1S, Passo Fundo) e três resistentes ao glyphosate (B2R, Santa Maria; B3R, Júlio de Castilhos; e B4R, Vacaria) foram colhidos aos 126, 147, 168 e 189 dias de idade. O biótipo B1S mostrou 21 dias de antecipação no florescimento em relação aos demais biótipos. O biótipo B4R produziu significativamente mais folhas (43 por planta), afilhos (14 por planta), espigas (14 por planta), sementes (3.484 por planta) e matéria seca total (raízes + parte aérea = 13,8 g por planta). Conclui-se que biótipos sensíveis não podem ser diferidos de biótipos resistentes apenas por aspectos morfológicos relacionados ao vigor.

Características fisiológicas de biótipos de Conyza bonariensis Resistentes ao glyphosate cultivados sob competição

A resistência de plantas daninhas a herbicidas está relacionada a modificações metabólicas, enzimáticas, fisiológicas e/ou anatômicas. Aliado a essas mudanças, a planta pode aumentar ou diminuir as atividades fisiológicas, o que, consequentemente, pode afetar o seu crescimento e desenvolvimento. Assim, biótipos resistentes podem apresentar melhor adaptação ecológica em ambientes de cultivo e tornar-se predominantes devido à eliminação das plantas sensíveis. Em condições de seleção natural, biótipos com maior adaptação ecológica apresentam maior produção que biótipos menos adaptados. Neste trabalho, avaliou-se o efeito da competição em características fisiológicas de biótipos de Conyza bonariensis suscetíveis e resistentes ao herbicida glyphosate. Os tratamentos constaram de plantas de dois biótipos de C. bonariensis - um comprovadamente resistente e um suscetível ao glyphosate, dispostas em modelo aditivo de estudo de competição. No centro da unidade experimental foram semeadas três sementes do biótipo considerado como o tratamento: resistente (R) ou suscetível (S), sendo essa planta rodeada por 0 (testemunha sem competição), 1, 2, 3, 4, ou 5 plantas do biótipo oposto. O biótipo suscetível apresentou-se mais tolerante à competição com plantas do biótipo oposto no tocante às características fisiológicas avaliadas. O biótipo resistente de buva apresenta desvantagem fisiológica em relação ao suscetível e, consequentemente, menor potencial de adaptabilidade na ausência do fator de seleção - o herbicida glyphosate.

CARACTERIZAÇÃO MORFOANATÔMICA, CONTAGEM CROMOSSÔMICA E VIABILIDADE POLÍNICA DE BIÓTIPOS DE AZEVÉM SUSCETÍVEL E RESISTENTES AO HERBICIDA GLYPHOSATE

RESUMOO azevém é uma planta daninha de ciclo anual, encontrada em praticamente todas as lavouras de inverno, em pomares e vinhedos da região Sul do Brasil. A espécie é normalmente controlada pelo herbicida glyphosate, no entanto, o uso continuado desse produto selecionou biótipos resistentes. Diferenças na suscetibilidade do azevém a herbicidas têm sido atribuídas a características morfológicas, anatômicas e genéticas das plantas. Os objetivos deste trabalho foram realizar a caracterização morfoanatômica, adequar metodologia para a análise citológica de cromossomos e indicar corantes para testes de viabilidade polínica de biótipos de azevém suscetível e resistentes ao herbicida glyphosate. As sementes dos biótipos de azevém suspeitos de resistência provieram do município de São Valentin, RS (SVA 1 e SVA 4), e Passo Fundo, RS (PFU 5), e as do biótipo conhecidamente suscetível (SVA 2), de São Valentin. Os biótipos de azevém estudados que apresentam resistência ao herbicida glyphosate não podem ser diferenciados do biótipo suscetível através de aspectos morfológicos, não existindo diferenças anatômicas de folha e raiz que evidenciem possibilidade da absorção diferencial do herbicida glyphosate entre os biótipos de azevém. A metodologia para a análise citológica dos biótipos de azevém merece adequações para melhor nitidez dos cromossomos, podendo-se aumentar o tempo de hidrólise e de exposição ao agente antimitótico utilizado neste trabalho, bem como testar outros agentes. Todos os corantes apresentaram bom desempenho na determinação da viabilidade polínica frente aos biótipos avaliados, exceto o azul de tripan, que subestimou os resultados.

Typing of Enterococcus faecium by polymerase chain reaction and pulsed field gel electrophoresis

Polymerase chain reaction (PCR) with JB1 or REP consensus oligonucleotides and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) were used to study genomic DNA extracted from 31 strains of enterococci. Eleven ATCC strains, representative of 11 species of Enterococcus, were initially tested by JB1-PCR, revealing that Enterococcus malodoratus and Enterococcus hirae presented identical banding patterns. Eight Enterococcus faecium isolates from Stanford University and 12 from São Paulo Hospital were studied by JB1-PCR, REP-PCR 1/2R and PFGE. Among the isolates from Stanford University, 5 genotypes were defined by JB1-PCR, 7 by REP-PCR 1/2R and 4 by PFGE. Among the isolates from São Paulo Hospital, 9 genotypes were identified by JB1-PCR, 6 by REP-PCR and 5 by PFGE. The three methods identified identical genotypes, but there was not complete agreement among them.

Clonal dissemination of VanA-type glycopeptide-resistant Enterococcus faecalis between hospitals of two cities located 100 km apart

Nosocomial dissemination of glycopeptide-resistant enterococci represents a major problem in hospitals worldwide. In Brazil, the dissemination among hospitals in the city of São Paulo of polyclonal DNA profiles was previously described for vancomycin-resistant Enterococcus faecium. We describe here the dissemination of VanA phenotype E. faecalis between two hospitals located in different cities in the State of São Paulo. The index outbreak occurred in a tertiary care university hospital (HCUSP) in the city of São Paulo and three years later a cluster caused by the same strain was recognized in two patients hospitalized in a private tertiary care hospital (CMC) located 100 km away in the interior of the state. From May to July 1999, 10 strains of vancomycin-resistant E. faecalis were isolated from 10 patients hospitalized in the HCUSP. The DNA genotyping using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) showed that all isolates were originated from the same clone, suggesting nosocomial dissemination. From May to July 2002, three strains of vancomycin-resistant E. faecalis were isolated from two patients hospitalized in CMC and both patients were colonized by the vancomycin-resistant Enterococcus in skin lesions. All isolates from CMC and HCUSP were highly resistant to vancomycin and teicoplanin. The three strains from CMC had minimum inhibitory concentration >256 µg/ml for vancomycin, and 64 (CMC 1 and CMC 2) and 96 µg/ml (CMC 3) for teicoplanin, characterizing a profile of VanA resistance to glycopeptides. All strains had the presence of the transposon Tn1546 detected by PCR and were closely related when typed by PFGE. The dissemination of the E. faecalis VanA phenotype among hospitals located in different cities is of great concern because E. faecalis commonly colonizes the gastrointestinal tract of patients and healthy persons for periods varying from weeks to years, which, together with the persistence of vancomycin-resistant Enterococcus in hospital rooms after standard cleaning procedures, increases the risk of the dissemination and reservoir of the bacteria.

Enterococcus gallinarum carrying the vanA gene cluster: first report in Brazil

In 2000, Enterococcus faecalis resistant to vancomycin was first reported at a tertiary hospital in Porto Alegre, southern Brazil. The resistance spread to other hospitals and surveillance programs were established by hospital infection committees to prevent the spread of vancomycin-resistant enterococci. In February 2002, an isolate initially identified at the genus level as Enterococcus was obtained by surveillance culture (rectal swab) from a patient admitted to a hospital for treatment of septic arthritis in the shoulder. The isolate proved to be resistant to vancomycin by the disc diffusion method and confirmed by an E-test resulting in a minimal inhibitory concentration of > or = 256 µg/ml. This isolate was sent to a reference laboratory (Laboratório Especial de Bacteriologia e Epidemiologia Molecular, Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, USP) for further study and proved to be an E. gallinarum by the polymerase chain reaction (PCR) using specific primers for the species. Due to the phenotype of unusually high vancomycin resistance, the isolate presumably had the resistance genes (vanA and vanB) and this was confirmed by PCR, which indicated the presence of the vanA gene. A 10.8-kb Tn1546-related transposon was also identified by long-PCR. Interspecies transfer of the vancomycin-resistance gene from the donor E. gallinarum was performed in a successful conjugation experiment in vitro, using E. faecium GE-1 and E. faecalis JH22 as receptors. This is the first report of the detection of a vanA determinant naturally acquired by E. gallinarum in Brazil, indicating the importance of characterizing VRE by both phenotype and genotype methods.

Clinical, epidemiological, and microbiological characteristics of bacteremia caused by high-level gentamicin-resistant Enterococcus faecalis

Enterococcus spp bacteremia is associated with high mortality and the appearance of high-level gentamicin resistance (HLGR) created additional challenges for the treatment of these infections. We evaluated the epidemiological and clinical characteristics of patients with bacteremias caused by HLGR and non_HLGR Enterococcus faecalis isolates at a teaching hospital in the State of São Paulo, Brazil. Patients with bacteremia due to E. faecalis diagnosed between January 1999 and December 2003 were included in the study. We collected clinical, epidemiological, and microbiological data from medical records. Banked isolates were typed using pulsed-field gel electrophoresis. We identified 145 cases of E. faecalis bacteremia: 66 (45.5%) were caused by HLGR isolates and 79 (54.5%) by non_HLGR. In the univariate analysis, patients with HLGR infection were older, had higher rates of bladder catheterization, and more often had treatment with cephalosporin, quinolone, and/or carbapenem compared with patients with non_HLGR infection (P < 0.05). Multivariate analysis indicated that older age, hematological malignancy, and previous use of vancomycin were independently associated with HLGR (P < 0.05). Mortality rates were not significantly different among patients with HLGR (50%) and non_HLGR (43%) infections (P = 0.40). Of the 32 genotyped isolates, 16 were distributed into 6 main electrophoresis patterns and 16 others had distinct patterns. E. faecalis bacteremia is associated with high mortality and is frequently caused by HLGR isolates at this teaching hospital. The variability among genotyped isolates suggests that endogenous infections, rather than patient-to-patient transmission of E. faecalis, are more common at this institution.

Cross-transmission of vancomycin-resistant Enterococcus in patients undergoing dialysis and kidney transplant

The objective of this study was to investigate the occurrence of vancomycin-resistant Enterococcus (VRE) cross-transmission between two patient groups (long-term dialysis and kidney transplant patients). Molecular typing, by automated ribotyping with the RiboPrinter Microbial Characterization System (Qualicon, USA), was used to analyze VRE isolates from 31 fecal samples of 320 dialysis patients and 38 fecal samples of 280 kidney transplant patients. Clonal spread of E. faecalis and E. casseliflavus was observed intragroup, but not between the two groups of patients. In turn, transmission of E. gallinarum and E. faecium between the groups was suggested by the finding of vancomycin-resistant isolates belonging to the same ribogroup in both dialysis and transplant patients. The fact that these patients were colonized by VRE from the same ribogroup in the same health care facility provides evidence for cross-transmission and supports the adoption of stringent infection control measures to prevent dissemination of these bacteria.

Vancomycin-dependent Enterococcus faecium vanA: characterization of the first case isolated in a university hospital in Brazil

In this study, we report the characterization of a strain of Enterococcus faecium vanA, which grows only in the presence of vancomycin (VDEfm-UEL). The bacterium was isolated from the feces of a female patient who had undergone surgical treatment of Reinke’s edema and was receiving intravenous vancomycin therapy for infection with methicillin/oxacillin-resistant Staphylococcus aureus, a postoperative complication. Antimicrobial dependence was further confirmed by the vancomycin E-test. VDEfm-UEL was also shown to be resistant to ampicillin, ciprofloxacin, chloramphenicol, erythromycin, levofloxacin, penicillin, rifampicin, and teicoplanin. The putative virulence genes efaA, gelE and esp were detected by PCR. The ddl gene from VDEfm-UEL was cloned and sequenced. Vancomycin dependence seems to be associated with the insertion of a nucleotide in that sequence, which results in a frame-shift mutation, introducing a premature stop codon. This is the first report of vancomycin-dependent E. faecium isolation in a university hospital in Brazil.

Vancomycin-resistant enterococcus outbreak in a pediatric intensive care unit: report of successful interventions for control and prevention

The objective of this study is to retrospectively report the results of interventions for controlling a vancomycin-resistant enterococcus (VRE) outbreak in a tertiary-care pediatric intensive care unit (PICU) of a University Hospital. After identification of the outbreak, interventions were made at the following levels: patient care, microbiological surveillance, and medical and nursing staff training. Data were collected from computer-based databases and from the electronic prescription system. Vancomycin use progressively increased after March 2008, peaking in August 2009. Five cases of VRE infection were identified, with 3 deaths. After the interventions, we noted a significant reduction in vancomycin prescription and use (75% reduction), and the last case of VRE infection was identified 4 months later. The survivors remained colonized until hospital discharge. After interventions there was a transient increase in PICU length-of-stay and mortality. Since then, the use of vancomycin has remained relatively constant and strict, no other cases of VRE infection or colonization have been identified and length-of-stay and mortality returned to baseline. In conclusion, we showed that a bundle intervention aiming at a strict control of vancomycin use and full compliance with the Hospital Infection Control Practices Advisory Committee guidelines, along with contact precautions and hand-hygiene promotion, can be effective in reducing vancomycin use and the emergence and spread of vancomycin-resistant bacteria in a tertiary-care PICU.