Establishment and characterisation of a new cell line derived from Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)

Insect cell cultures are an important biotechnological tool for basic and applied studies. The objective of this work was to establish and characterise a new cell line from Culex quinquefasciatus embryonic tissues. Embryonated eggs were taken as a source of tissue to make explants that were seeded in L-15, Grace's, Grace's/L-15, MM/VP12, Schneider's and DMEM culture media with a pH range from 6.7-6.9 and incubated at 28ºC. The morphological, cytogenetic, biochemical and molecular characteristics of the cell cultures were examined by observing the cell shapes, obtaining the karyotypes, using a cellulose-acetate electrophoretic system and performing random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction analysis, respectively. The Grace's/L-15 medium provided the optimal nutritional conditions for cell adhesion and proliferation. Approximately 40-60 days following the explant procedure, a confluent monolayer was formed. Cellular morphology in the primary cultures and the subcultures was heterogeneous, but in the monolayer the epithelioid morphology type predominated. A karyotype with a diploid number of six chromosomes (2n = 6) was observed. Isoenzymatic and molecular patterns of the mosquito cell cultures matched those obtained from the immature and adult forms of the same species. Eighteen subcultures were generated. These cell cultures potentially constitute a useful tool for use in biomedical applications.

The impact of CO2 on collection of Aedes aegypti (Linnaeus) and Culex quinquefasciatus Say by BG-Sentinel(r) traps in Manaus, Brazil

Carbon dioxide (CO2) is an important component for activating and attracting host-seeking mosquitoes. The BG-Sentinel(r) trap is a well-established monitoring tool for capturing Culicidae, but CO2 role for the trap effectiveness has not been evaluated in highly urbanised areas. The objective was to evaluate the effectiveness of BG-Sentinel traps baited with and without CO2 for capturing urban mosquitoes. Fifteen areas were selected within the city of Manaus, Brazil, where four BG-Sentinels were operated for 24 h, two of them with CO2 and two without CO2. Captured Aedes aegypti females were dissected for the determination of their parity status. A significantly higher proportion of traps (from 32-79%) were positive for female Ae. aegypti when using the BG-Sentinel with CO2 (χ2 = 11.0271, p ≤ 0.001). Catches of female Culex spp were six times higher in CO2 traps (Mann-Whitney U test = 190.5; p = 0.001). Parity rates were similar for both traps. This study showed that CO2 has primarily an enhancing effect on the efficacy of BG-Sentinel for capturing Culex spp in Manaus. For Ae. aegypti, the positivity rate of the trap was increased, when CO2 was added.

DsRed2 transient expression in Culex quinquefasciatus mosquitoes

Culex quinquefasciatus mosquitoes have been successfully genetically modified only once, despite the efforts of several laboratories to transform and establish a stable strain. We have developed a transient gene expression method, in Culex, that delivers plasmid DNA directly to the mosquito haemolymph and additional tissues. We were able to express DsRed2 fluorescent protein in adult Cx. quinquefasciatus mosquitoes by injecting plasmids directly into their thorax. The expression of DsRed2 in adult Cx. quinquefasciatus mosquitoes is an important stepping stone to genetic transformation and the potential use of new control strategies and genetic interactions.

Characterisation of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) larval habitats at ground level and temporal fluctuations of larval abundance in Córdoba, Argentina

The aims of this study were to characterise the ground-level larval habitats of the mosquito Culex quinquefasciatus, to determine the relationships between habitat characteristics and larval abundance and to examine seasonal larval-stage variations in Córdoba city. Every two weeks for two years, 15 larval habitats (natural and artificial water bodies, including shallow wells, drains, retention ponds, canals and ditches) were visited and sampled for larval mosquitoes. Data regarding the water depth, temperature and pH, permanence, the presence of aquatic vegetation and the density of collected mosquito larvae were recorded. Data on the average air temperatures and accumulated precipitation during the 15 days prior to each sampling date were also obtained. Cx. quinquefasciatus larvae were collected throughout the study period and were generally most abundant in the summer season. Generalised linear mixed models indicated the average air temperature and presence of dicotyledonous aquatic vegetation as variables that served as important predictors of larval densities. Additionally, permanent breeding sites supported high larval densities. In Córdoba city and possibly in other highly populated cities at the same latitude with the same environmental conditions, control programs should focus on permanent larval habitats with aquatic vegetation during the early spring, when the Cx. quinquefasciatus population begins to increase.

Aspectos ecológicos da população de Culex quinquefasciatus Say (Diptera, Culicidae) em abrigos situados no Parque Ecológico do Tietê, São Paulo, SP

O estudo objetivou conhecer, ao longo das estações do ano, aspectos ecológicos da população adulta de Culex quinquefasciatus em abrigos. As coletas dos adultos foram realizadas mensalmente, cobrindo-se o período de um ano, na vegetação da margem de um canal de circunvalação. Os insetos foram capturados com o auxílio de um aspirador à bateria. O material foi acondicionado e transportado ao laboratório e, posteriormente, a espécie de interesse foi identificada; machos e fêmeas foram quantificados e o desenvolvimento ovariano foi identificado segundo o critério de Sella. Dados metereológicos foram coletados visando correlacioná-los com a variação sazonal da população de mosquitos. Foram coletados 8.298 mosquitos da espécie Culex quinquefasciatus. Desse total, 6.313 (76%) eram machos e 1.985 (24%) fêmeas. As fêmeas foram encontradas com o abdome vazio (90,1%), com sangue (7,4%) ou com óvulos maduros (2,5%). As correlações de número de mosquitos coletados versus temperatura mensal média e precipitação mensal total não indicaram influência forte e positiva desses fatores na freqüência de mosquitos. A maior freqüência de machos pode ser explicada pela dispersão das fêmeas e pela permanência dos machos nos abrigos, representados pela vegetação na margem do canal favorecendo o acúmulo de mosquitos.

Aspectos da distribuição de Culex (Culex) quinquefasciatus Say (Diptera, Culicidae) na região do rio Pinheiros, na cidade de São Paulo, Estado de São Paulo, Brasil

A distribuição de Culex (Culex) quinquefasciatus Say (1823) ao longo das margens do rio Pinheiros e os principais fatores que levam à proliferação da espécie foram estudados efetuando-se coletas semanais de mosquitos adultos, no período de um ano, em três pontos eqüidistantes às margens do rio. Para as coletas de mosquitos utilizou-se aspirador à bateria, por um período de cinco minutos. Os mosquitos foram identificados, diferenciados segundo o sexo e contados. Para verificação do estado fisiológico, as fêmeas foram separadas em vazias, com sangue e com ovos. Foram coletados 35.684 mosquitos, todos identificados como Cx. quinquefasciatus, sendo 39,4% fêmeas e 60,6% machos. As freqüências tomaram proporções diferentes entre os pontos de coletas e, em uma série temporal. O ambiente impactado do rio Pinheiros representa um excelente criadouro de Cx. quinquefasciatus, confirmado pela ocorrência de picos acentuados na freqüência de mosquitos, com desenvolvimento de forma explosiva e sobreposições entre as gerações, após as chuvas e em épocas de verão.

Observações sobre aplicações de controle em ecótopo com alta infestação de Culex quinquefasciatus Say (Diptera, Culicidae)

Com o objetivo de conhecer aspectos da infestação do mosquito Culex quinquefasciatus no rio Pinheiros, São Paulo, SP, Brasil, e avaliar a eficácia das aplicações de controle efetuadas no local, foram realizadas atividades de monitoramento da população de mosquitos em dez pontos de amostragens, localizados ao longo das duas margens do rio Pinheiros. Os mosquitos foram coletados por meio de técnica de aspiração à bateria, durante o período de um ano e encaminhados ao laboratório para identificação, contagem e tratamento dos dados de freqüência com as datas de aplicações de controle químico e biológico da população de mosquitos. As aplicações de controle apresentam efeitos parciais na freqüência populacional da espécie, o que abre discussão sobre as peculiaridades do ecótopo, como possíveis barreiras na eficiência dos produtos aplicados no meio aquático e na vegetação marginal, ao longo da calha do rio.

Vector competence of Culex quinquefasciatus Say, 1823 exposed to different densities of microfilariae of Dirofilaria immitis (Leidy, 1856)

The metropolitan region of Recife, Brazil is endemic for Dirofilaria immitis and has an environment favorable to the development of Culex quinquefasciatus. The goal of this study was to evaluate the vector competence of the Cx. quinquefasciatus RECIFE population for D. immitis transmission. A total of 2,104 females of Cx. quinquefasciatus RECIFE population were exposed to different densities of D. immitis microfilariae blood meals, ranging from 1,820 to 2,900 mf/ml of blood, in a natural membrane apparatus. The results showed a variation between 92.3% and 98.8% of females fed. The exposure of the Cx. quinquefasciatus RECIFE population to different densities of microfilariae did not influence the mortality of the mosquitoes. Infective larvae from D. immitis were observed in the Malpighian tubules beginning on the 12th day, whereas larvae were observed in the head and proboscis beginning on the 13th day following infection. The vector efficiency index (VEI) presented by the mosquitoes ranged from 7.8 to 56.5. The data demonstrates that the Cx. quinquefasciatus RECIFE population has great potential for the transmission of D. immitis, as it allowed the development of the filarid until the infectious stage at the different densities of microfilariae to which it was exposed.

Wing diagnostic characters for Culex quinquefasciatus and Culex nigripalpus (Diptera, Culicidae)

Wing diagnostic characters for Culex quinquefasciatus and Culex nigripalpus (Diptera, Culicidae). Culex quinquefasciatus and Culex nigripalpus are mosquitoes of public health interest, which can occur sympatrically in urban and semi-urban localities. Morphological identification of these species may be difficult when specimens are not perfectly preserved. In order to suggest an alternative taxonomical diagnosis, wings of these species were comparatively characterized using geometric morphometrics. Both species could be distinguished by wing shape with accuracy rates ranging from 85-100%. Present results indicate that one can identify these species relying only on wing characters when traditional taxonomical characters are not visible.

Potencial sinantrópico de mosquitos Kerteszia e Culex (Diptera: Culicidae) no Sudeste do Brasil

OBJETIVO: Observar a potencialidade sinantrópica de Anopheles bellator e de An. cruzii em vilarejo rodeado por ambiente natural. MÉTODOS: As observações foram levadas a efeito na localidade de Pedrinhas, no Sudeste do Estado de São Paulo, Brasil, de outubro de 1996 a janeiro de 2000. A sinantropia, ou domiciliação, foi estimada pelo índice de Nuorteva (s) acrescido do fator intradomiciliar de Mihályi (d) e adaptado para culicídeos hematófagos. RESULTADOS: Utilizando procedimento baseado na atração pela isca humana, as duas espécies de Kerteszia mostraram freqüência conjunta positiva correspondente a s=35,7. Isso parece indicar a existência de certo grau de sinantropia por parte desses mosquitos. Assim também, a população de Cx. sacchettae, correspondente à razão de sinantropia sr=12,8, obtida pelo cálculo da relação entre os dados conseguidos na armadilha de Shannon. Quanto ao método de procura ativa pela aspiração ambiental, os resultados obtidos consistiram em valores negativos de s. Assim, corresponderam a -43,1 para An. bellator, -48,2 para An. cruzii e -3,0 para Cx. sacchettae. Tais cifras foram relacionadas ao valor positivo de s=+93,8 apresentado por Cx. quinquefasciatus e considerado como equivalente a +100,00. CONCLUSÕES: O observado em relação a domicílios isolados rurais repetiu-se em conjunto de casas formando vila, também de caráter rural, e circundada por ambiente primitivo. Ou seja, esses mosquitos adultos tendem a procurar o ambiente antrópico na busca de repasto sangüíneo. Uma vez tendo-o conseguido, voltam para o ambiente de onde saíram. Todavia, revelou-se alguma tendência adaptativa revelada pelo encontro de formas imaturas de An. bellator em recipientes artificiais. Quanto a Cx. sacchettae, a população local parece mostrar tendência para adaptação ao meio antrópico.

Survey of Bancroftian filariasis infection in humans and Culex mosquitoes in the western Brazilian Amazon region: implications for transmission and control

IntroductionThe aim of this work was to identify possible lymphatic filariasis foci in the western Brazilian Amazonian that could be established from the reports of Rachou in the 1950s. The study was conducted in three cities of the western Brazilian Amazon region - Porto Velho and Guajará-Mirim (State of Rondônia) and Humaitá (State of Amazonas).MethodsFor human infection evaluation thick blood smear stained with Giemsa was used to analyze samples collected from 10pm to 1am. Polymerase chain reaction (PCR) was used to examine mosquito vectors for the presence of Wuchereria bancrofti DNA. Humans were randomly sampled from night schools students and from inhabitants in neighborhoods lacking sanitation. Mosquitoes were collected from residences only.ResultsA total 2,709 night students enrolled in the Program for Education of Young Adults (EJA), and 935 people registered in the residences near the schools were examined, being 641 from Porto Velho, 214 from Guajará-Mirim and 80 from Humaitá. No individual examined was positive for the presence of microfilariae in the blood stream. A total of 7,860 female Culex quinquefasciatus specimens examined were negative by PCR.ConclusionsThis survey including human and mosquito examinations indicates that the western Amazon region of Brazil is not a focus of Bancroftian filariasis infection or transmission. Therefore, there is no need to be included in the Brazilian lymphatic filariasis control program.

Avaliação de termonebulizações de propoxur contra mosquitos através de testes biológicos

A eficácia de termonebulização do inseticida propoxur no controle de Aedes aegypti foi avaliada através de testes realizados no Município de São José do Rio Preto, Estado de São Paulo (Brasil). Estudos comparativos monitorados por mosquitos - Culex quinquefasciatus - presos em gaiolas, indicaram que o horário de aplicação do inseticida teve forte influência na mortalidade dos mosquitos, que não ultrapassou 43% quando as aplicações foram feitas entre 17 h e 17:30 h, enquanto que para as aplicações feitas após às 19 h a mortalidade média foi de 73%. Nos testes realizados à noite foi constatada uma mortalidade média não inferior a 95% nas gaiolas posicionadas em dependências com as portas e janelas abertas e naquelas onde as portas e janelas estavam fechadas observou-se uma mortalidade média não superior a 13%. Mudando-se a concentração do inseticida de 1:12 para 1:9, a mortalidade dos mosquitos não diferiu de forma significativa.

Aedes (Stegomyia) aegypti L. e a culicideofauna associada em área urbana da região sul, Brasil

Foram mostrados alguns aspectos sobre a ecologia de 11 espécies de Culicidae que procriam em recipientes, em uma área urbana do Sul do Brasil. Os mais variados tipos de recipientes foram listados como eficientes criadouros para larvas de culicídeos. Aedes aegypti apareceu como espécie recém-introduzida e limitada somente a duas áreas da cidade. As espécies predominantes foram: Culex quinquefasciatus, Culex coronator, Aedes aegypti, Aedes fluviatilis e Limatus durhamii.

Evaluation of organophosphorus and synthetic pyrethroid insecticides against six vector mosquitoe species

Three organophosphorus compounds- malathion, folithion and temephos- and two synthetic pyrethroids- alphamethrin and deltamethrin- were used for monitoring the susceptibility status of larvae and adults of six vector mosquitoe species: Culex quinquefasciatus (Filariasis) and Aedes albopictus (Dengue) (both laboratory and field strains); laboratory strains of Aedes aegypti (Dengue), Anopheles slephensi and Anopheles culicifacies (Malaria), and Culex tritaeniorhynchus (Japanese encephalitis) in India. From the LC50 values obtained for these insecticides, it was found that all mosquito species including the field strains of Cx. quinquefasciatus and Ae. albopictus were highly susceptible Except for Cx. quinquefasciatus (field strain) against malathion, 100% mortality was observed at the discriminating dosages recommended by World Health Organization. The residual effect of alphamethrin, deltamethrin, malathion and folithion at 25 mg (ai)/m² on different surfaces against six species of vector mosquitoes showed that alphamethrin was the most effective on all four treated surfaces (mud, plywood, cement and thatch). Nevertheless, residual efficacy lasted longer on thatch than on the other surfaces. Therefore, synthetic pyrethroids such as alphamethrin can be effectively employed in integrated vector control operations.

Mosquitos vetores potenciais de dirofilariose canina na Região Nordeste do Brasil

INTRODUÇÃO: Em alguns bairros costeiros de São Luís, Maranhão, a prevalência da dirofilariose chega a mais de 40% entre os cães domiciliados. Porém, desconhecem-se os vetores naturais, tanto lá quanto no resto do Nordeste do país. O objetivo do estudo foi identificar os prováveis vetores dessa parasitose. MÉTODOS: Realizaram-se coletas mensais de mosquitos em um bairro costeiro de São Luís, MA, de março de 1996 a maio de 1997, no peridomicílio, tendo cão e homem como iscas. Os mosquitos foram dissecados para a pesquisa de larvas da Dirofilaria immitis. RESULTADOS: Coletaram-se 1.738 mosquitos de 11 espécies. Culex quinquefasciatus, capturada todos os meses, porém menos freqüente na estação chuvosa, correspondeu a 54,5% do total, seguido de Aedes albopictus (20,3%), Aedes taeniorhynchus e Aedes scapularis (ambos 11%). Larvas de D.immitis foram encontradas em 0,1% dos Cx. quinquefasciatus e 0,5% dos Ae. taeniorhynchus. CONCLUSÕES: Ae. taeniorhynchus e Cx. quinquefasciatus foram considerados vetores potenciais da dirofilariose em São Luís. A importância local de Cx. quinquefasciatus como transmissor primário da D. immitis necessita ser melhor avaliada.