High prevalence and association of HIV-1 non-B subtype with specific sexual transmission risk among antiretroviral naïve patients in Porto Alegre, RS, Brazil

In South Brazil the circulation of two HIV-1 subtypes with different characteristics represents an important scenario for the study of the impact of HIV-1 diversity on the evolution of the HIV-1 epidemic and AIDS disease. HIV-1 B, the predominant variant in industrialized countries and HIV-1 C, the most prevalent subtype in areas with rapid epidemic growth, are implicated in most infections. We evaluated blood samples from 128 antiretroviral (ARV) naïve patients recruited at entry to the largest HIV outpatient service in Porto Alegre. Based on partial pol region sequencing, HIV-1 C was observed in 29%, HIV-1 B in 22.6% and, the recently identified CRF31_BC, in 23.4% of 128 volunteers. Other variants were HIV-1 F in 10% and other mosaics in 5.5%. In order to evaluate the association of socio-behavioral characteristics and HIV-1 subtypes, interviews and laboratory evaluation were performed at entry. Our data suggest an established epidemic of the three major variants, without any evidence of partitioning in either of the subgroups analyzed. However, anal sex practices were associated with subtype B, which could indicate a greater transmissibility of non-B variants by vaginal intercourse. This study provides baseline information for epidemiologic surveillance of the changes of the molecular characteristics of HIV-1 epidemics in this region.

Susceptibility of peritoneal macrophage from different species of neotropical primates to Ex vivo Leishmania (L.) infantum chagasi-infection

This study examined the susceptibility of peritoneal macrophage (PM) from the Neotropical primates: Callithrix jacchus, Callithrix penicillata, Saimiri sciureus, Aotus azarae infulatus and Callimico goeldii to ex vivo Leishmania (L.) infantum chagasi-infection, the etiological agent of American visceral leishmaniasis (AVL), as a screening assay for evaluating the potential of these non-human primates as experimental models for studying AVL. The PM-susceptibility to infection was accessed by the PM-infection index (PMI) at 24, 72 h and by the mean of these rates (FPMI), as well as by the TNF-α, IL-12 (Capture ELISA) and Nitric oxide (NO) responses (Griess method). At 24h, the PMI of A. azarae infulatus (128) was higher than those of C. penicillata (83), C. goeldii (78), S. sciureus (77) and C. jacchus (55). At 72h, there was a significant PMI decrease in four monkeys: A. azarae infulatus (128/37), C. penicillata (83/38), S. sciureus (77/38) and C. jacchus (55/12), with exception of C. goeldii (78/54). The FPMI of A. azarae infulatus (82.5) and C. goeldii (66) were higher than C. jacchus (33.5), but not higher than those of C. penicillata (60.5) and S. sciureus (57.5). The TNF-a response was more regular in those four primates which decreased their PMI at 24/72 h: C. jacchus (145/122 pg/mL), C. penicillata (154/130 pg/mL), S. sciureus (164/104 pg/mL) and A. azarae infulatus (154/104 pg/mL), with exception of C. goeldii (38/83 pg/mL). The IL-12 response was mainly prominent in A. infulatus and C. goeldii which presented the highest FPMI and, the NO response was higher in C. goeldii, mainly at 72 h. These findings strongly suggest that these New World primates have developed a resistant innate immune response mechanism capable of controlling the macrophage intracellular growth of L. (L.) i. chagasi-infection, which do not encourage their use as animal model for studying AVL.

APPLICABILITY OF kDNA-PCR FOR ROUTINE DIAGNOSIS OF AMERICAN TEGUMENTARY LEISHMANIASIS IN A TERTIARY REFERENCE HOSPITAL

SUMMARYThis study evaluated the applicability of kDNA-PCR as a prospective routine diagnosis method for American tegumentary leishmaniasis (ATL) in patients from the Instituto de Infectologia Emílio Ribas (IIER), a reference center for infectious diseases in São Paulo - SP, Brazil. The kDNA-PCR method detected Leishmania DNA in 87.5% (112/128) of the clinically suspected ATL patients, while the traditional methods demonstrated the following percentages of positivity: 62.8% (49/78) for the Montenegro skin test, 61.8% (47/76) for direct investigation, and 19.3% (22/114) for in vitro culture. The molecular method was able to confirm the disease in samples considered negative or inconclusive by traditional laboratory methods, contributing to the final clinical diagnosis and therapy of ATL in this hospital. Thus, we strongly recommend the inclusion of kDNA-PCR amplification as an alternative diagnostic method for ATL, suggesting a new algorithm routine to be followed to help the diagnosis and treatment of ATL in IIER.

USE OF MUELLER-HINTON BROTH AND AGAR IN THE GERM TUBE TEST

Candida albicans is often isolated from clinical samples, thus its presumptive differentiation from other species of the same genus can be based on its ability to form the germ tube in human serum. Nevertheless, there are two other species that share this characteristic: C. dubliniensis and C. africana. The aim of this study was to compare four different substrates to perform the germ tube (GT) test. The Candida spp. isolates were identified using a manual system (135 C. albicans, 24 C. tropicalis and one C. dubliniensis). The germ tube test was performed with fresh, previously frozen serum and Mueller-Hinton (MH) broth and agar. GT was observed in 96% (130/136) of the isolates through the fresh serum technique, 94% (128/136) through previously frozen serum, 92% (125/136) in MH agar, and 90% (122/136) in MH broth. The sensitivity of each test was higher than 90%, with 100% specificity. Both the MH agar and broth were able to identify the true positives, and false positives were not found. However, some C. albicans isolates were not identified. MH agar and broth may be used in laboratory for the rapid presumptive identification of C. albicans, as an alternative method for germ tube test.

Níveis de sensibilidade de enterobactérias, em particular Salmonella typhi, a rifamicina S.V.

Em face à predominante eliminação biliar da rifamicina S.V. atingindo concentrações muitas vêzes superiores aos níveis séricos obtidos com as doses terapêuticas, e pelo possível interêsse dessa verificação para o tratamento dos portadores biliares crônicos de Salmonella typhi determinou-se a concentração mínima inibitória de 165 estirpes de enterobactérias, incluindo 77 amostras de S. typhi. Foi verificado que a maioria das cepas de Escherichia coli, Shigella e Proteus mirabilis correspondiam a uma concentração inibitória mínima entre 33 a 65 μg/ml. Entre 65 e 128 μg/ml foram determinadas as concetrações inibitórias mínimas da maioria das outras espécies de Proteus, de Providencia e de Klebsiella. Para Salmonella e Enterobacter o limite mínino de sensibilidade foi, em regra, igual ou superior a 128 μg/ml. Diferenças mais acentuadas de comportamento entre as enterobactérias foram observadas quanto à ação bactericida da rifamicidas S.V. De uma maneira geral, para E. coli e Shigella, as concentrações inibitórias mínimas já referidas. Para as espécies de Proteus e Providencia houve variação maior de comportamento, mas tendência a que o efeito bactericidas fôsse encontrado em concentrações que correspondiam a 4 vêzes as bacteriostáticas para as mesmas espécies. Finalmente, de modo pouco feliz para os propósitos visados, em Salmonella, com a inclusão de S. typhi, não foi atingido um efeito bactericida, com as mais altas concentrações usadas as quais corresponderam em média a 6 vêzes as concentrações bacteriostáticas para esse gênero.

Contaminação por enteroparasitas em hortaliças comercializadas nas cidades de Niterói e Rio de Janeiro, Brasil

O objetivo deste estudo foi avaliar a contaminação por enteroparasitas em hortaliças consumidas cruas comercializadas nas cidades de Niterói e Rio de Janeiro. Foram estudadas 128 amostras de hortaliças3/4alface (Lactuca sativa) e agrião (Nasturtium officinale)3/4provenientes do comércio (supermercados, feiras-livre e quitandas) e de restaurantes tipo self-services. Apenas 6,2% das amostras apresentaram presença de estruturas parasitárias com morfologia semelhante as de espécies parasitas de animais. Foi encontrado presença de contaminantes como ácaros, ovos de ácaros, insetos, larvas de nematóides e protozoários ciliados em quase todas as amostras (96,1%), inclusive nas de restaurantes. Este alto percentual sugere a presença de risco de infecção, pois associado a esses agentes poderiam existir estruturas parasitárias infectantes para o homem.

Avaliação do teste rápido utilizando o antígeno recombinante K39 no diagnóstico da leishmaniose visceral no Brasil

Este estudo avaliou o desempenho teste rápido de imunocromatografia utilizando o antígeno rK39 (Kalazar Detected® InBios International, Seattle, WA, USA) e um teste de ELISA utilizando antígeno total, para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) em 128 pacientes com diagnóstico parasitológico da doença. Como controle foram incluídos soros de 10 indivíduos saudáveis e de 50 pacientes portadores de outras infecções como: malária (10), hanseníase (9), doença de Chagas (10), tuberculose (10) e leishmaniose cutânea (11). A sensibilidade do teste rápido com antígeno rK39 e ELISA foram 90% e 89% respectivamente, enquanto a especificidade foi 100% e 98% respectivamente. Nossos dados portanto, confirmam a eficiência do teste rápido com rK39 no diagnóstico da LV.

Fatores associados às formas evolutivas graves da infecção crônica pelo vírus da hepatite C

Com o objetivo de descrever os fatores epidemiológicos e clínicos-laboratoriais e avaliar os fatores associados ao desenvolvimento de fibrose moderada e grave, realizou-se a revisão de 426 prontuários médicos de pacientes com infecção crônica pelo vírus da hepatite C, atendidos na Clínica de Moléstias Infecciosas e Parasitárias da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, no período de 01/01 a 31/12/2000. Dos pacientes incluídos no estudo, 56,3% eram do sexo masculino e 43,7% do sexo feminino. A idade deles variou de 18 a 69 anos. A hemotransfusão foi a forma mais freqüente de transmissão do vírus da hepatite C, encontrada em 128 (30%) dos casos e em 187 (43,9%) pacientes não foi encontrado nenhum fator de risco. A distribuição dos pacientes quanto à alteração arquitetural visto na biópsia hepática foi: grau 0 (14,1%), grau 1 (51,2%), grau 2 (20,6%), grau 3 (8%) e grau 4 (6,1%). Na análise multivariada, encontramos associação positiva entre intensidade da fibrose e idade maior que 40 anos na data da biópsia hepática, níveis séricos de albumina abaixo do limite inferior normal, gama-glutamiltransferase maior ou igual a duas vezes o limite superior da normalidade, plaquetas em número menor que 150.000/mm³ e alta atividade necro-inflamatória. Os dados foram inconclusivos para testar a associação entre gravidade da fibrose e alcoolismo.

Nested-PCR do gene que codifica o antígeno b aplicada ao diagnóstico da tuberculose pulmonar

A reação em cadeia da polimerase usada para amplificação de uma seqüência interna de um fragmento previamente amplificado (nested-PCR) foi investigada como uma alternativa complementar a pesquisa de bacilos álcool ácido resistentes e a cultura do Mycobacterium tuberculosis em meio de Lowenstein-Jensen. Foram investigadas 144 amostras de escarro de pacientes suspeitos de tuberculose encaminhados ao Laboratório de Tuberculose do Instituto Evandro Chagas em Belém, no período de junho de 2002 a dezembro de 2003. Das 144 amostras, 121 foram caracterizadas como tuberculose, 119 foram positivas na cultura, 95 na baciloscopia e 128 na nested-PCR. A sensibilidade da nested-PCR foi 96% (116/121), enquanto a especificidade foi 48% (11/23). A nested-PCR poderá ser uma ferramenta complementar para o diagnóstico da tuberculose, pois apresenta sensibilidade equivalente à cultura, no entanto, necessita de maiores avaliações visando minimizar o número de resultados falso-positivos.

Reemergence of yellow fever: detection of transmission in the State of São Paulo, Brazil, 2008

INTRODUCTION: Following yellow fever virus (YFV) isolation in monkeys from the São José do Rio Preto region and two fatal human autochthonous cases from the Ribeirão Preto region, State of São Paulo, Brazil, two expeditions for entomological research and eco-epidemiological evaluation were conducted. METHODS: A total of 577 samples from humans, 108 from monkeys and 3,049 mosquitoes were analyzed by one or more methods: virus isolation, ELISA-IgM, RT-PCR, histopathology and immunohistochemical. RESULTS: Of the 577 human samples, 531 were tested by ELISA-IgM, with 3 positives, and 235 were inoculated into mice and 199 in cell culture, resulting in one virus isolation. One sample was positive by histopathology and immunohistochemical. Using RT-PCR, 25 samples were processed with 4 positive reactions. A total of 108 specimens of monkeys were examined, 108 were inoculated into mice and 45 in cell culture. Four virus strains were isolated from Alouattacaraya. A total of 931 mosquitoes were captured in Sao Jose do Rio Preto and 2,118 in Ribeirão Preto and separated into batches. A single isolation of YFV was derived from a batch of 9 mosquitoes Psorophoraferox, collected in Urupês, Ribeirão Preto region. A serological survey was conducted with 128 samples from the municipalities of São Carlos, Rincão and Ribeirão Preto and 10 samples from contacts of patients from Ribeirão Preto. All samples were negative by ELISA-IgM for YFV. CONCLUSIONS: The results confirm the circulation of yellow fever, even though sporadic, in the Sao Paulo State and reinforce the importance of vaccination against yellow fever in areas considered at risk.

Study of infection by Rickettsiae of the spotted fever group in humans and ticks in an urban park located in the City of Londrina, State of Paraná, Brazil

INTRODUCTION: Spotted fevers are emerging zoonoses caused by Rickettsia species in the spotted fever group (SFG). Rickettsia rickettsii is the main etiologic agent of Brazilian spotted fever (BSF) and it is transmitted by Amblyomma spp. ticks. METHODS: The study aimed to investigate SFG rickettsiae in the Arthur Thomas Municipal Park in Londrina, PR, by collecting free-living ticks and ticks from capybaras and blood samples from personnel working in these areas. Samples from A. dubitatum and A. cajennense were submitted for PCR in pools to analyze the Rickettsia spp. gltA (citrate synthase gene). RESULTS: All the pools analyzed were negative. Human sera were tested by indirect immunofluorescence assay with R. rickettsii and R. parkeri as antigens. Among the 34 sera analyzed, seven (20.6%) were reactive for R. rickettsii: four of these had endpoint titers equal to 64, 2 titers were 128 and 1 titer was 256. None of the samples were reactive for R. parkeri. An epidemiological questionnaire was applied to the park staff, but no statistically significant associations were identified. CONCLUSIONS: The serological studies suggest the presence of Rickettsiae related to SFG that could be infecting the human population studied; however, analysis of the ticks collected was unable to determine which species may be involved in transmission to humans.

Factors affecting Helicobacter pylori eradication using a seven-day triple therapy with a proton pump inhibitor, tinidazole and clarithromycin, in brazilian patients with peptic ulcer

Triple therapy is accepted as the treatment of choice for H. pylori eradication. In industrialized countries, a proton pump inhibitor plus clarithromycin and amoxicillin or nitroimidazole have shown the best results. Our aims were: 1. To study the eradication rate of the association of a proton pump inhibitor plus tinidazole and clarithromycin on H. pylori infection in our population. 2. To determine if previous treatments, gender, age, tobacco, alcohol use, and non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) change the response to therapy. METHODS: Two hundred patients with peptic ulcer (upper endoscopy) and H. pylori infection (histology and rapid urease test - RUT) were included. A proton pump inhibitor (lansoprazole 30 mg or omeprazole 20 mg), tinidazole 500 mg, and clarithromycin 250 mg were dispensed twice a day for a seven-day period. Eradication was assessed after 10 to 12 weeks of treatment through histology and RUT. RESULTS: The eradication rate of H. pylori per protocol was 65% (128/196 patients). This rate was 53% for previously treated patients, rising to 76% for not previously treated patients, with a statistical difference p<0.01. No significant difference was observed regarding sex, tobacco use, alcohol consumption, and NSAID use, but for elderly patients the difference was p = 0.05. Adherence to treatment was good, and side effects were mild. CONCLUSIONS: A proton pump inhibitor, tinidazole, and clarithromycin bid for seven days resulted in H. pylori eradication in 65% of the patients. Previous treatments were the main cause of treatment failure.

Biologia de Anofelinos Amazônicos. XIII. Estudo do ciclo biológico de Anopheles nuñez-tovari Gabaldon, 1940 (Diptera, Culicidae)

No estudo do ciclo biológico de Anopheles nuñez-tovari foram analisadas 108 posturas, totalizando 13.999 ovos. A média de ovos postos por postura foi de 128,83 + 4,85 e uma taxa de eclosão elevada de 84,06%. Foi constatado qe 89% dos ovos eclodem com 48 horas após a oviposição, mostrando, no total, um período médio de eclosão de 1,86 + 0,004 dias. A média de ovos eclodidos por postura foi de 109,39 + 5,26. Os dados de correlação entre ovos postos e ovos eclodidos evidenciaram que à medida que aumenta o número de ovos por postura há também um aumento correspondente na taxa de eclosão . Contudo, quando as posturas são reunidas em intervalos de classe de 40 ovos, constatou-se que não há correlação para algumas delas. Para as fases imaturas, verificou-se que existem diferenças no tempo de desenvolvimento, sendo o estádio 4o - pupa - o mais longo, apresentando uma média de 3,15 + 0,03 dias. A menor média foi observada para os estádios 2o - 3o com 1,46 + 0,02 dias. Valores intermediários foram constatados para os estádios 1o - 2o, 3o - 4oe estágio de pupa - adulto (2,34 + 0,02; 1,67 + 0,02 e 1,54 + 0,01 dias, respetivamente). Para o ciclo completo ovo-adulto observou-se um tempo médio de desenvolvimento de 12,02 + 0,04 dias. As maiores taxas de mortalidade foram verificadas para o 4o. estádio (19,6%0) e para o estádio até a emergência do imago, foi de 71,40%, sendo um valor elevado segundo os dados da literatura. A comparação dos períodos do desenvolvimento entre A. nuñez-tovari com A. darlingi e A. trannulatuspossibilitou considerar A. nuñez-tovari como mais próxima da primeira espécie.

COMPORTAMENTO DE LEVEDURAS DO GÊNERO CANDIDA"IN VITRO" A ANTIFÚNGICOS

Estudou-se o comportamento de leveduras do gênero Candida a antifungicos, pela determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Fungicida Mínima (CFM) "in vitro"de 30 cepas de Candida frente aos antifungicos: miconazol, cetoconazol e anfotericina B. Empregou-se o método de diluição em meio líquido e os antifungicos foram diluídos visando proporcionar concentrações a partir de 0,06 a 128 μg/mL. O inóculo foi padronizado ajustando-se a suspensão para conter 1X 106 ufc/mL. A concentração para a qual houve maior convergência de cepas foi de 1 μg/mL (26,5%) para anfotericina B. Para miconazol foi de 16 μg/mL (26,0%) e para cetoconazol 32 μg/mL (23,0%). Os valores de CFM foram de 2 μg/mL (23,5%) para anfotericina B, de 16 e 64 μg/mL (26,5%) para miconazol e 32 e 64 μg/mL (30,0%) para cetoconazol. Este imidazólico mostrou os valores de CIM e CFM mais elevados atingindo até 128 μg/mL em algumas espécies. As espécies de Candida mostraram-se mais sensíveis à Anfotericina B, quando comparadas em relação aos antifungicos testados. Sobre o desempenho das espécies de Candida, melhor padrão de comportamento foi verificado para C. albicans com níveis mais baixos de sensibilidade.

Erosão do solo na Amazônia: estudo de caso na região do Apiaú, Roraima, Brasil

O estudo analisou a erosão do solo pela ação da água das chuvas, em dois usos da terra (floresta primária e pastagem derivada de floresta) entre agosto de 1988 e fevereiro de 1992, na região do Apiaú, Estado de Roraima, Amazônia brasileira. Para um declive padrão de 20%, os resultados indicaram que a erosão em um sistema de pastagem com Brachiaria humidicola (1.128 kg.ha'.ano') foi 7,5 vezes maior quando comparado com os dados obtidos para floresta primária(150 kg.ha'.ano1) no mesmo período. O escoamento superficial ("runoff') foi de 3,18 χ IO6 l.ha'.ano'1 para o pasto e de 1,13 χ IO6 l.ha'.ano"1 para a floresta primária. Embora situados a menos de 1 km de distância, a precipitação pluviométrica anual que efetivamente atingiu o solo nos dois sistemas foi desigual (P < 0,001; t005 , 36) e refletiu a diferença de cobertura vegetal entre a floresta (1.538 mm) e a pastagem (2.109 mm). Os resultados indicam que a substituição de florestas tropicais por pastagens na Amazônia aumenta a erosão laminar e seus efeitos podem ser refletidos na sócio-economia regional e global.