Effect of metabolic acidosis on renal tubular sodium handling in rats as determined by lithium clearance

Systemic metabolic acidosis is known to cause a decrease in salt and water reabsorption by the kidney. We have used renal lithium clearance to investigate the effect of chronic, NH4Cl-induced metabolic acidosis on the renal handling of Na+ in male Wistar-Hannover rats (200-250 g). Chronic acidosis (pH 7.16 ± 0.13) caused a sustained increase in renal fractional Na+ excretion (267.9 ± 36.4%), accompanied by an increase in fractional proximal (113.3 ± 3.6%) and post-proximal (179.7 ± 20.2%) Na+ and urinary K+ (163.4 ± 5.6%) excretion when compared to control and pair-fed rats. These differences occurred in spite of an unchanged creatinine clearance and Na+ filtered load. A lower final body weight was observed in the acidotic (232 ± 4.6 g) and pair-fed (225 ± 3.6 g) rats compared to the controls (258 ± 3.7 g). In contrast, there was a significant increase in the kidney weights of acidotic rats (1.73 ± 0.05 g) compared to the other experimental groups (control, 1.46 ± 0.05 g; pair-fed, 1.4 ± 0.05 g). We suggest that altered renal Na+ and K+ handling in acidotic rats may result from a reciprocal relationship between the level of metabolism in renal tubules and ion transport.

Effect of D-alpha-tocopherol on tubular nephron acidification by rats with induced diabetes mellitus

The objective of the present study was to determine if treatment of diabetic rats with D-alpha-tocopherol could prevent the changes in glomerular and tubular function commonly observed in this disease. Sixty male Wistar rats divided into four groups were studied: control (C), control treated with D-alpha-tocopherol (C + T), diabetic (D), and diabetic treated with D-alpha-tocopherol (D + T). Treatment with D-alpha-tocopherol (40 mg/kg every other day, ip) was started three days after diabetes induction with streptozotocin (60 mg/kg, ip). Renal function studies and microperfusion measurements were performed 30 days after diabetes induction and the kidneys were removed for morphometric analyses. Data are reported as means ± SEM. Glomerular filtration rate increased in D rats but decreased in D + T rats (C: 6.43 ± 0.21; D: 7.74 ± 0.45; D + T: 3.86 ± 0.18 ml min-1 kg-1). Alterations of tubular acidification observed in bicarbonate absorption flux (JHCO3) and in acidification half-time (t/2) in group D were reversed in group D + T (JHCO3, C: 2.30 ± 0.10; D: 3.28 ± 0.22; D + T: 1.87 ± 0.08 nmol cm-2 s-1; t/2, C: 4.75 ± 0.20; D: 3.52 ± 0.15; D + T: 5.92 ± 0.19 s). Glomerular area was significantly increased in D, while D + T rats exhibited values similar to C, suggesting that the vitamin prevented the hypertrophic effect of hyperglycemia (C: 8334.21 ± 112.05; D: 10,217.55 ± 100.66; D + T: 8478.21 ± 119.81µm²). These results suggest that D-alpha-tocopherol is able to protect rats, at least in part, from the harmful effects of diabetes on renal function.

Proximal tubular dysfunction as an indicator of chronic graft dysfunction

New strategies are being devised to limit the impact of renal sclerosis on graft function. Individualization of immunosuppression, specifically the interruption of calcineurin-inhibitors has been tried in order to promote better graft survival once chronic graft dysfunction has been established. However, the long-term impact of these approaches is still not totally clear. Nevertheless, patients at higher risk for tubular atrophy and interstitial fibrosis (TA/IF) development should be carefully monitored for tubular function as well as glomerular performance. Since tubular-interstitial impairment is an early event in TA/IF pathogenesis and associated with graft function, it seems reasonable that strategies directed at assessing tubular structural integrity and function would yield important functional and prognostic data. The measurement of small proteins in urine such as α-1-microglobulin, N-acetyl-beta-D-glucosaminidase, alpha/pi S-glutathione transferases, β-2 microglobulin, and retinol binding protein is associated with proximal tubular cell dysfunction. Therefore, its straightforward assessment could provide a powerful tool in patient monitoring and ongoing clinical assessment of graft function, ultimately helping to facilitate longer patient and graft survival associated with good graft function.

Gentamicin-induced preconditioning of proximal tubular LLC-PK1 cells stimulates nitric oxide production but not the synthesis of heat shock protein

Nephrotoxicity is the main side effect of antibiotics such as gentamicin. Preconditioning has been reported to protect against injuries as ischemia/reperfusion. The objective of the present study was to determine the effect of preconditioning with gentamicin on LLC-PK1 cells. Preconditioning was induced in LLC-PK1 cells by 24-h exposure to 2.0 mM gentamicin (G/IU). After 4 or 15 days of preconditioning, cells were again exposed to gentamicin (2.0 mM) and compared to untreated control or G/IU cells. Necrosis and apoptosis were assessed by acridine orange and HOESCHT 33346. Nitric oxide (NO) and endothelin-1 were assessed by the Griess method and available kit. Heat shock proteins were analyzed by Western blotting. After 15 days of preconditioning, LLC-PK1 cells exhibited a significant decrease in necrosis (23.5 ± 4.3 to 6.5 ± 0.3%) and apoptosis (23.5 ± 4.3 to 6.5 ± 2.1%) and an increase in cell proliferation compared to G/IU. NO (0.177 ± 0.05 to 0.368 ± 0.073 µg/mg protein) and endothelin-1 (1.88 ± 0.47 to 2.75 ± 0.53 pg/mL) production significantly increased after 15 days of preconditioning compared to G/IU. No difference in inducible HSP 70, constitutive HSC 70 or HSP 90 synthesis in tubular cells was observed after preconditioning with gentamicin. The present data suggest that preconditioning with gentamicin has protective effects on proximal tubular cells, that involved NO synthesis but not reduction of endothelin-1 or production of HSP 70, HSC 70, or HSP 90. We conclude that preconditioning could be a useful tool to prevent the nephrotoxicity induced by gentamicin.

Noncrystalline uric acid inhibits proteoglycan and glycosaminoglycan synthesis in distal tubular epithelial cells (MDCK)

Hyperuricemia is associated with renal stones, not only consisting of uric acid (UrAc) but also of calcium oxalate (CaOx). Glycosaminoglycans (GAGs) are well-known inhibitors of growth and aggregation of CaOx crystals. We analyzed the effect of noncrystalline UrAc on GAG synthesis in tubular distal cells. MDCK (Madin-Darby canine kidney) cells were exposed to noncrystalline UrAc (80 µg/mL) for 24 h. GAGs were labeled metabolically and characterized by agarose gel electrophoresis. The expression of proteoglycans and cyclooxygenase 2 (COX-2) was assessed by real-time PCR. Necrosis, apoptosis and prostaglandin E2 (PGE2) were determined by acridine orange, HOESCHT 33346, and ELISA, respectively. CaOx crystal endocytosis was evaluated by flow cytometry. Noncrystalline UrAc significantly decreased the synthesis and secretion of heparan sulfate into the culture medium (UrAc: 2127 ± 377; control: 4447 ± 730 cpm) and decreased the expression of perlecan core protein (UrAc: 0.61 ± 0.13; control: 1.07 ± 0.16 arbitrary units), but not versican. Noncrystalline UrAc did not induce necrosis or apoptosis, but significantly increased COX-2 and PGE2 production. The effects of noncrystalline UrAc on GAG synthesis could not be attributed to inflammatory actions because lipopolysaccharide, as the positive control, did not have the same effect. CaOx was significantly endocytosed by MDCK cells, but this endocytosis was inhibited by exposure to noncrystalline UrAc (control: 674.6 ± 4.6, CaOx: 724.2 ± 4.2, and UrAc + CaOx: 688.6 ± 5.4 geometric mean), perhaps allowing interaction with CaOx crystals. Our results indicate that UrAc decreases GAG synthesis in MDCK cells and this effect could be related to the formation of UrAc and CaOx stones.

Calcium citrate improves the epithelial-to-mesenchymal transition induced by acidosis in proximal tubular cells

INTRODUCTION: Epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) is a key event in renal fibrosis. The aims of the study were to evaluate acidosis induced EMT, transforming-growth-factor (TGF) β1 role and citrate effect on it. METHODS: HK2 cells (ATCC 2290) were cultured in DMEM/HAM F12 medium, pH 7.4. At 80% confluence, after 24 hr under serum free conditions, cells were distributed in three groups (24 hours): A) Control: pH 7.4, B) Acidosis: pH 7.0 and C) Calcium citrate (0.2 mmol/L) + pH 7.0. Change (Δ) of intracellular calcium concentration, basal and after Angiotensin II (10-6M) exposition, were measured to evaluate cellular performance. EMT was evaluated by the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin by immunocytochemistry and/or Western blot. TGF-β1 secretion was determined by ELISA in cell supernatant. RESULTS: At pH 7.0 HK2 cells significantly reduced E-cadherin and increased α-SMA expression (EMT). Supernatant TGF-β1 levels were higher than in control group. Calcium citrate decreased acidosis induced EMT and improved cells performance, without reduction of TGF-β production. CONCLUSIONS: Acidosis induces EMT and secretion of TGF-β1 in tubular proximal cells in culture and citrate improves cellular performance and ameliorates acidosis induced EMT.

Sensitividade e especificidade do potencial de média latência

O Potencial Evocado Auditivo de Média Latência (PEAML) foi primeiramente descrito por Geisler, Frishkopf, Rosenblith em 1958.¹ É caracterizado por uma série de ondas/respostas neuroelétricas gravadas no cérebro através de eletrodos de superfície. Atualmente, tem sido visto como um dos testes eletrofisiológicos mais promissores para a avaliação das disfunções e/ou alterações do Sistema Nervoso Auditivo Central. Suas ondas aparecem no intervalo entre 10 e 80 milissegundos (ms) após o início do estímulo auditivo. A onda Pa é a mais estudada por ser a mais visível e robusta deste potencial. Esse teste ainda é pouco utilizado na prática clínica pelo fato de existir uma grande variabilidade nos resultados encontrados intersujeitos, o que torna difícil o estabelecimento de medidas de normalidade. OBJETIVO: O objetivo desse trabalho foi estabelecer a efetividade - sensitividade e especificidade do PEAML para que este potencial possa ser mais utilizado com maior fidedignidade. FORMA DE ESTUDO: Caso-controle. MATERIAL E MÉTODO: Fizeram parte desse estudo indivíduos com idade entre 15 e 55 anos, portadores de lesões de Sistema Nervoso Auditivo Central, comprovada através de diagnóstico por imagem ou que tenham sido submetidos a cirurgias crânio-encefálicas, indivíduos portadores de Transtornos do Processamento Auditivo (TPA) comprovadas através de avaliação comportamental e indivíduos normais (Grupo Controle). RESULTADOS: Os resultados mostram que o corte de 30% apresentou melhores resultados, tanto para o efeito de eletrodo quanto para o efeito de orelha. O efeito de orelha foi mais fidedigno para evidenciar Transtornos de Processamento Auditivo, enquanto o efeito de eletrodo foi mais efetivo para evidenciar lesão.

Referências anatômicas na cirurgia do implante auditivo de tronco cerebral

O implante auditivo de tronco cerebral é uma opção os pacientes surdos que não têm a integridade das vias auditivas preservada. A cirurgia, por sua complexidade anatômica e funcional, requer treinamento específico em laboratório de anatomia por parte do cirurgião. OBJETIVOS: Estudar a anatomia cirúrgica da cirurgia do implante auditivo de tronco cerebral. FORMA DE ESTUDO: Estudo anatômico. MATERIAL E MÉTODO: Neste estudo dissecamos cadáver fresco preparado com solução corante injetada nas artérias e veias intra-cranianas. O local de inserção do eletrodo do implante auditivo de tronco cerebral foi estudado através do acesso translabiríntico. RESULTADOS: A técnica cirúrgica utilizada para a implantação do eletrodo de tronco cerebral é semelhante à utilizada na remoção do shwannoma vestibular. O complexo de núcleo coclear, composto pelo núcleo coclear ventral e dorsal, é o local para a colocação do eletrodo. O núcleo coclear ventral é o principal núcleo de transmissão de impulsos neurais do VIII par e seus axônios formam a principal via ascendente do nervo coclear. Tanto o núcleo ventral como o dorsal não são visíveis durante a cirurgia e sua localização depende de identificação de estruturas anatômicas adjacentes. CONCLUSÃO: A região de implantação do eletrodo do implante auditivo de tronco cerebral apresenta referências anatômicas que permitem sua fácil identificação durante a cirurgia.

Comparação dos Potenciais de Latência Média com ou sem estímulo musical

Os Potenciais Auditivos Evocados (PEA) constituem uma fonte rica e complexa de informações sobre as vias do sistema nervoso central e de estruturas ativadas por estimulação auditiva. Devido ao escasso número de trabalhos existentes correlacionando Resposta de Latência Média com diferentes estímulos sonoros, surgiu o interesse em se realizar esse estudo. OBJETIVO: Verificar o Potencial Evocado Auditivo de Média Latência (PEAML) em adultos normo-ouvintes frente à estimulação por clique e com música contralateral. FORMA DE ESTUDO: coorte contemporânea com corte transversal. MÉTODO: Foram realizadas as avaliações de PEAML em 10 sujeitos utilizando cliques na intensidade de 70dBnNA bilateralmente e posteriormente com estímulo musical, sendo que as latências e amplitudes foram medidas. Foi realizada a comparação da amplitude da onda Pa em relação ao eletrodo C3 e C4 e em relação à orelha direita e esquerda na presença e ausência de estímulo musical. RESULTADOS: todos os sujeitos apresentaram PEAML dentro dos limites de normalidade em ambas as orelhas e na avaliação com estímulo musical e clique foi observada uma diminuição das amplitudes na orelha contralateral a apresentação do estímulo musical em todas as posições do eletrodo, embora esta diferença não tenha sido estatisticamente significante. CONCLUSÃO: Sugere-se que o estímulo musical influencia na amplitude do PEAML, uma vez que houve diminuição da amplitude da onda Pa frente a esta estimulação.

Estudo das latências e amplitudes dos potenciais evocados auditivos de média latência em indivíduos audiologicamente normais

Estudo de coorte contemporânea com corte transversal. O Potencial Evocado Auditivo de Média Latência (PEAML) é gerado entre 10 e 80ms e possui múltiplos geradores, com maior contribuição da região tálamo-cortical. O estabelecimento de critérios de normalidade para os valores de latência e amplitude é necessário para uso clínico. OBJETIVOS: Analisar a latência e amplitude do PEAML em indivíduos sem alterações audiológicas, e verificar a confiabilidade da amplitude Pa-Nb. MATERIAL E MÉTODO: Foram coletados os PEAML de 25 indivíduos durante o ano de 2005 e analisados os componentes Na, Pa, Nb para cada orelha testada (A1 e A2), e posicionamento de eletrodo (C3 e C4). RESULTADOS: Observou-se diferença estatisticamente significante entre os valores médios de latência para C3A1 e C4A1 com relação aos componentes Na e Pa, não sendo encontrada esta diferença para o componente Nb e valores médios das amplitudes Na-Pa e Pa-Nb. CONCLUSÃO: Foram estabelecidos os valores das médias e desvios padrão para os parâmetros latência e amplitude dos componentes Na, Pa, Nb, e Na-Pa e Pa-Nb, nas condições C3A1, C4A1, C3A2, C4A2, proporcionando os parâmetros para a análise e interpretação deste potencial.

Anastomose do nervo facial de coelhos com cola de fibrina: estudo da velocidade de condução nervosa

OBJETIVO: Este estudo tem o objetivo de avaliar através da velocidade de condução nervosa com eletrodos de superfície a utilização da cola de fibrina na anastomose nervosa. MÉTODOS: Neste experimento, foram avaliadas as diferenças entre as velocidades de condução nervosa pré e pós-operatória do nervo facial esquerdo de 12 coelhos. Foi verificada a existência de correlação entre a velocidade de condução nervosa e o número de axônios regenerados no pós-operatório. Os nervos transeccionados foram unidos com cola de fibrina. O potencial de ação motora foi obtido com o uso de eletrodos de superfície. O eletrodo de estimulação foi colocado imediatamente à frente do pavilhão auditivo (tronco do nervo facial) e o eletrodo de gravação foi colocado no músculo quadrado do lábio inferior. RESULTADOS: A média normal da velocidade de condução nervosa foi de 36,53 m/seg. Ao final do período, a velocidade de condução nervosa atingiu um valor de aproximadamente 81% do valor normal. Não foi observada correlação significativa entre a velocidade de condução nervosa pós-operatória e o número de axônios regenerados (p=0,146). CONCLUSÃO: A anastomose com cola de fibrina pode ser utilizada para anastomose nervosa no modelo animal e nervo estudados.

Morphometry of testis and seminiferous tubules of the adult crab-eating fox (Cerdocyon thous, Linnaeus, 1766)

Body and testicular biometric parameters are very important for establishing reproductive patterns and, consequently, the development of protocols for assisted reproduction in different species. A direct correlation between the testis weight and the sperm population was observed in other studied species, because the testis size primarily reflects the total volume of the seminiferous tubule, its main component. The objective of this study was to determine the testicular volume parameters and correlate data from morphometry of testis and seminiferous tubules with body mass in six adult crab-eating foxes. The mean body weight of the crab-eating foxes in this study was 6.53 kg, with approximately 0.068% allocated to the testicular mass and 0.042% specifically to seminiferous tubules, which represented 87.5% of the testicular parenchyma. The albuginea comprised 12.5% of the testicular mass. The mean diameter of seminiferous tubules was 236 µm, and the mean thickness of the seminiferous epithelium was 62.9 µm. Values of tubular parameters indicate a sperm productivity close to those observed in previously studied carnivores.

Esterilização por óxido de etileno: II. Influência de corpos de prova no desempenho de monitores biológicos e sua avaliação

Pela importância da garantia de esterilidade em produto médico-hospitalares e pela predominância da forma tubular dentre estes produtos, conduziu-se o estudo de monitores biológicos em que os corpos de prova apresentavam diferentes comprimentos e diâmetros. O sensor biológico foi constituído de esporos de Bacillus subtilis var. niger adquirido do mercado nacional sob tiras de papel. Após esterilização por processo industrial, seguiu-se a recuperação dos esporos sobreviventes através de inoculação dos suportes em caldo tioglicolato, caldo caseína-soja e este adicionado de azul de bromotimol. A capacidade promotora de crescimento destes 3 meios de cultura não apresentou diferenças. A eficácia esterilizante foi dependente do tamanho de corpos de prova. A determinação periódica do teor residual de gás nos corpos de prova, bem como a monitoração ambiental industrial indicaram a importância da legislação em vigor, devendo ser obedecida a fim de garantir inocuidade aos pacientes e operadores.

Avaliação da concentração de flúor em águas minerais comercializadas no Brasil

A utilização de flúor sistêmico deve ser controlada em termos de risco/benefício, pois enquanto a subdosagem não trouxer benefício anticárie, a sobredosagem estará associada com fluorose dental. Assim, uma das preocupações é o consumo de águas minerais, o qual tem aumentado nos últimos anos. Deste modo, foi realizado estudo com o objetivo de analisar a concentração de flúor em águas minerais comercializadas no Brasil. Foram analisadas 104 marcas comerciais, de diferentes regiões do País. Utilizou-se eletrodo específico Orion 96-09 e analisador de íons Orion EA 940, previamente calibrados com soluções padrões de flúor. Foram observadas concentrações de flúor variando de 0,0 a 4,4 ppm. Constataram-se: 1) Concentrações significativas de flúor não relatadas pelo produtor; 2) Concentrações de flúor sem significado preventivo anti-cárie, embora o produtor destaque na embalagem "Água Mineral Fluoretada"; 3) Concentrações de flúor capazes de provocar fluorose dental severa, embora o produtor não faça nenhuma referência que o mesmo existe. Conclui-se ser necessário um Sistema de Vigilância Sanitária para o controle de flúor nas águas minerais oferecidas à população brasileira, quer seja em termos de benefício como de risco.

Ingestão de flúor por crianças pela água e dentifrício

OBJETIVO: Determinar a dose total de flúor proporcionada por dieta (líquidos e sólidos) e escovação com dentifrícios fluoretados a crianças na idade crítica para o desenvolvimento da fluorose dental em uma região de água fluoretada. MÉTODOS: Para realização de um estudo-piloto, foram selecionadas 39 crianças (20 a 30 meses de idade) de uma creche de Piracicaba, SP, Brasil. Elas bebiam água fluoretada de abastecimento e comiam alimentos preparados com ela. Foi feita a coleta da dieta-duplicada e dos produtos da escovação por dois dias seguidos, em quatro períodos do ano. A concentração de flúor nas amostras foi determinada utilizando-se eletrodo específico. Foi realizada análise de variância (Anova) com nível de 5% de significância. RESULTADOS: A dose total média encontrada foi de 0,090 mg F/dia/kg, tendo a dieta contribuído com 45%, e o dentifrício, com 55%. CONCLUSÕES: Aceitando-se o limite de 0,07 mg F/kg para exposição sistêmica ao flúor, conclui-se que as crianças estão expostas a uma dose total de risco em termos de fluorose dental clinicamente aceitável. Entre as várias medidas de precaução que poderiam ser tomadas para diminuir a ingestão de flúor, a redução da quantidade de dentifrício utilizada para escovar os dentes foi considerada a mais apropriada, contemplando risco/benefício para a saúde pública.