The hemorrhagic syndrome of leptospirosis: an experimental study in guinea pigs

The hemorrhagic syndrome of leptospirosis was studied in guinea pigs. The study correlates hematological, histopathological and immunohistochemical alterations in sixty animals inoculated by the intraperitoneal route with lml of the culture of virulent strain of Leptospira interrogans serovar copenhageni. Leptospirae antigens were detected by immunoperoxidase, chiefly in liver, kidney and heart muscle capillaries. Possible pathogenic mechanisms responsible for hemorrhagic syndrome are discussed with emphasis on toxic and anoxic attacks causing damage to endothelia, platelet depletion and alterations to hemostasia rates: prothrombin time [FT], partial thromboplastin time [PIT] and fibrinogen concentrations. Tide clinical-laboratoiy picture is compatible with the histopathological observation of disseminated intravascular coagulation [D1C] in most of the guinea pigs from day 4 of infection.

Production and characterization of monoclonal antibodies to the edta extract of Leptospira interrogans, serovar icterohaemorrhagiae

Monoclonal antibodies (MABs) ivere produced against an etbylenediaminetetraacetate (EDTA) extract of Leptospira interrogans serovar icterohaemorrhagiae being characterized by gel precipitation as IgM and IgG (IgGl and IgG2b). The EDTA extract was detected as several bands by silver staining in SDS-PAGE. In the Western blot the bands around 20 KDa reacted with a monoclonal antibody, 47B4D6, and was oxidized by periodate and was not digested by pronase, suggesting that the determinant is of carbohydrate nature, lmmunocytochemistry, using colloidal gold labeling, showed that an EDTA extract determinant recognized by monoclonal antibody 47B4D6, is localized under the outer envelope of serovar icterohaemorrhagiae. Hoe AIAB raised against the EDTA extract was not able to protect hamsters from lethal challenge with virulent homologous leptospires.

Síndrome da meningite asséptica por enterovírus e Leptospira sp em crianças de Salvador, Bahia

Objetivando verificar a freqüência de enterovírus (EV), leptospiras e arbovírus como agentes causais da síndrome da meningite asséptica (SMA), em períodos não-epidêmicos, e comparar os pacientes com e sem diagnóstico etiológico determinado, foram selecionados 112 pacientes de idade entre 3 meses e 15 anos, com suspeita clínica de SMA, referenciados para Hospital Couto Maia, especializado em Doenças Infecciosas e Parasitárias (Salvador, Bahia), Em 44,6% (n=50) a etiologia foi determinada: enterovírus em 37,7% (n=42) dos casos, pelo teste de PCR Amplicor, por cultura do líquor e/ou de fezes; a Leptospira sp. em 7,1% (n=8), pelo método da micro-aglutinação, e nenhum caso de arbovírus foi detectado (inibição da hemaglutinação passiva). Entre os 14 enterovírus dos 22 isolados, foram identificados seis diferentes sorotipos, sendo o Echovirus-4 predominante (27,2%; 6/22) entre outros (Coxsackie B2, B3, B6 e B9; EV 71). Conclui-se que, os enterovírus foram os agentes mais freqüentes, e que a leptospirose deve ser lembrada no diagnóstico diferencial da SMA. Uma vez que as características clínicas e liquóricas dos pacientes dos grupos com e sem determinação do agente etiológico foram semelhantes, pode-se supor que o diagnóstico presuntivo de SMA é de provável etiologia viral ou pela leptospira.

Recommendations for the detection of Leptospira in urine by PCR

In the present study PCR was applied to detect leptospires in human urine. Several approaches for sample processing were evaluated to optimize the detection of leptospires in urine mixed with this bacterium. Furthermore, some changes in the composition of the reaction mix were studied. No amplification was observed in acidic urine, therefore neutralization of the sample immediately after collection is strongly recommended. PBS gave better results than Tris or NaOH as neutralizing reagents. Freezing and thawing of samples before processing yielded negative results. Elimination of epithelial cells, leukocytes and crystals by centrifugation at 3,000 rpm at room temperature increased sensitivity. In addition, both the washing step after collecting leptospires by centrifugation and the inclusion of 0.1% bovine serum albumin in the reaction mix minimized the interference of other inhibitory compounds. These modifications were useful to improve the detection of Leptospira in urine by PCR.

Presença de anticorpos da classe IgM de Leptospira interrogans em animais silvestres do Estado do Tocantins, 2002

Quatrocentos e vinte e sete amostras de soro provenientes de animais silvestres foram testadas frente a 18 sorovariedades de Leptospira interrogans. De 286 amostras de Cebus apella, 46 (16,1%) foram positivas para as sorovariedades pomona, brasiliensis, mini, swajizak, grippothyphosa, sarmin, fluminense, autumnalis, hebdomadis, guaratuba, javanica e icterohaemorhagiae. Das 82 de Alouatta caraya, 2 (2,4%) foram positivas para as sorovariedades mangus e fluminense. Das 31 de Nasua nasua, 4 (12,9%) foram positivas para as sorovariedades fluminense e javanica. Das 10 amostras de Cerdocyon thous, 2 (20%) foram positivas para as sorovariedades fluminense e brasiliensis. Sete de Dasyprocta sp, 6 de Tamandua tetradactila e 5 de Euphractus sexcintus não apresentaram reatividade.

Anticorpos anti-Leptospira em pacientes de Mato Grosso do Sul com suspeita clínica de dengue ou hepatite viral

Considerando a carência de dados clínicos e epidemiológicos da leptospirose humana no Estado de Mato Grosso do Sul e a possibilidade de confusão com outras doenças, soros de pacientes com suspeita clínica inicial de dengue e hepatite viral, porém, sem confirmação laboratorial, foram examinados, através de soroaglutinação microscópica para leptospirose. Os índices de sororreagentes nas amostras com suspeita clínica de dengue e hepatite viral foram, respectivamente, 15,9% e 9%. A maior ocorrência foi para o sorovar hurstbridge (70,4%) e o maior título para o sorovar canicola (1:51. 200). Não se observou associação entre positividade e sexo, idade ou ocupação dos pacientes. O estudo demonstrou que, embora as atuais notificações de casos de leptospirose em Mato Grosso do Sul sejam irrisórias, a prevalência de anticorpos foi elevada nos grupos investigados e, portanto, a hipótese de subnotificação de casos de leptospirose humana em Mato Grosso do Sul e dificuldades no diagnóstico diferencial com dengue e hepatite viral devem ser consideradas.

Identificação da Leptospira interrogans sorovar pomona em camundongos geneticamente selecionados, para a alta e baixa produção de anticorpos, através da técnica de imunoperoxidase em tecido renal e isolamento bacteriano em meio de Fletcher

O presente trabalho teve por objetivo identificar a presença da Leptospira interrogans sorovar pomona em camundongos geneticamente selecionados para a alta e baixa resposta a anticorpos. Todos os animais foram submetidos ao isolamento bacteriano, imunohistoquímica (imunoperoxidase) em cortes de tecido renal e coloração através da hematoxilina-eosina. A técnica de imunoperoxidase apresentou-se pouco mais sensível em relação ao cultivo, entretanto, ambas foram bons parâmetros de identificação do agente. Presença de lesões renais mais intensas ocorreram em períodos em que houve maior número de bactérias isoladas em meio de cultivo. Camundongos da linhagem HIV-A conseguiram eliminar as leptospiras com maior eficiência e rapidez em relação as linhagem LIV-A, entretanto o estudo demonstrou que ambas linhagens da seleção IV-A foram eficientes em controlar o processo infeccioso.

Caracterização de cepas de referência de Leptospira sp utilizando a técnica de pulsed field gel electrophoresis

INTRODUÇÃO: A leptospirose é uma zoonose endêmica, mundialmente distribuída, causada por bactérias do gênero Leptospira. Este gênero compreende espécies patogênicas e saprofíticas, com mais de 200 sorovares distintos, dificultando sua caracterização. A técnica de pulsed field gel electrophoresis tem sido empregada como uma ferramenta para auxiliar nesta caracterização. Os objetivos deste trabalho foram padronizar a técnica de PFGE, determinar os perfis moleculares das cepas de referência utilizadas pelo Laboratório de Referência Nacional para Leptospirose/Centro Colaborador da Organização Mundial de Saúde para Leptospirose e criar um banco de dados com estes perfis. MÉTODOS: Foram analisadas, por PFGE, dezenove cepas utilizando a enzima de restrição NotI. RESULTADOS: Cada cepa apresentou um perfil único que pode ser considerado como uma identidade genômica específica, com exceção dos sorovares Icterohaemorrhagiae e Copenhageni, cujos perfis foram indistinguíveis. CONCLUSÕES: Dessa forma, foi possível a criação de um banco de perfis moleculares que está sendo utilizado no Laboratório para a comparação e identificação de cepas isoladas de quadros clínicos.

Evaluation of pathogenic fungi occurrence in traumatogenic structures of freshwater fish

INTRODUCTION: Fungal infections in human skin, such as sporotrichosis, can occur after fish induced trauma. This work aimed to identify fungi in freshwater fish that are pathogenic to humans. METHODS: Extraction of dental arches from Serrassalmus maculatus (piranha) and Hoplias malabaricus (wolf fish), stings from Pimelodus maculatus (mandis catfish), dorsal fin rays from Plagioscion spp. (corvina) and Tilapia spp., for culture in Mycosel agar. Some cultures were submitted to DNA extraction for molecular identification by sequencing ITS-5.8S rDNA. RESULTS: Cultures identified most yeast as Candida spp., while sequencing also permitted the identification of Phoma spp. and Yarrowia lipolytica. CONCLUSIONS: While the search for S. schenckii was negative, the presence of fungus of the genera Phoma and Candida revealed the pathogenic potential of this infection route. The genus Phoma is involved in certain forms of phaeohyphomycosis, a subcutaneous mycosis caused by dematiaceous fungi, with reports of infections in human organs and systems. Traumatizing structures of some freshwater fish present pathogenic fungi and this may be an important infection route that must be considered in some regions of Brazil, since there are a large number of a fisherman in constant contact with traumatogenic fish.

Sorovares de Leptospira spp. predominantes em exames sorológicos de caninos e humanos no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais

INTRODUÇÃO: O objetivo desta pesquisa foi verificar a ocorrência dos principais sorovares de Leptospira spp. em cães domésticos e humanos, notificados no ano de 2008, bem como os principais fatores de riscos em uma abordagem geográfica relacionados à doença no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais, Brasil. MÉTODOS: Foram examinadas 268 amostras de soro sanguíneo de cães de diferentes bairros pertencentes aos distritos sanitários norte, sul, leste, oeste e central deste município, colhidas durante a campanha de vacinação antirrábica animal, em agosto de 2008. Foi realizada uma abordagem geográfica do município e avaliada a localização de áreas periféricas, aterro sanitário, coleta de lixo, notificação de roedores, casos de leptospirose humana e áreas de alagamento decorrente de enchentes, durante o ano de 2008. A leptospirose foi diagnosticada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), padrão-ouro para diagnóstico da leptospirose animal e humana. RESULTADOS: Os cães reagiram principalmente aos sorovares Autumnalis (34,2%) e Tarassovi (23,7%), sendo este, também detectado em humanos em 2008. A ocorrência destes sorovares pode estar relacionada com uma fonte de infecção comum as duas espécies, ou a hipótese de que o cão possa ser a fonte de infecção para o ser humano. O distrito sanitário leste apresentou um maior número de cães reagentes. CONCLUSÕES: A leptospirose ocorreu nos cães e humanos no município de Uberlândia no ano de 2008. Esta doença muitas vezes negligenciada deve ser prevenida por representar risco à saúde pública e se parecer com outras doenças também endêmicas como a dengue.

In vitro antifungal activity of fatty acid methyl esters of the seeds of Annona cornifolia A.St.-Hil. (Annonaceae) against pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis

INTRODUCTION: Fatty acids are abundant in vegetable oils. They are known to have antibacterial and antifungal properties. METHODS: Antifungal susceptibility was evaluated by broth microdilution assay following CLSI (formerly the NCCLS) guidelines against 16 fungal strains of clinical interest. RESULTS: In this work, fatty acid methyl esters (FAME) was able to inhibit 12 clinical strains of the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis and were also active in the bioautographic assay against Cladosporium sphaerospermum. CONCLUSIONS: FAME was a more potent antifungal than trimethoprim-sulfamethoxazole against P. brasiliensis under the experimental conditions tested.

Non-biting flying insects as carriers of pathogenic bacteria in a Brazilian hospital

IntroductionInsects have been described as mechanical vectors of nosocomial infections.MethodsNon-biting flying insects were collected inside a pediatric ward and neonatal-intensive care unit (ICU) of a Brazilian tertiary hospital.ResultsMost (86.4%) of them were found to carry one or more species of bacteria on their external surfaces. The bacteria isolated were Gram-positive bacilli (68.2%) or cocci (40.9%), and Gram-negative bacilli (18.2%).ConclusionsInsects collected inside a hospital were carrying pathogenic bacteria; therefore, one must consider the possibility they may act as mechanical vectors of infections, in especially for debilitated or immune-compromised patients in the hospital environments where the insects were collected.

Occurrence of potentially pathogenic Vibrio in oysters (Crassostrea gigas) and waters from bivalve mollusk cultivations in the South Bay of Santa Catarina

Introduction This research aimed to identify and quantify potentially pathogenic Vibrio from different cultivations of bivalve shellfish in the State of Santa Catarina, Brazil, and water regions in the South Bay, as well as correlate the incidence of these microorganisms with the physicochemical parameters of marine waters. Methods Between October 2008 and March 2009, 60 oyster and seawater samples were collected from six regions of bivalve mollusk cultivation, and these samples were submitted for Vibrio counts. Results Twenty-nine (48.3%) oyster samples were revealed to be contaminated with one or more Vibrio species. The Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus counts in the samples ranged from < 0.5 log10 Most Probable Number (MPN) g–1 to 2.3 log10 MPN g–1 oyster and from < 0.5 log10 MPN g–1 to 2.1 log10 MPN g–1 oyster, respectively. Of the 60 seawater samples analyzed, 44 (73.3%) showed signs of contamination with one or more vibrio species. The counts of V. parahaemolyticus and V. vulnificus in the samples ranged from < 0.3 log10 MPN·100mL–1 to 1.7 log10MPN·100mL–1 seawater and from < 0.3 log10 MPN·100mL–1 to 2.0 log10 MPN·100mL–1 seawater, respectively. A positive correlation between V. vulnificus counts and the seawater temperature as well as a negative correlation between the V. parahaemolyticus counts and salinity were observed. Conclusions The results suggest the need to implement strategies to prevent vibrio diseases from being transmitted by the consumption of contaminated bivalve shellfish.

Synergistic interactions in mixed-species biofilms of pathogenic bacteria from the respiratory tract

IntroductionMixed-species biofilms are involved in a wide variety of infections. We studied the synergistic interactions during dual-species biofilm formation among isolates of Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, and Stenotrophomonas maltophilia.MethodsIsolates were cultured as single-species and all possible combinations of dual-species biofilms.ResultsThe 61 A. baumannii biofilms increased by 26-fold when cultured with S. maltophilia isolates; 62 A. baumannii biofilms increased by 20-fold when cultured with S. maltophilia isolates; and 31 P. aeruginosa biofilms increased by 102-fold when cultured with S. maltophilia 106.ConclusionsSynergy was observed between two isolates, including those that inherently lacked biofilm formation ability.