Métodos de análise orgânica do café. I. Comparação entre métodos de determinação do ácido clorogênico

Três métodos de determinação do ácido clorogênico em café verde foram comparados. Foram utilizadas seis amostras de café, sendo que três de qualidade de bebida Mole e três Rio. Os resultados obtidos com os três métodos para os cafés Rio não diferiram estatísticamente entre si, embora os métodos de MOORES et al. e WEISS (oficial da AOAC) deram valores menores para os cafés Mole em relação ao método cromatográfico de GNAGY modificado. É discutido uma provável interferência da alta atividade da polifenol oxidase geralmente encontrada nos cafés Mole que oxidaria o ácido clorogênico durante a extração pelos dois primeiros métodos.

Confirmation of Anopheles (Anopheles) calderoni Wilkerson, 1991 (Diptera: Culicidae) in Colombia and Ecuador through molecular and morphological correlation with topotypic material

The morphologically similar taxa Anopheles calderoni, Anopheles punctimacula, Anopheles malefactor and Anopheles guarao are commonly misidentified. Isofamilies collected in Valle de Cauca, Colombia, showed morphological characters most similar to An. calderoni, a species which has never previously been reported in Colombia. Although discontinuity of the postsubcostal pale spots on the costa (C) and first radial (R1) wing veins is purportedly diagnostic for An. calderoni, the degree of overlap of the distal postsubcostal spot on C and R1 were variable in Colombian specimens (0.003-0.024). In addition, in 98.2% of larvae, seta 1-X was located off the saddle and seta 3-C had 4-7 branches in 86.7% of specimens examined. Correlation of DNA sequences of the second internal transcribed spacer and mtDNA cytochrome c oxidase subunit I gene (COI) barcodes (658 bp of the COI gene) generated from Colombian progeny material and wild-caught mosquitoes from Ecuador with those from the Peruvian type series of An. calderoni confirmed new country records. DNA barcodes generated for the closely related taxa, An. malefactor and An. punctimacula are also presented for the first time. Examination of museum specimens at the University of the Valle, Colombia, revealed the presence of An. calderoni in inland localities across Colombia and at elevations up to 1113 m.

Modulation of expression and activity of cytochrome P450s and alteration of praziquantel kinetics during murine schistosomiasis

In this study, we investigated the expression and activity of liver cytochrome P450s (CYPs) and praziquantel (PZQ) kinetics in mice infected with Schistosoma mansoni. Swiss Webster (SW) mice of both genders were infected (100 cercariae) on postnatal day 10 and killed on post-infection days (PIDs) 30 or 55. Non-infected mice of the same age and sex served as controls. Regardless of mouse sex, infection depressed the activities of CYP1A [ethoxy/methoxy-resorufin-O-dealkylases (EROD/MROD)], 2B9/10 [pentoxy/benzyloxy-resorufin-O-dealkylases (PROD, BROD)], 2E1 [p-nitrophenol-hydroxylase (PNPH)] and 3A11 [erythromycin N-demethylase (END)] on PID 55 but not on PID 30. On PID 55, infection decreased liver CYP mRNA levels (real-time reverse transcription-polymerase chain reaction). On PID 30, whereas mRNA levels remained unaltered in males, they were depressed in females. Plasma PZQ (200 and 400 mg/kg body weight intraperitoneally) levels were measured (high-performance liquid chromatography) at different post-treatment intervals. In males and females, infection delayed the PZQ clearance on PID 55, but not on PID 30. Therefore, it can be concluded that schistosomiasis down-modulated CYP expression and activity and delayed PZQ clearance on PID 55, when a great number of parasite eggs were lodged in the liver. On PID 30, when egg-laying was initiated by the worms, no change of CYP expression and activity was found, except for a depression of CYP1A2 and 3A11 mRNAs in female mice.

DNA multigene sequencing of topotypic specimens of the fascioliasis vector Lymnaea diaphana and phylogenetic analysis of the genus Pectinidens (Gastropoda)

Freshwater lymnaeid snails are crucial in defining transmission and epidemiology of fascioliasis. In South America, human endemic areas are related to high altitudes in Andean regions. The species Lymnaea diaphana has, however, been involved in low altitude areas of Chile, Argentina and Peru where human infection also occurs. Complete nuclear ribosomal DNA 18S, internal transcribed spacer (ITS)-2 and ITS-1 and fragments of mitochondrial DNA 16S and cytochrome c oxidase (cox)1 genes of L. diaphana specimens from its type locality offered 1,848, 495, 520, 424 and 672 bp long sequences. Comparisons with New and Old World Galba/Fossaria, Palaearctic stagnicolines, Nearctic stagnicolines, Old World Radix and Pseudosuccinea allowed to conclude that (i) L. diaphana shows sequences very different from all other lymnaeids, (ii) each marker allows its differentiation, except cox1 amino acid sequence, and (iii) L. diaphana is not a fossarine lymnaeid, but rather an archaic relict form derived from the oldest North American stagnicoline ancestors. Phylogeny and large genetic distances support the genus Pectinidens as the first stagnicoline representative in the southern hemisphere, including colonization of extreme world regions, as most southern Patagonia, long time ago. The phylogenetic link of L. diaphana with the stagnicoline group may give light to the aforementioned peculiar low altitude epidemiological scenario of fascioliasis.

Genetic compatibility between Anopheles lesteri from Korea and Anopheles paraliae from Thailand

To assess differentiation and relationships between Anopheles lesteri and Anopheles paraliae we established three and five iso-female lines of An. lesteri from Korea and An. paraliae from Thailand, respectively. These isolines were used to investigate the genetic relationships between the two taxa by crossing experiments and by comparing DNA sequences of ribosomal DNA second internal transcribed spacer (ITS2) and mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I (COI) and subunit II (COII). Results of reciprocal and F1-hybrid crosses between An. lesteri and An. paraliae indicated that they were compatible genetically producing viable progenies and complete synaptic salivary gland polytene chromosomes without inversion loops in all chromosome arms. The pairwise genetic distances of ITS2, COI and COII between these morphological species were 0.040, 0.007-0.017 and 0.008-0.011, respectively. The specific species status of An. paraliae in Thailand and/or other parts of the continent are discussed.

Mosquitoes of eastern Amazonian Ecuador: biodiversity, bionomics and barcodes

Two snapshot surveys to establish the diversity and ecological preferences of mosquitoes (Diptera: Culicidae) in the terra firme primary rain forest surrounding the Tiputini Biodiversity Station in the UNESCO Yasuní Biosphere Reserve of eastern Amazonian Ecuador were carried out in November 1998 and May 1999. The mosquito fauna of this region is poorly known; the focus of this study was to obtain high quality link-reared specimens that could be used to unequivocally confirm species level diversity through integrated systematic study of all life stages and DNA sequences. A total of 2,284 specimens were preserved; 1,671 specimens were link-reared with associated immature exuviae, all but 108 of which are slide mounted. This study identified 68 unique taxa belonging to 17 genera and 27 subgenera. Of these, 12 are new to science and 37 comprise new country records. DNA barcodes [658-bp of the mtDNA cytochrome c oxidase ( COI ) I gene] are presented for 58 individuals representing 20 species and nine genera. DNA barcoding proved useful in uncovering and confirming new species and we advocate an integrated systematics approach to biodiversity studies in future. Associated bionomics of all species collected are discussed. An updated systematic checklist of the mosquitoes of Ecuador (n = 179) is presented for the first time in 60 years.

COI barcode versus morphological identification of Culex ( Culex ) (Diptera: Culicidae) species: a case study using samples from Argentina and Brazil

Sequences of the cytochrome c oxidase subunit I (COI) mitochondrial gene from adults of 22 Culex ( Culex ) species from Argentina and Brazil were employed to assess species identification and to test the usefulness of COI for barcoding using the best close match (BCM) algorithm. A pairwise Kimura two-parameter distance matrix including the mean intra and interspecific distances for 71 COI barcode sequences was constructed. Of the 12 COI lineages recovered in the Neighbour-joining topology, five confirmed recognised morphological species ( Cx. acharistus , Cx. chidesteri , Cx. dolosus , Cx. lygrus and Cx. saltanensis ) with intraspecific divergences lower than 1.75%. Cx. bilineatus is formally resurrected from the synonymy of Cx. dolosus . Cx. maxi , Cx. surinamensis and the Coronator group species included were clustered into an unresolved lineage. The intraspecific distance of Cx. pipiens (3%) was almost twice the interspecific between it and Cx. quinquefasciatus (1.6%). Regarding the BCM criteria, the COI barcode successfully identified 69% of all species. The rest of the sequences, approximately 10%, 18% and 3%, remained as ambiguously, mis and unidentified, respectively. The COI barcode does not contain enough information to distinguish Culex ( Cux. ) species.

Identification of blood meal sources of Lutzomyia longipalpis using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis of the cytochrome B gene

An analysis of the dietary content of haematophagous insects can provide important information about the transmission networks of certain zoonoses. The present study evaluated the potential of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of the mitochondrial cytochrome B (cytb) gene to differentiate between vertebrate species that were identified as possible sources of sandfly meals. The complete cytb gene sequences of 11 vertebrate species available in the National Center for Biotechnology Information database were digested with Aci I, Alu I, Hae III and Rsa I restriction enzymes in silico using Restriction Mapper software. The cytb gene fragment (358 bp) was amplified from tissue samples of vertebrate species and the dietary contents of sandflies and digested with restriction enzymes. Vertebrate species presented a restriction fragment profile that differed from that of other species, with the exception of Canis familiaris and Cerdocyon thous. The 358 bp fragment was identified in 76 sandflies. Of these, 10 were evaluated using the restriction enzymes and the food sources were predicted for four: Homo sapiens (1), Bos taurus (1) and Equus caballus (2). Thus, the PCR-RFLP technique could be a potential method for identifying the food sources of arthropods. However, some points must be clarified regarding the applicability of the method, such as the extent of DNA degradation through intestinal digestion, the potential for multiple sources of blood meals and the need for greater knowledge regarding intraspecific variations in mtDNA.

Relações material de origem / solo e pedogênese em uma seqüência de solos predominantemente argilosos e Latossólicos sobre psamitos na depressão periférica Paulista: Paulo State Peripheral Depression, southeastern Brazil

Na região da Depressão Periférica Paulista, estudaram-se os solos em uma encosta representativa das baixas colinas com relevo suave ondulado e lançantes longos do baixo vale do rio Piracicaba. Após intensas observações de campo, foram amostrados cinco pedons, assentados em rochas psamíticas da formação Itararé (Carbonífero-Permiano). Quatro apresentaram características latossólicas e textura argilosa e um, interposto na porção superior da meia encosta, textura média e B textural. Com observações de campo, estratigráficas, macro e micromorfológicas e da mineralogia da argila, concluiu-se que grande parte do material de origem dos pedons Latossólicos argilosos proveio do retrabalhamento de um sedimento neocenozóico argiloso, previamente bastante intemperizado, com remanescentes semelhantes, hoje ocupando preferencialmente as superfícies cimeiras locais, e sem aparente filiação com as rochas psamíticas subjacentes. Deduziu-se que as características latossólicas dos solos da meia encosta e do sopé foram herdadas de idêntico material. No terço inferior da encosta, ocorreu um Bt, relativamente pouco espesso, interpretado como produto de transformação do transportado Bw, principalmente por mecanismos de argiluviação que coalescem os antigos microagregados tipicamente Latossólicos. O mais provável material de origem do Podzólico Vermelho-Amarelo Latossólico textura média/argilosa no terço superior da meia encosta, foi considerado como derivado, em grande parte, de sedimento correlativo a um antigo e elevado depósito aluvial correspondente a um nível de terraço do rio Piracicaba, hoje quase totalmente reafeiçoado.

Adubação nitrogenada e irrigação no maracujazeiro-amarelo. I. Produtividade e qualidade dos frutos

Conduziu-se um experimento em Campos dos Goytacazes, RJ, no período de dezembro de 1995 a junho de 1997, para avaliar o efeito da adubação nitrogenada, sob diferentes lâminas de irrigação, na produtividade e na qualidade dos frutos do maracujazeiro-amarelo. Testaram-se quatro doses de nitrogênio (50, 250, 450 e 650 g planta-1 ano-1 de N), utilizando a uréia como fonte de N, sob seis lâminas de irrigação (0, 25, 50, 75, 100 e 125% da ET0 - evapotranspiração de referência), num esquema fatorial 4 x 6, com três repetições. Utilizou-se um sistema de irrigação por gotejamento. Não houve variação na produtividade quando o N foi aplicado sob lâminas de irrigação de 0, 25, 100 e 125% da ET0. A produtividade máxima de frutos, 41,3 t ha-1, foi obtida quando se aplicaram 290 g planta-1 ano-1 de N, sob uma lâmina de irrigação de 75% da ET0, o que correspondeu a uma lâmina total de água (irrigação + precipitação efetiva) de 1.293 mm. A adubação nitrogenada influenciou o número de frutos e não apresentou influência sobre o peso médio e outras características qualitativas dos frutos. A irrigação influenciou a produtividade, o peso médio, o comprimento e o diâmetro dos frutos.

Produção de etileno e atividade da enzima ACCoxidase em frutos de maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.)

O maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) é uma das principais espécies cultivadas do gênero Passiflora. Seus frutos são ricos em minerais, vitaminas e apresentam aroma e sabor agradáveis. O presente trabalho teve como objetivos determinar a produção de etileno e atividade enzimática da ACCoxidase (ACCO) em maracujá-amarelo colhido em diferentes estádios de maturação. A determinação do estádio de maturação foi realizada com o auxílio de um colorímetro, que, por meio da radiação ultravioleta, estabeleceu valores absolutos da cor dos frutos de cada um dos grupos (I, II e III). A produção de etileno e a atividade da ACCoxidase foram realizadas por cromatografia gasosa. Os frutos do grupo I são predominantemente verdes, de acordo com os valores absolutos da cor obtidos. Os frutos do grupo II são predominantemente, coloridos, ou seja, em um estádio de maturação intermediário, e os frutos do grupo III, totalmente coloridos, apresentando-se, portanto, em início da senescência. Os frutos do grupo I apresentaram atividade da ACCO predominantemente mais elevada do que os frutos do grupo III, ocorrendo também o mesmo comportamento com a produção de etileno, com um valor médio de 7,25 nL. g-1. h-1, bem acima do nível máximo estabelecido para espécies classificadas como fracamente produtoras de etileno (0,5 nL. g-1. h-1). Assim, o maracujá-amarelo difere quanto à produção de etileno e atividade da enzima ACCO, de acordo com o estádio de maturação. A espécie foi considerada, em comparação com outras espécies, como produtora intermediária de etileno. A atividade enzimática da ACCO é mais elevada em frutos predominantemente verdes, mas ela é limitada e necessita de co-fatores enzimáticos para sua atividade máxima.

Síntese e caracterização de novos compostos de coordenação de cobre (II) com ligantes não-simétricos N,O-doadores: contribuições para o sítio ativo da galactose oxidase

The reactions of four new unsymmetrical N,O-donor ligands, {H2BBPETEN= [N-(2-hydroxybenzyl) - N,N' - bis(2 methylpyridyl) -N'-(hydroxyethyl) ethylenodiamine], H3BPETEN=[N,N'- bis(2-hydroxybenzyl) -N- (2-methylpyridyl) -N'- (hydroxyethyl) ethylenodiamine], HTPETEN=[N,N,N'- tris(2-methylpyridyl) -N'- (hydroxyethyl) ethylenodiamine] and H3BIMETEN=[N,N'-(2-hydroxybenzyl)-N-(1-methylimidazol-2-il-methyl)-N'- (hydroxyethyl)ethylenodiamine]}, with Cu(II) salts afforded the following mononuclear compounds: [CuII(HBBPETEN)]ClO4, [CuII(H2BPETEN)]ClO4 , [CuII(HTPETEN)](PF6)2 and [CuII(H2BIMETEN)]ClO4 . All were characterized by EPR, electronic spectroscopy and electrochemistry. The four copper (II) compounds showed interesting electrochemistry properties. All presented an anodic wave that can be attributed to the Cu (I) oxide formation at the electrode surface, or to a Cu0 sediment at the same surface or yet, to Cu(I) -> Cu(II) oxidation process with coupled chemistry reaction, due to their irreversibility. Two of the complexes are described as interesting synthetic models for the active site of the metalloenzyme galactose oxidase.

Titulação amperométrica de compostos fenólicos usando polifenol oxidase de vegetal como titulante

Titulação amperométrica de compostos fenólicos usando extrato bruto de batata doce (Ipomoea batatas (L.) Lam.), fonte da enzima polifenol oxidase, como titulante é proposta para determinação de fenóis em águas residuárias. Esta enzima catalisa a oxidação de monofenol e difenol pelo oxigênio molecular produzindo o-quinona. Um eletrodo de oxigênio foi usado como eletrodo indicador e o consumo de oxigênio na solução foi proporcional à concentração do substrato (analito). Esse método apresentou uma resposta linear para catecol, pirogalol, hidroquinona, fenol e p-cresol na faixa de concentração de 2,0x10-5 a 4,0x10-4 mol L-1 e a recuperação de catecol em duas amostras variou de 97,7 a 102%. Os resultados obtidos para compostos fenólicos em águas residuárias de indústrias usando o procedimento proposto e o método padrão estão em concordância a um nível de confiança de 95%.

Fowl adenovirus Group I as a causal agent of inclusion body hepatitis/hydropericardium syndrome (IBH/HPS) outbreak in brazilian broiler flocks

Commercial broiler flocks from a farm located in the State of São Paulo, Brazil, presented diarrhea, depression, increased mortality and poor weight gain. Upon post-mortem examination, classical signs of Inclusion Body Hepatitis/Hydropericardium Syndrome (IBH/HPS) were observed, including enlarged pale yellow-colored livers and straw-colored liquid in the pericardial sac. In addition, gross lesions were also observed in the kidneys, pancreas, thymus, intestines and gallbladder. Samples of these organs were analyzed by PCR for the detection of the hexon gene of the Fowl Adenovirus (FAdVs) Group I. The results were positive for both flocks (A and B) assayed by PCR. The macroscopic lesions associated with the detection of FAdV Group I by PCR in several of these affected organs allowed for the identification of IBH/HPS. In fact, this is the first report in Brazil of IBH/HPS in broilers, which identifies FAdVs group I as a causal agent of the disease. These findings may contribute to the worldwide epidemiology of the adenovirus-mediated hepatitis/hydropericardium syndrome.

Estrutura populacional de Euterpe edulis Mart. no Sul da Bahia, Brasil

Objetivou-se neste estudo, por meio de contagem de indivíduos classificados em diferentes estádios de desenvolvimento, conhecer a estrutura populacional da palmeira juçara (Euterpe edulis Mart.), presente na Mata Atlântica do Sul da Bahia. Os trabalhos foram desenvolvidos no Ecoparque de Una, Una, BA, Brasil. A população foi classificada em seis estádios: Plântula, Jovem I, Jovem II, Imaturo I, Imaturo II e Adulto, e em cada estádio, foram avaliados a densidade, as distribuições de freqüência de classes de altura de inserção das folhas, número de folhas, diâmetro à altura do peito (DAP) e diâmetro ao nível do solo (DAS). Foram calculadas as relações existentes entre essas variáveis, através do coeficiente de correlação de Pearson. A estrutura demográfica encontrada, com exceção da densidade de plântulas, é compatível com a estrutura registrada nos estudos de população de E. edulis das regiões sul e sudeste do Brasil com grande número de indivíduos em regeneração e poucos indivíduos nas classes de maior tamanho. A densidade populacional apresentou-se relativamente baixa, supondo, entre outras possibilidades, tratar-se de um ecótipo diferente dos anteriormente estudados nas regiões sul e sudeste do Brasil. As variáveis se correlacionaram positivamente, com exceção de folhas e DAS no estádio adulto.