Genetic diversity and genetic exchange in Trypanosoma cruzi: dual drug-resistant "progeny" from episomal transformants

Extensive characterisation of Trypanosoma cruzi by isoenzyme phenotypes has separated the species into three principal zymodeme groups, Z1, Z2 and Z3, and into many individual zymodemes. There is marked diversity within Z2. A strong correlation has been demonstrated between the strain clusters determined by isoenzymes and those obtained using random amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles. Polymorphisms in ribosomal RNA genes, in mini-exon genes, and microsatellite fingerprinting indicate the presence of at least two principal T. cruzi genetic lineages. Lineage 1 appears to correspond with Z2 and lineage 2 with Z1. Z1 (lineage 2) is associated with Didelphis. Z2 (lineage 1) may be associated with a primate host. Departures from Hardy-Weinberg equilibrium and linkage disequilibrium indicate that propagation of T. cruzi is predominantly clonal. Nevertheless, two studies show putative homozygotes and heterozygotes circulating sympatrically: the allozyme frequencies for phosphoglucomutase, and hybrid RAPD profiles suggest that genetic exchange may be a current phenomenon in some T. cruzi transmission cycles. We were able to isolate dual drug-resistant T. cruzi biological clones following copassage of putative parents carrying single episomal drug-resistant markers. A multiplex PCR confirmed that dual drug-resistant clones carried both episomal plasmids. Preliminary karyotype analysis suggests that recombination may not be confined to the extranuclear genome.

Biology of Amblyomma aureolatum (Pallas, 1772) (Acari: Ixodidae) on some laboratory hosts in Brazil

The ixodid Amblyomma aureolatum is suspected to play a role in the epidemiology of wild life-cycle hemoparasites, which frequently infect dogs in rural and hunting areas in Brazil. Little is known about its bionomics. The objective of the present study was to evaluate some bionomic aspects of A. aureolatum ticks in Brazil. One engorged female, collected from a dog (Canis familiaris) in São Sebastião das Águas Claras, State of Minas Gerais, was used to establish a colony in the laboratory. Subsequently its parasitic stage progeny were fed on domestic dogs and laboratory animals. The free-living stages were incubated at 27ºC ± 2°C and minimum 70% relative humidity in a BOD incubator. The egg incubation period ranged from 31 to 34 days; the parasitic period of larvae ranged from 4 to 6 days and ecdysis to nymphs occurred from day 19 up to day 22. The parasitic period of nymphs ranged from 5 to 8 days and the period of ecdysis to adults from 31 to 33 days. The parasitic period of adults ranged from 11 to 15 days, the pre-oviposition period from 6 to 12 days, and the oviposition period from 9 to 38 days. The total duration of the life cycle ranged from 116 to 168 days.

Interrelationship between ectoparasites and wild rodents from northeastern Buenos Aires province, Argentina

Infestation parameters and indices of mites, ticks and fleas associated with wild rodents from northeastern Buenos Aires Province, Argentina, were studied. Host species similarity was also analyzed in relation to their ectoparasites. Fifty-five rodents were captured from January 2000 to March 2001. In total, 1,022 ectoparasites were collected and three ectoparasite-host associations were new records. However, this is the first study on Craneopsylla minerva wolffhuegeli infesting parameters. Ectoparasite total mean abundance and total prevalence were higher in Holochilus brasiliensis (MA = 47.7; P = 100%) and Scapteromys aquaticus (MA = 25.4; P = 95.4%), meanwhile specific richness and diversity were higher in Oligoryzomys flavescens (S = 6; H = 1.3) and Akodon azarae (S = 4; H = 1.0). On the other hand, the only individual of Calomys laucha was not parasited. S. aquaticus-H. brasiliensis, which preferred similar microhabitats, shared the same ectoparasite species (Css = 100). Whereas, A. azarae, which was mostly associated with grassland, showed the highest difference with the other hosts (Css < 0.4). Considering every ectoparasite species, H. brasiliensis showed the highest mean abundance, prevalence and preference. The results suggest that the particular characteristics of this rodent would give it better possibilities not only of being infested by ectoparasites, but also of transmitting them to its progeny.

Dengue virus detection by using reverse transcription-polymerase chain reaction in saliva and progeny of experimentally infected Aedes albopictus from Brazil

Oral susceptibility and vertical transmission of dengue virus type 2 (DENV-2) in an Aedes albopictus sample from Rio de Janeiro was estimated. The infection (36.7%) and transmission (83.3%) rates for Ae. albopictus were higher than those of an Ae. aegypti colony used as control, 32.8 and 60%, respectively. Fourth instar larvae and females descendants of 48.5 and 39.1% of experimentally infected Ae. albopictus showed to harbor the virus. The oral susceptibility and the high capacity to assure vertical transmission exhibited by Ae. albopictus from Brazil reinforce that this species may play a role in the maintenance of the virus in nature and be a threat for dengue control in the country.

Failure to demonstrate experimental vertical transmission of the epidemic strain of Chikungunya virus in Aedes albopictus from La Réunion Island, Indian Ocean

Aedes albopictus was responsible for transmission in the first outbreak of chikungunya (CHIK) on La Réunion Island, Indian Ocean, in 2005-2006. The magnitude of the outbreak on this island, which had been free of arboviral diseases for over 30 years, as well as the efficiency of Ae. albopictus as the main vector, raises questions about the maintenance of the CHIK virus (CHIKV) through vertical transmission mechanisms. Few specimens collected from the field as larvae were found to be infected. In this study, Ae. albopictus originating from La Réunion were orally infected with a blood-meal containing 10(8) pfu/mL of the CHIKV epidemic strain (CHIKV 06.21). Eggs from the first and second gonotrophic cycles were collected and raised to the adult stage. The infectious status of the progeny was checked (i) by immunofluorescence on head squashes of individual mosquitoes to detect the presence of viral particles or (ii) by quantitative RT-PCR on mosquito pools to detect viral RNA. We analysed a total of 1,675 specimens from the first gonotrophic cycle and 1,709 from the second gonotrophic cycle without detecting any viral particles or viral RNA. These laboratory results are compared to field records.

A transient increase in total head phosphotyrosine levels is observed upon the emergence of Aedes aegypti from the pupal stage

Phosphorylation and dephosphorylation of protein tyrosine residues constitutes a major biochemical regulatory mechanism for the cell. We report a transient increase in the total tyrosine phosphorylation of the Aedes aegypti head during the first days after emergence from the pupal stage. This correlates with an initial reduction in total head protein tyrosine phosphatase (PTP) activity. Similarly, phosphotyrosine (pTyr)-containing bands are seen in extracts prepared from both male and female heads and are spread among a variety of structures including the antennae, proboscis and the maxillary palps combined with the proboscis. Also, mosquitoes treated with sodium orthovanadate, a classical PTP inhibitor, show reduced blood-feeding activity and higher head tyrosine phosphorylation levels. These results suggest that pTyr-mediated signalling pathways may play a role in the initial days following the emergence of the adult mosquito from the pupal stage.

Profile of total IgG, IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 levels in sera of patients with paracoccidioidomycosis: treatment follow-up using Mexo and rPb27 as antigens in an ELISA

The levels of total of IgG, IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 were evaluated in 54 patients with chronic paracoccidioidomycosis (PCM) before, during and after treatment using an enzyme-linked immunosorbent assay with Mexo and recombinant Pb27 (rPb27) as the antigens. Mexo was effective in distinguishing PCM patients from individuals in the negative control group (NC) based on total IgG and rPb27 performed worse than Mexo when these two groups were compared. IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 could not be used to clearly distinguish PCM patients from those in the NC group using either antigen. There was no clear relationship between antibody levels and the period of treatment. The majority of patients presented with decreased antibody levels during treatment, with no statistically significant differences among the different periods of treatment. Only IgG4 presented a negative correlation between its levels and clinical improvement during treatment. In total, 65% of untreated PCM patients showed reactivity against IgG4 when the Mexo antigen was used and this reactivity decreased over the course of treatment. There was a tendency towards decreasing antibody levels during treatment, but these antibody levels did not necessarily clear after the treatment was stopped. Mexo was useful for PCM diagnosis using total IgG; however, more studies are necessary before this antigen can be used in measuring the levels of total IgG and its subclasses for monitoring patients during treatment.

Incidência natural e biologia de Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner, 1983 (Hymenoptera, Trichogrammatidae) em ovos de Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818 (Lepidoptera, Noctuidae)

Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner is an egg parasitoid of the corn earworm Helicoverpa zea (Boddie) (Lepidoptera, Noctuidae), and has recently been collected from eggs of Anticarsia gemmatalis Hübner on soybeans. In order to evaluate the suitability of A. gemmatalis eggs as hosts of T. atopovirilia, field surveys were conducted in 1999 and 2000 on corn and soybeans, and a colony of the parasitoid was established in laboratory. At 25 ºC, development from oviposition to emergence lasted nine days and a sex-ratio of 0.58 (females:males) was obtained. Females lived significantly longer (11.4 days) when kept in ovipositional activity, than in the absence of host eggs (6.6 days). Total fecundity averaged 104.5 parasitized eggs, resulting in the emergence of 138.3 descendents. Mean daily fecundity was highest (30 eggs/female) on the first day. Oviposition continued until one day before the death of the females, however 70% of the eggs were laid during the first four days after emergence. A female-biased progeny was produced during the first three days of oviposition, whereas further ovipositions were male-biased. Females lived significantly longer when exposed to host eggs in comparison to females deprived of eggs. The results show that eggs of A. gemmatalis are suitable for the development of T. atopovirilia, and this parasitoid should be considered in future programs of biological control of the velvetbean caterpillar.

Biological characteristics and parasitism capacity of Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera, Trichogrammatidae) on eggs of Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera, Noctuidae)

This study aimed at evaluating the biological characteristics and the capacity of parasitism of a Trichogramma pretiosum Riley, 1869 (Hymenoptera, Trichogrammatidae) strain (T. pretiosum RV) collected in Rio Verde County, State of Goiás, Brazil. The study was carried out on eggs of Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera, Noctuidae) and conducted under controlled environmental conditions at different constant temperatures. The biological parameters determined were: developmental time (egg-adult; days); emergence (%); sex ratio; number of progeny/egg; number of generation/year; thermal constant (K); temperature threshold (Tb); daily number of parasitized eggs; cumulative parasitism (%); total number of eggs parasitized by T. pretiosum; and female longevity. To study the T. pretiosum parasitism capacity, 20 S. frugiperda eggs (< 24 h old) were placed into 8.0 cm x 2.0 cm glass vials containing one female (< 24 h old) each. Trials were carried out in a completely randomized experimental design, with 20 replications at each temperature. The environmental chambers (BOD type) were set at 18ºC, 20ºC, 22ºC, 25ºC, 28ºC and 32ºC ± 1ºC, 70 ±10% relative humidity, and 14/10 h (L:D) photoperiod. The eggs of S. frugiperda were replaced daily until parasitoid death. Results have shown an inverse correlation between developmental time and temperature, with statistically significant differences among means, except at 25ºC and 28ºC (10 days). Parasitoid emergence (%) was also influenced by temperature. The lowest percent emergence was observed at 32ºC, and the highest ones at 18ºC and 20ºC temperatures. The temperature did not affect T. pretiosum sex ratio and number of parasitoids per egg, thus allowing changes in the temperature to control insect mass production in the laboratory to meet the needs for field releases.

Boro total e solúvel e suas relações com alguns atributos dos solos do estado do Ceará

Foram avaliados os teores de boro total e solúvel, por meio de três extratores, usados como índices de disponibilidade para as plantas, e suas relações com as propriedades do solo em unidades de mapeamento representativas do estado do Ceará. Utilizaram-se 48 amostras compostas da camada superficial (0-20 cm) de solos classificados como: Areia Quartzosa (AQd), Aluvial (Ae), Planossolo (PL), Bruno Não-Cálcico (NC), Cambissolo (Ce), Podzólico Vermelho-Amarelo (PV), Latossolo Vermelho-Amarelo (LV) e Litossolo (Re). O boro total foi determinado após fusão com carbonato de sódio, e o boro solúvel por meio dos extratores: água quente, HCl 0,05 mol L-1 e Mehlich-1. O B total variou entre 8,3 e 52,2 mg kg-1, com média geral de 16,0 mg kg-1, verificando-se as menores médias nos solos NC, Re e AQd e as maiores nos solos LV, PL e PV. Os teores de B solúvel variaram entre 0,22 e 1,22 mg kg-1, com média de 0,60 mg kg-1, na água quente; entre 0,21 e 1,24 mg kg-1, com média de 0,53 mg kg-1, no HCl 0,05 mol L-1; e entre 0,50 e 1,81 mg kg-1, com média de 1,07 mg kg-1, no Mehlich-1, representando 3,76; 3,32 e 6,76% do B total, respectivamente. As menores médias foram apresentadas pelos solos AQd e LV, e as maiores pelo Ce. Os três extratores correlacionaram-se de forma positiva e altamente significativa. O B total e a matéria orgânica explicaram 28,8 e 38,3% do B extraído pela água quente, respectivamente. O conteúdo de argila, os óxidos de Mn e os sesquióxidos de Fe e Al amorfos e cristalinos influenciaram em menor proporção. A inclusão dessas características numa análise de regressão múltipla melhorou os coeficientes de correlação.

Culturas de cobertura, acúmulo de nitrogênio total no solo e produtividade de milho

A associação de preparos conservacionistas com culturas de cobertura é importante estratégia de melhoria da qualidade do solo. Quando leguminosas são utilizadas, verifica-se incremento na disponibilidade de nitrogênio (N) para a primeira cultura em sucessão (efeito imediato). Todavia, o uso de leguminosas por vários anos pode se refletir no incremento da capacidade do solo em suprir N (efeito residual). Com o objetivo de distinguir o efeito residual do efeito imediato do uso de culturas de cobertura foi realizada esta pesquisa. Utilizou-se um experimento de longa duração (1985 a 1995) instalado na Estação Experimental Agronômica da UFRGS, RS. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados com parcelas subsubdivididas e três repetições. As parcelas principais incluíram três sistemas de preparo: convencional, reduzido e direto; as subparcelas abrangeram três sistemas de cultura: aveia/milho (A/M), aveia + ervilhaca/milho (A + E/M) e aveia + ervilhaca/milho+caupi (A + E/M + C) e as subsubparcelas doses de N. O solo da área experimental é um Podzólico Vermelho-Escuro. No ano desta pesquisa (1995), os sistemas de cultura utilizados foram aveia/milho, ervilhaca/milho e aveia + ervilhaca/milho. Visando avaliar o efeito residual do uso de culturas de cobertura, um segmento da parcela foi mantido descoberto durante o inverno que antecedeu o cultivo do milho. A associação de preparos conservacionistas (reduzido e direto) com o uso de leguminosas aumentou o estoque de N total na camada superficial do solo. O efeito residual das leguminosas no sistema A + E/M + C promoveu incrementos de 26 e 19% na quantidade de N absorvido e rendimento de grãos, respectivamente, em relação ao histórico de uso de A/M. Contudo, a presença de resíduos de ervilhaca ainda foi a principal responsável pelo fornecimento de N ao milho (efeito imediato).

C-orgânico, N-total e substâncias húmicas sob influência da introdução de pastagens (Brachiaria sp.) em áreas de cerrado e floresta amazônica

O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da intervenção humana na remoção da cobertura original e seu posterior uso agrícola, pela introdução de pastagem (Brachiaria sp) na região do cerrado (Senador Canedo-GO), junto à Empresa Goiana de Pesquisa Agropecuária (EMGOPA), e da floresta amazônica (Porto Velho-RO), junto à Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), tendo como atributos principais de análises modificações nos teores de nitrogênio total, carbono orgânico, relação C/N e frações de ácidos fúlvicos, ácidos húmicos e humina. As amostras foram coletadas em setembro de 1995, em Latossolo Vermelho-Amarelo argiloso, ao longo de uma transeção que continha 24 pontos: 12 sob vegetação natural e 12 sob pastagem plantada, em duas profundidades, em ambos os ecossistemas. Os resultados permitiram observar uma diminuição nas concentrações de ácido fúlvico e humina e nos teores de N-total e C-orgânico na mudança da condição de vegetação natural para pastagem; os maiores valores foram encontrados no horizonte Ao, principalmente no solo sob floresta amazônica, revelando uma queda brusca deste para o subjacente, evidenciando o efeito do tipo da cobertura vegetal sobre o teor e sobre a distribuição dos componentes orgânicos em solos tropicais.

Teor total e capacidade máxima de adsorção de chumbo em Latossolos brasileiros

O teor total e a capacidade máxima de adsorção de chumbo (Pb) dos solos são influenciados pelos seus atributos físicos, químicos e mineralógicos e o seu conhecimento é de fundamental importância para estudos da dinâmica do Pb no meio ambiente. Neste estudo, determinaram-se o teor total e a capacidade máxima de adsorção de Pb (CMAPb) de Latossolos de várias regiões geográficas do Brasil e correlacionaram-se os valores de CMAPb com os seus atributos físicos, químicos e mineralógicos. O teor total variou de 6,14 a 30,55 mg kg-1, com média de 18,00 mg kg-1, verificando-se os maiores teores em solos das regiões sul e sudeste. A CMAPb variou de 2.115 a 19.465 mg kg-1, com média de 11.296 mg kg-1, apresentando correlação negativa com as relações Al2O3/Fe2O3 e Gt/(Gt + Hm) e correlação positiva com Si e Fe, extraídos por ataque sulfúrico, Fe, extraído pelo oxalato ácido de amônio e ditionito-citrato-bicarbonato de sódio, caulinita e hematita, bem como com os valores de CTC e superfície específica. Os solos estudados apresentaram grande capacidade de retenção de Pb, tendo os Latossolos Roxos e Latossolos Vermelho-Escuros apresentado maiores CMAPb que os Latossolos Vermelho-Amarelos e Latossolo Amarelo. Adicionalmente, a maioria dos solos apresentou CMAPb maior que a CTC a pH 7,0, o que pode ser um indicativo de que parte do Pb é adsorvido como complexo de esfera interna.

Importância das espécies minerais no potássio total da fração argila de solos do Triângulo Mineiro

Poucos trabalhos relacionam a reserva de K em solos desenvolvidos sob clima tropical úmido com os minerais presentes na fração argila. Com esse propósito, coletaram-se amostras de 19 solos no Triângulo Mineiro, originados de diferentes materiais de origem e estádios de desenvolvimento. Dada a significativa ocorrência, tomou-se maior número de amostras no Grupo Bauru, abrangendo todas as formações geológicas encontradas na região. Os teores totais de K foram determinados após digestão das amostras de terra fina e das frações areia, silte e argila com ácidos concentrados (HF, HNO3 e H2SO4). Para avaliar a contribuição de cada espécie mineral nos teores totais de K, amostras da fração argila saturadas por Na foram submetidas a extrações seqüenciais e seletivas de minerais, na seguinte ordem: extração de Al e óxidos de Fe de baixa cristalinidade; extração de óxidos de Fe mais cristalinos; extração de gibbsita e caulinita; extração de minerais do tipo 2:1; extração de feldspatos e minerais resistentes. A composição mineralógica da fração argila refletiu o intenso grau de intemperismo e lixiviação dos solos do Triângulo Mineiro, com baixos teores de minerais de baixa cristalinidade, predomínio de caulinita e presença de outros minerais secundários resistentes. Mesmo com essa mineralogia, a fração argila apresentou o maior teor de K total, principalmente para os solos mais intemperizados. Considerando a abundância de caulinita na fração argila, este mineral foi uma importante fonte de formas não-trocáveis do nutriente. Por outro lado, a contribuição dos óxidos de Fe e de Al de baixa cristalinidade e dos óxidos de Fe mais cristalinos nos teores totais de K da fração argila foi inexpressiva. Em geral, os minerais primários facilmente intemperizáveis (mica e feldspato) contribuíram em grande proporção para o K total da fração argila, principalmente para os solos mais jovens desenvolvidos de arenito da Formação Uberaba, migmatito/micaxisto do Grupo Araxá e basalto da Formação Serra Geral.

Correlação linear e espacial entre a produtividade de forragem, a porosidade total e a densidade do solo de Pereira Barreto (SP)

Em relação aos sistemas de manejo adotados pelo homem, a porosidade total e a densidade do solo são atributos ativamente alterados, refletindo decisivamente sobre a produtividade vegetal agrícola. No ano agrícola de 2005, na Fazenda Bonança, no município de Pereira Barreto, Estado de São Paulo, Brasil, foram analisadas a produtividade de forragem do milho outonal (MSF) no sistema plantio direto irrigado, a porosidade total (PT) e a densidade do solo (DS) em profundidade, em um Latossolo Vermelho distrófico. O objetivo foi estudar a variabilidade e as correlações lineares e espaciais entre os atributos da planta e do solo, visando selecionar um indicador da qualidade física do solo de boa representatividade para produtividade da forragem. Foi instalada a malha geoestatística, para coleta de dados do solo e planta, contendo 125 pontos amostrais, numa área de 2.500 m². Os atributos estudados, além de não terem variado aleatoriamente, apresentaram variabilidade dos dados entre média e baixa e seguiram padrões espaciais bem definidos, com alcance entre 6,8 e 23,7 m. Por sua vez, a correlação linear entre o atributo da planta e os do solo, em razão do elevado número de observações, foi baixa. As observações de melhor correlação com a MSF foram a DS1 e a PT1. Entretanto, do ponto de vista espacial, houve excelente correlação inversa entre a MSF e a DS1, assim como entre a DS1 e a PT1. Nos sítios onde a DS1 aumentou (1,45-1,64 kg dm-3) a MSF variou entre 11.653 e 14.552 kg ha-1; já naqueles onde diminuiu (1,35-1,45 kg dm-3) a MSF, ficou entre 14.552 e 17.450 kg ha-1. Portanto, a densidade global, avaliada na camada de 0-0,10 m (DS1), apresentou-se como satisfatório indicador da qualidade física do solo de Pereira Barreto (SP), quando destinado à produtividade de forragem do milho outonal.