Efeito das interações hiperconjugativas na constante de acoplamento ¹J CH da hexametilenotetramina e do adamantano: estudo teórico e experimental

The objective of this work was to determine the influence of hyperconjugative interactions on the ¹J CH coupling constant for hexamethylenetetramine (1) and adamantane (2). For this end, theoretical and experimental ¹J CH were obtained and hyperconjugative interactions were investigated using NBO. It was observed, theoretically and experimentally, that ¹J CH in 1 is 20 Hz larger than in 2, mainly due to the nN®s*C-H hyperconjugative interaction. This interaction occurs only in 1, with an energy of 9.30 kcal mol-1. It increases the s-character of the carbon atom in the C-H bond and the occupancy of the sigma*C-H orbital in (1).

Caracterização de membranas assimétricas de acetato de celulose produzidas a partir do aproveitamento do resíduo da palha de milho para uso em ultrafiltração

Cellulose acetates (CA) with different degrees of acetylation were synthesized from cellulose extracted from corn stover. Membranes were prepared for the ultrafiltration process with pure polymers and blend form of CA utilizing a dioxane/acetone system. The membranes were characterized according to their transport properties. The blend form materials presented the best results for application in ultrafiltration experiments. M-TAC/DAC (corn stover triacetate and diacetate) and M-TAC/DAC-Rho (corn stover triacetate and Rhodia diacetate) presented rejection to egg albumin protein of 87.39% and 80.50%, respectively. Thus, MWCO of 45 kDa was determined for these materials.

Tratamento cirúrgico do adenocarcinoma de reto por laparoscopia e por acesso convencional: estudo comparativo de tempo cirúrgico, complicações pós-operatórias, radicalidade oncológica e sobrevida

OBJETIVO: Comparar duas vias cirúrgicas (laparoscópica e convencional) para o tratamento de câncer de reto no que se refere às complicações pós-operatórias, radicalidade oncológica e sobrevida. MÉTODOS: Trata-se de estudo retrospectivo com 84 pacientes com câncer retal que foram admitidos no Hospital do Câncer de Barretos entre 2000 e 2003. Somente os indivíduos que se submeteram à operações eletivas (intenção curativa) foram incluídos. A via cirúrgica foi escolhida subjetivamente e não com base na localização do tumor. RESULTADOS: O acesso laparoscópico foi utilizado por 50% dos pacientes. Não houve diferença (P> 0,05) entre os dois grupos em relação à: idade, sexo, topografia, estádio, tratamento neoadjuvante e adjuvante, número de linfonodos regionais dissecados, tamanho da peça cirúrgica, margens cirúrgicas, transfusões de sangue, taxas de complicações pós-operatórias, dias de hospitalização e a taxa de sobrevida global. O tempo cirúrgico foi maior no grupo laparoscópico (mediana: 210x127,5min, P<0,001). Houve diminuição do tempo cirúrgico com o aumento do número de laparoscopias realizadas pela equipe (rho: -0,387, P=0,020). CONCLUSÃO: As vias laparoscópica e convencional, para o tratamento de câncer de reto, foram equivalentes em relação às complicações pós-operatórias, radicalidade oncológica e sobrevida. Contudo, o tempo cirúrgico foi maior no grupo da laparoscopia.

Expressão da MMP-9 e do VEGF no câncer de mama: correlação com outros indicadores de prognóstico

OBJETIVO: analisar a expressão da metaloproteinase da matriz 9 (MMP-9) e do fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) em um grupo de pacientes com câncer primário de mama, e correlacioná-los entre si e com outros indicadores de prognóstico. MÉTODOS: estudo transversal que analisou a expressão da MMP-9 e do VEGF em 88 casos consecutivos de tumores primários de mama. As amostras foram obtidas de pacientes portadoras de câncer primário de mama, submetidas a tratamento cirúrgico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2004. A técnica de imuno-histoquímica, usando o complexo avidina-biotina-peroxidase, foi aplicada para avaliar a imunoreação dos antígenos nos tumores. A expressão qualitativa das proteínas foi avaliada por meio da observação da intensidade da coloração acastanhada dos anticorpos no citoplasma das células malignas, considerando positiva quando pelo menos uma célula tumoral apresentava coloração nítida e inequívoca para cada um destes marcadores. Para a determinação do escore qualitativo (0=ausente, 1=fraca, 2=média e 3=forte), foi considerada a intensidade da coloração citoplasmática mais forte na lâmina, independente do número de células coradas. A expressão quantitativa foi determinada pela percentagem média de células coradas, observadas em pelo menos dez campos microscópicos. A quantificação final da expressão da MMP-9 e do VEGF foi feita por meio da aplicação do algoritmo HSCORE=Σ[(I+1)]xPC, no qual I e PC representam a intensidade da coloração e a percentagem das células coradas, respectivamente. RESULTADOS: a MMP-9 e o VEGF apresentaram alto percentual de positividade nos tumores estudados. A expressão final mostrou escore mediano de 180 e 190, respectivamente. Quando se comparou a expressão da MMP-9 e do VEGF com as variáveis "idade", "diâmetro tumoral", "tipo histológico", "grau histológico", "linfonodo axilar" e "invasão vascular", não foi encontrada nenhuma correlação significativa. Comparadas entre si, a MMP-9 e o VEGF apresentaram uma correlação significativa (rho=0,23; p=0,03). A positividade do linfonodo axilar apresentou uma correlação positiva com o maior diâmetro tumoral (2,7±1,1 cm; p<0,01) e com a presença de invasão vascular (84,1%; p<0,01). CONCLUSÕES: os resultados encontrados não mostraram correlação entre a expressão da MMP-9 e do VEGF com os indicadores de prognóstico selecionados, mas uma correlação significativa quando correlacionados entre si.

Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37°C; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizou-se o Conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100%, respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8 e 10,3%, respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, conclui-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.

HHV-8 infection in patients with AIDS-related Kaposi's sarcoma in Brazil

The aims of the present study were to determine the prevalence of human herpesvirus type 8 (HHV-8) in HIV-positive Brazilian patients with (HIV+/KS+) and without Kaposi's sarcoma (HIV+/KS-) using PCR and immunofluorescence assays, to assess its association with KS disease, to evaluate the performance of these tests in detecting HHV-8 infection, and to investigate the association between anti-HHV-8 antibody titers, CD4 counts and staging of KS disease. Blood samples from 66 patients, 39 HIV+/KS+ and 27 HIV+/KS-, were analyzed for HHV-8 viremia in peripheral blood mononuclear cells by PCR and HHV-8 antigenemia for latent and lytic infection by immunofluorescence assay. Positive samples for latent nuclear HHV-8 antigen (LNA) antibodies were titrated out from 1/100 to 1/409,600 dilution. Clinical information was collected from medical records and risk behavior was assessed through an interview. HHV-8 DNA sequences were detected by PCR in 74.3% of KS+ patients and in 3.7% of KS- patients. Serological assays were similar in detecting anti-LNA antibodies and anti-lytic antigens in sera from KS+ patients (79.5%) and KS- patients (18.5%). HHV-8 was associated with KS whatever the method used, i.e., PCR (odds ratio (OR) = 7.4, 95% confidence interval (CI) = 2.16-25.61) or anti-LNA and anti-lytic antibodies (OR = 17.0, 95%CI = 4.91-59.14). Among KS+ patients, HHV-8 titration levels correlated positively with CD4 counts (rho 0.48, P = 0.02), but not with KS staging. HHV-8 is involved in the development of KS in different geographic areas worldwide, as it is in Brazil, where HHV-8 is more frequent among HIV+ patients. KS severity was associated with immunodeficiency, but no correlation was found between HHV-8 antibody titers and KS staging.

Isolation of bovine plasma albumin by liquid chromatography and its polymerization for use in immunohematology

The aim of the method described here is to remove hemoglobin, the major contaminant in the bovine plasma obtained from slaughterhouses, by adding a mixture of 19% cold ethanol and 0.6% chloroform, followed by fibrinogen and globulin precipitation by the Cohn method and nonspecific hemagglutinin by thermocoagulation. The experimental volume of bovine plasma was 2,000 ml per batch. Final purification was performed by liquid chromatography using the ion-exchange gel DEAE-Sepharose FF. The bovine albumin thus obtained presented > or = 99% purity, a yield of 25.0 ± 1.2 g/l plasma and >71.5% recovery. N-acetyl-DL-tryptophan (0.04 mmol/g protein) and sodium caprylate (0.04 mmol/g protein) were used as stabilizers and the final concentration of albumin was adjusted to 22.0% (w/v), pH 7.2 to 7.3. Viral inactivation was performed by pasteurization for 10 h at 60°C. The bovine albumin for the hemagglutination tests used in immunohematology was submitted to chemical treatment with 0.06% (w/v) glutaraldehyde and 0.1% (w/v) formaldehyde at 37°C for 12 h to obtain polymerization. A change in molecular distribution was observed after this treatment, with average contents of 56.0% monomers, 23.6% dimers, 12.2% trimers and 8.2% polymers. The tests performed demonstrated that this polymerized albumin enhances the agglutination of Rho(D)-positive red cells by anti-Rho(D) serum, permitting and improving visualization of the results.

Effect of suramin on myotoxicity of some crotalid snake venoms

We investigated the protective effect of suramin, an enzyme inhibitor and an uncoupler of G protein from receptors, on the myotoxic activity in mice of different crotalid snake venoms (A.c. laticinctus, C.v. viridis, C.d. terrificus, B. jararacussu, B. moojeni, B. alternatus, B. jararaca, L. muta). Myotoxicity was evaluated in vivo by injecting im the venoms (0.5 or 1.0 mg/kg) dissolved in physiological saline solution (0.1 ml) and measuring plasma creatine kinase (CK) activity. Two experimental approaches were used in mice (N = 5 for each group). In protocol A, 1 mg of each venom was incubated with 1.0 mg suramin (15 min, 37ºC, in vitro), and then injected im into the mice at a dose of 1.0 mg/kg (in vivo). In protocol B, venoms, 1.0 mg/kg, were injected im 15 min prior to suramin (1.0 mg/kg, iv). Before and 2 h after the im injection blood was collected by orbital puncture. Plasma was separated and stored at 4ºC for determination of CK activity using a diagnostic kit from Sigma. Preincubation of some venoms (C.v. viridis, A.c. laticinctus, C.d. terrificus and B. jararacussu) with suramin reduced (37-76%) the increase in plasma CK, except for B. alternatus, B. jararaca or L. muta venoms. Injection of suramin after the venom partially protected (34-51%) against the myotoxicity of B. jararacussu, A.c. laticinctus and C.d. terrificus venom, and did not protect against C.v. viridis, L. muta, B. moojeni, B. alternatus or B. jararaca venoms. These results show that suramin has an antimyotoxic effect against some, but not all the North and South American crotalid snake venoms studied here.

Patient and physician evaluation of the severity of acute asthma exacerbations

We studied the ability of patients not experienced in the use of peak expiratory flow meters to assess the severity of their asthma exacerbations and compared it to the assessment of experienced clinicians. We also evaluated which data of physical examination and medical history are used by physicians to subjectively evaluate the severity of asthma attacks. Fifty-seven adult patients (15 men and 42 women, with a mean (± SD) age of 37.3 ± 14.5 years and 24.0 ± 17.9 years of asthma symptoms) with asthma exacerbations were evaluated in a University Hospital Emergency Department. Patients and physicians independently evaluated the severity of the asthma attack using a linear scale. Patient score, physician score and forced expiratory volume at the first second (FEV1) were correlated with history and physical examination variables, and were also considered as dependent variables in multiple linear regression models. FEV1 correlated significantly with the physician score (rho = 0.42, P = 0.001), but not with patient score (rho = 0.03; P = 0.77). Use of neck accessory muscles, expiratory time and wheezing intensity were the explanatory variables in the FEV1 regression model and were also present in the physician score model. We conclude that physicians evaluate asthma exacerbation severity better than patients and that physician's scoring of asthma severity correlated significantly with objective measures of airway obstruction (FEV1). Some variables (the use of neck accessory muscles, expiratory time and wheezing intensity) persisted as explanatory variables in physician score and FEV1 regression models, and should be emphasized in medical schools and emergency settings.

Effect of exercise on the caloric intake of breast cancer patients undergoing treatment

The purpose of this study was to examine the effects of an exercise intervention on the total caloric intake (TCI) of breast cancer patients undergoing treatment. A secondary purpose was to determine whether or not a relationship existed between changes in TCI, body fat composition (%BF), and fatigue during the study, which lasted 6 months. Twenty females recently diagnosed with breast cancer, scheduled to undergo chemotherapy or radiation, were assigned randomly to an experimental (N = 10) or control group (N = 10). Outcome measures included TCI (3-day food diary), %BF (skinfolds), and fatigue (revised Piper Fatigue Scale). Each exercise session was conducted as follows: initial cardiovascular activity (6-12 min), followed by stretching (5-10 min), resistance training (15-30 min), and a cool-down (approximately 8 min). Significant changes in TCI were observed among groups (F1,18 = 8.582; P = 0.009), at treatments 2 and 3, and at the end of the study [experimental (1973 ± 419), control (1488 ± 418); experimental (1946 ± 437), control (1436 ± 429); experimental (2315 ± 455), control (1474 ± 294), respectively]. A significant negative correlation was found (Spearman rho(18) = -0.759; P < 0.001) between TCI and %BF and between TCI and fatigue levels (Spearman rho(18) = -0.541; P = 0.014) at the end of the study. In conclusion, the results of this study suggest that an exercise intervention administered to breast cancer patients undergoing medical treatment may assist in the mitigation of some treatment side effects, including decreased TCI, increased fatigue, and negative changes in body composition.

Angiotensin II induces NF-κB, JNK and p38 MAPK activation in monocytic cells and increases matrix metalloproteinase-9 expression in a PKC- andRho kinase-dependent manner

Angiotensin II (ANG II), the main effector of the renin-angiotensin system, is implicated in endothelial permeability, recruitment and activation of the immune cells, and also vascular remodeling through induction of inflammatory genes. Matrix metalloproteinases (MMPs) are considered to be important inflammatory factors. Elucidation of ANG II signaling pathways and of possible cross-talks between their components is essential for the development of efficient inhibitory medications. The current study investigates the inflammatory signaling pathways activated by ANG II in cultures of human monocytic U-937 cells, and the effects of specific pharmacological inhibitors of signaling intermediates on MMP-9 gene (MMP-9) expression and activity. MMP-9 expression was determined by real-time PCR and supernatants were analyzed for MMP-9 activity by ELISA and zymography methods. A multi-target ELISA kit was employed to evaluate IκB, NF-κB, JNK, p38, and STAT3 activation following treatments. Stimulation with ANG II (100 nM) significantly increased MMP-9 expression and activity, and also activated NF-κB, JNK, and p38 by 3.8-, 2.8- and 2.2-fold, respectively (P < 0.01). ANG II-induced MMP-9 expression was significantly reduced by 75 and 67%, respectively, by co-incubation of the cells with a selective inhibitor of protein kinase C (GF109203X, 5 µM) or of rho kinase (Y-27632, 15 µM), but not with inhibitors of phosphoinositide 3-kinase (wortmannin, 200 nM), tyrosine kinases (genistein, 100 µM) or of reactive oxygen species (α-tocopherol, 100 µM). Thus, protein kinase C and Rho kinase are important components of the inflammatory signaling pathways activated by ANG II to increase MMP-9 expression in monocytic cells. Both signaling molecules may constitute potential targets for effective management of inflammation.

Vascular O-GlcNAcylation augments reactivity to constrictor stimuli by prolonging phosphorylated levels of the myosin light chain

O-GlcNAcylation is a modification that alters the function of numerous proteins. We hypothesized that augmented O-GlcNAcylation levels enhance myosin light chain kinase (MLCK) and reduce myosin light chain phosphatase (MLCP) activity, leading to increased vascular contractile responsiveness. The vascular responses were measured by isometric force displacement. Thoracic aorta and vascular smooth muscle cells (VSMCs) from rats were incubated with vehicle or with PugNAc, which increases O-GlcNAcylation. In addition, we determined whether proteins that play an important role in the regulation of MLCK and MLCP activity are directly affected by O-GlcNAcylation. PugNAc enhanced phenylephrine (PE) responses in rat aortas (maximal effect, 14.2±2 vs 7.9±1 mN for vehicle, n=7). Treatment with an MLCP inhibitor (calyculin A) augmented vascular responses to PE (13.4±2 mN) and abolished the differences in PE-response between the groups. The effect of PugNAc was not observed when vessels were preincubated with ML-9, an MLCK inhibitor (7.3±2 vs 7.5±2 mN for vehicle, n=5). Furthermore, our data showed that differences in the PE-induced contractile response between the groups were abolished by the activator of AMP-activated protein kinase (AICAR; 6.1±2 vs 7.4±2 mN for vehicle, n=5). PugNAc increased phosphorylation of myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT-1) and protein kinase C-potentiated inhibitor protein of 17 kDa (CPI-17), which are involved in RhoA/Rho-kinase-mediated inhibition of myosin phosphatase activity. PugNAc incubation produced a time-dependent increase in vascular phosphorylation of myosin light chain and decreased phosphorylation levels of AMP-activated protein kinase, which decreased the affinity of MLCK for Ca2+/calmodulin. Our data suggest that proteins that play an important role in the regulation of MLCK and MLCP activity are directly affected by O-GlcNAcylation, favoring vascular contraction.

EFEITO DA ASSOCIAÇÃO DE PECTINASE, INVERTASE E GLICOSE ISOMERASE NA QUALIDADE DO SUCO DE BANANA

O efeito do tratamento em que se associou as enzimas comerciais: 0,03 % v/p de pectinase (Clarex) a 0,6 % v/p de invertase (Invertase-S) e 0,5 % p/p de glicose-isomerase (Taka-sweet) sobre purê de banana (Musa cavendishii), em condições amenas de hidrólise (40o C, 15 min.) foi observado e comparado com o efeito de outros três tratamentos enzimáticos: 0,03 % v/p de pectinase (Clarex); 0,03 % v/p de pectinase (Clarex) associada à 0,6 % v/p de invertase (Invertase-S); e 0,03 % v/p de pectinase (Sigma) associada a 0,03 % v/p de celulase (Sigma), visando determinar a qualidade representada por um conjunto de propriedades físicas, fisico-químicas, químicas, microbiológicas e sensoriais dos sucos de banana obtidos. Essas propriedades não diferiram significativamente em função das pectinases e celulase empregadas. A adição de invertase provocou aumento de doçura e diminuição da viscosidade do suco. Por outro lado, a adição de glicose isomerase ao suco invertido não foi capaz de aumentar significativamente o teor de frutose.

Chá-mate e café como fontes de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) na dieta da população de Campinas

Com o objetivo de determinar os níveis dos contaminantes hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) em chá-mate e café e avaliar a contribuição desses produtos como fonte de HPAs na dieta da população de Campinas, três marcas com três diferentes lotes de chá-mate e café em pó, totalizando 18 amostras, foram analisadas. Os dados de consumo de chá-mate e café foram obtidos de uma pesquisa de hábitos alimentares feita no ano de 1993 junto à população local, através do método de freqüência de alimentos. A determinação de HPAs foi conduzida por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência. A presença de diferentes hidrocarbonetos foi observada em todas as amostras de café analisadas, em níveis variando tanto entre as marcas quanto em função da técnica de preparo da bebida. A quantidade média de HPAs totais encontrada no café (bebida pronta para consumo) foi de 10,12mig/kg, enquanto que o chá-mate apresentou um nível de contaminantes significativamente menor (sigma=0,70mig/kg). Considerando-se a estimativa de consumo diário médio per capita de 69,79g de chá-mate e de 86,77g de café, pode-se considerar que o chá-mate e o café aportam diariamente cerca de 0, 05mig e 0, 88mig de HPAs totais, respectivamente, na dieta da população estudada (n=600 indivíduos).

Isotermas e calor isostérico de sorção do feijão

O teor de água de equilíbrio dos grãos de feijão foi determinado pelo método dinâmico-gravimétrico para temperaturas entre 25 e 55 °C e atividades de água para cada temperatura, entre 0,20 e 0,75. Observou-se que o teor de água decresce com o aumento da temperatura para uma dada atividade de água à semelhança dos produtos higroscópicos. Aos dados experimentais foram ajustados diversos modelos matemáticos disponíveis na literatura (Brunauer-Emmett-Teller, Chung Pfost, Copace, Guggenhein-Anderson-de Boer, Halsey Modificado, Henderson, Henderson Modificado, Oswin, Sabbah e Sigma Copace). Segundo os parâmetros estatísticos de análise, o modelo de Halsey Modificado foi o que descreveu melhor a higroscopicidade do feijão. A partir dos resultados obtidos calculou-se o calor isostérico para cada teor de água de equilíbrio. Observou-se que o calor isostérico aumenta com a diminuição do conteúdo de água do produto, indicando que a redução do teor de água aumenta a energia necessária para a remoção de água. Os valores de calor isostérico para os grãos de feijão na faixa de umidade de 10,10 a 21,71 (% b.s.), variam de 3961 a 2718 kJ kg-1.