Imunofluorescência para neuropeptídeos na mucosa nasal humana: avaliação de técnica para peptídeo intestinal vasoativo (VIP)

Os neuropeptídeos são neurotransmissores relevantes na fisiologia nasal e o conhecimento crescente acerca de seu papel na fisiopatologia de doenças nasais abre novas perspectivas. A sua investigação na mucosa nasal humana baseia-se em grande parte em marcação imunológica, método complexo e sujeito a inúmeros fatores de erro. Com o intuito de viabilizar este tipo de pesquisa em nosso meio, um método de imunofluorescência para peptídeo intestinal vasoativo (VIP) na mucosa nasal humana é proposto e avaliado. FORMA DE ESTUDO: Coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Oito pacientes submetidos a cirurgia funcional do nariz têm um fragmento de mucosa coletado da concha inferior. O tecido foi fixado em solução de Zamboni (paraformaldeído 4% tamponado e ácido pícrico 0,4%), congelado em nitrogênio líquido e armazenado. Cortes de 14 µm foram realizados e submetidos à reação de imunofluorescência para VIP (Península Laboratories). As imagens microscópicas foram documentadas em fotografia convencional. A especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade de execução foram avaliadas. A reprodutibilidade de interpretação de resultados foi avaliada através da comparação de graus de marcação (0 a 4) atribuídos às fotos por seis observadores. RESULTADOS: Os resultados mostraram ser o método suficientemente específico, sensível, além de reprodutível em sua execução. A interpretação de resultados mostrou depender do perfeito esclarecimento do observador no julgamento das imagens de imunofluorescência, mas mostrou uniformidade. CONCLUSÃO: O método proposto foi considerado útil na pesquisa de neuropeptídeos na mucosa nasal humana.

Eritroplasia e leucoeritroplasia oral: análise retrospectiva de 13 casos

Eritroplasia e leucoeritroplasia são lesões orais cancerizáveis com elevado potencial de transformação maligna. OBJETIVOS: Neste estudo retrospectivo foram analisadas as características clínico-patológicas de 13 casos de eritroplasias e leucoeritroplasias orais de pacientes atendidos em um Serviço especializado em Estomatologia e diagnóstico histopatológico. MATERIAL E MÉTODO: Foram revisados os registros de biópsia de pacientes atendidos entre os anos de 1978 e 2006. Foram registradas e características clínicas e histopatológicas das lesões, bem como sexo, idade dos pacientes e associação com fatores de risco. RESULTADOS: As lesões exibiram predileção por pacientes do sexo masculino na proporção de 1:3.3. A média etária dos indivíduos foi de 57 anos e o palato mole foi o sítio envolvido em 77% dos casos. Sintomatologia dolorosa foi relatada por 61,5% dos pacientes e associação com tabagismo e etilismo foi observada em 100% e em 46% dos casos, respectivamente. As lesões analisadas exibiam displasia epitelial e mais de 50% foram diagnosticadas como carcinoma in situ ou carcinoma invasivo. CONCLUSÕES: Apesar de apresentarem baixa prevalência, as eritroplasias homogêneas e as leucoplasias salpicadas exibem alterações epiteliais que vão de displasia epitelial a carcinoma invasivo, o que justifica sua inclusão entre as lesões bucais com maior potencial de malignização.

Anemia ancilostomótica: estudo da fisiopatologia

Foram estudados 17 casos de ancilostomose e determinados alguns parâmetros hematológicos como: dosagem de hemoglobina, do ferro sérico e da transferrina, contagem de hemácias, hematócrito, volume corpuscular médio (VCM) e hemoglobina corpuscular média (HCM). O estudo incluiu também a obtenção de alguns dados eritrocinéticos, como a determinação da velocidade de decaimento do ferro plasmático (T1V2 do 59Fe) e da incorporação do ferro à hemoglobina. O estudo radioisotópico permitiu ainda determinar o volume de sangue e a quantidade de hemoglobina perdida nas fezes, bem como o teor de ferro reabsorvido dessa hemoglobina. Estabeleceram também o grau de infecção através da contagem de ovos e de vermes nas fezes. Os doentes não apresentaram evidente alteração nutricional. A carência de ferro foi o fator comum a todos os casos que exibiram anemia, constituindo a base fisiopatológica da anemia ancilostomótica. O verme fixado à mucosa duodenal suga o sangue do hospedeiro e esta espoliação de sangue a longo prazo provoca a anemia. O volume de sangue perdido é geralmente proporcional ao grau de infecção, mas a quantidade de hemoglobina perdida mostrou ser independente do volume de sangue espoliado. A reabsorção de grande parte do ferro da hemoglobina perdida na luz intestinal concorre para que a anemia se estabeleça mais tardiamente que em outras hemorragias como a vaginal. Os indivíduos anêmicos foram submetidos a transfusões de sangue e com isso apresentaram melhora clínica e laboratorial, imediata mas temporária. A cura clínica foi estabelecida somente após tratamento adequado com vermífugos.

Biópsia per-oral do intestino delgado em 150 casos de diferentes enteroparasitoses

Os autores fazem uma apresentação sumária de alguns tipos de instrumentos utilizados na realização da biópsia duodeno-jejunal através intubação oral, ao mesmo tempo que comentam a importância do método no estudo da patologia intestinal. Em seguida apresentam os resultados de sua experiência empregando 6 diferentes tipos de sondas e mostram os resultados histopatológicos observados em 150 casos de diversas parasitoses intestinais, submetidos a estudo. Entre os resultados chamam a atenção para a presença freqüente da Giardia lamblia, detectada em 16 dos 50 (32%) casos desta parasitose, contra 3 dos 27 (11,1%) de esquistossomose e apenas 2 dos 108 (1,8%) de estrongiloidíase. Relatam também o achado de numerosas leishmânias no córion da mucosa jejunal de um paciente parasitado pela Giardia lamblia, que era portador de Calazar. Apreciam, ainda, o significado de outras alterações, consideradas inespecíficas, sobre as quais aguardam estudos mais completos, para chegar a conclusões mais válidas. Entre estas, merece destaque o achado de atrofia das vilosidades intestinais em 27 pacientes infectados pelo Strongyloides stercoialis tendo que em 5 dêles havia parasitismo exclusivo pelo referido nematóide.

Parâmetros clínicos relevantes para o diagnóstico diferencial entre leishmaniose cutâneo-mucosa e paracoccidioidomicose

Foram estudados retrospectivamente os prontuários de 15 pacientes portadores de leishmaniose e 28 pacientes de paracoccidioidomicose, nas formas de acometimento de mucosa oronasofaringolaringeana, atendidos na Escola Paulista de Medicina de 1986 a 1990. Estes pacientes foram comparados com relação às seguintes variáveis: sexo, idade, tempo de evolução da doença, topografia da lesão e queixas clínicas. Sexo, tempo de evolução da doença, topografia de lesão em septo nasal, palatos, língua e lábios, e queixa clínica com relação a dor em cavidade oral, disfagia/odinofagia e obstrução nasal apresentaram diferença estatisticamente significante em sua ocorrência nos dois grupos de pacientes. Os autores consideram estes achados relevantes na diferenciação clínica entre as duas moléstias.

Current status of herpesvirus identification in the oral cavity of HIV-infected children

INTRODUCTION: Some viruses of the Herpesviridae family are frequently the etiologic agents of oral lesions associated with HIV. The aim of this study was to identify the presence of herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1, HSV-2), Varicella Zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), human cytomegalovirus (HCMV), human herpesvirus type 6, type 7 and type 8 (HHV-6, HHV-7 and HHV-8) in the oral cavity of HIV-infected children/adolescents and verify the association between viral subtypes and clinical factors. METHODS: The cells of oral mucosa were collected from 50 HIV infected children/adolescents, 3-13 years old (mean age 8.66). The majority (66%) of selected were girls, and they were all outpatients at the pediatric AIDS clinic of a public hospital in Rio de Janeiro. Nested-PCR was used to identify the viral types. RESULTS: Absence of immunosuppression was observed in 66% of the children. Highly active antiretroviral therapy (HAART) was used by 72.1% of selected and moderate viral load was observed in 56% of the children/adolescents. Viral types were found in 86% of the children and the subtypes were: HSV-1 (4%), HSV-2 (2%), VZV (4%), EBV (0%), HCMV (24%), HHV6 (18%), HHV-7 (68%), HHV8 (0%). CONCLUSIONS: The use of HAART has helped to reduce oral lesions, especially with herpes virus infections. The health professionals who work with these patients should be aware of such lesions because of their predictive value and the herpes virus can be found circulating in the oral cavity without causing lesions.

Dirofilariasis involving the oral cavity: report of the first case from South America

Oral dirofilariasis is very rare with non-specific clinical manifestations. Here, we report the case of a 65-year-old South American woman with a submucosal nodule on her right buccal mucosa. The nodule was slightly tender and painful. Differential diagnoses included mesenchymal (lipoma or fibrolipoma, solitary fibrous tumor, and neurofibroma) or glandular benign tumors (pleomorphic adenoma) with secondary infections. We performed excisional biopsy. A histopathological examination revealed a dense fibrous capsule and a single female filarial worm showing double uterus appearance, neural plaque, well-developed musculature and intestinal apparatus. Dirofilariasis was diagnosed, and the patient was followed-up for 12 months without recurrence.

Efeito da suplementação nutricional com glicina e glutamina, por via oral, na cicatrização colônica em coelhos

OBJETIVO: Avaliar o efeito de dois aminoácidos, glicina e glutamina, na epitelização da mucosa colônica, tamanho da área de cicatriz, fibroplasia e resistência tênsil da anastomose intestinal, após colectomia parcial e anastomose término-terminal. MÉTODOS: Quarenta e cinco coelhos adultos, com idade entre 24 e 28 semanas, do sexo masculino, com peso inicial médio de 2.362 g, foram distribuídos aleatoriamente, de forma dupla desconhecida, em cinco grupos, de acordo com o tipo de suplemento. Dois animais morreram em cada grupo por causas diversas. Os grupos de coelhos foram assim distribuídos: Grupo 1 - (n = 9) receberam suplementação alimentar com glutamina durante sete dias antes e cinco dias após a operação; Grupo 2 - (n = 9) receberam suplementação alimentar com glicina durante sete dias antes e cinco dias após a operação; Grupo 3 - (n = 9) receberam suplementação alimentar com glutamina durante cinco dias após a operação; Grupo 4 - (n = 9) receberam suplementação alimentar com glicina durante cinco dias após a operação; Grupo 5 - (n = 9) não receberam suplementação alimentar. A resistência da anastomose foi medida por meio de pressão de ruptura por insuflação de ar intraluminar. RESULTADOS: O Grupo 2 foi o único grupo que apresentou valores de ruptura superiores aos do Grupo 5 (p < 0,05). Não houve diferença entre os grupos quanto aos aspectos histológicos estudados. CONCLUSÃO: A suplementação oral com glicina, no período pré e pós-operatório, aumenta a resistência tênsil anastomótica colônica após colectomia parcial em coelhos.

Caracterização fenotípica de leveduras isoladas da mucosa vaginal em mulheres adultas

OBJETIVO: caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A) para vulvovaginite, e determinar os indicadores clínicos que possivelmente levam ao surgimento de sinais e sintomas relacionados ao acometimento da mucosa por essa patologia. MÉTODOS: inicialmente foi aplicado um questionário, com questões abertas e fechadas, sobre dados clínicos epidemiológicos. Logo, ocorreu o diagnóstico micológico com semeadura em meio Chrom Agar Candida, identificação micromorfológica e bioquímica. Métodos específicos para detecção de fatores de virulência, proteinase e fosfolipase foram empregados. A análise estatística das variáveis foi estabelecida utilizando os testes χ2 e χ2 de Pearson. RESULTADOS: Candida albicans foi a espécie mais prevalente (87%, S e 67%, A), seguida de Candida glabrata (4%, S e 17%, A). O número de mulheres que referiram adoção de anticoncepcionais foi mais alto entre as sintomáticas, 77%. Nos dois grupos estudados, em torno de 87% apresentaram ciclos menstruais regulares, 57% das mulheres eram casadas com idade entre 30 a 40 anos. Em relação a práticas sexuais, houve para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Em relação à fosfolipase, apenas Candida albicans produziu este fator de virulência em 37,5%. A proteinase foi detectada em Candida albicans, Candida glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência esteve associado, principalmente, a isolados de pacientes sintomáticas. CONCLUSÕES: a colonização e infecção da mucosa vaginal por levedura é real com diversas espécies de Candida presentes. No entanto, Candida albicans se destaca como espécie prevalente em mucosa vaginal de mulheres adultas. Fica evidente a emergência de espécies de Candida não albicans, algumas com resistência intrínseca aos azólicos, tais como Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, e Candida guillermondii, o que pode ser explicado pelo uso inadequado de medicamentos e tratamento empírico.

IgA production, coliforms analysis and intestinal mucosa morphology of piglets that received probiotics with viable or inactivated cells

Two types of probiotics were used in piglets. One product is a mixed culture of viable Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium e Bifidobacterium bifidum. The second product is composed of inactivated Lactobacillus acidophilus cells. The piglets received two weekly oral doses for 30 days while a control group did not receive probiotics. All piglets were euthanized at the 30th day of life and the mesenteric lymph nodes, the small intestine, and blood samples were collected. The tissue samples were studied by light microscopy and the blood serum was analyzed by ELISA method. The treatment with the probiotic with viable cells produced higher serum levels of IgA (P<0.05) and more IgA expressing cells were found in the mesenteric lymph nodes than observed in the inactivated cells treatment or control groups (P<0.05). Also, intestinal villi were longer, crypts were deeper (P<0.05) and fecal coliform count was lower than found in the inactivated product (P<0.05). These results suggest that viable probiotics are more efficient than inactivated probiotics to induce immunostimulation and intestinal modifications in piglets, thus improving their health and development.

Morphological changes of the jejunal mucosa in protracted diarrhea and their correlation with disease duration, weight loss and serum albumin levels

The pathogenesis of protracted diarrhea is multifactorial. In developing countries, intestinal infectious processes seem to play an important role in triggering the syndrome. Thirty-four children aged 1 to 14 months, mean 6.5 months, with protracted diarrhea were studied clinically and in terms of small intestinal mucosal morphology. Mild, moderate or severe hypotrophy of the jejunal mucosa was detected in 82% of cases, and mucosal atrophy was observed in 12%. The intensity of the morphological changes of the jejunal mucosa correlated negatively with serum albumin levels. No correlation was detected between mucosal grading and duration of diarrhea or between mucosal grading and weight reported as percentile. After nutritional support was instituted, serial jejunal biopsies were obtained from 12 patients: five patients submitted to parenteral nutrition for 7 to 38 days, mean 17 days, and 7 patients receiving a hypoallergenic oral diet (semi-elemental formula, 3; chicken formula, 3; human milk, 1). In seven cases (58%) a progressive increase in villus height and a decrease in the number of inflammatory cells were noted. Recovery of the morphologic pattern was accompanied by clinical improvement in all patients

Aging and immunoglobulin isotype patterns in oral tolerance

In the present review we address oral tolerance as an important biological phenomenon and discuss how it is affected by aging. Other factors such as frequency of feeding and previous digestion of the antigen also seem to influence the establishment of oral tolerance. We also analyze immunoglobulin isotypes of specific antibodies formed by tolerant and immunized animals of different ages submitted to different conditions of oral antigen administration. Isotypic patterns were studied as a parameter for assessing the pathways of B and T cell interactions leading to antibody production

Coupling of palmitate to ovalbumin inhibits the induction of oral tolerance

Oral tolerance is a phenomenon that may occur in animals exposed to protein antigens for the first time by the oral route. They become unable to produce immune responses at the levels normally observed when they are immunized parenterally with antigen in the presence of adjuvants. Lipids have been used as adjuvants for both parenteral and oral immunization. In the present study we coupled ovalbumin with palmitate residues by incubating the protein with the N-hydroxysuccinimide palmitate ester and tested the preparation for its ability to induce oral tolerance. This was performed by giving 20 mg of antigen to mice by the oral route 7 days prior to parenteral immunization in the presence of Al(OH)3. Mice were bled one week after receiving a booster that was given 2 weeks after primary immunization. Specific antibodies were detected by ELISA. Despite the fact that the conjugates are as immunogenic as the unmodified protein when parenterally injected in mice, they failed to induce oral tolerance. This discrepancy could be explained by differences in the intestinal absorption of the two forms of the antigen. In fact, when compared to the non-conjugated ovalbumin, a fast and high absorption of the lipid-conjugated form of ovalbumin was observed by "sandwich" ELISA.

Ethanol-induced colitis prevents oral tolerance induction in mice

The gut mucosa is a major site of contact with antigens from food and microbiota. Usually, these daily contacts with natural antigens do not result in inflammatory reactions; instead they result in a state of systemic hyporesponsiveness named oral tolerance. Inflammatory bowel diseases (IBD) are associated with the breakdown of the immunoregulatory mechanisms that maintain oral tolerance. Several animal models of IBD/colitis are available. In mice, these include targeted disruptions of the genes encoding cytokines, T cell subsets or signaling proteins. Colitis can also be induced by intrarectal administration of chemical substances such as 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid in 50% ethanol. We report here a novel model of colitis induced by intrarectal administration of 50% ethanol alone. Ethanol-treated mice develop an inflammatory reaction in the colon characterized by an intense inflammatory infiltrate in the mucosa and submucosa of the large intestine. They also present up-regulation of both interferon gamma (IFN-gamma) and interleukin-4 (IL-4) production by cecal lymph node and splenic cells. These results suggest a mixed type of inflammation as the substrate of the colitis. Interestingly, cells from mesenteric lymph nodes of ethanol-treated mice present an increase in IFN-gamma production and a decrease in IL-4 production indicating that the cytokine balance is altered throughout the gut mucosa. Moreover, induction of oral tolerance to ovalbumin is abolished in these animals, strongly suggesting that ethanol-induced colitis interferes with immunoregulatory mechanisms in the intestinal mucosa. This novel model of colitis resembles human IBD. It is easy to reproduce and may help us to understand the mechanisms involved in IBD pathogenesis.

Candidíase oral e leucoplasia pilosa como marcadores de progressão da infecção pelo HIV em pacientes brasileiros

Candidíase oral (CO) e leucoplasia pilosa (LP) são importantes indicadores da progressão da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) para o quadro de AIDS, principalmente em locais onde exames específicos são inacessíveis. OBJETO: Relacionar CO e LP ao número de células CD4+ e à carga viral (CV) em pacientes brasileiros HIV-positivos, confirmando-as como marcadores clínicos confiáveis de progressão da doença. FORMA DE ESTUDO: Coorte longitudinal. CASUÍSTICA E MÉTODO: Avaliamos prospectivamente 124 pacientes HIV-positivos, isentos de terapia antiretroviral. Todos foram submetidos a exame ORL, dosagem de células CD4+ e CV, sendo divididos em dois grupos: P e A, de acordo com a presença ou ausência de CO e LP. Depois de seis meses, os pacientes do grupo A foram subdivididos nos subgrupos P6 (presença de lesões) e A6. Dosamos novamente CD4+ e carga viral. Os resultados foram analisados estatisticamente. RESULTADOS: No grupo P (43 pacientes, 28 CO e 15 LP) a contagem de células CD4+ foi menor e a carga viral maior em relação ao grupo A (p<0,001). Após 6 meses, 15 dos 81 pacientes do grupo A foram excluídos por iniciarem terapia antiretroviral. Dezoito (11 CO e 7 LP), passaram a compor o grupo P6. Os demais, sem lesões, compuseram o grupo A6. A contagem de células CD4+ no grupo P6 foi menor (p< 0,001) que no grupo A6. O inverso ocorreu com a carga viral. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: CO e LP indicam contagem de células CD4+ abaixo de 300 cels/mm³ e carga viral elevada, sendo marcadores clínicos confiáveis da progressão da doença.