Caracterização biológica de clones das cepas Y, CL e MR de Trypanosoma cruzi em camundongos C3H isogênicos

Dez clones isolados das cepas Y, CL e MR foram caracterizados segundo infectividade das culturas, curvas de parasitemia, polimorfismo e mortalidade em camundongos C3H isogênicos. Entra os clones das cepas Y e CL foram encontradas diferenças intragrupos bastante significativas. Os clones da cepa MR apresentaram maior homogeneidade. Estes resultados indicam que as cepas do T. cruzi podem apresentar diferentes graus de heterogeneidade. Também sugerem que as condições utilizadas para a manutenção de cepas de T. cruzi podem resultar em vantagens seletivas para algumas subpopulações, podendo uma cepa ser o resultado da interação destas subpopulações (clones) selecionadas após alguns anos de manutenção em laboratório.

Stability of isoenzyme and kinetoplast DNA (k-DNA) patterns in successively cloned Trypanosoma cruzi populations

Four Trypanosoma cruzi strains from zymodermes A, B, C and D were successively clonedon BHI-LIT-agar-blood BLAB). Twenty clones from the first generation (F1), 10 from The second (F2) and 4 from the third (F3) from the strains A138, B147 and C23 were isolated. The D150 strain provied 29 F1 and F2 clones. The strains and clones had their isoenzyme and K-DNA patterns determined. The clones from A138, Bl47 and C231 strains presented isoemzyme and K-DNA patterns identical between thewmselves and their respective parental strains. Therefore showing the homogenety and stability of isoenzyme and K-DNA patterns after successive cloning. The Dl50 strain from zymodeme D (ZD) showed heterogeneity. Twenty-eight out of 29 clones of the first generation were of zymodeme A and only one was of zymodeme C, confirming previous reports that ZD strains consisted of ZA and ZC parasite populations. The only D150 strain clone of zymodeme C showed a K-DNA pattern identical to its parental strain. The remining clones although similar among themselves were different from the parental strain. Thus the T. cruzi strains had either homonogeneus or heterogeneous populations. The clones produced by successive cloning provided genetically homonogeous populations. Their experimental use will make future results more reliable and reproducible.

Biological Parameters and Molecular Markers of Clone CL Brener - The Reference Organism of the Trypanosoma cruzi Genome Project

Clone CL Brener is the reference organism used in the Trypanosoma cruzi Genome Project. Some biological parameters of CL Brener were determined: (a) the doubling time of epimastigote forms cultured in liver infusion-tryptose (LIT) medium at 28oC is 58±13 hr; (b) differentiation of epimastigotes to metacyclic trypomastigotes is obtained by incubation in LIT-20% Grace´s medium; (c) trypomastigotes infect mammalian cultured cells and perform the complete intracellular cycle at 33 and 37oC; (d) blood forms are highly infective to mice; (e) blood forms are susceptible to nifurtimox and benznidazole. The molecular typing of CL Brener has been determined: (a) isoenzymatic profiles are characteristic of zymodeme ZB; (b) PCR amplification of a 24Sa ribosomal RNA sequence indicates it belongs to T. cruzi lineage 1; (c) schizodeme, randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) and DNA fingerprinting analyses were performed

The Trypanosoma cruzi Genome Project: Nuclear Karyotype and Gene Mapping of Clone CL Brener

By using improved pulsed field gel electrophoresis conditions, the molecular karyotype of the reference clone CL Brener selected for Trypanosoma cruzi genome project was established. A total of 20 uniform chromosomal bands ranging in size from 0.45 to 3.5 Megabase pairs (Mbp) were resolved in a single run. The weighted sum of the chromosomal bands was approximately 87 Mbp. Chromoblots were hybridized with 39 different homologous probes, 13 of which identified single chromosomes. Several markers showed linkage and four different linkage groups were identified, each comprising two markers. Densitometric analysis suggests that most of the chromosomal bands contain two or more chromosomes representing either homologous chromosomes and/or heterologous chromosomes with similar sizes

Towards the Physical Map of the Trypanosoma cruzi Nuclear Genome: Construction of YAC and BAC Libraries of the Reference Clone T. cruzi CL-Brener

Strategies to construct the physical map of the Trypanosoma cruzi nuclear genome have to capitalize on three main advantages of the parasite genome, namely (a) its small size, (b) the fact that all chromosomes can be defined, and many of them can be isolated by pulse field gel electrophoresis, and (c) the fact that simple Southern blots of electrophoretic karyotypes can be used to map sequence tagged sites and expressed sequence tags to chromosomal bands. A major drawback to cope with is the complexity of T. cruzi genetics, that hinders the construction of a comprehensive genetic map. As a first step towards physical mapping, we report the construction and partial characterization of a T. cruzi CL-Brener genomic library in yeast artificial chromosomes (YACs) that consists of 2,770 individual YACs with a mean insert size of 365 kb encompassing around 10 genomic equivalents. Two libraries in bacterial artificial chromosomes (BACs) have been constructed, BACI and BACII. Both libraries represent about three genome equivalents. A third BAC library (BAC III) is being constructed. YACs and BACs are invaluable tools for physical mapping. More generally, they have to be considered as a common resource for research in Chagas disease

Biological characterization of a beta-galactosidase expressing clone of Trypanosoma cruzi CL strain

Clone CL B5 of Trypanosoma cruzi is a beta-galactosidase expressing organism that was genetically transfected to be used for in vitro pharmacological screening. Biological parameters were determined, evaluating growth kinetics of epimastigotes, metacyclogenesis, infectivity to mammalian cell lines, parasitemia kinetics in mice and sensibility to nifurtimox and benznidazole. Differences in relation to other strains and CL parental strain were found, the most important being the incapability to produce death to mice in spite of the high inoculum used. However, it possesses the required features to be used for in vitro drug screening. Data obtained demonstrate that heterogeneity of T. cruzi appears even among clones of the same strain, and that these differences found do not prevent the use of clone CL B5 for the purpose that was engineered.

Cl gene cluster encoding several small nucleolar RNAs: a comparison amongst trypanosomatids

Small nucleolar RNAs (snoRNAs) are small non-coding RNAs that modify RNA molecules such as rRNA and snRNA by guiding 2'-O-ribose methylation (C/D box snoRNA family) and pseudouridylation reactions (H/ACA snoRNA family). H/ACA snoRNAs are also involved in trans-splicing in trypanosomatids. The aims of this work were to characterise the Cl gene cluster that encodes several snoRNAs in Trypanosoma rangeli and compare it with clusters from Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Leishmania major, Leishmania infantum, Leishmania braziliensis and Leptomonas collosoma. The T. rangeli Cl gene cluster is an 801 base pair (bp) repeat sequence that encodes three C/D (Cl1, Cl2 and Cl4) and three H/ACA (Cl3, Cl5 and Cl6) snoRNAs. In contrast to T. brucei, the Cl3 and Cl5 homologues have not been annotated in the Leishmania or T. cruzi genome projects (http//:www.genedb.org). Of note, snoRNA transcribed regions have a high degree of sequence identity among all species and share gene synteny. Collectively, these findings suggest that the Cl cluster could constitute an interesting target for therapeutic (gene silencing) or diagnostic intervention strategies (PCR-derived tools).

A morphologically distinct Phlebotomus argentipes population from active cutaneous leishmaniasis foci in central Sri Lanka

Although the reported aetiological agent of cutaneous leishmaniasis (CL) in Sri Lanka is Leishmania donovani, the sandfly vector remains unknown. Ninety-five sandflies, 60 females and 35 males, collected in six localities in the district of Matale, central Sri Lanka, close to current active transmission foci of CL were examined for taxonomically relevant characteristics. Eleven diagnostic morphological characters for female sandflies were compared with measurements described for Indian and Sri Lankan sandflies, including the now recognised Phlebotomus argentipes sensu lato species complex. The mean morphometric measurements of collected female sandflies differed significantly from published values for P. argentipes morphospecies B, now re-identified as Phlebotomus annandalei from Delft Island and northern Sri Lanka, from recently re-identified P. argentipes s.s. sibling species and from Phlebotomus glaucus. Furthermore, analysis of underlying variation in the morphometric data through principal component analysis also illustrated differences between the population described herein and previously recognised members of the P. argentipes species complex. Collectively, these results suggest that a morphologically distinct population, perhaps most closely related to P. glaucus of the P. argentipess. I. species complex, exists in areas of active CL transmission. Thus, research is required to determine the ability of this population of flies to transmit cutaneous leishmaniasis.

Clínica do cuidado de enfermagem na terapia intensiva: aliança entre técnica, tecnologia e humanização

Pesquisa de campo, qualitativa, cujo objetivo foi caracterizar a clínica do cuidado de enfermagem específica da terapia intensiva. Para isso forma realizadas observação e entrevista com 21 enfermeiros de uma unidade de terapia intensiva. Os resultados evidenciaram oito características desta clínica, que abarcam tanto a subjetividade quanto a objetividade, traduzidas em: interação, diálogo, princípios humanísticos, vigilância, conhecimento e domínio do maquinário. Em razão dessa clínica, a subjetividade nem sempre expressa-se de modo claro e a objetividade exige capacitação dos enfermeiros para cuidar na terapia intensiva. Conclui-se que a clínica do cuidado de enfermagem na terapia intensiva alia técnica, tecnologia e humanização, que fundamentam os cuidados de enfermagem que lá se realizam.

Impacto dos nutrientes N e K e de açúcares solúveis sobre populações de Diabrotica speciosa (Germar) (Coleoptera, Chrysomelidae) e Agrotis ipsilon (Hüfnagel) (Lepidoptera, Noctuidae) na cultura da batata, Solanum tuberosum L. (Solanaceae)

Foi estudada a ocorrência de Diabrotica speciosa (Germar, 1824) (Coleoptera, Chrysomelidae) e de Agrotis ipsilon (Hüfnagel, 1767) (Lepidoptera, Noctuidae) em plantas de batata, cultivares Achat e Monalisa, influenciadas por dosagens de nitrogênio e potássio, e teor mínimo de açúcares solúveis. Os seguintes parâmetros foram avaliados: concentração de nutrientes minerais e açúcar em folha verde, folha senescente, folha em abcisão, haste, tubérculo e planta total usando extratos de infusão em etanol 80%. A maior infestação por larvas de D. speciosa foi na cultivar Monalisa a 150 kg.ha-1 de N + K com 27,03% a P<0,05. Foi observado que o efeito da dosagem de N + K no incremento da concentração de açúcares solúveis aumentou os danos provocados por A. ipsilon nos tubérculos e hastes. A infestação por essas espécies aumentou para 58,82% na cultivar Monalisa, quando a dosagem de nitrogênio foi elevada de 0 para 150 kg.ha-1, na ausência de potássio. Por outro lado, alta dosagem de potássio reduziu os danos causados por A. ipsilon na cultivar Monalisa. Entretanto, não influiu no armazenamento de açúcar solúvel. Os resultados indicaram que na cultivar Achat os teores de açúcares solúveis foram reduzidos, provavelmente sensibilizados pela elevação da dosagem de adubação potássica, diferindo da cultivar Monalisa cuja influência verificada foi pela dosagem do nitrogênio.

Ants and their effects on an insect herbivore community associated with the inflorescences of Byrsonima crassifolia (Linnaeus) H.B.K. (Malpighiaceae)

The effects of ants on the insect community on inflorescences of Byrsonima crassifolia (Malpighiaceae) were tested in an ant exclusion experiment in a cerrado vegetation in southeastern Brazil. Forty-four species of insects (23 families) and nine species of ants (6 genera and 3 subfamilies) were found on the inflorescences of B. crassifolia. The exclusion of ants, primarily Camponotus sericeiventris and Camponotus spp., reduced the treehopper population to 20% of the original abundance. Ant exclusion and time influenced the abundance of chewing (Exclusion, P<0.001; Time, P<0.002), and sucking insects (Exclusion, P<0.02; Time, P<0.01). Twice as many chewing and sucking insects were found on ant-excluded inflorescences as compared to control inflorescences (P<0.001). One and half more sucking insects were found on ant-excluded than on control inflorescences. Only time significantly influenced the richness of chewing and sucking insects associated with B. crassifolia inflorescences. Inflorescences on control branches were significantly less attacked by herbivores than inflorescences on ant-excluded branches (P<0.001). Therefore, these results suggest that the presence of ants alters the structure of insect herbivore community associated with B. crassifolia.

Respostas do cacaueiro à aplicação de N, P e K em dois solos da Amazônia Brasileira

A cacauicultura da Amazônia está implantada em solos eutróficos, com predominância da Terra Roxa Estruturada, e em Latossolos ou Podzólicos distróficos, sendo desconhecidas as limitações nutricionais desses solos na fase produtiva do cacaueiro. As respostas do cacaueiro à aplicação de N, P e K foram determinadas em dois experimentos instalados nos municípios de Medicilândia, ao longo da Rodovia Transamazônica, e Benevides, Pará, em solos das unidades Terra Roxa Estrutura eutrófica (TR) e Latossolo Amarelo (LA), respectivamente. As lavouras de cacau do híbrido Sca 6 x Be 10 foram implantadas após o corte e queima da mata primária, utilizando-se, como esquema experimental, um fatorial NPK 2³ com tratamentos adicionais de P. Os resultados obtidos demonstraram que o P foi o principal nutriente que limitou a produção, provocando incrementos de produtividade (P < 0,01) da ordem de 13,7% (110 kg ha-1) e 44,3% (214 kg ha-1) nos solos TR e LA, respectivamente, na média do período 1987 a 1993. O K também aumentou (P < 0,01) o rendimento de amêndoas secas de cacau no solo LA, verificando-se, ainda, interações significativas (P < 0,05) entre N x K e P x K neste solo. A resposta linear do cacaueiro ao P e o aumento ou diminuição da taxa de infecção de vassoura-de-bruxa ao N, P e K evidenciam a necessidade de novas pesquisas para definir a dosagem econômica de P, de K e o efeito da interação dos nutrientes com a enfermidade.

Absorção de N, P e K por espécies de adubos verdes cultivadas em diferentes épocas e densidades num latossolo vermelho-escuro argiloso sob cerrados

Populações específicas de plantas e a época de semeadura podem promover interferências na absorção dos nutrientes. Assim, um experimento foi realizado, no ano agrícola de 1991/92, num Latossolo Vermelho-Escuro argiloso no Centro Nacional de Pesquisa de Solos/Embrapa, em Senador Canedo (GO), com o objetivo de determinar os teores e as quantidades absorvidas de nitrogênio, fósforo e potássio na parte aérea da Crotalaria juncea: l., Crotalaria ochroleuca: G. Don, mucuna preta ( Mucuna aterrima (Piper & Tracy) Merr.) e guandu cv. Kaki (Cajanus cajan (L.) Millsp.), em três épocas de semeadura (início, meados e final da estação chuvosa) e em dois espaçamentos entrelinhas (0,5 e 0,4 m). O delineamento experimental, dentro de cada época, foi o de blocos ao acaso em parcelas subdivididas, com três repetições. As espécies diferiram entre si quanto aos teores e quantidades absorvidas de N, P e K. Ao contrário das épocas de semeadura, não houve efeito significativo dos espaçamentos nos teores e quantidades absorvidas de N, P e K. A interação de espécies e épocas de semeadura foi significativa apenas para o nitrogênio e fósforo.

Contribuição dos mecanismos de fluxo de massa e de difusão para o suprimento de K, Ca e Mg a plantas de arroz

O transporte de nutriente até à superfície das raízes pode ocorrer por fluxo de massa ou por fluxo de massa e difusão, dependendo da atividade do nutriente na solução do solo e da exigência nutricional da planta. Objetivou-se verificar a contribuição dos mecanismos de fluxo de massa e de difusão para o suprimento de potássio, de cálcio e de magnésio a plantas de arroz, em experimento realizado em casa de vegetação. Aplicaram-se em amostra de Latossolo Variação Una, os seguintes tratamentos: Na2CO3, K2CO3, CaCO3 e MgCO3. Aos 75 dias da semeadura, as plantas de arroz foram colhidas e determinadas as quantidades de potássio, de cálcio e de magnésio nelas acumuladas, bem como a concentração desses nutrientes na solução do solo. Essas concentrações, multiplicadas pelo volume de água transpirado, foram usadas para calcular o suprimento por fluxo de massa. A difusão foi estimada por diferença entre a quantidade do nutriente acumulado no vegetal e a transportada por fluxo de massa. Verificou-se que o potássio foi transportado predominantemente por difusão, exceto no tratamento com K2CO3, que gerou altos teores de K na solução de solo, tornando o fluxo de massa suficiente para atender à demanda das plantas. O cálcio e o magnésio foram transportados por fluxo de massa. Segundo os resultados, a difusão foi o principal mecanismo de transporte de potássio nas condições do experimento; todavia, o fluxo de massa pode satisfazer isoladamente a demanda nutricional da planta, quando a concentração de potássio na solução do solo for muito elevada.

Método convencional e "bootstrap" para estimar o número de observações na determinação dos parâmetros da função K(Θ)

A variabilidade natural do solo dificulta a obtenção de valores que representem adequadamente as propriedades do solo em determinada área. O conhecimento do número mínimo de observações, que devem ser realizadas para representar, com um erro aceitável, uma propriedade ou característica do solo, é fundamental para que os resultados experimentais possam ser aplicados com segurança. No presente trabalho, comparou-se o método convencional (teste-t) com o método "bootstrap", com vistas em estimar o número de observações necessárias para calcular os parâmetros que caracterizam a relação entre a condutividade hidráulica e o teor de água do solo, determinada pelo método do perfil instantâneo. Realizou-se um experimento de drenagem num Latossolo Vermelho-Amarelo em Piracicaba (SP), numa parcela experimental com 45 pontos de observação distanciados de 1 m entre si. Observaram-se a umidade (com TDR) e o potencial mátrico (com tensiômetros) durante três semanas de redistribuição da água. Após processamento dos dados, o conjunto de valores mostrou uma distribuição não-normal, fazendo-se necessária a eliminação de "outliers" para a aplicação do método convencional, normalizando a distribuição. Assim, o uso do método tradicional só é recomendado após a confirmação da pertinência da eliminação dos "outliers". Ambos os métodos de análise requerem grande número de repetições, reafirmando que determinações da função condutividade hidráulica com poucas repetições não podem ser extrapoladas para áreas maiores.