Evaluation of the rabbit as a model for chagas' disease: I. Parasitological studies

In order to investigate the value of the rabbit as an experimental model for Chagas' disease, 72 animals have been inoculated by intraperitoneal and conjunctival route with bloodstream forms, vector-derived metacyclic trypomastigotes and tissue culture trypomastigotes of Trypanosoma cruzi strains Y, CL and Ernane. In 95.6% of the animals trypomastigotes had been detected at the early stages of infection by fresh blood examination. The course of parasitemia at the acute phase was strongly influenced by the parasite strain and route of inoculation. At the chronic phase parasites had been recovered by xenodiagnosis and/or hemoculture in 40% of the examined animals. The xenodiagnosis studies have shown selective interactions between the T. cruzi strains and the four species of vectors used, inducing significant variability in the results. The data herein present are consistent with the parasitological requirements established for a suitable model for chronic Chagas' disease.

Experimental Chagas' disease in dogs

This paper describes the development of experimental Chagas' disease in 64 out-bred young dogs. Twenty-nine animals were inoculated with the Be-62 and 35 with Be-78 Trypanosoma cruzi strains. Twenty-six were infected with blood trypomastigotes by different inoculation routes and 38 with metacyclic trypomastigotes from the vector via the conjunctival route. Twenty of the 26 dogs infected with blood trypomastigotes were autopsied during the acute phase. Eleven died spontaneously and nine were sacrificed. Six remained alive until they died suddenly (two) or were autopsied (four). Twelve of the 38 dogs infected with metacyclic trypomastigotes evolved naturally to the chronic phase and remained alive for 24-48 months. The parasitemia, clinical aspects and serology (IgM and IgG) as well as electrocardiogram, hemogram and heart anatomo-histopathologic patterns of acute and chronic cardiac forms of Chagas' disease as seen in human infections, were reproduced. The most important finding is the reproductibility of diffuse fibrosing chronic chagasic cardiopathy in all dogs infected with Be-78 T. cruzi strain autopsied between the 90th and 864th days of infection. Thus, the dog can be considered as a suitable experimental model to study Chagas' disease according to the requisites of the World Health Organization (1984). Futhermore the animal is easily obtained and easy to handle and maintain in experimental laboratory conditions.

Isolation and identification of Adenovirus in hospitalized children, under five years, with acute respiratory disease, in Havana, Cuba

Nine Adenovirus (Ad) strains isolated in Cuba, from 128 nasopharingeal swab specimens of children below five years old, with acute respiratory diseases, during 1996 and 1997, were studied by restriction enzyme analysis of genomic DNA with two endonucleases BamH I and Sma I. All different fragment patterns were compared with the respective prototypes. The identified adenoviruses were Ad 1 (n=4), Ad 2 (n=1) and Ad 6 (n=4). Males were more frequently infected than females. The analysis of the occurrence of these Adenovirus strains of subgenus C revealed that Ad 1 and Ad 6 were the predominant serotypes in 1996 and in 1997, respectively.

First record of human trichinosis in Chile associated with consumption of wild boar (Sus scrofa)

The first South American case of human trichinosis, resulting from the consumption of roast wild boar (Sus scrofa) is reported in Chile. The patient presented fever, diarrhea, myalgias, facial edema, sub-conjunctival reddening, photophobia, eosinophilia, and elevated glutamic oxalacetic transaminase. The diagnosis was confirmed by two immunoenzymatic tests (ELISA) using somatic and excretion-secretion antigens.

Bacterial and fungal colonization of burn wounds

A prospective study of fungal and bacterial flora of burn wounds was carried out from February 2004 to February 2005 at the Burns Unit of Hospital Regional da Asa Norte, Brasília, Brazil. During the period of the study, 203 patients were treated at the Burns Unit. Wound swab cultures were assessed at weekly intervals for four weeks. Three hundred and fifty four sampling procedures (surface swabs) were performed from the burn wounds. The study revealed that bacterial colonization reached 86.6% within the first week. Although the gram-negative organisms, as a group, were more predominant, Staphylococcus aureus (28.4%) was the most prevalent organism in the first week. It was however surpassed by Pseudomonas aeruginosa form third week onwards. For S. aureus and P. aeruginosa vancomycin and polymyxin were found to be the most effective drugs. Most of the isolates showed high level resistance to antimicrobial agents. Fungi were found to colonize the burn wound late during the second week postburn, with a peak incidence during the third and fourth weeks. Species identification of fungi revealed that Candida tropicalis was the most predominant, followed by Candida parapsilosis. It is crucial for every burn institution to determine the specific pattern of burn wound microbial colonization, the time-related changes in the dominant flora, and the antimicrobial sensitivity profiles. This would enable early treatment of imminent septic episodes with proper empirical systemic antibiotics, without waiting for culture results, thus improving the overall infection-related morbidity and mortality.

Techniques for the detection of pathogenic Cryptococcus species in wood decay substrata and the evaluation of viability in stored samples

In this study, we evaluated several techniques for the detection of the yeast form of Cryptococcus in decaying wood and measured the viability of these fungi in environmental samples stored in the laboratory. Samples were collected from a tree known to be positive for Cryptococcus and were each inoculated on 10 Niger seed agar (NSA) plates. The conventional technique (CT) yielded a greater number of positive samples and indicated a higher fungal density [in colony forming units per gram of wood (CFU.g-1)] compared to the humid swab technique (ST). However, the difference in positive and false negative results between the CT-ST was not significant. The threshold of detection for the CT was 0.05.10³ CFU.g-1, while the threshold for the ST was greater than 0.1.10³ CFU-1. No colonies were recovered using the dry swab technique. We also determined the viability of Cryptococcus in wood samples stored for 45 days at 25ºC using the CT and ST and found that samples not only continued to yield a positive response, but also exhibited an increase in CFU.g-1, suggesting that Cryptococcus is able to grow in stored environmental samples. The ST.1, in which samples collected with swabs were immediately plated on NSA medium, was more efficient and less laborious than either the CT or ST and required approximately 10 min to perform; however, additional studies are needed to validate this technique.

Comparison of the infectivity of Trypanosoma cruzi insect-derived metacyclic trypomastigotes after mucosal and cutaneous contaminative challenges

Trypanosoma cruzi infects humans when infected triatomine vector excreta contaminate breaks in skin or mucosal surfaces. T. cruzi insect-derived metacyclic trypomastigotes (IMT) invade through gastric mucosa after oral challenges without any visible inflammatory changes, while cutaneous and conjunctival infections result in obvious local physical signs. In this study we compared the infectivity of T. cruzi IMT in mice after cutaneous and oral contaminative challenges simulating natural infections. The 50% infective dose (ID50) for oral challenge was 100 fold lower than the ID50for cutaneous challenge, indicating that oral mucosal transmission is more efficient than cutaneous transmission.

Acute dacryocystitis: another clinical manifestation of sporotrichosis

Sporotrichosis associated with exposure to domestic cats is hyperendemic in Rio de Janeiro, Brazil. A review of the clinical records at our institute revealed four patients with clinical signs of dacryocystitis and a positive conjunctival culture for Sporothrix who were diagnosed with Sporothrix dacryocystitis. Three patients were children (< 13 years of age) and one patient was an adult. Two patients reported contact with a cat that had sporotrichosis. Dacryocystitis was associated with nodular, ulcerated lesions on the face of one patient and with granulomatous conjunctivitis in two patients; however, this condition manifested as an isolated disease in another patient. All of the patients were cured of the fungal infections, but three patients had chronic dacryocystitis and one patient developed a cutaneous fistula. Sporotrichosis is usually a benign disease, but may cause severe complications when the eye and the adnexa are affected. Physicians, especially ophthalmologists in endemic areas, should be aware of the ophthalmological manifestations and complications of sporotrichosis.

Determinação simultânea de resíduos de sulfametoxazol e trimetoprima em superfícies de equipamentos de produção

A cleaning validation method was developed and validated, based on swabbing sampling and simultaneous chromatographic determination of sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprim (TMP) residues. The method presented limits of detection of 0.06 mg mL-1 for SMX and 0.09 mg mL-1 for TMP. It was considered selective, precise, accurate and robust according to the guidelines from ANVISA, the Brazilian regulatory agency, and International Conference on Harmonization. Mean swab recovery factors of 98.5% for SMX and 97.7% for TMP were obtained for spiked stainless steel plates. The method was successfully applied to the assay of actual swab samples collected from eleven points on an equipment surface.

Freqüência de infecção pelo Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum em mulheres inférteis e relação com repercussões clínicas

OBJETIVOS: determinar a freqüência de infecção pelo Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum e relacioná-la a variáveis clínicas de mulheres inférteis. MÉTODOS: estudo transversal com 322 pacientes inférteis submetidas à coleta de swab endocervical para pesquisa de Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum, de outubro de 2002 a maio de 2004. Todas as pacientes foram submetidas a protocolo básico de investigação clínica e laboratorial da infertilidade. Como controle, utilizou-se série histórica de 51 mulheres não gestantes, previamente pesquisadas quanto aos agentes infecciosos estudados. RESULTADOS: a freqüência de infecção pelo Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum foi de 4,9% nas pacientes inférteis e 13,8% no grupo controle. Entre as pacientes inférteis observou-se relação entre a presença dos dois patógenos e alterações no resultado da histerossalpingografia (OR: 3,20; IC 95%: 1,05-9,73), presença de dispareunia (OR: 10,72; IC 95%: 3,21-35,77) e corrimento vaginal (OR: 8,5; IC 95%: 2,83-26,02), além de cultura endocervical positiva para Escherichia coli (OR: 16,09; IC 95%: 4,95-52,25). CONCLUSÃO: a taxa de infecção pelo Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum é baixa em pacientes inférteis e está associada a seqüelas reprodutivas tardias.

Influência da freqüência de coitos vaginais e da prática de duchas higiênicas sobre o equilíbrio da microbiota vaginal

OBJETIVO: verificar se alta freqüência de coitos vaginais e o uso de duchas higiênicas interferem com a microbiota vaginal. MÉTODOS: noventa e sete mulheres atendidas em centro de saúde localizado em zona de prostituição na cidade de Campinas foram avaliadas em estudo prospectivo de corte transversal. A anamnese determinou as freqüências de coitos vaginais e do uso de duchas higiênicas nas 44 profissionais do sexo e nas 53 não-profissionais do sexo estudadas. O conteúdo vaginal foi coletado com swab estéril de Dacron, da parede vaginal direita, e disposto em duas lâminas de vidro. A microbiota vaginal foi estudada em microscopia óptica com lente de imersão em esfregaço corado pela técnica de Gram. Os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher. As mulheres profissionais e não profissionais do sexo apresentaram, respectivamente, média de idade de 24,9 (± 6,4) e 31,5 (± 9,7) anos, hábito de fumar em 52,2 e 24,5%, prática do uso de lubrificantes vaginais em 56,8 e 0% e prática de uso de condom em 100 e 41,5% dos casos respectivamente. RESULTADOS: apenas 1,8% das mulheres do grupo controle tinham sete ou mais relações sexuais por semana, em evidente contraste com as profissionais do sexo (97,7%). Não houve diferenças significativas quanto à raça, escolaridade e paridade. A vaginose bacteriana e a flora vaginal anormal foram mais observadas nas profissionais do sexo do que no grupo controle (p=0,02 e 0,001) e associou-se à alta freqüência (sete ou mais vezes) de coitos vaginais semanais (p=0,04 e 0,001). O diagnóstico de vaginose citolítica foi mais freqüente nas mulheres não-profissionais do sexo (p=0,04) e com menor freqüência de relações sexuais (p=0,04). O uso de duchas higiênicas foi mais comum nas profissionais do sexo (p=0,002). Entretanto, esta prática não esteve associada aos distúrbios da microbiota vaginal e nem à presença de vulvovagintes. CONCLUSÕES: profissionais do sexo com sete ou mais relações sexuais semanais apresentaram maior freqüência de vaginose bacteriana e alterações da flora vaginal. O hábito de duchas vaginais não interferiu com o ecossistema vaginal das mulheres estudadas.

Streptococcus agalactiae em gestantes: prevalência de colonização e avaliação da suscetibilidade aos antimicrobianos

OBJETIVOS: verificar a ocorrência de colonização por Streptococcus agalactiae em gestantes e avaliar a suscetibilidade das amostras isoladas aos antimicrobianos. MÉTODOS: foram avaliadas 167 grávidas entre a 32ª e a 41ª semana de gestação, independente da presença ou não de fatores de risco, atendidas no ambulatório de pré-natal entre fevereiro de 2003 e fevereiro de 2004. O material vaginal/anal, colhido com um único swab, foi inoculado em caldo Todd-Hewitt acrescido de ácido nalidíxico (15 µg/mL) e gentamicina (8 µg/mL), com posterior subcultura no meio de ágar sangue. A identificação foi feita por meio da avaliação da morfologia e tipo de hemólise das colônias no meio de ágar sangue, teste da catalase, teste de cAMP e testes sorológicos. A avaliação da suscetibilidade aos antimicrobianos foi realizada pelos testes de difusão e de diluição em ágar. A análise estatística foi realizada por meio do teste de chi2; valores de p<0,05 foram considerados significativos. RESULTADOS: a freqüência de colonização foi de 19,2%, sem diferenças significativas com relação à idade, número de gestações, ocorrência de abortos e presença ou ausência de diabete melito (p>0,05). Todas as 32 amostras isoladas foram sensíveis a penicilina, cefotaxima, ofloxacina, cloranfenicol, vancomicina e meropenem. A resistência a eritromicina e clindamicina foi detectada em 9,4 e 6,2% das amostras, respectivamente. CONCLUSÕES: a incidência relativamente elevada (19,2%) de colonização por S. agalactiae entre as gestantes avaliadas e o isolamento de amostras resistentes, especialmente aos antimicrobianos recomendados nos casos de alergia à penicilina, enfatizam a importância de detectar esta colonização no final da gravidez, associada à avaliação da suscetibilidade aos antimicrobianos, para uma prevenção eficaz da infecção neonatal.

Influência do conteúdo vaginal de gestantes sobre a recuperação do estreptococo do grupo B nos meios de transporte Stuart e Amies

OBJETIVO: avaliar a influência do meio vaginal de gestantes na sobrevivência do estreptococo do grupo B (EGB) mantido por 8, 24 e 48 horas nos meios de transporte Amies e Stuart. MÉTODOS: foram coletados três swabs vaginais de 30 gestantes atendidas no Ambulatório de Pré-Natal do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM), Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). O primeiro swab foi mergulhado diretamente no meio seletivo de Todd-Hewitt; o segundo foi utilizado para a realização da bacterioscopia corada pelo Gram e o terceiro foi mergulhado em 2 mL de solução salina à qual foram acrescentados 200 µL de uma suspensão contendo EGB na concentração de 1-2 x 10(8) unidades formadoras de colônia. Desta última suspensão de EGB, foram colhidos três swabs do meio Amies e três do meio Stuart, os quais foram mantidos em temperatura ambiente por 8, 24 e 48 horas, para posterior semeadura em ágar sangue. A leitura do crescimento das placas foi realizada após 24 horas de incubação e classificada semiquantitativamente (0-3 cruzes) de acordo com o número de colônias observadas. A análise estatística foi efetuada com o teste exato de Fisher. RESULTADOS: a recuperação do EGB nos meios de transporte Amies e Stuart após 48 horas de estocagem foi de 97 e 87%, respectivamente. Em um dos quatro casos em que não houve a recuperação do EGB após 48 horas de armazenamento, o pH vaginal foi superior a 4,5 e em dois casos havia a presença de vaginose citolítica. CONCLUSÕES: ambos os meios de transporte mostraram-se adequados para a recuperação do EGB em gestantes até 48 horas após a coleta. As características do meio vaginal não influenciaram a recuperação do EGB no presente estudo.

Presença de Candida nas mucosas vaginal e bucal e sua relação com IgA salivar

OBJETIVO: correlacionar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal e vaginal de mulheres com e sem candidíase vulvovaginal (CVV) com os níveis de IgA secretora (IgAs) presentes na saliva. MÉTODOS: cinqüenta e uma mulheres foram incluídas; 13 apresentaram CVV e 38 formaram o Grupo Controle. De cada paciente, foram coletados 2,0 mL de saliva sem estimulação e secreção vaginal com o auxílio de swab, que foi imerso a seguir em 2,0 mL de solução fisiológica. As amostras foram semeadas em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol para isolamento e contagem de colônias, e os isolados foram identificadas fenotipicamente. Na saliva de ambos os grupos foi quantificada IgA pela técnica ELISA. RESULTADOS: nas 13 pacientes com diagnóstico clínico e micológico de CVV, a média de unidades formadoras de colônias de Candida por mililitro de secreção vaginal (ufc/mL) foi de 52.723 e 23,8% dos pacientes apresentaram colonização na mucosa bucal com menor quantidade de ufc/mL (6.030). Os níveis de IgAs na saliva foram mais baixos no grupo com CVV (média de densidade: 0,3) quando comparados aos níveis de IgA do Grupo Controle (média de DO: 0,6). Onze pacientes (37%) do Grupo Controle apresentaram colonização por Candida na cavidade bucal, com média de ufc/mL mais baixa quando comparada ao grupo com CVV. O Grupo Controle também apresentou menor quantidade de ufc/mL (1.973) na cavidade vaginal quando comparado com o Grupo CVV (52.942). CONCLUSÕES: os resultados demonstraram que os pacientes com diagnóstico clínico de candidíase vulvovaginal apresentaram maior quantidade de Candida, tanto na cavidade vaginal quanto na bucal, e apresentaram menores níveis de IgA anti-Candida na saliva.

Colonização materna e neonatal por estreptococo do grupo B em situações de ruptura pré-termo de membranas e no trabalho de parto prematuro

OBJETIVO: identificar a prevalência e os fatores de risco de colonização materna por estreptococo do grupo B (EGB) em gestantes com trabalho de parto prematuro (TPP) e/ou ruptura prematura pré-termo de membranas (RPM). MÉTODOS: foram colhidos dois swabs anais e dois swabs vaginais de 203 gestantes com diagnóstico de TPP ou RPM entre 22 e 36 semanas completas de gestação atendidas no serviço em um período de um ano. Foram excluídas as gestantes que deram entrada com parto iminente. Um swab de cada local foi colocado em meio de transporte, sendo posteriormente enviados para cultura em placas de ágar-sangue, os outros dois foram incubados por 24 horas em meio de Todd-Hewitt para posterior semeadura em placas de ágar-sangue. Foram analisados fatores de risco com o uso do teste do qui-quadrado, t de Student (p ajustado a 0,05 e intervalo de confiança 95%) e de regressão logística. Foram analisadas as seguintes variáveis: idade, raça, paridade e escolaridade maternas; resultados das culturas por local de coleta e tipo de cultura; diagnóstico de admissão; idade gestacional de admissão; bacteriúria assintomática; idade gestacional no parto; tipo de parto; taxa de colonização neonatal por EGB e resultado neonatal imediato. RESULTADOS: a prevalência de colonização materna por EGB foi de 27,6% (56 gestantes). As taxas de colonização segundo as complicações da gestação foram 30% para RPM, 25,2% para TPP e 17,8% para TPP + RPM. As variáveis "raça branca", "baixo nível de escolaridade" e "bacteriúria" foram associadas a maiores taxas de colonização na análise univariada. A presença de infecção urinária foi a única variável significativamente associada à colonização materna na análise multivariada. A taxa de detecção do estreptococo do grupo B foi significativamente maior com o uso do meio seletivo e com a associação de coleta de culturas anais e vaginais. A taxa de colonização neonatal foi de 3,1%. Ocorreram dois casos de sepse precoce por EGB nesta amostra, com prevalência de 10,8 casos por mil nascidos vivos e mortalidade de 50%. CONCLUSÕES: a amostra avaliada apresenta altas taxas de colonização materna por Streptococcus agalactiae. São necessários o uso de meio de cultura seletivo e a associação de culturas ano-retais e vaginais para aumentar a taxa de detecção do EGB. A incidência de sepse neonatal precoce foi elevada nesta população.