Detection of Bartonella henselae DNA in clinical samples including peripheral blood of immune competent and immune compromised patients by three nested amplifications

Bacteria of the genus Bartonella are emerging pathogens detected in lymph node biopsies and aspirates probably caused by increased concentration of bacteria. Twenty-three samples of 18 patients with clinical, laboratory and/or epidemiological data suggesting bartonellosis were subjected to three nested amplifications targeting a fragment of the 60-kDa heat shock protein (HSP), the internal transcribed spacer 16S-23S rRNA (ITS) and the cell division (FtsZ) of Bartonella henselae, in order to improve detection in clinical samples. In the first amplification 01, 04 and 05 samples, were positive by HSP (4.3%), FtsZ (17.4%) and ITS (21.7%), respectively. After the second round six positive samples were identified by nested-HSP (26%), eight by nested-ITS (34.8%) and 18 by nested-FtsZ (78.2%), corresponding to 10 peripheral blood samples, five lymph node biopsies, two skin biopsies and one lymph node aspirate. The nested-FtsZ was more sensitive than nested-HSP and nested-ITS (p < 0.0001), enabling the detection of Bartonella henselae DNA in 15 of 18 patients (83.3%). In this study, three nested-PCR that should be specific for Bartonella henselae amplification were developed, but only the nested-FtsZ did not amplify DNA from Bartonella quintana. We conclude that nested amplifications increased detection of B. henselae DNA, and that the nested-FtsZ was the most sensitive and the only specific to B. henselae in different biological samples. As all samples detected by nested-HSP and nested-ITS, were also by nested-FtsZ, we infer that in our series infections were caused by Bartonella henselae. The high number of positive blood samples draws attention to the use of this biological material in the investigation of bartonellosis, regardless of the immune status of patients. This fact is important in the case of critically ill patients and young children to avoid more invasive procedures such as lymph nodes biopsies and aspirates.

AN UPWARD TREND IN DNA P16INK4A METHYLATION PATTERN AND HIGH RISK HPV INFECTION ACCORDING TO THE SEVERITY OF THE CERVICAL LESION

SUMMARY High-risk human papillomavirus (hr-HPV) infection is necessary but not sufficient for cervical cancer development. Recently, P16INK4A gene silencing through hypermethylation has been proposed as an important cofactor in cervical carcinogenesis due to its tumor suppressor function. We aimed to investigate P16INK4A methylation status in normal and neoplastic epithelia and evaluate an association with HPV infection and genotype. This cross-sectional study was performed with 141 cervical samples from patients attending Hospital Moncorvo Filho, Rio de Janeiro. HPV detection and genotyping were performed through PCR and P16INK4A methylation by nested-methylation specific PCR (MSP). HPV frequency was 62.4% (88/141). The most common HPV were HPV16 (37%), HPV18 (16.3%) and HPV33/45(15.2%). An upward trend was observed concerning P16INK4A methylation and lesion degree: normal epithelia (10.7%), low grade lesions (22.9%), high grade (57.1%) and carcinoma (93.1%) (p < 0.0001). A multivariate analysis was performed to evaluate an association between methylation, age, tobacco exposure, HPV infection and genotyping. A correlation was found concerning methylation with HPV infection (p < 0.0001), hr-HPV (p = 0.01), HSIL (p < 0.0007) and malignant lesions (p < 0.0001). Since viral infection and epigenetic alterations are related to cervical carcinoma, we suggest that P16INK4A methylation profile maybe thoroughly investigated as a biomarker to identify patients at risk of cancer.

LACK OF ASSOCIATION BETWEEN HERPESVIRUS DETECTION IN SALIVA AND GINGIVITIS IN HIV‑INFECTED CHILDREN

The aims of this study were to compare the detection of human herpesviruses (HHVs) in the saliva of HIV-infected and healthy control children, and to evaluate associations between viral infection and gingivitis and immunodeficiency. Saliva samples were collected from 48 HIV-infected and 48 healthy control children. Clinical and laboratory data were collected during dental visits and from medical records. A trained dentist determined gingival indices and extension of gingivitis. Saliva samples were tested for herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2), varicella zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), and cytomegalovirus (CMV) by nested polymerase chain reaction assays. Thirty-five HIV-infected and 16 control children had gingivitis. Seventeen (35.4%) HIV-infected children and 13 (27%) control children were positive for HHVs. CMV was the most commonly detected HHV in both groups (HIV-infected, 25%; control, 12.5%), followed by HSV-1 (6.2% in both groups) and HSV-2 (HIV-infected, 4.2%; control, 8.3%). The presence of HHVs in saliva was not associated with the presence of gingivitis in HIV-1-infected children (p = 0.104) or healthy control children (p = 0.251), or with immunosuppression in HIV-infected individuals (p = 0.447). Gingivitis was correlated with HIV infection (p = 0.0001). These results suggest that asymptomatic salivary detection of HHVs is common in HIV-infected and healthy children, and that it is not associated with gingivitis.

DENGUE DURING PREGNANCY: ASSOCIATION WITH LOW BIRTH WEIGHT AND PREMATURITY

The aim of this study was to evaluate the effects of dengue virus infection during pregnancy and its correlation with low birth weight, prematurity, and asphyxia. A non-concurrent cohort study reveals the association of dengue during pregnancy with prematurity and low birth weight, when birth occurred during the maternal-fetal viremia period (p = 0.016 and p < 0.0001, respectively).

Resposta proliferativa das células T contra a cruzipaina na cardiopatia chagásica crônica

A natureza dos antigenos do T. cruzi, bem como dos fatores do hospedeiro que contribuem para a cardiopatia chagásica tem sido intensamente investigada nestes últimos anos. Nesse contexto, a caracterização funcional das populações de linfócitos T reativos na fase crônica da doença é particularmente relevante. No presente trabalho, pretende-se analisar a resposta proliferativa de células mononucleares de sangue periférico de pacientes acometidos com a forma cardíaca da doença de Chagas. Os estudos se restrigem à cruzipaina, a cisteíno-protease majoritária do T. cruzi, uma glicoproteína altamente irnunogênica em pacientes chagásicos. Utilizando o índice de estimulação (IE) das culturas de células mononucleares como critério de avaliação de reatividade celular, analisamos 24 individuos: doadores normais (n = 8), cardiopatas não-chagásicos (n = 8) e cardiopatas chagásicos crônicos (n = 8) sem outras associações mórbidas. Pela análise de variância observou-se que os IE dos pacientes chagásicos são significativamente mais altos do que o valor observado nos demais grupos (p = 0,0001) enquanto o teste de comparações múltiplas de Tukey revelou que a média do IE dos individuos normais e cardiopatas não-chagásicos não difere significativamente entre si. Nossos estudos indicam que a resposta dos linfócitos T, face à cruzipaina, está exclusivamente associada ã doença de Chagas. A análise do repertório de epitópos T da cruzipaina e do padrão funcional de reatividade (Th1/Th2) de linfócitos T de sangue periférico estã sendo presentemente conduzida. Em vista da abundante expressão de cruzipaina presente em amastigotas, é possível que linfócitos T anticruzipaina participem das reações inflamatórias associadas com a cardiopatia chagásica. A caracterização destas subpopulações poderá oferecer possíveis subsídios para a identificação de marcadores de cardiopatia chagásica.

Avaliação da relação entre parasitoses intestinais e fatores de risco para o HIV em pacientes com AIDS

Estudo transversal em 200 pacientes portadores da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) na cidade de São Paulo, a fim de verificar se a presença de enteroparasitas está associada aos diversos fatores de risco para a infecção pelo HIV. Verificou-se que a diarréia foi mais freqüente no grupo que apresentou parasitose intestinal, sendo a diferença altamente significante (p < 0,0001). O parasita mais prevalente foi a Giardia lamblia em 32 (16%) casos. A associação entre a presença de parasitas nas fezes e os fatores de risco não revelou significado estatístico, principalmente para os patógenos Giardia lamblia e Cryptosporidium parvum (p = 0,99; p = 0,69, respectivamente). Devido à divergência na literatura, convém realizar estudos em outras áreas geográficas do país.

Freqüência de soropositividade para antígenos de Toxocara canis em crianças de classes sociais diferentes

Para estudar a freqüência da infecção pelo Toxocara canis em crianças de classes sociais diferentes de Brasília, Brasil, foram testados soros de 602 crianças de ambos os sexos, de 1 a 12 anos, distribuídas em dois grupos representativos de condições socioeconômicas distintas. As amostras do primeiro grupo foram obtidas em laboratório público que atende bairros pobres. As do segundo grupo foram colhidas em laboratório privado, que serve à classe média. Os anticorpos anti-Toxocara foram detectados pelo método ELISA, com antígenos de Toxocara canis, e absorção com antígenos do Ascaris suum. A prevalência de soropositividade foi de 21,8% (66/302) no primeiro grupo e de 3% (9/300) no segundo (p<0,0001). Não houve diferença quanto ao gênero ou idade das crianças. Os resultados sugerem significativa prevalência de toxocaríase na população infantil de Brasília, com predomínio nas classes sociais menos favorecidas economicamente.

Identificação de ponto de corte no nível sérico da alanina aminotransferase para rastreamento da hepatite C em pacientes com insuficiência renal crônica em hemodiálise

Pacientes com insuficiência renal crônica em hemodiálise apresentam níveis séricos mais baixos de alanina aminotransferase. Para estabelecer melhor ponto de corte nos níveis de ALT, no diagnóstico da hepatite C, avaliaram-se mensalmente, durante 6 meses os níveis desta enzima em 235 pacientes em hemodiálise, sendo excluídos aqueles que apresentassem média acima do limite superior da normalidade. O ponto de corte foi identificado através da construção de curva ROC. Entre 202 pacientes, 15 (7,4%) apresentavam anti-VHC positivo e 187 (92,6%) negativo, com média de ALT de 0,7 e de 0,5 do limite superior (p < 0,0001), respectivamente. O ponto de corte para ALT situou-se em 0,6 do limite superior, com sensibilidade de 67% e especificidade de 75% na identificação do anti-VHC. Sugere-se que os limites superiores de normalidade da ALT sejam reduzidos para 60% dos limites convencionais, quando se avaliam pacientes com IRC em hemodiálise.

Neurological disease in HIV-infected patients in the era of highly active antiretroviral treatment: a Brazilian experience

To study characteristics of neurological disorders in HIV/AIDS patients and their relationship to highly active antiretroviral treatment, a cross-sectional study was conducted in an infectious disease public hospital in Belo Horizonte, Brazil, between February 1999 and March 2000. Of the 417 patients enrolled, neurological disease was observed in 194 (46.5%) and a new AIDS-defining neurological event developed in 23.7% of individuals. Toxoplasmosis (42.3%), cryptococcosis meningitis (12.9%) and tuberculosis (10.8%) were the most common causes of neurological complications. The majority (79.3%) of patients were on highly active antiretroviral treatment and these individuals using HAART showed higher CD4 cell counts (p = 0.014) and presented stable neurological disease (p= 0.0001), although no difference was found with respect to the profile of neurological complications. The neurological diseases continue to be a frequent complication of HIV/AIDS and infections are still its main causes in Brazil, even in the highly active antiretroviral treatment era.

Comparative study of survivor and nonsurvivor sepsis patients in a university hospital

To determine parameters associated with the evolution of sepsis, a five-year retrospective study was conducted in a university hospital. One hundred and four consecutive sepsis patients were evaluated, of whom 55.8% were men. The mortality was 68.3% and was associated with older age (p<0.05). Chronic comorbidities and infection site were not associated with prognosis. Gram-positive bacteria were more frequently identified in survivors (p<0.05), while non-detection of the germ was associated with mortality (p<0.01). Appropriate use of antibiotics (germ sensitive to at least one drug administered) was associated with survival (p<0.0001) while inappropriate use (p<0.05) or empirical use (p<0.01) were more frequent in nonsurvivors. Leukocytosis was the main abnormality (54.8%) detected on diagnosis, from the leukocyte count. During the evolution, normal leukocyte count was associated with survival (p<0.01) and leukocytosis with mortality (p<0.05). In conclusion, mortality was associated with nondetection of the pathogen, leukocytosis during the evolution of the sepsis and inappropriate or empirical use of antimicrobials. Evidence-based treatment that is directed towards modifiable risk factors might improve the prognosis for sepsis patients.

Alterações da função hepática de camundongos desnutridos e infectados pelo Schistosoma mansoni

Existem poucos estudos sobre as alterações da função hepática em camundongos com esquistossomose associada à desnutrição. Neste trabalho, os animais foram divididos em quatro grupos, de acordo com as dietas (normal ou hipoprotéica) e infectados ou não pelo Schistosoma mansoni. Todos os grupos desenvolveram-se menos que o grupo controle (p<0,0001). A mortalidade nos animais foi devida à infecção. Níveis altos de aminotransferases nos animais nutridos e infectados sugerem um processo inflamatório intenso (p<0,0001). Todos os grupos apresentaram elevação da fosfatase alcalina. Houve aumento da aspartato transferase e da fosfatase alcalina em animais nutridos infectados. As dietas modificaram os níveis de albumina (p>0,001), e das proteínas séricas. Os grupos, comparados ao controle, mostraram baixos níveis de glicose (p<0,001). Este estudo verificou que ambas, infecção e/ou desnutrição, interferiram nos níveis dos indicadores bioquímicos, mas as alterações mais importantes da função hepática ocorreram durante a inflamação intensa causada pela esquistossomose.

Mobilidade populacional e produção da leishmaniose tegumentar americana no Estado do Paraná, sul do Brasil

São escassas as informações sobre o papel da mobilidade populacional na manutenção da leishmaniose tegumentar americana no estado do Paraná. Avalia-se a mobilidade populacional como fator de risco para esta endemia em três mesorregiões do Paraná, utilizando dados gerados na Universidade Estadual de Maringá, no período de 1987 a 2004. Foram notificados 1.933 casos, predominando os casos migrantes (54,4%). Os municípios com maior número de casos notificados foram Maringá (358), Doutor Camargo (108) e Terra Boa (105). Os casos rurais foram predominantemente autóctones (89,8%), enquanto os urbanos, na maioria (84,8%) migrantes (p<0,0001). Para os casos rurais autóctones, não houve predomínio entre os sexos (p=0,127); para os casos urbanos migrantes, prevaleceu o sexo masculino (p<0,0001). Os casos migrantes foram na maioria relacionados com a mobilidade intra e intermunicipal. A mobilidade populacional parece ser uma variável importante na epidemiologia desta doença no Estado do Paraná.

Leishmaniose visceral: estudo retrospectivo de fatores associados à letalidade

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral é um problema de saúde pública, com grau de letalidade alcançando 10%. Para o tratamento medicamentoso, é recomendado o antimoniato de metilglucamina. Este estudo tem como objetivo avaliar o uso de medicamento em casos de leishmaniose visceral atendidos no Serviço de Infectologia do Núcleo de Hospital Universitário de Campo Grande Estado do Mato Grosso do Sul. MÉTODOS: Para coleta de dados, foram pesquisados prontuários de 76 pacientes com diagnóstico de leishmaniose visceral atendidos pelo Serviço de Infectologia do Hospital Universitário de Campo Grande. RESULTADOS: Foram analisados prontuários de 76 (28,9%) pacientes (56 homens e 20 mulheres) apresentavam comorbidades. Como droga de 1ª escolha, 88,2% dos pacientes utilizaram o antimoniato-N-metil glucamina com evolução para óbito de 18,4%. A análise de sobrevida mostrou diferença estatisticamente significativa em pacientes com e sem comorbidades (p< 0,0001) e com comorbidade que fizeram uso de Glucantime® (p <0,0009). A letalidade de 18,4% sinaliza ineficiência das medidas de assistência a saúde adotadas. CONCLUSÕES: Os resultados sugerem que o prognóstico da doença torna-se ruim quando associado à presença de comorbidades e que o tratamento deve ser criterioso, para minimizar a letalidade.

Características e tendência da AIDS entre idosos no Estado do Espírito Santo

INTRODUÇÃO: A AIDS entre adultos mais velhos é um problema de saúde pública emergente. Comparamos o perfil epidemiológico e sociodemográfico, bem como a evolução e a tendência da epidemia entre homens e mulheres nas faixas etárias de 50 anos e mais e 20 a 39 anos acometidos pela AIDS, no Estado do Espírito Santo, Brasil. MÉTODOS: Realizamos um estudo de série temporal, com dados secundários do SINAN/AIDS, no período de Janeiro de 1991 a dezembro 2006. RESULTADOS: Neste período, foram notificados 3.382 casos de AIDS em indivíduos com idade entre 20 e 39 anos e 551 casos entre indivíduos com 50 anos e mais. Em ambas as faixas etárias, os mais acometidos são os homens. Há diferenças referentes à raça/cor, em que a maioria dos mais velhos são brancos (45,3% - p-valor = 0,044) e os mais jovens pardos (44,7%, p-valor = 0,003). O analfabetismo prevalece entre os mais velhos (17,7% - p-valor = 0,001). Mais da metade (80%) das notificações ocorreu em municípios de médio a grande porte. A principal categoria de exposição foi a heterossexual, em ambos as faixas etárias, com maior frequência para o grupo de 50 anos ou mais (77,3% - p=0,0001). A incidência acumulada é maior para a faixa etária de 20 a 39 anos (R²=0,68); porém, vem aumentando proporcionalmente, entre as duas faixas no decorrer dos anos, com tendência de crescimento significativa para ambas (p <0,01). CONCLUSÕES: A epidemia de AIDS pode ser considerada em expansão entre mais velhos no Espirito Santo.

Characterization of mannose-binding lectin plasma levels and genetic polymorphisms in HIV-1-infected individuals

INTRODUCTION: The present study investigated the association between mannose-binding lectin (MBL) gene polymorphism and serum levels with infection by HIV-1. METHODS: Blood samples (5mL) were collected from 97 HIV-1-infected individuals resident in Belém, State of Pará, Brazil, who attended the Special Outpatient Unit for Infections and Parasitic Diseases (URE-DIPE). CD4+ T-lymphocyte count and plasma viral load were quantified. A 349bp fragment of exon 1 of the MBL was amplified via PCR, using genomic DNA extracted from controls and HIV-1-infected individuals, following established protocols. MBL plasma levels of the patients were quantified using an enzyme immunoassay kit. RESULTS: Two alleles were observed: MBL*O, with a frequency of 26.3% in HIV-1-infected individuals; and the wild allele MBL*A (73.7%). Similar frequencies were observed in the control group (p > 0.05). Genotype frequencies were distributed according to the Hardy-Weinberg equilibrium in both groups. Mean MBL plasma levels varied by genotype, with statistically significant differences between the AA and AO (p < 0.0001), and AA and OO (p < 0.001) genotypes, but not AO and OO (p = 0.17). Additionally, CD4+ T-lymphocytes and plasma viral load levels did not differ significantly by genotype (p > 0.05). CONCLUSIONS: The results of this study do not support the hypothesis that MBL gene polymorphism or low plasma MBL concentrations might have a direct influence on HIV-1 infection, although a broader study involving a large number of patients is needed.