Identification of a genetic marker associated with the resistance to Schistosoma mansoni infection using random amplified polymorphic DNA analysis

In schistosomiasis, the host/parasite interaction remains not completely understood. Many questions related to the susceptibility of snails to infection by respective trematode still remain unanswered. The control of schistosomiasis requires a good understanding of the host/parasite association. In this work, the susceptibility/resistance to Schistosoma mansoni infection within Biomphalaria alexandrina snails were studied starting one month post infection and continuing thereafter weekly up to 10 weeks after miracidia exposure. Genetic variations between susceptible and resistant strains to Schistosoma infection within B. alexandrina snails using random amplified polymorphic DNA analysis technique were also carried out. The results showed that 39.8% of the examined field snails were resistant, while 60.2% of these snails showed high infection rates.In the resistant genotype snails, OPA-02 primer produced a major low molecular weight marker 430 bp. Among the two snail strains there were interpopulational variations, while the individual specimens from the same snail strain, either susceptible or resistant, record semi-identical genetic bands. Also, the resistant character was ascendant in contrast to a decline in the susceptibility of snails from one generation to the next.

Resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis development in Lewis rats from a conventional animal facility

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the brain and spinal cord that is mediated by CD4+ T lymphocytes specific to myelin components. In this study we compared development of EAE in Lewis rats from two colonies, one kept in pathogen-free conditions (CEMIB colony) and the other (Botucatu colony) kept in a conventional animal facility. Female Lewis rats were immunized with 100 µl of an emulsion containing 50 µg of myelin, associated with incomplete Freund's adjuvant plus Mycobacterium butyricum. Animals were daily evaluated for clinical score and weight. CEMIB colony presented high EAE incidence with clinical scores that varied from three to four along with significant weight losses. A variable disease incidence was observed in the Botucatu colony with clinical scores not higher than one and no weight loss. Immunological and histopathological characteristics were also compared after 20 days of immunization. Significant amounts of IFN-gamma, TNF-alpha and IL-10 were induced by myelin in cultures from CEMIB animals but not from the Botucatu colony. Significantly higher levels of anti-myelin IgG1 were detected in the CEMIB colony. Clear histopathological differences were also found. Cervical spinal cord sections from CEMIB animals showed typical perivascular inflammatory foci whereas samples from the Botucatu colony showed a scanty inflammatory infiltration. Helminths were found in animals from Botucatu colony but not, as expected, in the CEMIB pathogen-free animals. As the animals maintained in a conventional animal facility developed a very discrete clinical, and histopathological EAE in comparison to the rats kept in pathogen-free conditions, we believe that environmental factors such as intestinal parasites could underlie this resistance to EAE development, supporting the applicability of the hygiene hypothesis to EAE.

First isolation of Cryptococcus gattii molecular type VGII and Cryptococcus neoformans molecular type VNI from environmental sources in the city of Belém, Pará, Brazil

Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are important agents of meningoencephalitis in humans in the city of Belém. This clinical data suggests that the region may be a highly endemic area for the pathogenic Cryptococcus species within the state of Pará (PA), Northern Brazil. Preliminary analysis of 11 environmental samples from the city of Belém showed two positive locations, including a hollow of a kassod tree (Senna siamea) colonized simultaneously by C. gattii molecular type VGII and C. neoformans molecular type VNI, and a birdcage in a commercial aviary positive for C. neoformans, molecular type VNI. This is the first evidence of an environmental occurrence of molecular types VNI and VGII in PA.

Faecal examination and PCR to detect Strongyloides venezuelensis in experimentally infected Lewis rats

More sensitive methodologies are necessary to improve strongyloidiasis diagnosis. This study compared the sensitivities of the McMaster modified technique and polymerase chain reaction (PCR) assays, both performed in faecal samples. Lewis rats were subcutaneously infected with 4,000, 400 or 40 infective third-stage larvae, considered as high, moderate or low infection, respectively. Seven days later, they were euthanized to count adult nematodes recovered from the small intestine. Stool samples were used to count the number of eggs per gram (EPG) of faeces and to detect parasite DNA by PCR performed with a species and a genus primer pair. The sensitivity of these assays depended upon parasite burden and the primer specificity. All assays presented 100% sensitivity at the highest parasite load. In the moderate infection, EPG and PCR with the genus primer maintained 100% specificity, whereas PCR sensitivity with the species primer decreased to 77.7%. In low infection, the sensitivity was 60% for EPG, 0% for PCR with the species primer and 90% for PCR done with the genus primer. Together, these results suggest that PCR with a genus primer can be a very sensitive methodology to detect Strongyloides venezuelensisin faeces of Lewis rats infected with very low parasite burden.

Decreased production of TNF-alpha by lymph node cells indicates experimental autoimmune encephalomyelitis remission in Lewis rats

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is mediated by CD4+ Th1 cells that mainly secrete IFN-γ and TNF-α, important cytokines in the pathophysiology of the disease. Spontaneous remission is, in part, attributed to the down regulation of IFN-γ and TNF-α by TGF-β. In the current paper, we compared weight, histopathology and immunological parameters during the acute and recovery phases of EAE to establish the best biomarker for clinical remission. Female Lewis rats were immunised with myelin basic protein (MBP) emulsified with complete Freund's adjuvant. Animals were evaluated daily for clinical score and weight prior to euthanisation. All immunised animals developed the expected characteristics of EAE during the acute phase, including significant weight loss and high clinical scores. Disease remission was associated with a significant reduction in clinical scores, although immunised rats did not regain their initial weight values. Brain inflammatory infiltrates were higher during the acute phase. During the remission phase, anti-myelin antibody levels increased, whereas TNF-α and IFN-γ production by lymph node cells cultured with MBP or concanavalin A, respectively, decreased. The most significant difference observed between the acute and recovery phases was in the induction of TNF-α levels in MBP-stimulated cultures. Therefore, the in vitro production of this cytokine could be used as a biomarker for EAE remission.

A transient increase in total head phosphotyrosine levels is observed upon the emergence of Aedes aegypti from the pupal stage

Phosphorylation and dephosphorylation of protein tyrosine residues constitutes a major biochemical regulatory mechanism for the cell. We report a transient increase in the total tyrosine phosphorylation of the Aedes aegypti head during the first days after emergence from the pupal stage. This correlates with an initial reduction in total head protein tyrosine phosphatase (PTP) activity. Similarly, phosphotyrosine (pTyr)-containing bands are seen in extracts prepared from both male and female heads and are spread among a variety of structures including the antennae, proboscis and the maxillary palps combined with the proboscis. Also, mosquitoes treated with sodium orthovanadate, a classical PTP inhibitor, show reduced blood-feeding activity and higher head tyrosine phosphorylation levels. These results suggest that pTyr-mediated signalling pathways may play a role in the initial days following the emergence of the adult mosquito from the pupal stage.

Mycobacteria mobility shift assay: a method for the rapid identification of Mycobacterium tuberculosis and nontuberculous mycobacteria

The identification of mycobacteria is essential because tuberculosis (TB) and mycobacteriosis are clinically indistinguishable and require different therapeutic regimens. The traditional phenotypic method is time consuming and may last up to 60 days. Indeed, rapid, affordable, specific and easy-to-perform identification methods are needed. We have previously described a polymerase chain reaction-based method called a mycobacteria mobility shift assay (MMSA) that was designed for Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and nontuberculous mycobacteria (NTM) species identification. The aim of this study was to assess the MMSA for the identification of MTC and NTM clinical isolates and to compare its performance with that of the PRA-hsp65 method. A total of 204 clinical isolates (102 NTM and 102 MTC) were identified by the MMSA and PRA-hsp65. For isolates for which these methods gave discordant results, definitive species identification was obtained by sequencing fragments of the 16S rRNA and hsp65 genes. Both methods correctly identified all MTC isolates. Among the NTM isolates, the MMSA alone assigned 94 (92.2%) to a complex or species, whereas the PRA-hsp65 method assigned 100% to a species. A 91.5% agreement was observed for the 94 NTM isolates identified by both methods. The MMSA provided correct identification for 96.8% of the NTM isolates compared with 94.7% for PRA-hsp65. The MMSA is a suitable auxiliary method for routine use for the rapid identification of mycobacteria.

Amamentação: a prática do enfermeiro na perspectiva da Classificação Internacional de Práticas de Enfermagem em Saúde Coletiva

Estudo descritivo exploratório que objetivou descrever os diagnósticos e as intervenções de Enfermagem sob a perspectiva da Classificação Internacional das Práticas de Enfermagem em Saúde Coletiva - CIPESC® na atenção à Saúde da Mulher, subtema Pré-Natal e Puerpério, correlacionando-os com as competências do Enfermeiro no Programa Mãe Curitibana. Os dados utilizados foram os diagnósticos e intervenções gerados nas consultas de Enfermagem nos meses de abril a julho de 2005 e trabalhados em estatística simples. O diagnóstico Amamentação Adequada foi o mais frequente e as intervenções mais acionadas relacionam-se ao fortalecimento da usuária frente ao processo saúde-doença (68,9%). Apesar da atuação do Enfermeiro no puerpério, esta competência não consta do Protocolo do Programa. Concluiu-se que são necessários pequenos ajustes nos diagnósticos analisados e uma revisão do Protocolo para abrigar as competências do Enfermeiro que são desenvolvidas em sua prática nos serviços de saúde, conforme constam nos registros da base CIPESC®.

Integralidade na percepção dos trabalhadores de uma Unidade Básica de Saúde da Família

O objetivo deste estudo foi identificar a percepção de trabalhadores da saúde acerca do princípio da integralidade. Para isso, participaram de uma pesquisa cinco trabalhadores de uma Unidade Básica de Saúde da Família da região leste da cidade de São Paulo. Optou-se pela abordagem qualitativa por meio de entrevista e análise temática. Emergiram dos discursos três categorias: integralidade como perfil e prática dos profissionais de saúde, com ênfase na humanização do cuidado; integralidade como organização do serviço e do processo de trabalho em saúde e integralidade como integração da unidade com outros serviços de saúde. Em cada dimensão desvela-se a percepção da ausência ou presença desse princípio como norteador da atenção à saúde, problematizando-se os avanços e entraves vivenciados e os desafios da mudança do modelo assistencial.

Necessidades de cuidados de mulheres infectadas pelo papilomavírus humano: uma abordagem compreensiva

Pesquisa fundamentada na fenomenologia de Martin Heidegger que objetivou compreender as necessidades de cuidados das mulheres infectadas pelo Papilomavírus Humanos. Participaram catorze mulheres que haviam recebido o diagnóstico dessa infecção. As questões norteadoras foram: como é, para você, estar com este diagnóstico? Conte-me sua experiência, desde que soube do diagnóstico até hoje. Como está sendo a assistência que você tem recebido? O desvelamento do tema - buscando o cuidado como solicitude - mostrou a importância do suporte dos familiares e de amigos. A presença da infecção como motivo de conflitos e separação conjugal foi outro aspecto ressaltado. Os depoimentos deixam em evidência a resignação após a tentativa frustrada de busca por informações precisas e esclarecedoras para a tomada de decisões assertivas. As ações de saúde à mulher infectada necessitam ultrapassar os modelos tradicionais de cuidado, incluindo ações de promoção e prevenção à saúde, com profissionais capacitados, sensíveis à dimensão subjetiva.

Fungo micorrízico, fósforo e nitrogênio no crescimento inicial da trema e do fedegoso

De março de 1993 a junho de 1994, em vasos com amostra de um latossolo vermelho-escuro (LE) argiloso fase cerrado, estudou-se a resposta da trema (Trema micrantha (L)Blum.) e do fedegoso (Senna macranthera Rich.) a fósforo (P) nitrogênio (N) e à inoculação com o fungo micorrízico arbuscular Glomus etunicatum (Ge) Becker & Gerdemann. O trabalho foi desenvolvido em casa de vegetação do Departamento de Ciência do Solo da Universidade Federal de Lavras (MG), por meio de dois experimentos. A inoculação com Ge resultou em efeitos positivos para o crescimento das espécies, sendo esse efeito menos evidente no fedegoso que se beneficiou mais dos fungos indígenas. Em plantas inoculadas, a dose de P necessária para atingir 80% do crescimento máximo (CM) foi de 100 mg kg-1 de P no solo, para a trema, e de 80 mg kg-1 de P no solo, para o fedegoso, enquanto as plantas colonizadas pelos fungos indígenas requereram, respectivamente, 3,2 e 1,5 vezes mais P para atingir tal crescimento. Ambas as espécies apresentaram crescimento reduzido na ausência de P, porém tiveram grande crescimento quando receberam superfosfato. Por outro lado, a adição de N mineral não promoveu o crescimento das mudas. A adição de P solúvel e a introdução de G. etunicatum são importantes fatores para o crescimento inicial das espécies estudadas, em solo de baixa fertilidade natural.

Micorrizas arbusculares no crescimento pós-transplantio de mudas de árvores em solo com excesso de metais pesados

Os efeitos adversos dos metais pesados para as diversas formas de vida dificultam a recuperação de solos contaminados por estes elementos. Neste trabalho, avaliaram-se os efeitos da inoculação com fungos micorrízicos arbusculares no crescimento e absorção de metais de mudas de cinco espécies arbóreas, transplantadas para misturas que continham diferentes proporções de um solo contaminado (PSC). Mudas de Senna multijuga (L.C. Rich.) Irwin et Barneby (cássia verrugosa), Luehea grandiflora Mart. et Zucc. (açoita-cavalo), Enterolobium contortisiliquum (Vell.) Morong (tamboril), Albizia lebbeck (L.) Benth. (albizia) e Senna macranthera (Collard.) Irwin et Barneby (fedegoso), inoculadas e sem inoculação, foram transplantadas para as misturas de solos e desenvolvidas por 180 dias, no período de abril a novembro de 1996, em vasos, em casa de vegetação do Departamento de Ciência do Solo da UFLA, Lavras (MG). Verificou-se que a elevação na PSC na mistura reduziu o desenvolvimento das mudas e a colonização micorrízica (CM), sendo isto causado pela elevada absorção de metais pelas plantas, especiamente, de Cd e Zn. A inoculação favoreceu o crescimento das mudas após transplantio, sendo esse efeito mais evidente nas misturas de solo com baixa PSC. A CM foi reduzida de 70 a 90% no solo não contaminado para valores próximos de zero na mistura com alta PSC. Os níveis críticos de toxidez (redução de 10% na matéria seca das plantas inoculadas) dos metais no solo foram, em mg dm-3, de 83, 57, 153, 256 e 16, para o Zn, e de 1,3; 0,9; 0,8; 4,0 e 1,6, para Cd, para açoita-cavalo, cássia verrugosa, fedegoso, tamboril e albizia, respectivamente. Observando esses níveis críticos, as plantas não inoculadas apresentaram produção de matéria seca relativa, média para todas as espécies, de apenas 39%, evidenciando os benefícios da inoculação para o crescimento pós-transplantio das mudas. Esses benefícios relacionaram-se com menores teores de metais na parte aérea. Mesmo desconhecendo os mecanismos envolvidos nestas respostas, os resultados deste trabalho evidenciaram a importância das micorrizas arbusculares para o crescimento de mudas de árvores e para a recuperação de áreas tropicais contaminadas com metais pesados.

Biomassa microbiana e matéria orgânica leve em solos sob sistemas agrícolas orgânico e convencional na Chapada da Ibiapaba - CE

Em muitos casos, a substituição da vegetação nativa por sistemas agrícolas resulta em decréscimo nos conteúdos de C e N nos diferentes compartimentos da matéria orgânica do solo. Para testar se as práticas de manejo que priorizam o aporte de resíduos orgânicos promovem aumento dos compartimentos da matéria orgânica mais sensíveis ao manejo, este estudo se propôs estudar áreas de uma propriedade que utiliza um sistema de produção de acerola em larga escala, sob manejo orgânico, e uma área sob cultivo convencional de cenoura e beterraba em rotação com milho, pertencentes à Fazenda Amway Nutrilite do Brasil e à Associação de Horticultores do Pivot Central, respectivamente, ambas localizadas na região da Chapada da Ibiapaba, Ceará. Selecionou-se, também, uma área de pastagem localizada no interior da primeira propriedade amostrada, bem como áreas sob mata nativa, próximas às áreas de cultivo. Amostras de um Neossolo Quartzarênico foram coletadas nas profundidades de 0-5 e 5-15 cm e foram determinados os teores de C orgânico total, de C e N microbiano (Cmic e Nmic) e da matéria orgânica leve (Cmol e Nmol), além do C mineralizável obtido por respirometria. O acúmulo médio nos estoques de Nmic nas áreas sob manejo orgânico em relação à mata nativa foi de 11,7 kg ha-1, o que representou um incremento de 585 % de Nmic nas áreas de cultivo. Já na pastagem, ocorreu acúmulo de 211 kg ha-1 no estoque de Cmic em relação à mata nativa em subsuperfície, representando um incremento de 514,6 %. Por outro lado, os estoques de Cmic no cultivo convencional sofreram reduções de 59 e 53 %, nas camadas de 0-5 e de 5-15 cm, respectivamente, em relação à mata nativa. Os estoques de Cmol obtidos nas linhas de cultivo nos sistemas orgânicos apresentaram incremento de 106 %, na camada de 0-5 cm, em relação à mata; no sistema convencional, porém, constatou-se uma redução em 31 % no estoque de Cmol na camada superficial. Os resultados indicaram que o manejo realizado nas áreas sob cultivo orgânico com acerola e pastagem contribuiu para a manutenção e recuperação dos conteúdos de C e N da biomassa microbiana (BMS) e da matéria orgânica leve (MOL) do solo. Os incrementos e, ou, reduções de C e N nos compartimentos BMS e MOL, comparativamente à área nativa de referência, foram proporcionalmente maiores que os valores obtidos, quando considerados somente os estoques de C orgânico e N totais, principalmente na área sob sistema de cultivo convencional. Isto indica serem tais compartimentos sensíveis às mudanças no estado da matéria orgânica de acordo com o manejo. Os sistemas de manejo orgânico e pastagem constituem estratégias de manejo importantes que devem ser consideradas para a conservação e, ou, aumento da matéria orgânica e, conseqüentemente, para a melhoria da qualidade do solo e implementação do seqüestro de C na região da Chapada da Ibiapaba, Ceará.

Compatibilidade simbiótica de fungos micorrízicos arbusculares com espécies arbóreas tropicais

A revegetação com espécies arbóreas é uma estratégia adequada, quando se pretende a reabilitação de terras degradadas. Entretanto, o estabelecimento e o crescimento destas em solos pobres em nutrientes dependem de diversos fatores como a capacidade de formar e beneficiar-se das micorrizas. No presente estudo, realizado em casa de vegetação na Universidade Federal de Lavras, Minas Gerais- Brasil, avaliaram-se aspectos da relação fungos micorrízicos arbusculares e espécies arbóreas do sudeste brasileiro. Os fungos estudados foram: Scutellospora pellucida, Acaulospora scrobiculata, Entrophospora colombiana, Gigaspora gigantea, Gigaspora margarita, Glomus etunicatum, Scutellospora gregaria, Glomus clarum e isolados oriundos de agrossistemas e de mata, os quais foram inoculados em dezesseis espécies vegetais: Luehea grandiflora, Cecropia pachystachya, Schinus terebinthifolius, Machaerium nyctitans, Senna macranthera, Senna spectabilis, Solanum granuloso-leprosum, Caesalpinea ferrea, Tabebuia serratifolia, Maclura tinctoria, Guazuma ulmifolia, Acacia polyphylla, Mimosa caesalpiniaefolia, Enterolobium contortisiliquum, Trema micrantha e Cedrela fissilis. Estas espécies apresentaram comportamento diferenciado em relação à susceptibilidade aos fungos e às respostas em crescimento decorrentes da inoculação. A amplitude de eficiência simbiótica dos fungos variou muito, sendo o Gl. clarum, E. colombiana, S. pellucida e Gl. etunicatum os fungos de maior amplitude, beneficiando mais de 80 % das espécies vegetais estudadas, e a A. scrobiculata a espécie de comportamento mais restrito em relação aos hospedeiros. A análise da compatibilidade fungo-hospedeiro e o comportamento geral das espécies em associação indicam a ocorrência de seletividade diferenciada na relação fungo-hospedeiro, existindo combinações de eficiência simbiótica muito variável para as plantas hospedeiras. A importância destes resultados para a revegetação de áreas degradadas é discutida.