Toxocara canis (Werner, 1782) eggs in the Pleistocene site of Menez-Dregan, France (300,000-500,000 years before present)

On the archaeological site of Menez-Dregan in Brittany, France, dated 300,000-500,000 years-old, paleoparasitological analysis of cave deposits led to the detection of well-preserved helminth eggs, which morphology and morphometry pointed to the diagnosis of Toxocara canis eggs, a parasite of carnivore mammals. Paleolithic remains suggested a parasitism of the hyena Crocuta spelaea or other canids that inhabited the region.

Larval recovery of Toxocara canis in organs and tissues of experimentally infected Rattus norvegicus

The aim of this note was to record for the first time the recovery of Toxocara canis larvae from tissues and organs of Rattus norvegicus (Berkenhout, 1769), Wistar strain, until the 60th day after experimental infection. Rats were orally infected with embryonated T. canis eggs, killed on days 3, 5, 8, 10, 15, 30, and 60 after inoculation and larvae were recovered from liver, lungs, kidneys, brain, and carcass after acid digestion, showing a pattern of migration similar of that previously observed in mice.

In vitro and in vivo effects of Enterococcus faecalis CECT7121 on Toxocara canis

The aim of the present paper was to evaluate the larvicidal effect of Enterococcus faecalis CECT7121 (Ef7121) on the Toxocara canis cycle both in vitro and in vivo. For the in vitro experiments, T. canis larvae were incubated with the supernatants of Ef7121 (EI) and mutant Ef7121 (EIm), in a pre-culture of Ef7121 (EII) and in a fresh culture with Ef7121 (EIII) and the Ef7121 mutant strain (EIIIm). The viability of the larvae was calculated after a 48 h incubation. A significant reduction of the viability of T. canis larvae was observed in EI, EII and EIII. A decrease of this inhibitory effect was observed in EIm and EIIIm (p = 0.008). In the in vivo experiments, mice were orally inoculated with three doses of Ef7121. To study the probiotic persistence in the intestine, the animals were sacrificed every four days and their intestines were dissected. The initial average bacterial levels were 9.7 x 10(4) for Ef7121 (colony forming units/g). At the end of the assay the levels were 1.46 x 10(4). No bacterial translocation was detected in mesenteric lymphatic nodules and spleen. Ef7121 interference with the biological cycle was evaluated in mice challenged with T. canis. The interference was significant when the mice were challenged with probiotic and T. canis simultaneously (p = 0.001), but it was not significant when the challenge was performed 15 days after administration of the bacterial inoculum (p = 0.06). In conclusion, Ef7121 possessed in vitro and in vivo larvicidal activity.

Detection of Leishmania infantum in naturally infected Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) and Canis familiaris in Misiones, Argentina: the first report of a PCR-RFLP and sequencing-based confirmation assay

In this study, a genotypification of Leishmaniawas performed using polimerase chain reaction-restriction fragment length polymorfism (PCR-RFLP) and sequencing techniques to identify species of Leishmaniaparasites in phlebotomine sand flies and dogs naturally infected. Between January-February of 2009, CDC light traps were used to collect insect samples from 13 capture sites in the municipality of Posadas, which is located in the province of Misiones of Argentina. Sand flies identified as Lutzomyia longipalpiswere grouped into 28 separate pools for molecular biological analysis. Canine samples were taken from lymph node aspirates of two symptomatic stray animals that had been positively diagnosed with canine visceral leishmaniasis. One vector pool of 10 sand flies (1 out of the 28 pools tested) and both of the canine samples tested positively for Leishmania infantumby PCR and RFLP analysis. PCR products were confirmed by sequencing and showed a maximum identity with L. infantum. Given that infection was detected in one out of the 28 pools and that at least one infected insect was infected, it was possible to infer an infection rate at least of 0.47% for Lu. longipalpisamong the analyzed samples. These results contribute to incriminate Lu. longipalpis as the vector of L. infantumin the municipality of Posadas, where cases of the disease in humans and dogs have been reported since 2005.

Identification of candidate antigens from adult stages of Toxocara canis for the serodiagnosis of human toxocariasis

In the present work, we identified adult Toxocara canis antigens through sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for potential use in human toxocariasis immunodiagnosis. The sensitivity and specificity of several semi-purified antigens, as well as their cross-reactivity with other parasitic infections, were assessed by IgM and IgG-enzime linked immunosorbent assay. Whilst we found that the crude extract of the parasite presented limited sensitivity, specificity and high cross-reactivity against other parasites, we identified 42, 58, 68 and 97-kDa semi-purified antigens as the most promising candidates for immunodiagnosis. Moreover, the 58 and 68-kDa antigens presented the lowest IgM cross-reactivity. When tested as a combination, a mixture of the 58 and 68-kDa antigens presented 100% sensitivity and specificity, as well as minor cross-reactivity. Although the combination of the 42, 58, 68 and 97-kDa antigens presented 100% sensitivity at a dilution of 1:40, the low specificity and high cross-reactivity observed suggested a limited use for diagnostic purposes. Our data suggested that the 58 and 68-kDa antigens might be most suitable for the immunodiagnosis of human toxocariasis.

An evaluation of the dot-ELISA procedure as a diagnostic test in an area with a high prevalence of human Toxocara canis infection

The aim of this work was to evaluate a dot-enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) using excretory-secretory antigens from the larval stages of Toxocara canis for the diagnosis of toxocariasis. A secondary aim was to establish the optimal conditions for its use in an area with a high prevalence of human T. canis infection. The dot-ELISA test was standardised using different concentrations of the antigen fixed on nitrocellulose paper strips and increasing dilutions of the serum and conjugate. Both the dot-ELISA and standard ELISA methods were tested in parallel with the same batch of sera from controls and from individuals living in the problem area. The best results were obtained with 1.33 µg/mL of antigen, dilutions of 1/80 for the samples and controls and a dilution of 1/5,000 for the anti-human IgG-peroxidase conjugate. All steps of the procedure were performed at room temperature. The coincidence between ELISA and dot-ELISA was 85% and the kappa index was 0.72. The dot-ELISA test described here is rapid, easy to perform and does not require expensive equipment. Thus, this test is suitable for the serological diagnosis of human T. canis infection in field surveys and in the primary health care centres of endemic regions.

Toxocara canis and the allergic process

The protective effect of infectious agents against allergic reactions has been thoroughly investigated. Current studies have demonstrated the ability of some helminths to modulate the immune response of infected hosts. The objective of the present study was to investigate the relationship between Toxocara canis infection and the development of an allergic response in mice immunised with ovalbumin (OVA). We determined the total and differential blood and bronchoalveolar lavage fluid cells using BALB/c mice as a model. To this end, the levels of interleukin (IL)-4, IL-5 and IL-10 and anti-OVA-IgE were measured using an ELISA. The inflammatory process in the lungs was observed using histology slides stained with haematoxylin and eosin. The results showed an increase in the total number of leukocytes and eosinophils in the blood of infected and immunised animals at 18 days after infection. We observed a slight lymphocytic inflammatory infiltrate in the portal space in all infected mice. Anti-OVA-IgE levels were detected in smaller proportions in the plasma of immunised and infected mice compared with mice that were only infected. Therefore, we concluded that T. canis potentiates inflammation in the lungs in response to OVA, although anti-OVA-IgE levels suggest a potential reduction of the inflammatory process through this mechanism.

Ocorrência de Rhopalopsyllus lutzi lutzi (Baker) (Siphonaptera, Rhopalopsyllidae) em Canis familiaris (Linnaeus) de zona rural do município de Piraí, Rio de Janeiro, Brasil

A ocorrência de Rhopalopsyllus lutzi lutzi (Baker) (Siphonaptera, Rhopalopsyllidae) foi assinalada em Canis familiaris (Linnaeus) de áreas rurais do município de Piraí, estado do Rio de Janeiro, Brasil. No período de junho 2001/novembro 2003, 51 sifonápteros foram capturados em oito cães procedentes de duas propriedades rurais do município de Piraí. Os exemplares coletados foram acondicionados em álcool etílico 70%, levados ao Laboratório de Parasitologia Animal da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro para contagem e sexagem. Os exemplares foram identificados como Rhopalopsyllus lutzi lutzi Baker, 1904 (machos=18 e fêmeas=33). R. lutzi lutzi é, pela primeira vez, assinalada em cães domésticos naturalmente infestados em áreas rurais do estado do Rio de Janeiro.

Inquérito sorológico e fatores de risco para a brucelose por Brucella canis em cães do município de Santana de Parnaíba, Estado de São Paulo

Foi investigada a prevalência da brucelose causada por Brucella canis em cães do município de Santana de Parnaíba, SP, Brasil, e realizado um estudo de possíveis fatores de risco associados à soropositividade para B. canis. Foram examinadas 410 amostras de soro sanguíneo de cães colhidas durante a campanha de vacinação anti-rábica animal, realizada em agosto de 1999. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando antígeno de lipopolissacarídeos e proteínas de Brucella ovis, amostra Reo 198, foi empregada em soros normais como teste de triagem, e, para a confirmação, a mesma técnica foi aplicada em soros tratados pelo 2-mercaptoetanol (IDGA-ME). A reação de fixação de complemento (CFT), utilizando antígeno de B. ovis, amostra 63/290, também foi utilizada como prova confirmatória. A determinação da prevalência considerou como positivos os animais que reagiram positivamente nos dois testes confirmatórios (IDGA-ME e CFT). A prevalência da B. canis foi de 2,2% (I.C. 95% = 1,01-4,13%). A análise estatística mostrou que os cães com acesso irrestrito à rua o dia todo (manejo do tipo solto) estiveram mais expostos ao risco da infecção por B. canis, com um valor de odds ratio de 8,73 (I.C. 95% = 1,48-51,55) e p=0,04.

Relação entre a biometria ultra-sonográfica em modo B do bulbo ocular e os diâmetros fronto occiptal e bizigomático em Canis familiaris

Avaliou-se 31 cães saudáveis, sem raça definida, sendo 10 machos e 21 fêmeas, com 8 meses a 7 anos de idade e peso de1,5-28 kg. Inicialmente foram mensurados os diâmetros fronto-occiptal (DFO) e bizigomático (DBZ) do crânio com o auxílio de um paquímetro. A ultra-sonografia transpalpebral em modo-B foi realizada para mensurar as estruturas do bulbo ocular, conforme se segue: D1- espessura da córnea; D2- distância entre o ponto central da imagem da córnea e a da cápsula anterior do cristalino (câmara anterior); D3- distância entre o ponto central da imagem da córnea e a da cápsula posterior do cristalino; D4- espessura do cristalino, que corresponde a distância entre a imagem da cápsula anterior e a cápsula posterior do cristalino; D5- diâmetro do cristalino, distância entre as imagens dos pólos do cristalino; D6- área do cristalino; D7- câmara vítrea, distância entre a imagem da cápsula posterior do cristalino e a retina; D8- distância entre a cápsula anterior do cristalino e a retina; D9- distância entre a imagem da córnea e a retina. Com exceção da D4, houve efeito dos DFO e DBZ sobre as medidas das estruturas internas do BO. A análise de regressão linear entre as medidas das estruturas do bulbo ocular e os DFO e DBZ foram significativas para D1, D2, D3, D4, D5, D6, D7, D8 e D9.

Triplex Doppler da artéria renal e a relação entre a ecobiometria dos rins com distância atlanto-coccígea e altura em Canis familiaris

O objetivo do trabalho foi estabelecer a relação entre a ecobiometria renal com medidas de conformação corporal como a distância atlanto-coccígea (DAC) e a altura (H) de cães adultos saudáveis, obtendo-se parâmetros de normalidade para avaliar o tamanho e volume renal, bem como estabelecer valores de referência para avaliar a perfusão sanguínea dos rins por meio do índice de resistividade (IR) e do índice de pulsatilidade (IP) do ramo principal da artéria renal. No estudo foram utilizados 22 cães adultos sem raça definida, sendo 11 machos e 11 fêmeas. Os animais foram previamente aferidos quanto a DAC e a H. Os exames ultra-sonográficos foram realizados com um aparelho HDI 4000 PHILIPS munido de um transdutor microconvexo multifreqüêncial (5-8 MHz), dispositivos Doppler Colorido e Doppler de Fluxo. Os animais foram posicionados em decúbito lateral direito ou esquerdo, de acordo com o rim a ser avaliado. Os diâmetros longitudinal (DL) e dorsoventral (DDV) dos rins foram mensurados na secção longitudinal e, o diâmetro transversal (DT) foi aferido no plano transversal. O volume (V) foi calculado automaticamente pelo software do ultra-som. Com o uso do Triplex Doppler, o IR e o IP das artérias renais direita e esquerda foram obtidos. Todos os dados foram apresentados em média ± EPM. Análises de regressão linear foram realizadas tendo o DL, DDV, DT e V como variáveis dependentes e a DAC e H como variáveis independentes. Os IR e IP dos rins direito e esquerdo foram comparados pelo teste t de Student. A DAC variou de 54-78cm para machos e 37-71cm para fêmeas e a altura variou entre 34-64 cm para os machos e 24-57cm para as fêmeas. As médias obtidas para DL, DDV, DT e V dos rins esquerdo e direito foram: 5,24±0,27cm, 3,07±0,15cm, 3,07±0,9cm, 28,01±3,4mL e 4,50±0,19cm, 2,88±0,14cm, 2,71±0,15cm, 21,27±2,6mL, respectivamente. As análises de regressão linear entre as medidas lineares e volume renal com a DAC e a H foram significativas para os interceptos e coeficientes de regressão (P<0,01). Houve diferenças estatísticas quando comparado os IR e IP entre os rins direito e esquerdo (P=0,001), sendo que as médias para IR e IP dos rins esquerdo e direito foram 0,62±0,08; 1,34±0,18 e 0,70±0,06; 1,62±0,13; respectivamente. Os dados obtidos no presente trabalho podem auxiliar na avaliação do tamanho, volume e perfusão dos rins de cães adultos.

Alterações hematológicas em cães (Canis lupus familiaris) após tratamento com eletroacupuntura

A acupuntura, é uma terapia que cada vez mais adquire uma credibilidade no mundo ocidental, a sua indicação pode ser para pacientes anêmicos e imunossuprimidos, e outras afecções. O experimento foi realizado com oito cães adultos, sendo 4 fêmeas e 4 machos. O estudo consistiu em análise das concentrações das células vermelhas e brancas avaliado em 4 tratamentos: controle (T0), acupuntura (T1), eletroacupuntura unilateral (T2) e eletroacupuntura bilateral (T3). Os acupontos utilizados foram intestino grosso 4, intestino grosso 11 e estômago 36. Todos os animais passaram por todos os tratamentos com um intervalo de 7 dias para cada tratamento. Os hemogramas séricos foram verificados 20 minutos antes do início do tratamento (M0), logo após o tratamento (M1), e 60 minutos (M2) e 120 minutos (M3) após o tratamento. O resultado da série vermelha não foi significativo, mas notou-se somente uma diminuição significativa da concentração média corpuscular (CHCM) (p<0,05) no tratamento T1 no M1 em comparação aos outros tratamentos; notou-se também uma redução significativa (p<0,05) na concentração plaquetária de T1, T2 e T3 em comparação ao grupo controle. A eletroacupuntura pode levar a uma trombocitopenia, quando estimulado estes pontos, provavelmente por um estímulo parassimpaticomimético.

Babesia canis vogeli infection in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil

Abstract:This study aimed to report the prevalence of Babesia canis vogeli in dogs and ticks in the urban and rural areas of Petrolina, Pernambuco. Serum and peripheral blood samples of 404 dogs were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) and by blood smears, respectively. The presence of tick infestation was evaluated, and some specimens were submitted to DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR). The presence of antibodies anti-B. canis vogeli was determinate in 57.9% (234/404) of dogs. The direct detection of Babesia spp was obtained in 0.5% (2/404) dogs by visualization of intraerythrocytic forms. Infestation by Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed in 54.5% (220/404) of dogs in both urban and rural areas. DNA of Babesia canis vogeli were obtained by PCR in 6% individual (3/50) and 8.7% of pool of ticks (7/80). The risk factors for the presence of anti-B. canis vogeli antibodies, as determined through the application of logistic regression models (P<0.05), were the following: medium breed size variables (P<0.001); contact with areas of forest (P=0.021); and access on the street (P=0.046). This study describes, for the first time, the confirmation of infection of B. canis vogeli in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil.

Evidence for eosinophil recruitment, leukotriene B4 production and mast cell hyperplasia following Toxocara canis infection in rats

It is well known that eosinophilia is a key pathogenetic component of toxocariasis. The objective of the present study was to determine if there is an association between peritoneal and blood eosinophil influx, mast cell hyperplasia and leukotriene B4 (LTB4) production after Toxocara canis infection. Oral inoculation of 56-day-old Wistar rats (N = 5-7 per group) with 1000 embryonated eggs containing third-stage (L3) T. canis larvae led to a robust accumulation of total leukocytes in blood beginning on day 3 and peaking on day 18, mainly characterized by eosinophils and accompanied by higher serum LTB4 levels. At that time, we also noted increased eosinophil numbers in the peritoneal cavity. In addition, we observed increased peritoneal mast cell number in the peritoneal cavity, which correlated with the time course of eosinophilia during toxocariasis. We also demonstrated that mast cell hyperplasia in the intestines and lungs began soon after the T. canis larvae migrated to these compartments, reaching maximal levels on day 24, which correlated with the complete elimination of the parasite. Therefore, mast cells appear to be involved in peritoneal and blood eosinophil infiltration through an LTB4-dependent mechanism following T. canis infection in rats. Our data also demonstrate a tight association between larval migratory stages and intestinal and pulmonary mast cell hyperplasia in the toxocariasis model.

Ocorrência de larva migrans na areia de áreas de lazer das escolas municipais de ensino infantil, Araçatuba, SP, Brasil

A areia das áreas de lazer de escolas podem constituir vias de transmissão para várias zoonoses parasitárias, representando risco potencial para as crianças que brincam nesses locais. Foi avaliada a ocorrência de agentes de larva migrans em 28 escolas municipais de ensino infantil de Araçatuba, SP. Foram colhidas 535 amostras de areia das áreas de lazer dessas escolas nos meses de janeiro (verão) e julho (inverno) de 1997 para estabelecimento da freqüência de isolamento de larvas e/ou ovos de Ancylostoma spp. e de ovos de Toxocara spp., pelos métodos de centrífugo-flutuação e de Baermann, respectivamente. A presença de larvas de Ancylostoma spp. foi observada, em pelo menos uma das amostras, em 35,7% (10/28) das amostras da primeira colheita (verão) e em 46,4% (13/28) quando da segunda colheita (inverno). Ovos de Toxocara spp. não foram encontrados e a presença de ovos de Ancylostoma spp. foi observada em 0,56% (3/535) das amostras.