Caracterização de leveduras isoladas da vagina e sua associação com candidíase vulvovaginal em duas cidades do sul do Brasil

OBJETIVOS: avaliar a distribuição de espécies de leveduras isoladas da vagina em duas localidades do sul do Brasil e comparar o perfil de suscetibilidade in vitro destas leveduras a antifúngicos usados na prática clínica. MÉTODOS: todas as mulheres atendidas entre janeiro e junho de 2004 para exames rotineiros de amostras vaginais, independente de serem sintomáticas ou não, foram incluídas neste estudo. Foram excluídas as que apresentavam imunodeficiências como AIDS ou outras infecções genitais. Amostras de conteúdo vaginal dessas mulheres (Jaraguá do Sul - SC (n=130) e Maringá - PR (n=97)) foram cultivadas. As leveduras isoladas foram identificadas e submetidas ao teste de suscetibilidade aos antifúngicos fluconazol, nistatina e anfotericina B. RESULTADOS: a freqüência de cultura positiva para levedura foi semelhante nas duas localidades, aproximadamente 24%. Candida albicans foi a espécie prevalente, mas sua freqüência diferiu: em SC correspondeu a 77,4% das leveduras e foi a mais freqüente tanto nas mulheres sintomáticas quanto nas assintomáticas. Já no PR foi 50,0%, com predomínio mais evidente nos casos sintomáticos. Observamos altos índices de suscetibilidade ao fluconazol e anfotericina B, porém 51,1% das leveduras apresentaram suscetibilidade dependente da dose (S-DD) para nistatina. C. albicans mostrou maior tendência de resistência à nistatina (52,8% de S-DD) do que as espécies não-albicans (44,4%). CONCLUSÕES: nossos dados mostram diferenças regionais quanto à espécie de levedura em amostras vaginais. Sugerem que a determinação da espécie pode ter implicação clínica, considerando as diferenças quanto à suscetibilidade, principalmente à nistatina, e que poderiam ter importância no manejo da candidíase vulvovaginal.

Candidíase vulvovaginal: sintomatologia, fatores de risco e colonização anal concomitante

OBJETIVO: analisar pacientes com candidíase vulvovaginal quanto a sintomatologia, fatores de risco e resultados da cultura anal, identificar a freqüência de Candida albicans e não C. albicans e correlacionar as colonizações anal e vaginal. MÉTODOS: foram incluídas 99 pacientes com suspeita clínica de candidiase vulvovaginal, procedentes de Natal, RN, atendidas entre maio de 2003 e maio de 2005, perfazendo-se o total de 294 coletas. O material clínico, colhido por zaragatoas, foi semeado em CHROMagar Candida®. As leveduras foram identificadas pelo método clássico, além da prova de crescimento a 42 e 45ºC e da prova do caldo Sabouraud hipertônico. A sintomatologia, fatores de risco e colonização anal foram analisados de acordo com a positividade ou negatividade para Candida spp. As culturas positivas para C. albicans nos dois sítios foram comparadas com outros resultados encontrados. Para análise estatística utilizou-se o teste do chi2, com correção de Yates e o teste exato de Fisher. RESULTADOS: a espécie mais frequente foi C. albicans em 69% dos casos. Uso de roupas íntimas justas e/ou sintéticas, presença de doenças alérgicas, ocorrência de prurido, leucorréia e hiperemia apresentaram associação com a positividade vaginal para Candida spp. A chance de uma paciente com colonização anal positiva de apresentar positividade vaginal concomitante foi 2,8 e 4,9 vezes maior, respectivamente, para Candida spp e C. albicans. A chance de uma paciente com cultura anal positiva para C. albicans de apresentar resultado vaginal positivo foi 3,7 vezes maior quando comparada a espécies não C. albicans. CONCLUSÕES: C. albicans foi a espécie mais comum, tendo sido observada associação da positividade vaginal para Candida spp com uso de roupas justas e/ou sintéticas, doenças alérgicas, prurido, leucorréia e eritema (p<0,05). A positividade anal concomitante com a vaginal foi significativa, sugerindo uma possível contaminação vaginal a partir do ânus.

Correlação entre os resultados laboratoriais e os sinais e sintomas clínicos das pacientes com candidíase vulvovaginal e relevância dos parceiros sexuais na manutenção da infecção em São Paulo, Brasil

OBJETIVO: relacionar as leveduras identificadas aos sinais e sintomas clínicos das pacientes com candidíase vulvovaginal e investigar a importância dos parceiros sexuais na reincidência da infecção. MÉTODOS: foi desenvolvido estudo prospectivo de julho de 2001 a julho de 2003 com uma amostra de mulheres residentes na Grande São Paulo. Foram avaliadas 179 pacientes com suspeita clínica de vaginite fúngica, com idade entre 18 e 65 anos. Os critérios para exclusão foram: gravidez, comprometimento imunológico intrínseco e extrínseco, incluindo AIDS, diabetes, imunossupressão, pacientes em terapia com corticosteróides, antibióticos ou hormônios, em pós-menopausa, em uso de dispositivo intra-uterino e duchas vaginais ou espermicidas. Amostras de secreções vaginais ou da glande dos parceiros sexuais de pacientes com vaginite de repetição foram coletadas para microscopia e cultura de fungos. Colônias fúngicas isoladas em CHROMagar Candida foram identificadas por provas clássicas. O teste exato de Fisher foi usado para correlacionar o quadro clínico com as leveduras isoladas das pacientes. RESULTADOS: os sinais e sintomas clínicos mais relevantes na candidíase vulvovaginal foram prurido e corrimento, seguidos por eritema e edema, estatisticamente independente do agente etiológico. Leveduras foram diagnosticadas por microscopia direta em 77 pacientes com vulvovaginites, sendo obtidos 40 cultivos de Candida spp. Candida albicans (70%), C. glabrata (20%), C. tropicalis (7,5%) e C. guilliermondii (2,5%) foram identificadas. As leveduras prevalentes nos parceiros foram C. albicans e C. glabrata. As mesmas espécies foram detectadas nas companheiras e parceiros em 87% dos casos. CONCLUSÕES: as vulvovaginites fúngicas foram mais freqüentes em mulheres entre 18 e 34 anos de idade. Não foi observada correlação entre as espécies de leveduras detectadas e a sintomatologia clínica. Os parceiros sexuais podem ser importantes reservatórios de Candida spp e estar relacionados à manutenção da candidíase vulvovaginal.

Caracterização fenotípica de leveduras isoladas da mucosa vaginal em mulheres adultas

OBJETIVO: caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A) para vulvovaginite, e determinar os indicadores clínicos que possivelmente levam ao surgimento de sinais e sintomas relacionados ao acometimento da mucosa por essa patologia. MÉTODOS: inicialmente foi aplicado um questionário, com questões abertas e fechadas, sobre dados clínicos epidemiológicos. Logo, ocorreu o diagnóstico micológico com semeadura em meio Chrom Agar Candida, identificação micromorfológica e bioquímica. Métodos específicos para detecção de fatores de virulência, proteinase e fosfolipase foram empregados. A análise estatística das variáveis foi estabelecida utilizando os testes χ2 e χ2 de Pearson. RESULTADOS: Candida albicans foi a espécie mais prevalente (87%, S e 67%, A), seguida de Candida glabrata (4%, S e 17%, A). O número de mulheres que referiram adoção de anticoncepcionais foi mais alto entre as sintomáticas, 77%. Nos dois grupos estudados, em torno de 87% apresentaram ciclos menstruais regulares, 57% das mulheres eram casadas com idade entre 30 a 40 anos. Em relação a práticas sexuais, houve para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Em relação à fosfolipase, apenas Candida albicans produziu este fator de virulência em 37,5%. A proteinase foi detectada em Candida albicans, Candida glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência esteve associado, principalmente, a isolados de pacientes sintomáticas. CONCLUSÕES: a colonização e infecção da mucosa vaginal por levedura é real com diversas espécies de Candida presentes. No entanto, Candida albicans se destaca como espécie prevalente em mucosa vaginal de mulheres adultas. Fica evidente a emergência de espécies de Candida não albicans, algumas com resistência intrínseca aos azólicos, tais como Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, e Candida guillermondii, o que pode ser explicado pelo uso inadequado de medicamentos e tratamento empírico.

Frequência de leveduras em fluido vaginal de mulheres com e sem suspeita clínica de candidíase vulvovaginal

OBJETIVO: estudar a candidíase vulvovaginal em mulheres com e sem suspeita clínica a partir de fluido vaginal, identificando frequência de Candida spp. e associando a fatores de risco intrínsecos e extrínsecos. MÉTODOS: foram coletadas 286 amostras de pacientes atendidas em clínicas e postos de saúde entre Agosto de 2005 e Agosto de 2007. Foram 121 mulheres com suspeita e 165 sem suspeita clínica. Com zaragatoas estéreis, as amostras foram coletadas, transportadas ao laboratório em solução fisiológica 0,85%, semeadas em CHROMagar Candida e em meio ágar Sabouraud 4% com cloranfenicol. Foram realizados os procedimentos clássicos para identificação: macro e micromorfologia, zimograma e auxanograma. Os dados obtidos foram analisados através de testes de frequência e tabelas de contingência (χ2). RESULTADOS: Um total de 47,9% das mulheres com suspeita clínica obteve confirmação de candidíase pelos exames laboratoriais. Das pacientes sem suspeita clínica (Grupo Controle), 78,2% foram negativas para candidíase vulvovaginal pelos testes laboratoriais. Candida albicans foi a espécie prevalente com 74,5% dos casos. Foram encontradas diferenças significativas para os casos positivos, de acordo com as pacientes das duas cidades avaliadas (p<0,05). O vestuário foi um aspecto diferencial encontrado entre as duas populações estudadas. CONCLUSÕES: a presença de fatores predisponentes não define, seguramente, a candidíase vulvovaginal. A localização geográfica tem mostrado ser um fator relevante na distribuição dos eventos. O tipo de vestuário pode ser uma das razões. O cultivo de amostras do conteúdo vaginal, seguida de identificação do micro-organismo, é importante.

Antimicrobial activity of the essential oil from Lippia sidoides, carvacrol and thymol against oral pathogens

Dental caries and periodontal disease are associated with oral pathogens. Several plant derivatives have been evaluated with respect to their antimicrobial effects against such pathogenic microorganisms. Lippia sidoides Cham (Verbenaceae), popularly known as "Alecrim-pimenta" is a typical shrub commonly found in the Northeast of Brazil. Many plant species belonging to the genus Lippia yield very fragrant essential oils of potential economic value which are used by the industry for the commercial production of perfumes, creams, lotions, and deodorants. Since the leaves of L. sidoides are also extensively used in popular medicine for the treatment of skin wounds and cuts, the objective of the present study was to evaluate the composition and antimicrobial activity of L. sidoides essential oil. The essential oil was obtained by hydro-distillation and analyzed by GC-MS. Twelve compounds were characterized, having as major constituents thymol (56.7%) and carvacrol (16.7%). The antimicrobial activity of the oil and the major components was tested against cariogenic bacterial species of the genus Streptococcus as well as Candida albicans using the broth dilution and disk diffusion assays. The essential oil and its major components thymol and carvacrol exhibited potent antimicrobial activity against the organisms tested with minimum inhibitory concentrations ranging from 0.625 to 10.0 mg/mL. The most sensitive microorganisms were C. albicans and Streptococcus mutans. The essential oil of L. sidoides and its major components exert promising antimicrobial effects against oral pathogens and suggest its likely usefulness to combat oral microbial growth.

Antioxidant and antimicrobial activities of bitter and sweet apricot (Prunus armeniaca L.) kernels

Abstract The present study describes the in vitro antimicrobial and antioxidant activity of methanol and water extracts of sweet and bitter apricot (Prunus armeniaca L.) kernels. The antioxidant properties of apricot kernels were evaluated by determining radical scavenging power, lipid peroxidation inhibition activity and total phenol content measured with a DPPH test, the thiocyanate method and the Folin method, respectively. In contrast to extracts of the bitter kernels, both the water and methanol extracts of sweet kernels have antioxidant potential. The highest percent inhibition of lipid peroxidation (69%) and total phenolic content (7.9 ± 0.2 µg/mL) were detected in the methanol extract of sweet kernels (Hasanbey) and in the water extract of the same cultivar, respectively. The antimicrobial activities of the above extracts were also tested against human pathogenic microorganisms using a disc-diffusion method, and the minimal inhibitory concentration (MIC) values of each active extract were determined. The most effective antibacterial activity was observed in the methanol and water extracts of bitter kernels and in the methanol extract of sweet kernels against the Gram-positive bacteria Staphylococcus aureus. Additionally, the methanol extracts of the bitter kernels were very potent against the Gram-negative bacteria Escherichia coli (0.312 mg/mL MIC value). Significant anti-candida activity was also observed with the methanol extract of bitter apricot kernels against Candida albicans, consisting of a 14 mm in diameter of inhibition zone and a 0.625 mg/mL MIC value.

Identification of fungemia agents using the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis

Prompt and specific identification of fungemia agents is important in order to define clinical treatment. However, in most cases conventional culture identification can be considered to be time-consuming and not without errors. The aim of the present study was to identify the following fungemia agents: Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida glabrata, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii, and Histoplasma capsulatum using the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis (PCR/RFLP). More specifically: a) to evaluate 3 different amplification regions, b) to investigate 3 different restriction enzymes, and c) to use the best PCR/RFLP procedure to indentify 60 fungemia agents from a culture collection. All 3 pairs of primers (ITS1/ITS4, NL4/ITS5 and Primer1/Primer2) were able to amplify DNA from the reference strains. However, the size of these PCR products did not permit the identification of all the species studied. Three restriction enzymes were used to digest the PCR products: HaeIII, Ddel and Bfal. Among the combinations of pairs of primers and restriction enzymes, only one (primer pair NL4/ITS5 and restriction enzyme Ddel) produced a specific RFLP pattern for each microorganism studied. Sixty cultures of fungemia agents (selected from the culture collection of Fundação de Medicina Tropical do Amazonas - FMTAM) were correctly identified by PCR/RFLP using the prime pair NL4/ITS5 and Ddel. We conclude that the method proved to be both simple and reproducible, and may offer potential advantages over phenotyping methods.

Estudo da atividade antimicrobiana dos ácidos anacárdicos do óleo da casca da castanha de caju (CNSL) dos clones de cajueiro-anão-precoce CCP-76 e CCP-09 em cinco estágios de maturação sobre microrganismos da cavidade bucal

A atividade antimicrobiana dos ácidos anacárdicos do óleo da casca da castanha de caju (CNSL) Anacardium occidentale (Anacardiaceae) foi estudada sobre os microrganismos da cavidade bucal Streptococcus mutans ATCC 25175, Staphylococcus aureus ATCC 12598, Candida albicans ATCC 10231 e Candida utilis. Os ácidos anacárdicos obtidos dos extratos etílicos do CNSL apresentaram atividade antibacteriana contra os microganismos citados, porém a maior atividade inibitória ocorreu sobre a bactéria Gram positiva Streptococcus mutans, considerada predominante na cárie dentária. As cáries dentárias são uma das mais freqüentes doenças infecciosas nos países em desenvolvimento. Os elementos que influenciam na cárie dentária incluem o estado nutricional, a ingestão de açúcar e a presença da microbiota cariogênica.

Interference of heating on the antimicrobial activity and chemical composition of Origanum vulgare L. (Lamiaceae) essential oil

Origanum vulgare L. (oregano), Lamiaceae, essential oil has a variety of biological properties and its antimicrobial activity has received a renewed interest for use in food conservation. The aim of this study was to evaluate the interference of heating on the antimicrobial activity and chemical composition of O. vulgare essential oil. The antimicrobial activity of the essential oil kept at room temperature and exposed to different heating temperatures (60, 80, 100 and 120 °C during 1 hour) was evaluated by observing antimicrobial effectiveness at absolute concentration and determining MIC values by the solid medium diffusion procedure. The essential oil chemical composition analysis was performed by GC-MS. O. vulgare essential oil showed interesting antimicrobial activity on all assayed microbial strains (Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, Bacillus cereus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica, Salmonella enterica, Serratia marcencens), noted by large growth inhibition zones (30-42 mm). Heating treatment showed no significant interference (p < 0.05) on the essential oil antimicrobial activity, noted by the development of microbial growth inhibition zones with similar or close diameters when evaluating the essential oil kept at room temperature and after exposure to different thermal treatments. MIC values oscillated between 10and 40 µL.mL-1 (20µL.mL-1 for most strains). However, no significant difference (p < 0.05) was noted among the MIC values found for the essential oil aliquots exposed to different temperatures. Moreover, heating did not significantly (p < 0.05) affect the chemical composition of O. vulgare essential oil. Monoterpenes, terpenic compounds and sesquiterpenes were found in the essential oil, with carvacrol (68.06-70.27%) and p-cymene (12.85-15.81%) being the compounds found in the highest amounts. These results showed the thermal stability and intense antimicrobial properties of O. vulgare essential oil and support its possible concomitant use with heating temperatures in order to reach microbial safety in foods.

Rosemary (Rosmarinus officinalis): a study of the composition, antioxidant and antimicrobial activities of extracts obtained with supercritical carbon dioxide

Rosemary leaf extracts were obtained by supercritical fluid extraction (SFE) and Soxhlet extraction. Their chemical compositions were evaluated by GC-MS. The extracts were analyzed for compounds reported in the literature as showing antimicrobial and antioxidant activities. The rosemary extracts were tested with regard to antioxidant (DPPH radical scavenging and total phenolic content - Folin-Denis reagent), antibacterial (Gram-positive bacteria - Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Bacillus cereus ATCC 11778 - and Gram-negative bacteria - Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) and antifungal (Candida albicans) activities. Antioxidant, antibacterial and antifungal activities of the SFE extracts were confirmed.

Evaluation of Etest and macrodilution broth method for antifungal susceptibility testing of Candida sp strains isolated from oral cavities of AIDS patients

A comparison of the Etest and the reference broth macrodilution susceptibility test for fluconazole, ketoconazole, itraconazole and amphotericin B was performed with 59 of Candida species isolated from the oral cavities of AIDS patients. The Etest method was performed according to the manufacturer's instructions, and the reference method was performed according to National Committee for Clinical Laboratory Standards document M27-A guidelines. Our data showed that there was a good correlation between the MICs obtained by the Etest and broth dilution methods. When only the MIC results at ± 2 dilutions for both methods were considered, the agreement rates were 90.4% for itraconazole, ketoconazole and amphotericin B and 84.6% for fluconazole of the C. albicans tested. In contrast, to the reference method, the Etest method classified as susceptible three fluconazole-resistant isolates and one itraconazole-resistant isolate, representing four very major errors. These results indicate that Etest could be considered useful for antifungal sensitivity evaluation of yeasts in clinical laboratories.

Candidemia in a Brazilian hospital: the importance of Candida parapsilosis

The aim of this study was to perform a retrospective analysis of cases of candidemia in a Brazilian hospital in the city of Fortaleza, Ceará. A total of 50 blood cultures were analyzed from 40 candidemic patients. The mycological diagnosis was based on the phenotypical analysis and the patients' data were recorded in appropriate files. The most frequent species were Candida parapsilosis (n = 18), followed by C. albicans (n = 14), C. tropicalis (n = 8), C. guillermondii (n = 6), C. glabrata (n = 2), and Candida spp. (n = 2). A detailed descriptive study was undertaken with 21 patients whose medical records were complete. The candidemia episodes occurred in eight male patients and 13 female patients. The most representative risk factors implicated in candidemia were prior antibiotic therapy, central venous catheters, parenteral nutrition, gastric probes and mechanical ventilation. Death occurred in 13 of the 21-candidemic patients. This study demonstrated the emergence of candidemia caused by C. parapsilosis in a Brazilian hospital in the city of Fortaleza, Ceará.

Molecular identification of Candida dubliniensis isolated from oral lesions of HIV-positive and HIV-negative patients in São Paulo, Brazil

Candida dubliniensis is a new, recently described species of yeast. This emerging oral pathogen shares many phenotypic and biochemical characteristics with C. albicans, making it hard to differentiate between them, although they are genotypically distinct. In this study, PCR (Polymerase Chain Reaction) was used to investigate the presence of C. dubliniensis in samples in a culture collection, which had been isolated from HIV-positive and HIV-negative patients with oral erythematous candidiasis. From a total of 37 samples previously identified as C. albicans by the classical method, two samples of C. dubliniensis (5.4%) were found through the use of PCR. This study underscores the presence of C. dubliniensis, whose geographical and epidemiological distribution should be more fully investigated.

Candida guilliermondii as the aetiology of candidosis

Candida guilliermondii is one of the components of human microbiota. This yeast has been infrequently associated with human infections, which may be related to its low pathogenicity. The aim of this study was to provide clinical and epidemiological data for patients infected with C. guilliermondii at Santa Casa Complexo Hospitalar, Brazil. From October 1997 to October 2003, C. guilliermondii was isolated from clinical samples from 11 patients. Three patients were excluded because the isolation of the yeast represented colonisation. Specimens from the eight patients included in the study corresponded to blood (n = 5), ascitis fluid (n = 2), and oesophagus biopsy (n = 1). Three patients (37.5%) had major immunosuppressed conditions, including solid organ transplantation, AIDS, and leukaemia. Previous use of antibiotics occurred in 87.5%. Main invasive medical procedures were central venous catheter (50.0%), abdominal surgery (25.0%), and peritoneal dialysis (50.0%). No susceptibility data was obtained. Although risk factors for candidaemia were similar amongst patients infected by with C. guilliermondii or other Candida species, mortality associated with C. guilliermondii was significantly lower.