The utility of anti-trypomastigote lytic antibodies for determining cure of Trypanosoma cruzi infections in treated patients: an overview and perspectives

In previous work, we proposed alternative protocols for following patients with treated Chagas disease and these are reviewed herein. Evidence was provided to support the following: (i) functional anti-trypomastigote antibodies are indicative of ongoing chronic Trypanosoma cruzi infections; (ii) specific antibodies detected by conventional serology (CS) with epimastigote extracts, fixed trypomastigotes or other parasite antigens may circulate years after parasite elimination; (iii) functional antibodies are evidenced by complement-mediated lysis of freshly isolated trypomastigotes, a test which is 100% specific, highly sensitive, and the first to revert after T. cruzi elimination and (iv) the parasite target for the lytic antibodies is a glycoprotein of high molecular weight (gp160) anchored at the parasite surface. The complement regulatory protein has been cloned, sequenced and produced as a recombinant protein by other groups and is useful for identifying functional anti-T. cruzi antibodies in ELISA tests, thus dispensing with the need for live trypomastigotes to manage treated patients. If used instead of CS to define cures for Chagas patients, ELISA will avoid unnecessary delays in finding anti-T. cruzi drugs. Other highly sensitive techniques for parasite DNA detection, such as PCR, need to be standardized and included in future protocols for the management of patients with drug-treated Chagas disease.

Influence of anti-filarial chemotherapy strategies on the genetic structure of Wuchereria bancrofti populations

Lymphatic filarial (LF) parasites have been under anti-filarial drug pressure for more than half a century. Currently, annual mass drug administration (MDA) of diethylcarbamazine (DEC) or ivermectin in combination with albendazole (ALB) have been used globally to eliminate LF. Long-term chemotherapies exert significant pressure on the genetic structure of parasitic populations. We investigated the genetic variation among 210 Wuchereria bancrofti populations that were under three different chemotherapy strategies, namely MDA with DEC alone (group I, n = 74), MDA with DEC and ALB (group II, n = 60) and selective therapy (ST) with DEC (group III, n = 34) to understand the impact of these three drug regimens on the parasite genetic structure. Randomly amplified polymorphic DNA profiles were generated for the three groups of parasite populations; the gene diversity, gene flow and genetic distance values were determined and phylogenetic trees were constructed. Analysis of these parameters indicated that parasite populations under ST with a standard dose of DEC (group III) were genetically more diverse (0.2660) than parasite populations under MDA with DEC alone (group I, H = 0.2197) or with DEC + ALB (group II, H = 0.2317). These results indicate that the MDA may reduce the genetic diversity of W. bancrofti populations when compared to the genetic diversity of parasite populations under ST.

Leprosy exposure, infection and disease: a 25-year surveillance study of leprosy patient contacts

Contact surveillance is a valuable strategy for controlling leprosy. A dynamic cohort study of leprosy contacts was initiated in 1987 at Oswaldo Cruz Foundation. The objective of this work was to review the data on the major risk factors leading up to the infectious stage of the disease, estimate incidence rates of leprosy in the cohort and characterise the risk factors for the disease among the contacts under surveillance. The incidence rate of leprosy among contacts of leprosy patients was estimated at 0.01694 cases per person-year in the first five years of follow-up. The following factors were associated with acquiring the disease: (i) not receiving the BCG vaccine, (ii) a negative Mitsuda reaction and (iii) contact with a patient with a multibacillary clinical form of leprosy. The contacts of index patients who had high bacilloscopic index scores > 1 were at especially high risk of infection. The following factors were associated with infection, which was defined as a seropositive reaction for anti-phenolic glicolipid-1 IgM: (i) young age (< 20 years), (ii) a low measured Mitsuda reaction (< 5 mm) and (iii) contact with an index patient who had a high bacilloscopic index. BCG vaccination and re-vaccination were shown to be protective among household contacts. The main conclusions of this study indicate an urgent need for additional leprosy control strategies in areas with a high incidence of the disease.

Características testiculares de touros imunizados com vacina anti-hormônio liberador do hormônio luteinizante

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação imunoesterilizadora de uma vacina anti-hormônio liberador de hormônio luteinizante (LHRH), composta por ovalbumina-LHRH-7 e tiorredoxina-LHRH-7, em touros mestiços Nelore. Vinte e seis touros, com dois anos de idade, foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos de 13 animais. No grupo I, os animais receberam uma dose e dois reforços da vacina nos dias 0, 141, e 287 do experimento. No grupo II, os animais não receberam nenhum tratamento (controle). Para avaliar o efeito da vacina nos touros, foi realizada a mensuração da circunferência escrotal no início do experimento e no dia do abate, 741 dias depois. Por ocasião do abate, também foi coletada uma amostra dos testículos para avaliação histológica. O grupo imunizado apresentou circunferência escrotal ao abate de 22±5,98 cm, menor do que a do grupo controle que foi de 35,6±2,4 cm. Na análise histológica dos animais do grupo imunizado, foi observada degeneração testicular com ausência de espermatozoides em 85% dos animais avaliados, os outros 15% apresentaram redução no número de espermatozoides, em comparação aos animais do grupo controle. A vacina anti-LHRH, com fusão de proteínas, é efetiva na castração imunológica de touros e deve ser considerada como alternativa para utilização na produção bovina extensiva no Brasil.

Síntese e caracterização de cloro[ácido 2-(difenilfosfino)benzóico]-ouro(I) e alguns de seus derivados

In this contribution a few new gold(I)phosphine complexes, [2-(PPh2)C6H4CO 2H]AuX (where X = Cl, SCN, Br3) and a similar gold(III) derivative [{2-(PPh2)C6H4CO 2H}AuIII Cl (C6H4CH2NMe2 )]Cl have been synthesised and characterised. The phosphine, 2-(diphenylphosphino)benzoic acid, has been employed for the first time in gold chemistry. This ligand is potentially bidentate through bonding of the phosphine and carboxylate groups. The X-ray structure of the complex chloro[2-(diphenylphosphino) benzoic acid]gold(I) has been elucidated and the bond lengths encountered show great similarity to those of chloro(triphenylphosphine)gold(I). [2-(PPh2)C6H4CO 2H]AuCl crystallises in the space group P2(1)/c with a = 9.113(2) Å, b = 10.925(2) Å, c = 23.069(4) Å, beta = 99.95º(3), V = 2299 ų, Z = 4 and R = 0.091. Biological tests for anti-fungal and anti-bacterial activity demostrate that [2-(PPh2)C6H4CO 2H]AuCl exhibits broad spectrum activity against a range of organisms.

O Quadrante de Ruetsap e a anti-ciência, tecnologia e inovação

The concept of research and the controversy among classical models for C, T & I, outdated by the development of knowledge and Post-modern society needs were revisited through the (3) Quadrants advanced by Donald Stokes in the mid-nineties. The scientific community to fit into these Quadrants was faced with many difficulties and reacted by issuing pseudo-facts, accepted by under-prepared technocrats as viable justifications for conducting research in face of these new paradigms. In a poor country full of contrast and needs such as Brazil, this attitude satisfies the bureaucracy and academic elite, but frustrates government and society, that do not get, in the expected measure, the benefits of their commitment with the Teaching, Research and Extension Sectors mainly embedded in the Public University system. An extension, in fact a contradictory approach, to Pasteur's Quadrant, is proposed to characterize this situation: The Syndrome of Ruetsap's Quadrant.

UVA I-protection effectiveness of bioactive compound and organic UV filters: an in vitro assessment

This research work aimed at determining the UVA effectiveness (UVA I/UV ratio), by diffuse transmittance analysis, of sunscreens developed with a bioactive substance, the rutin, associating or not with organic UVB-UVA filters incorporated at a phosphate-base O/W emulsion. Sunscreens provided conflicting and unpredictable results concerning the anti-UVA protection, specially, at the UVA I region. Possible interactions among the organic UV filters and the polyphenolic bioactive substance may have accounted with improvement or reduction of UV protection by a complex and not yet elucidated mechanism, probably regarding wavelength delocalization to superior or inferior values, by resonant molecule stabilization or destabilization.

Especificidade de anti-soro policlonal à Leifsonia xyli subsp. xyli

Detectar a presença da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli em material de propagação da cana-de-açúcar (Saccharum sp.) é importante para direcionar o controle do raquitismo-da-soqueira. Neste trabalho, objetivou-se produzir anticorpo policlonal específico contra Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), visando utilizá-lo em método sorológico para detecção do patógeno. Para isso, o antígeno foi preparado a partir de células intactas, após lavagem por centrifugação de cultura-pura em tampão fosfato salino 0,01 M (PBS) e diálise em glutaraldeido 2% em PBS. O plano de imunização em coelho consistiu de duas injeções intramusculares da mistura 1:1 do antígeno com adjuvante Freund (completo e incompleto, a intervalos de 21 dias) e duas injeções subcutâneas do antígeno puro, a intervalos de dez dias. O anti-soro foi testado pelo método de Dot Blot com revelação por peroxidase para se determinar: (i) título do anticorpo e (ii) reação contra Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e bactérias endofíticas de cana-de-açúcar (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Herbaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae e Gluconacetobacter diazotrophicus). A maior diluição analisada do anti-soro 1:20.000 mostrou reação fortemente positiva e específica contra Lxx e ausência de reação contra as demais bactérias. A purificação da fração IgG (Imunoglobulina G) não resultou em melhoria na reatividade e especificidade do anti-soro. Estimou-se o nível de detecção do método a partir de suspensão bacteriana em 2x10(6) células/ml.

Oócitos aparentemente maduros injetados em telófase I apresentam piores resultados de reprodução assistida

OBJETIVO: Avaliar o estágio de maturação nuclear de oócitos com o primeiro corpúsculo polar (CP) visível de pacientes inférteis submetidas à estimulação ovariana para injeção intracitoplasmática de espermatozoide (ICSI) e comparar os resultados da injeção intracitoplasmática de espermatozoide entre os oócitos em telófase I (TI) e metáfase II (MII), e entre aqueles em metáfase II com e sem fuso celular visível. MÉTODOS: Estudo prospectivo que incluiu 106 pacientes inférteis submetidas à injeção intracitoplasmática de espermatozoide. Foram incluídas pacientes com idade menor ou igual a 38 anos, hormônio folículo estimulante (FSH) basal menor que 10 mIU/mL e índice de massa corpórea (IMC) menor que 30 kg/m². Foram excluídas pacientes com doenças sistêmicas, com qualquer infecção ativa, tabagistas ou que fizeram uso de medicações hormonais e anti-inflamatórias hormonais e não hormonais nos últimos dois meses, previamente à programação para o procedimento de reprodução assistida. Os oócitos com extrusão do primeiro corpúsculo polar foram avaliados pela microscopia de polarização, imediatamente antes da realização da injeção intracitoplasmática de espermatozoide, e caracterizados quanto ao estágio de maturação nuclear (telófase I ou metáfase II). Os oócitos em metáfase II foram avaliados de acordo com a presença ou não do fuso meiótico. Foram analisadas as taxas de fertilização, clivagem e o número de embriões de boa qualidade no segundo dia (D2) de desenvolvimento. Os dados foram analisados comparativamente através do teste exato de Fisher. Em todas as análises foi considerado o nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: O fuso meiótico de 516 oócitos foi visualizado através da microscopia de polarização. Dezessete dos 516 oócitos avaliados estavam em telófase I (3,3%) e 499 (96,7%) em metáfase II. Os oócitos injetados em telófase I apresentaram taxas de fertilização significativamente menores do que os injetados em metáfase II (53 e 78%, respectivamente) e não produziram nenhum embrião de boa qualidade no segundo dia. Comparando-se os oócitos com e sem fuso celular visível, não foi observada diferença significativa nos resultados de injeção intracitoplasmática de espermatozoide. CONCLUSÕES: Oócitos injetados em telófase I apresentaram menores taxas de fertilização quando comparados aos em metáfase II. É possível que a análise do estágio de maturação nuclear oocitária, por meio da microscopia de polarização, possa ser utilizada como fator de predição das taxas de fertilização pós-injeção intracitoplasmática de espermatozoide.

Prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum (Apicomplexa: Sarcocystidae) em bovinos leiteiros de propriedades rurais em três microrregiões no estado do Maranhão

Objetivou-se, no presente estudo, pesquisar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em 812 amostras de soros sangüíneos de bovinos leiteiros procedentes de propriedades rurais de sete municípios das microrregiões de Itapecuru-Mirim, Médio Mearim e Presidente Dutra, estado do Maranhão, Brasil. Para o cálculo do tamanho da amostra, considerou-se um soroprevalência de 34,7% para N. caninum, com erro máximo de 9,5% e intervalo de confiança de 95%. Para a detecção da presença de anticorpos da classe IgG, utilizou-se a técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI), com ponto de corte 1:200, usando como antígeno, taquizoítos da cepa NC-1, mantida em cultura celular no Laboratório de Diagnóstico das Parasitoses dos Animais da Escola de Medicina Veterinária da UFBA. Do total de amostras analisadas, encontrou-se uma prevalência de 50,74%. Os títulos variaram de 1:200 a 1:6400, assim distribuídos: 108 (26,21%) amostras de soro apresentaram título de 1:200; 132 (32,04%) 1:400; 94 (22,81%) 1:800; 46 (11,16%) 1:1600; 23 (5,58%) 1:3200 e nove (2,18%) com títulos de 1:6400. Dentre as microrregiões, a Itapecuru-Mirim apresentou o menor percentual de animais soropositivos (20,69%) e Presidente Dutra o maior (47,66%). Com relação à variável sexo, observou-se maior prevalência de sororreagentes nas fêmeas (46,80%) do que nos machos (52,46%). Não se verificou diferença significativa (P>0,05) para as variáveis microrregiões, sexo e idade. Conclui-se que os bovinos leiteiros das regiões estudadas estão expostos à infecção por N. caninum.

Nematóides resistentes a alguns anti-helmínticos em rebanhos caprinos no Cariri Paraibano

Objetivou-se avaliar a resistência de nematódeos a alguns anti-helmínticos em rebanhos caprinos no Cariri Paraibano. Foram utilizados 144 animais no período seco e 120 animais no período chuvoso, fêmeas com idade acima de oito meses de vida e lactantes, distribuídos em 4 grupos: Grupo I não tratado, Grupo II tratado com albendazole a 10%, Grupo III tratado com ivermectina a 1% e Grupo IV tratado com fosfato de levamisole a 18,8%, nas doses recomendadas pelos fabricantes. Para avaliar a resistência, aplicou-se o teste de redução na contagem de ovos por grama de fezes (RCOF) e o cultivo de larvas de helmintos. As amostras fecais foram coletadas no dia do tratamento (dia base) e 7, 14 e 21 dias após o tratamento. No grupo tratado com Albendazole, observaram-se eficácias de 61%, 11% e 24% no período seco e de 55%, 14% e 12% no período chuvoso, aos 7, 14, e 21 dias, respectivamente. No grupo tratado com Ivermectina, a eficácia foi de 14%, 70% e 66% para o período seco, e de 76%, 34% e 71% para o período chuvoso, aos 7, 14 e 21 dias, respectivamente. O grupo tratado com fosfato de Levamisole apresentou percentuais de eficácia de 89%, 79% e 73% no período seco e de 76%, 69% e 67% no período chuvoso, aos 7, 14 e 21 dias, respectivamente. Os resultados obtidos indicam que os nematódeos gastrintestinais de alguns rebanhos caprinos no Cariri Paraibano não são sensíveis aos princípios ativos Albendazole, Levamisole e Ivermectina. Durante o período de estudo foi identificada a presença de parasitas dos gêneros Haemonchus, Trichostrongylus, Oesophagostomum e Strongyloides.

Resposta de linfonodos em bovinos inoculados a campo com a vacina recombinante rSBm7462 anti Rhipicephalus (Boophilus) microplus)

A dependência exclusiva de compostos químicos para o controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tornou-se uma das maiores preocupações científicas e econômicas dos últimos anos, e como consequência, estão sendo realizadas pesquisas para o desenvolvimento de vacinas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta de linfonodos de bovinos imunizados a campo com o peptídeo rSBm7462 anti R. (B.) microplus. Foram utilizados 14 bovinos mestiços (Bos taurus x Bos indicus), com idades entre 4-10 meses, mantidos em duas propriedades rurais do norte do estado de Minas Gerais. Os animais receberam três imunizações do peptídeo rSBm7462, aplicados por via subcutânea, com intervalo de 30 dias. Após 15 dias de cada imunização, os linfonodos pré-escapulares foram coletados e fixados por 18 horas em formol. Posteriormente, foram incluídos em Paraplast e as amostras foram coradas pela técnica hematoxilina-eosina (HE) para a observação de eventos celulares. Para a identificação do antígeno nos linfonodos dos animais imunizados, foi realizada a técnica de imuno-histoquímica (IHQ) com o método peroxidase-anti-peroxidase (PAP). A resposta de linfonodos dos bovinos inoculados foi avaliada pelas análises de formação de centros germinais (CG), hiperplasia de cordões medulares (CM) e a presença do antígeno rSBm7462 em células PAP+, demonstrando que o peptídeo recombinante rSBm7462 induz uma resposta imune adaptativa T-dependente, caracterizada nos tecidos linfóides secundários pela formação de estruturas que conferem afinidade e memória imunológica.

Regulation of T cell response to leishmania antigens by determinants of histocompatibility leukocyte class I and II molecules

It has been shown that HLA class I molecules play a significant role in the regulation of the proliferation of T cells activated by mitogens and antigens. We evaluated the ability of mAb to a framework determinant of HLA class I molecules to regulate T cell proliferation and interferon gamma (IFN-g) production against leishmania, PPD, C. albicans and tetanus toxoid antigens in patients with tegumentary leishmaniasis and healthy subjects. The anti-major histocompatibility complex (MHC) mAb (W6/32) suppressed lymphocyte proliferation by 90% in cultures stimulated with aCD3, but the suppression was variable in cultures stimulated with leishmania antigen. This suppression ranged from 30-67% and was observed only in 5 of 11 patients. IFN-g production against leishmania antigen was also suppressed by anti-HLA class I mAb. In 3 patients IFN-g levels were suppressed by more than 60%, while in the other 2 cultures IFN-g levels were 36 and 10% lower than controls. The suppression by HLA class I mAb to the proliferative response in leishmaniasis patients and in healthy controls varied with the antigens and the patients or donors tested. To determine whether the suppression is directed at antigen presenting cells (APCs) or at the responding T cells, experiments with antigen-primed non-adherent cells, separately incubated with W6/32, were performed. Suppression of proliferation was only observed when the W6/32 mAb was added in the presence of T cells. These data provide evidence that a mAb directed at HLA class I framework determinants can suppress proliferation and cytokine secretion in response to several antigens.

Evaluation of an anti-carcinoembryonic monoclonal antibody suitable for immunoscintigraphy

An anti-carcinoembryonic antigen (CEA) monoclonal antibody (mAb 6D1.1) was evaluated in vitro and in vivo to determine its suitability as a tracer for immunoscintigraphy of colorectal carcinomas. Determination of mAb affinity for CEA showed a constant of association of 0.63 ± 0.11 x 109 M-1. Binding of technetium-99m (99mTc)-6D1.1, labeled by a direct method, to human cultured lineages was highly specific. Binding to only CEA-positive LS-174T cells resulted in a saturable curve inhibited by pre-incubation with unlabeled mAb. No binding at all was observed for the human lineages MeWo (melanoma) or ZR75-30 (breast carcinoma), neither of them expressing CEA cells. Intravenous injection of 99mTc-6D1.1 into nude mice xenografted with human LS-174T tumors resulted in planar images of excellent quality. Localization of an irrelevant mAb labeled with either 99mTc or iodine-125 was never observed in tumor masses. Biodistribution studies on excised tumoral tissue showed retention of 28.48% of the injected dose per gram of LS-174T tumor. The tumor-to-blood ratio was 3.46. The same analysis performed on the other three human xenografted tumors studied demonstrated that only the CEA-producing HT-29 (colorectal adenocarcinoma) retained 99mTc-6D1.1 while the other two (ZR75-30 and MeWo) did not. These data demonstrate that this mAb is an adequate tool for targeting CEA-expressing tumors in experimental models.

Is pancreas development abnormal in the non-obese diabetic mouse, a spontaneous model of type I diabetes?

Despite extensive genetic and immunological research, the complex etiology and pathogenesis of type I diabetes remains unresolved. During the last few years, our attention has been focused on factors such as abnormalities of islet function and/or microenvironment, that could interact with immune partners in the spontaneous model of the disease, the non-obese diabetic (NOD) mouse. Intriguingly, the first anomalies that we noted in NOD mice, compared to control strains, are already present at birth and consist of 1) higher numbers of paradoxically hyperactive ß cells, assessed by in situ preproinsulin II expression; 2) high percentages of immature islets, representing islet neogenesis related to neonatal ß-cell hyperactivity and suggestive of in utero ß-cell stimulation; 3) elevated levels of some types of antigen-presenting cells and FasL+ cells, and 4) abnormalities of extracellular matrix (ECM) protein expression. However, the colocalization in all control mouse strains studied of fibroblast-like cells (anti-TR-7 labeling), some ECM proteins (particularly, fibronectin and collagen I), antigen-presenting cells and a few FasL+ cells at the periphery of islets undergoing neogenesis suggests that remodeling phenomena that normally take place during postnatal pancreas development could be disturbed in NOD mice. These data show that from birth onwards there is an intricate relationship between endocrine and immune events in the NOD mouse. They also suggest that tissue-specific autoimmune reactions could arise from developmental phenomena taking place during fetal life in which ECM-immune cell interaction(s) may play a key role.