Sporothrix schenckii COMPLEX: SUSCEPTIBILITIES TO COMBINED ANTIFUNGAL AGENTS AND CHARACTERIZATION OF ENZYMATIC PROFILES

SUMMARY Sporothrix schenckiiwas reclassified as a complex encompassing six cryptic species, which calls for the reassessment of clinical and epidemiological data of these new species. We evaluated the susceptibility of Sporothrix albicans (n = 1) , S. brasiliensis (n = 6) , S. globosa (n = 1), S. mexicana(n = 1) and S. schenckii(n = 36) to terbinafine (TRB) alone and in combination with itraconazole (ITZ), ketoconazole (KTZ), and voriconazole (VRZ) by a checkerboard microdilution method and determined the enzymatic profile of these species with the API-ZYM kit. Most interactions were additive (27.5%, 32.5% and 5%) or indifferent (70%, 50% and 52.5%) for TRB+KTZ, TRB+ITZ and TRB+VRZ, respectively. Antagonisms were observed in 42.5% of isolates for the TRB+VRZ combination. Based on enzymatic profiling, the Sporothrix schenckii strains were categorized into 14 biotypes. Leucine arylamidase (LA) activity was observed only for S. albicans and S. mexicana. The species S. globosaand S. mexicanawere the only species without β-glucosidase (GS) activity. Our results may contribute to a better understanding of virulence and resistance among species of the genus Sporothrixin further studies.

CHEMICAL CHARACTERIZATION AND EVALUATION OF ANTIBACTERIAL, ANTIFUNGAL, ANTIMYCOBACTERIAL, AND CYTOTOXIC ACTIVITIES OF Talinum paniculatum

SUMMARY In this study, the bioactivity of Talinum paniculatum was evaluated, a plant widely used in folk medicine. The extract from the T. paniculatum leaves (LE) was obtained by percolation with ethanol-water and then subjecting it to liquid-liquid partitions, yielding hexane (HX), ethyl acetate (EtOAc), butanol (BuOH), and aqueous (Aq) fractions. Screening for antimicrobial activity of the LE and its fractions was evaluated in vitro through broth microdilution method, against thirteen pathogenic and non-pathogenic microorganisms, and the antimycobacterial activity was performed through agar diffusion assay. The cytotoxic concentrations (CC90) for LE, HX, and EtOAc were obtained on BHK-21 cells by using MTT reduction assay. The LE showed activity against Serratia marcescens and Staphylococcus aureus, with Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values of 250 and 500 µg/mL, respectively. Furthermore, HX demonstrated outstanding activity against Micrococcus luteus and Candida albicans with a MIC of 31.2 µg/mL in both cases. The MIC for EtOAc also was 31.2 µg/mL against Escherichia coli. Conversely, BuOH and Aq were inactive against all tested microorganisms and LE proved inactive against Mycobacterium tuberculosisand Mycobacterium bovisas well. Campesterol, stigmasterol, and sitosterol were the proposed structures as main compounds present in the EF and HX/EtOAc fractions, evidenced by mass spectrometry. Therefore, LE, HX, and EtOAc from T. paniculatumshowed potential as possible sources of antimicrobial compounds, mainly HX, for presenting low toxicity on BHK-21 cells with excellent Selectivity Index (SI = CC90/MIC) of 17.72 against C. albicans.

RELATED FACTORS FOR COLONIZATION BY Candida SPECIES IN THE ORAL CAVITY OF HIV-INFECTED INDIVIDUALS

The colonization of the oral cavity is a prerequisite to the development of oropharyngeal candidiasis. Aims: The aims of this study were: to evaluate colonization and quantify Candida spp. in the oral cavity; to determine the predisposing factors for colonization; and to correlate the levels of CD4+ cells and viral load with the yeast count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) in HIV-positive individuals treated at a University Hospital. Saliva samples were collected from 147 HIV patients and were plated on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) and chromogenic agar, and incubated at 30 ºC for 72 h. Colonies with similar morphology in both media were counted and the result expressed in CFU/mL. Results: Of the 147 HIV patients, 89 had positive cultures for Candida spp., with a total of 111 isolates, of which C. albicans was the most frequent species (67.6%), and the mean of colonies counted was 8.8 × 10³ CFU/mL. The main predisposing factors for oral colonization by Candida spp. were the use of antibiotics and oral prostheses. The use of reverse transcriptase inhibitors appears to have a greater protective effect for colonization. A low CD4+ T lymphocyte count is associated with a higher density of yeast in the saliva of HIV patients.

FACTORS RELATED TO ORAL CANDIDIASIS IN ELDERLY USERS AND NON-USERS OF REMOVABLE DENTAL PROSTHESES

This study examined the association between oral candidiasis in elderly users and nonusers of prosthesis and its predisposing factors. To this end, we performed a cross-sectional study where saliva samples from 48 patients were collected they used prosthesis and 43 patients (control group) who did not use. Among the 91 patients, Candida spp were isolated in 40 (83.3%) who used prosthesis and in 23 (53.5%) in the control group. A statistically significant association was determined between the two groups, the isolation of yeasts and dental prosthesis (p < 0.05, OR = 4.3). The most common etiological agent was Candida albicans (37 isolates), with 23 (62.2%) in the denture group and 14 (37.8%) (control group). Among patients who presented clinical manifestations of oral candidiasis (n = 24), 83.3% (n = 20) belonged to the group that wore dentures, while only 16.7% (n = 4) belonged to the control group. Elderly patients with diabetes had 4.4 times higher estimated risk of developing oral candidiasis when compared with individuals without this condition. There was no statistically significant association between being user prostheses and have diabetes with the onset of candidiasis. No statistically significant association was determined between xerostomia, use of prosthesis and oral candidiasis. The use of prosthetics and poor oral hygiene in elderly patients predisposes to the development of oral candidiasis.

Candidíase em pacientes aidéticos

Trinta e cinco aidéticos entre 19 e 55 anos admitidos e tratados de candidíase no Hospital Emílio Ribas, SP, com ELISA positivo para HIV e confirmado pelo Western Blot. Tuberculose em 9 sendo 2 com pericardite; neurotoxoplasmose em 6; neurocriptococose em 5; herpes labial em 4; pneumocistose em 3 e sarcoma de Kaposi em 2, achavam-se associadas. A concentração inibitória mínima 50% (MIC 50%) para os azoles foi: ketoconazol= 2,2 µg/ml; itraconazol- 21,0 µg/ml; fluconazol = 19,0 µg/ml. O MIC 50% para ospolienos: nistatina- 50,0 µg/ml; anfotericina B= 0,12 µg/ml e para 5 fluorcitosina= 1,6 µg/ml nas 35 amostras de Candida isoladas. Testes não paramétricos de Siegel revelaram significante identificação (80%) das Candida albicans na candidíase, e que a dose de AMB não modificou o número de óbitos, precoce e tardio, ocorridos nesses aidéticos. O uso prévio dos azoles e da nistatina explicaria, talvez, o elevado MIC 50% observado nas amostras de Candida isoladas.

Candidíase em pacientes transplantados renais

O objetivo do trabalho foi verificar a prevalência de candidíase em transplantados renais. Foram avaliados os prontuários dos pacientes transplantados no Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto de fevereiro de 1968 a fevereiro de 1995. Nesse período foram transplantados 620 pacientes. Destes, 87 apresentaram 107 episódios de candidíase. Locais mais acometidos: trato urinário com 55 episódios, trato respiratório com 28, e trato gastrointestinal com 16. O agente etiológico mais freqüente foi C. albicans com 65 casos seguido de C. tropicalis com 12 e C. glabrata com 11 casos. As infecções do trato urinário mostraram incidência maior (61,7%) nos primeiros 6 meses. A maioria se apresentou clínicamente como infecção bacteriana. No trato respiratório, as infecções foram caracterizadas por recuperação do agente no escarro. No trato gastrointestinal, 9/16 episódios foram esofágicos, com epigastralgia, dor retroesternal, às vezes acompanhados de candidíase oral ou odinofagia. Nos outros episódios o agente foi recuperado nas fezes com quadro clínico de gastroenterite. Nas infecções dos tratos urinário e respiratório, houve associação da candidíase com antibioticoterapia prévia (76% e 67% respectivamente), além de infecções bacterianas concomitantes (34% e 64% respectivamente). As infecções por Candida sp tiveram prevalência geral em torno de 14,5%. A localização predominante foi no trato urinário e, em seguida, nos tratos respiratório e gastrointestinal, apresentando alto índice de associação com antibioticoterapia prévia e infecções bacterianas.

Enzimotipagem de espécies do gênero Candida isoladas da cavidade bucal

Foram avaliadas quanto a produção de exoenzimas fosfolipase e proteinase, 79 amostras de Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes com lesões bucais características de candidose e indivíduos com boca clinicamente normal, atendidos na Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto USP. Dentre as cepas de C. albicans isoladas de lesões bucais, a fosfolipase e proteinase foram detectadas em, respectivamente, 83,3% e 66,7%. C. tropicalis e C. parapsilosis produziram somente proteinase. Quanto às cepas isoladas de nichos sem lesão, do total de 32 C. albicans, 71,9% apresentaram fosfolipase e 68,7% proteinase. C. tropicalis apresentou apenas a enzima proteinase, C. glabrata, C. krusei, C. guilliermondii e Candida spp, não apresentaram nenhuma das exoenzimas. Entre as amostras de C. albicans de ambos os grupos, o enzimotipo 22 (fosfolipase positiva e proteinase fracamente positiva) foi prevalente. Enzimotipos diferentes foram detectados em amostras da mesma espécie provenientes de mesmo paciente.

Inquérito soroepidemiológico para infecções por fungos causadores de micoses sistêmicas na Reserva Indígena Xacriabá, Estado de Minas Gerais

A Reserva Indígena Xacriabá situa-se no norte do Estado de Minas Gerais, próxima do município de Manga e do vale do Rio São Francisco. A população índia é miscigenada com brancos e negros e exerce atividades agrícolas e pecuária. Amostras de sangue foram coletadas de 180 habitantes da Reserva (85 homens e 95 mulheres), com 15 a 84 anos de idade, testando-se o soro pelo método da contraimunoeletroforese com antígenos de Paracoccidioides brasiliensis, Histoplasma capsulatum, Cryptococcus neoformans e Candida albicans. Verificou-se soros reagentes em, respectivamente, 5%, 3,9%, 7,2% e 6,7% do total de amostras. Os indivíduos reativos com antígenos de P. brasiliensis e H. capsulatum eram predominantemente mulheres e tinham idade menor e títulos médios mais elevados de anticorpos do que os reativos com outros antígenos.Os resultados são sugestivos da ocorrência de paracoccidiodomicose-infecção e de histoplasmose-infecção, nas primeiras décadas de vida dos habitantes, na área da Reserva Indígena Xacriabá.

Avaliação da resposta imune celular em pacientes com candidíase recorrente

A candidíase recorrente cutânea ou mucosa é caracterizada pela ocorrência de, no mínimo, 4 episódios de candidíase no período de um ano. Não são conhecidos os fatores que levam à recorrência desta infecção. O presente estudo avaliou a resposta linfoproliferativa e a produção de IFN-g de pacientes com candidíase recorrente. Os índices de estimulação da resposta linfoproliferativa em culturas de células de pacientes com candidíase recorrente estimuladas com antígeno de Candida albicans, PPD e TT foram respectivamente de 6±8, 17±20 e 65±30. A adição de anticorpo monoclonal anti-IL-10 às culturas de células de 6 pacientes aumentou a resposta linfoproliferativa de 735±415 para 4143±1746 cpm. A produção de IFN-g em culturas de células estimuladas com antígeno de Candida, foi 162±345pg/ml. Pacientes com candidíase recorrente apresentam uma deficiência na resposta linfoproliferativa e na produção de IFN-g, podendo a resposta imune celular ao antígeno de Candida ser restaurada parcialmente através da neutralização da IL-10 in vitro.

Epidemiologia das infecções hematogênicas por Candida spp

O gênero Candida spp é responsável por cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções de corrente sanguínea. Nos Estados Unidos da América, Candida spp é a quarta causa mais comum de infecções de corrente sanguínea, respondendo por cerca de 8% dos casos das infecções documentadas neste sítio. Espécies não-albicans respondem hoje por ao menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades de história natural e sensibilidade a antifúngicos. A mortalidade geral de fungemias por Candida spp é da ordem de 40 a 60%, tornado esta complicação infecciosa um grande desafio para os clínicos que trabalham em hospitais terciários em diferentes países.

Utilização do ágar suco de tomate (ágar V8) na identificação presuntiva de Candida dubliniensis

Avaliou-se a capacidade do ágar suco de tomate (ágar V8) em diferenciar Candida dubliniensis de Candida albicans com base na produção de clamidoconídios. Noventa e três isolados de Candida albicans e vinte e seis de Candida dubliniensis foram incluídos; 100% de Candida dubliniensis formaram clamidoconídios e 92,5% de Candida albicans não evidenciaram estas estruturas. Estes resultados permitem sugerir este meio como recurso alternativo na identificação presuntiva de Candida dubliniensis.

Differentiation of Candida species obtained from nosocomial candidemia using RAPD-PCR technique

Thirteen strains of the genus Candida were isolated from catheter, urine and surgical wounds from individual patients of the Santa Casa de Misericórdia, Belo Horizonte, MG, Brazil. Ten strains were characterized as Candida albicans, two as Candida glabrata, and one as Candida parapsilosis. Isolates were evaluated for molecular relatedness by random amplified polymorphic DNA technique using 15 primers. The analysis of the genomic DNA obtained revealed a low intraspecific polymorphism and did not allow for the differentiation between strains of the same species obtained from distinct clinical sources (catheter, urine and surgical wounds). The RAPD profiles generated were able to differentiate among the species of Candida albicans, Candida parapsilosis and Candida glabrata strains isolated in this study.

Fatores de virulência de Candida spp isoladas de cateteres venosos e mãos de servidores hospitalares

Avaliou-se o potencial de virulência de 23 leveduras isoladas de cateteres e mãos de trabalhadores em um hospital do Noroeste do Paraná. As leveduras isoladas de cateter foram mais aderentes e hidrofóbicas (P<0,05) que as leveduras isoladas das mãos. Candida não-albicans expressaram com mais intensidade os fatores de virulência avaliados.

Identificação microbiológica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da cavidade oral de indivíduos HIV positivos

A candidíase orofaríngea é a infecção fúngica mais comum entre os pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana e seu tratamento é realizado com antifúngicos tópicos ou sistêmicos, que são indicados empiricamente com base em dados clínicos. O objetivo deste estudo foi determinar a freqüência de leveduras em lavados bucais de indivíduos HIV positivos, comparando os resultados entre pacientes com diferentes condições de imunodeficiência e verificar o perfil de susceptibilidade das espécies isoladas frente aos antifúngicos visando avaliar se as opções de tratamento utilizadas na prática clínica atingem a maioria das espécies identificadas. Leveduras foram isoladas em 58% das amostras de lavado bucal coletadas e Candida albicans foi a espécie mais (93%) freqüente. Resistência ou susceptibilidade dose dependente, frente aos antifúngicos testados foi registrada em aproximadamente 17% das amostras. A importante variabilidade de resposta sugere limitações quanto à eficácia das terapias instituídas empiricamente.

Identification and differentiation of Candida species from pediatric patients by random amplified polymorphic DNA

Thirty-four Candida isolates were analyzed by random amplified polymorphic DNA using the primer OPG-10:24 Candida albicans; 4 Candida tropicalis; 2 Candida parapsilosis; 2 Candida dubliniensis; 1 Candida glabrata and 1 Candida krusei. The UPGMA-Pearson correlation coefficient was used to calculate the genetic distance between the different Candida groupings. Samples were classified as identical (correlation of 100%); highly related samples (90%); moderately related samples (80%) and unrelated samples (< 70%). The results showed that the RAPD proposed was capable of classifying the isolates coherently (such that same species were in the same dendrogram), except for two isolates of Candida parapsilosis and the positive control (Netherlands, 1973), probably because they are now recognized as three different species. Concerning the only fluconazole-resistant Candida tropicalis isolate with a genotype that was different to the others, the data were insufficient to affirm that the only difference was the sensitivity to fluconazole. We concluded that the Random Amplified Polymorphic DNA proposed might be used to confirm Candida species identified by microbiological methods.