Identification of candidate antigens from adult stages of Toxocara canis for the serodiagnosis of human toxocariasis

In the present work, we identified adult Toxocara canis antigens through sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for potential use in human toxocariasis immunodiagnosis. The sensitivity and specificity of several semi-purified antigens, as well as their cross-reactivity with other parasitic infections, were assessed by IgM and IgG-enzime linked immunosorbent assay. Whilst we found that the crude extract of the parasite presented limited sensitivity, specificity and high cross-reactivity against other parasites, we identified 42, 58, 68 and 97-kDa semi-purified antigens as the most promising candidates for immunodiagnosis. Moreover, the 58 and 68-kDa antigens presented the lowest IgM cross-reactivity. When tested as a combination, a mixture of the 58 and 68-kDa antigens presented 100% sensitivity and specificity, as well as minor cross-reactivity. Although the combination of the 42, 58, 68 and 97-kDa antigens presented 100% sensitivity at a dilution of 1:40, the low specificity and high cross-reactivity observed suggested a limited use for diagnostic purposes. Our data suggested that the 58 and 68-kDa antigens might be most suitable for the immunodiagnosis of human toxocariasis.

An evaluation of the dot-ELISA procedure as a diagnostic test in an area with a high prevalence of human Toxocara canis infection

The aim of this work was to evaluate a dot-enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) using excretory-secretory antigens from the larval stages of Toxocara canis for the diagnosis of toxocariasis. A secondary aim was to establish the optimal conditions for its use in an area with a high prevalence of human T. canis infection. The dot-ELISA test was standardised using different concentrations of the antigen fixed on nitrocellulose paper strips and increasing dilutions of the serum and conjugate. Both the dot-ELISA and standard ELISA methods were tested in parallel with the same batch of sera from controls and from individuals living in the problem area. The best results were obtained with 1.33 µg/mL of antigen, dilutions of 1/80 for the samples and controls and a dilution of 1/5,000 for the anti-human IgG-peroxidase conjugate. All steps of the procedure were performed at room temperature. The coincidence between ELISA and dot-ELISA was 85% and the kappa index was 0.72. The dot-ELISA test described here is rapid, easy to perform and does not require expensive equipment. Thus, this test is suitable for the serological diagnosis of human T. canis infection in field surveys and in the primary health care centres of endemic regions.

Toxocara canis and the allergic process

The protective effect of infectious agents against allergic reactions has been thoroughly investigated. Current studies have demonstrated the ability of some helminths to modulate the immune response of infected hosts. The objective of the present study was to investigate the relationship between Toxocara canis infection and the development of an allergic response in mice immunised with ovalbumin (OVA). We determined the total and differential blood and bronchoalveolar lavage fluid cells using BALB/c mice as a model. To this end, the levels of interleukin (IL)-4, IL-5 and IL-10 and anti-OVA-IgE were measured using an ELISA. The inflammatory process in the lungs was observed using histology slides stained with haematoxylin and eosin. The results showed an increase in the total number of leukocytes and eosinophils in the blood of infected and immunised animals at 18 days after infection. We observed a slight lymphocytic inflammatory infiltrate in the portal space in all infected mice. Anti-OVA-IgE levels were detected in smaller proportions in the plasma of immunised and infected mice compared with mice that were only infected. Therefore, we concluded that T. canis potentiates inflammation in the lungs in response to OVA, although anti-OVA-IgE levels suggest a potential reduction of the inflammatory process through this mechanism.

Ocorrência de Rhopalopsyllus lutzi lutzi (Baker) (Siphonaptera, Rhopalopsyllidae) em Canis familiaris (Linnaeus) de zona rural do município de Piraí, Rio de Janeiro, Brasil

A ocorrência de Rhopalopsyllus lutzi lutzi (Baker) (Siphonaptera, Rhopalopsyllidae) foi assinalada em Canis familiaris (Linnaeus) de áreas rurais do município de Piraí, estado do Rio de Janeiro, Brasil. No período de junho 2001/novembro 2003, 51 sifonápteros foram capturados em oito cães procedentes de duas propriedades rurais do município de Piraí. Os exemplares coletados foram acondicionados em álcool etílico 70%, levados ao Laboratório de Parasitologia Animal da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro para contagem e sexagem. Os exemplares foram identificados como Rhopalopsyllus lutzi lutzi Baker, 1904 (machos=18 e fêmeas=33). R. lutzi lutzi é, pela primeira vez, assinalada em cães domésticos naturalmente infestados em áreas rurais do estado do Rio de Janeiro.

Inquérito sorológico e fatores de risco para a brucelose por Brucella canis em cães do município de Santana de Parnaíba, Estado de São Paulo

Foi investigada a prevalência da brucelose causada por Brucella canis em cães do município de Santana de Parnaíba, SP, Brasil, e realizado um estudo de possíveis fatores de risco associados à soropositividade para B. canis. Foram examinadas 410 amostras de soro sanguíneo de cães colhidas durante a campanha de vacinação anti-rábica animal, realizada em agosto de 1999. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando antígeno de lipopolissacarídeos e proteínas de Brucella ovis, amostra Reo 198, foi empregada em soros normais como teste de triagem, e, para a confirmação, a mesma técnica foi aplicada em soros tratados pelo 2-mercaptoetanol (IDGA-ME). A reação de fixação de complemento (CFT), utilizando antígeno de B. ovis, amostra 63/290, também foi utilizada como prova confirmatória. A determinação da prevalência considerou como positivos os animais que reagiram positivamente nos dois testes confirmatórios (IDGA-ME e CFT). A prevalência da B. canis foi de 2,2% (I.C. 95% = 1,01-4,13%). A análise estatística mostrou que os cães com acesso irrestrito à rua o dia todo (manejo do tipo solto) estiveram mais expostos ao risco da infecção por B. canis, com um valor de odds ratio de 8,73 (I.C. 95% = 1,48-51,55) e p=0,04.

Relação entre a biometria ultra-sonográfica em modo B do bulbo ocular e os diâmetros fronto occiptal e bizigomático em Canis familiaris

Avaliou-se 31 cães saudáveis, sem raça definida, sendo 10 machos e 21 fêmeas, com 8 meses a 7 anos de idade e peso de1,5-28 kg. Inicialmente foram mensurados os diâmetros fronto-occiptal (DFO) e bizigomático (DBZ) do crânio com o auxílio de um paquímetro. A ultra-sonografia transpalpebral em modo-B foi realizada para mensurar as estruturas do bulbo ocular, conforme se segue: D1- espessura da córnea; D2- distância entre o ponto central da imagem da córnea e a da cápsula anterior do cristalino (câmara anterior); D3- distância entre o ponto central da imagem da córnea e a da cápsula posterior do cristalino; D4- espessura do cristalino, que corresponde a distância entre a imagem da cápsula anterior e a cápsula posterior do cristalino; D5- diâmetro do cristalino, distância entre as imagens dos pólos do cristalino; D6- área do cristalino; D7- câmara vítrea, distância entre a imagem da cápsula posterior do cristalino e a retina; D8- distância entre a cápsula anterior do cristalino e a retina; D9- distância entre a imagem da córnea e a retina. Com exceção da D4, houve efeito dos DFO e DBZ sobre as medidas das estruturas internas do BO. A análise de regressão linear entre as medidas das estruturas do bulbo ocular e os DFO e DBZ foram significativas para D1, D2, D3, D4, D5, D6, D7, D8 e D9.

Triplex Doppler da artéria renal e a relação entre a ecobiometria dos rins com distância atlanto-coccígea e altura em Canis familiaris

O objetivo do trabalho foi estabelecer a relação entre a ecobiometria renal com medidas de conformação corporal como a distância atlanto-coccígea (DAC) e a altura (H) de cães adultos saudáveis, obtendo-se parâmetros de normalidade para avaliar o tamanho e volume renal, bem como estabelecer valores de referência para avaliar a perfusão sanguínea dos rins por meio do índice de resistividade (IR) e do índice de pulsatilidade (IP) do ramo principal da artéria renal. No estudo foram utilizados 22 cães adultos sem raça definida, sendo 11 machos e 11 fêmeas. Os animais foram previamente aferidos quanto a DAC e a H. Os exames ultra-sonográficos foram realizados com um aparelho HDI 4000 PHILIPS munido de um transdutor microconvexo multifreqüêncial (5-8 MHz), dispositivos Doppler Colorido e Doppler de Fluxo. Os animais foram posicionados em decúbito lateral direito ou esquerdo, de acordo com o rim a ser avaliado. Os diâmetros longitudinal (DL) e dorsoventral (DDV) dos rins foram mensurados na secção longitudinal e, o diâmetro transversal (DT) foi aferido no plano transversal. O volume (V) foi calculado automaticamente pelo software do ultra-som. Com o uso do Triplex Doppler, o IR e o IP das artérias renais direita e esquerda foram obtidos. Todos os dados foram apresentados em média ± EPM. Análises de regressão linear foram realizadas tendo o DL, DDV, DT e V como variáveis dependentes e a DAC e H como variáveis independentes. Os IR e IP dos rins direito e esquerdo foram comparados pelo teste t de Student. A DAC variou de 54-78cm para machos e 37-71cm para fêmeas e a altura variou entre 34-64 cm para os machos e 24-57cm para as fêmeas. As médias obtidas para DL, DDV, DT e V dos rins esquerdo e direito foram: 5,24±0,27cm, 3,07±0,15cm, 3,07±0,9cm, 28,01±3,4mL e 4,50±0,19cm, 2,88±0,14cm, 2,71±0,15cm, 21,27±2,6mL, respectivamente. As análises de regressão linear entre as medidas lineares e volume renal com a DAC e a H foram significativas para os interceptos e coeficientes de regressão (P<0,01). Houve diferenças estatísticas quando comparado os IR e IP entre os rins direito e esquerdo (P=0,001), sendo que as médias para IR e IP dos rins esquerdo e direito foram 0,62±0,08; 1,34±0,18 e 0,70±0,06; 1,62±0,13; respectivamente. Os dados obtidos no presente trabalho podem auxiliar na avaliação do tamanho, volume e perfusão dos rins de cães adultos.

Alterações hematológicas em cães (Canis lupus familiaris) após tratamento com eletroacupuntura

A acupuntura, é uma terapia que cada vez mais adquire uma credibilidade no mundo ocidental, a sua indicação pode ser para pacientes anêmicos e imunossuprimidos, e outras afecções. O experimento foi realizado com oito cães adultos, sendo 4 fêmeas e 4 machos. O estudo consistiu em análise das concentrações das células vermelhas e brancas avaliado em 4 tratamentos: controle (T0), acupuntura (T1), eletroacupuntura unilateral (T2) e eletroacupuntura bilateral (T3). Os acupontos utilizados foram intestino grosso 4, intestino grosso 11 e estômago 36. Todos os animais passaram por todos os tratamentos com um intervalo de 7 dias para cada tratamento. Os hemogramas séricos foram verificados 20 minutos antes do início do tratamento (M0), logo após o tratamento (M1), e 60 minutos (M2) e 120 minutos (M3) após o tratamento. O resultado da série vermelha não foi significativo, mas notou-se somente uma diminuição significativa da concentração média corpuscular (CHCM) (p<0,05) no tratamento T1 no M1 em comparação aos outros tratamentos; notou-se também uma redução significativa (p<0,05) na concentração plaquetária de T1, T2 e T3 em comparação ao grupo controle. A eletroacupuntura pode levar a uma trombocitopenia, quando estimulado estes pontos, provavelmente por um estímulo parassimpaticomimético.

Babesia canis vogeli infection in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil

Abstract:This study aimed to report the prevalence of Babesia canis vogeli in dogs and ticks in the urban and rural areas of Petrolina, Pernambuco. Serum and peripheral blood samples of 404 dogs were tested by indirect immunofluorescence assay (IFA) and by blood smears, respectively. The presence of tick infestation was evaluated, and some specimens were submitted to DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR). The presence of antibodies anti-B. canis vogeli was determinate in 57.9% (234/404) of dogs. The direct detection of Babesia spp was obtained in 0.5% (2/404) dogs by visualization of intraerythrocytic forms. Infestation by Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed in 54.5% (220/404) of dogs in both urban and rural areas. DNA of Babesia canis vogeli were obtained by PCR in 6% individual (3/50) and 8.7% of pool of ticks (7/80). The risk factors for the presence of anti-B. canis vogeli antibodies, as determined through the application of logistic regression models (P<0.05), were the following: medium breed size variables (P<0.001); contact with areas of forest (P=0.021); and access on the street (P=0.046). This study describes, for the first time, the confirmation of infection of B. canis vogeli in dogs and ticks in the semiarid region of Pernambuco, Brazil.

Evidence for eosinophil recruitment, leukotriene B4 production and mast cell hyperplasia following Toxocara canis infection in rats

It is well known that eosinophilia is a key pathogenetic component of toxocariasis. The objective of the present study was to determine if there is an association between peritoneal and blood eosinophil influx, mast cell hyperplasia and leukotriene B4 (LTB4) production after Toxocara canis infection. Oral inoculation of 56-day-old Wistar rats (N = 5-7 per group) with 1000 embryonated eggs containing third-stage (L3) T. canis larvae led to a robust accumulation of total leukocytes in blood beginning on day 3 and peaking on day 18, mainly characterized by eosinophils and accompanied by higher serum LTB4 levels. At that time, we also noted increased eosinophil numbers in the peritoneal cavity. In addition, we observed increased peritoneal mast cell number in the peritoneal cavity, which correlated with the time course of eosinophilia during toxocariasis. We also demonstrated that mast cell hyperplasia in the intestines and lungs began soon after the T. canis larvae migrated to these compartments, reaching maximal levels on day 24, which correlated with the complete elimination of the parasite. Therefore, mast cells appear to be involved in peritoneal and blood eosinophil infiltration through an LTB4-dependent mechanism following T. canis infection in rats. Our data also demonstrate a tight association between larval migratory stages and intestinal and pulmonary mast cell hyperplasia in the toxocariasis model.

Ocorrência de larva migrans na areia de áreas de lazer das escolas municipais de ensino infantil, Araçatuba, SP, Brasil

A areia das áreas de lazer de escolas podem constituir vias de transmissão para várias zoonoses parasitárias, representando risco potencial para as crianças que brincam nesses locais. Foi avaliada a ocorrência de agentes de larva migrans em 28 escolas municipais de ensino infantil de Araçatuba, SP. Foram colhidas 535 amostras de areia das áreas de lazer dessas escolas nos meses de janeiro (verão) e julho (inverno) de 1997 para estabelecimento da freqüência de isolamento de larvas e/ou ovos de Ancylostoma spp. e de ovos de Toxocara spp., pelos métodos de centrífugo-flutuação e de Baermann, respectivamente. A presença de larvas de Ancylostoma spp. foi observada, em pelo menos uma das amostras, em 35,7% (10/28) das amostras da primeira colheita (verão) e em 46,4% (13/28) quando da segunda colheita (inverno). Ovos de Toxocara spp. não foram encontrados e a presença de ovos de Ancylostoma spp. foi observada em 0,56% (3/535) das amostras.

Exposure to larva migrans syndromes in squares and public parks of cities in Chile

Between November 2001 and December 2002, 600 dog fecal samples were collected in main squares and public parks of 13 cities in Chile, from the extreme north to the extreme south of the country. The samples were processed in the laboratory by centrifugal sedimentation and the Harada-Mori methods. T. canis eggs were found in 12 cities. Detection rates ranged from 1.9 to 12.5% with an average of 5.2%. Seven percent of the samples had eggs and 9.5% had rhabditoid and/or filariform larvae of Ancylostomatidae. Strongyloides stercoralis were not found. Squares and public parks in Chile pose a potential risk of exposure to visceral, ocular, and/or cutaneous larva migrans syndromes.

Ovos de Toxocara sp. e larvas de Ancylostoma sp. em praça pública de Lavras, MG

Larva migrans visceral e cutânea são zoonoses parasitárias causadas pela infecção da larva de Toxocara sp. e Ancylostoma sp., respectivamente. O objetivo do estudo foi verificar a contaminação por ovos de Toxocara sp. e ovos e larvas de Ancylostoma sp. em amostras de solos coletadas de praças públicas e de áreas de recreação infantil de Lavras, Estado de Minas Gerais, por meio da técnica de centrífugo-flutuação e do método de Baermann. A ocorrência de ovos de Toxocara sp. e, ovos e larvas de Ancylostoma sp. foi observada em 69,6% (16/23) das amostras de solo coletadas de praças públicas. A contaminação somente por ovos de Ancylostoma sp. em amostras de solo coletadas em escolas/creches foi de 22,2% (4/18). A percentagem de amostras de areia coletadas de escolas/creches contaminadas somente com larvas de Ancylostoma sp. foi de 11,1% (2/18). Praças públicas são as áreas com maior risco potencial de infecção por Toxocara sp. e Ancylostoma sp. Exame coproparasitológico realizado em 174 amostras de fezes de cães observou 58% e 23%, respectivamente, com ovos de Ancylostoma sp. e Toxocara sp.

Prevalência de Cryptosporidium sp. em cães de instituições da cidade de São Paulo

OBJETIVO: Os cães são importante fonte de infecção da criptosporidiose para o homem. O objetivo do estudo foi avaliar a ocorrência de Cryptosporidium sp. em cães e, adicionalmente, comparar duas técnicas de análise fecal. MÉTODOS: Foram analisadas 450 amostras fecais de cães na cidade de São Paulo entre 2003 e 2004. Os espécimes fecais foram randomicamente selecionados: 200 amostras de cães provenientes de um hospital veterinário universitário público (grupo 1) e 250 amostras de canis particulares (grupo 2). A pesquisa de Cryptosporidium sp. foi realizada empregando-se a coloração de Ziehl-Neelsen modificada e a técnica de PCR. Foi empregado o teste de duas proporções com intervalo de confiança de 0,05 (z crítico=±1,645). RESULTADOS: Foram encontrados somente oocistos de Cryptosporidium parvum. A prevalência observada pela microscopia de luz foi de 8,8% e com a técnica de PCR foi de 9,5%. Os animais jovens apresentaram menor freqüência (5,5%) em relação aos adultos (10,1%) e não se observou diferença estatisticamente significante na prevalência entre machos e fêmeas. CONCLUSÕES: A prevalência de C. parvum na população canina estudada foi semelhante às observadas em outros estudos e acometendo em igual proporção machos e fêmeas. A técnica de PCR permitiu a detecção de um número maior de casos positivos que a microscopia de luz.

Visceral larva migrans: a seroepidemiological survey in five municipalities of São Paulo State, Brazil

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), employing antigens from Toxocara canis larvae and the absortion of suspected sera with Ascaris lumbricoides extracts was used in a seroepidemiological study performed in five municipalities of São Paulo State, Brazil (São Paulo, Campinas, Santos, Marília and Presidente Prudente) in order to determine the frequency of antibodies to Toxocara. In 2,025 blood samples collected, 806 proceeded from male subjects and 1,219 from females; 483 samples were collected from subjects under 15 years of age and the remaining 1,542 from subjects aged 15 years or over. Among the 2,025 sera investigated, 3.60% had antibodies to Toxocara at significant levels. A moderate predominance of infection with Toxocara among male subjects (3.72%) was observed, although the difference was not statistically significant when this rate was compared with that for female (3.28%). Related to age, a higher frequency of positive results was detected among subjects under 15 years (6.41%) against the older group (2.53%). A trend of more elevated rates of infection was observed in municipalities with high demographic densities (São Paulo, Campinas and Santos). Nevertheless, such findings only appeared to be statistically significant in subjects younger than 15 years.