Improving the production of the denatured recombinant N-terminal domain of rhoptry-associated protein 2 from a Plasmodium falciparum target in the pathology of anemia in falciparum malaria

Rhoptry-associated protein 2 (RAP2) is known to be discharged from rhoptry onto the membrane surface of infected and uninfected erythrocytes (UEs) ex vivo and in vitro and this information provides new insights into the understanding of the pathology of severe anemia in falciparum malaria. In this study, a hexahistidine-tagged recombinant protein corresponding to residues 5-190 of the N-terminal of Plasmodium falciparum RAP2 (rN-RAP2) was produced using a new method of solubilization and purification. Expression was induced with D-lactose, a less expensive alternative inducer to the more common isopropyl-²-D-thio-galactopyranosidase. The recombinant protein was purified using two types of commercially-available affinity columns, iminodiacetic and nitrilotriacetic. rN-RAP2 had immunogenic potential, since it induced high titers of anti-RAP2 antibodies in mice. These antibodies recognized full-length RAP2 prepared from Triton X-100 extracts from two strains of P. falciparum. In fact, the antibody recognized a 29-kDa product of RAP2 cleavage as well as 82 and 70-kDa products of RAP1 cleavage. These results indicate that the two antigens share sequence epitopes. Our expressed protein fragment was shown to contain a functional epitope that is also present in rhoptry-derived ring surface protein 2 which attaches to the surface of both infected and UEs and erythroid precursor cells in the bone marrow of malaria patients. Serum from malaria patients who developed anemia during infection recognized rN-RAP2, suggesting that this protein fragment may be important for epidemiological studies investigating whether immune responses to RAP2 exacerbate hemolysis in falciparum malaria patients.

Association of hepatitis C virus NS5B variants with resistance to new antiviral drugs among untreated patients

Mutations located in the 109-amino acid fragment of NS5B are typically associated with resistance to interferon (IFN) and ribavirin (RIB) and to new antiviral drugs. The prevalence of these mutations was examined in 69 drug-naïve individuals with hepatitis C virus (HCV) infections in Rio de Janeiro, Brazil. Mutations related to non-response to IFN/RIB were observed in all subtypes studied (1a, 1b, 2b, 3a and 4). The most common mutation was Q309R, present in all subtypes, except subtype 2b with frequency above 20%. D244N was detected only in subtype 3a and A333E was detected only in subtype 2b. We did not detect the S282T, S326G or T329I mutations in any of the samples analysed. Of note, the C316N mutation, previously related to a new non-nucleoside compound (HCV796 and AG-021541), was observed in only eight of 33 (24%) samples from subtype 1b. Site 316 was under positive selection in this HCV variant. Our data highlight the presence of previously described resistance mutations in HCV genotypes from drug-naïve patients.

G6PD deficiency in Latin America: systematic review on prevalence and variants

Plasmodium vivax radical cure requires the use of primaquine (PQ), a drug that induces haemolysis in glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient (G6PDd) individuals, which further hampers malaria control efforts. The aim of this work was to study the G6PDd prevalence and variants in Latin America (LA) and the Caribbean region. A systematic search of the published literature was undertaken in August 2013. Bibliographies of manuscripts were also searched and additional references were identified. Low prevalence rates of G6PDd were documented in Argentina, Bolivia, Mexico, Peru and Uruguay, but studies from Curaçao, Ecuador, Jamaica, Saint Lucia, Suriname and Trinidad, as well as some surveys carried out in areas of Brazil, Colombia and Cuba, have shown a high prevalence (> 10%) of G6PDd. The G6PD A-202A mutation was the variant most broadly distributed across LA and was identified in 81.1% of the deficient individuals surveyed. G6PDd is a frequent phenomenon in LA, although certain Amerindian populations may not be affected, suggesting that PQ could be safely used in these specific populations. Population-wide use of PQ as part of malaria elimination strategies in LA cannot be supported unless a rapid, accurate and field-deployable G6PDd diagnostic test is made available.

Cuidando de pacientes em fase terminal: a perspectiva de alunos de enfermagem

Este estudo busca compreender como alunos de graduação em Enfermagem percebem a si mesmos ao cuidar de pacientes em fase terminal e expor os significados da experiência vivida. Foram entrevistados 14 alunos, respondendo à questão: Como se mostra a você o cuidar do paciente na fase terminal? Para os alunos, é sempre uma experiência dolorosa, que os coloca face a face com suas fragilidades e inseguranças. Eles atribuem suas dificuldades à própria incapacidade de aceitar a morte e ao despreparo e inexperiência. Relatam que falta apoio dos profissionais com quem compartilham esse cuidado. No que se refere à formação profissional, para alguns a experiência foi positiva, apesar das dificuldades; outros a avaliam negativamente, resultando em rejeição a situações semelhantes. Novas investigações sobre o tema são necessárias para aprofundar e ampliar a reflexão para o âmbito da formação dos enfermeiros em nível nacional.

Sufrimiento en infantes con enfermedad terminal: perspectiva de padres y profesionales

Diagnóstico de situación con una metodología científica de carácter exploratorio y descriptivo (observación participante con tratamiento estadístico descriptivo) con el fin de identificar las prácticas de enfermería en el ámbito de la promoción de la salud durante la consulta de enfermería para la salud infantil. De las 31 consultas observadas (n = 31) se mostró que la mayoría de las observaciones se produjeron en niños menores de 2 años siendo que el tema más discutido és alimentación con el uso predominante de la metodología expositiva. Se verificó poca utilización de apoyo informativo y cuando se utilizan se refieren a temas de seguridad y nutrición. La mayoría de los proveedores ha hecho preguntas y se verifico reducido registro de la interacción proveedores/niños con un expendio promedio de 23 minutos por consulta. Teniendo en cuenta los resultados y reflectando en ellos se destaca como intervención la elaboración de un manual para la promoción de la salud con la integración de la teoría y la evidencia de las buenas prácticas en este ámbito.

Association of bGH and Pit-1 gene variants with milk production traits in dairy Gyr bulls

The objective of this study was to obtain genetic marker information in the Gyr breed by analyzing bGH and Pit-1 gene polymorphisms and to verify their association with milk production traits. One sample including 40 Gyr bulls were genotyped at two bGH gene restriction sites (bGH- AluI and bGH-MspI) and at one restriction site in the Pit-1 gene (Pit-1 HinfI). The bGH-MspI(-) allele was favorable for fat milk percentage. The heterozigous Pit-1 HinfI (+/-) bulls were superior for fat milk production, in relation to homozigous Pit-1 HinfI (+/+). The Pit-1 and bGH genes are strong candidates in the dairy cattle QTL search, and zebuine populations are promising samples for this purpose.

Inheritance of late flowering in natural variants of soybean cultivars under short-day conditions

The objective of this work was to determine the inheritance of the long juvenile period trait in natural variants of the Doko, BR 9 (Savana), Davis, Embrapa 1 (IAS 5RC), and BR 16 soybean cultivars. Complete diallel crosses were made between the Doko and BR 16 cultivars and their variants. A 3:1 segregation ratio was observed in the F2 populations of the 'Doko' x Doko-18T, 'Doko' x Doko-Milionária, 'Davis' x São Carlos, and 'BR 9 (Savana)' x MABR92-836 (Savanão) crosses, indicating that the long juvenile period trait is controlled by a pair of recessive genes. The difference in late flowering between the Doko cultivar and both of its variants was caused by a recessive spontaneous mutation at the same genetic locus. However, the variants Doko-18T and Doko-Milionária are identical mutants that share a pair of genes that control the long juvenile period under short-day conditions. These mutants can be used in breeding programs to develop cultivars adapted to low-latitude tropical regions.

Multidetector computed tomography angiography of the celiac trunk and hepatic arterial system: normal anatomy and main variants

Abstract Although digital angiography remains as the gold standard for imaging the celiac arterial trunk and hepatic arteries, multidetector computed tomography in association with digital images processing by software resources represents a useful tool particularly attractive for its non invasiveness. Knowledge of normal anatomy as well as of its variations is helpful in images interpretation and to address surgical planning on a case-by-case basis. The present essay illustrates several types of anatomical variations of celiac trunk, hepatic artery and its main branches, by means of digitally reconstructed computed tomography images, correlating their prevalence in the population with surgical implications.

Caracterização da região 5'-terminal de um isolado brasileiro do Southern bean mosaic virus

O presente trabalho caracteriza a região 5'-terminal de um isolado do Southern bean mosaic virus encontrado no Estado de São Paulo (SBMV-SP). O RNA foi extraído de partículas virais purificadas e submetido a RT-PCR usando oligonucleotídeos desenhados para amplificar cerca de 590 nt da região 5'-terminal do RNA viral. Foi obtido um fragmento de tamanho esperado que, após clonagem e seqüenciamento, mostrou a existência de uma região não codificadora com 92 nt e a primeira ORF, começando no primeiro AUG (posição 93) e terminando no códon UGA na posição 534. Na região não codificadora foi detectado um segmento parcialmente complementar ao RNA ribossomal 18S. A ORF1 codifica uma proteína de 147 aminoácidos com massa molecular estimada de 17080 Da. A extremidade 3' da ORF1 sobrepõe a extremidade 5' da ORF2 em 34 nucleotídeos. Os resultados obtidos indicam que a região 5'-terminal do RNA do SBMV-SP é similar ao isolado Arkansas (SBMV-ARK) descrito na América do Norte.

Variability of the 3' terminal of the polymerase gene of Grapevine leafroll-associated virus 3 isolates from Vale do São Francisco, Brazil

Many viral diseases, including leafroll, which is of great economic importance, affect grapevines (Vitis spp.). A complex of eight viruses [Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV) -1 to 8] is associated with this disease. The objective of this study was to compare the variability of the 3' terminal region of the polymerase gene of three isolates of GLRaV-3 (Grapevine leafroll-associated virus-3), from Submédio do Vale do Rio São Francisco (Petrolina-PE) with that of other isolates available at the GenBank, including an isolate from North America and another from Southern Brazil. The viral RNA was extracted from three infected ELISA reactive plants and a fragment of 340 bp was amplified, by RT-PCR, using primers that recognize that portion of the polymerase gene found between nucleotides 8267 and 8606. The three isolates from Vale do Rio São Francisco named Pet-1, Pet-2 and Pet-3, showed similarities ranging from 98% and 94%, respectively to the isolates from North America (AF037268) and Southern Brazilian (AF438411). Considering the whole genome, the main variation found was one amino acid change at position 2766 (F2766Y). These preliminary data indicate the existence of a natural variation among GLRaV-3 isolates from grapevines. This could be due to the vegetative propagation and long cycle of the plant, associated with the error-prone nature of RNA-dependent RNA polymerase.

Caracterização da região 3'-terminal do genoma de um isolado brasileiro do Southern bean mosaic virus

O presente trabalho caracteriza a região 3'-terminal do genoma de um isolado do Southern bean mosaic virus encontrado no Estado de São Paulo (SBMV-SP). O RNA foi extraído de partículas virais purificadas e submetido a RT-PCR usando oligonucleotídeos desenhados para amplificar 972 nt da região 3'-terminal do RNA viral. Foi obtido fragmento de tamanho esperado que inclui o gene da proteína capsidial e a região 3'-terminal não codificadora. O gene da proteína capsidial (ORF4) contém 801 nucleotídeos, incluindo-se o códon de terminação UGA, com seqüência deduzida de 266 aminoácidos e massa molecular estimada de 28.800 Da. Sessenta e um aminoácidos terminais da ORF2 estão sobrepostos na ORF4. O "sinal de localização nuclear", encontrado dentro do "Domínio R" na região 5'-terminal da ORF4 de alguns sobemovírus, não foi identificado no SBMV-SP. Esse dado pode explicar a ausência de partículas virais do SBMV-SP no núcleo celular. A seqüência do SBMV-SP apresentou identidade de nucleotídeos e aminoácidos de, respectivamente, 91% e 93% com o isolado "Arkansas" (SBMV-ARK) descrito nos EUA. Os resultados obtidos indicam que o SBMV-SP e o SBMV-ARK são isolados muito proximamente relacionados.

Avaliação das câmaras frias usadas para o armazenamento de frutas e hortaliças no entreposto terminal de São Paulo (CEAGESP): CEAGESP

O tempo de vida pós-colheita de frutas e hortaliças está diretamente relacionado à temperatura de armazenamento do produto. Em condições controladas de temperatura e umidade relativa do ar, as reações metabólicas podem ser retardadas, proporcionando melhor conservação do produto. Foram realizadas avaliações das câmaras frias destinadas à estocagem de frutas e hortaliças na Companhia de Entrepostos e Armazéns Gerais de São Paulo, CEAGESP - São Paulo - SP, com o objetivo de identificar a situação das câmaras frias utilizadas nesse entreposto. As condições de estocagem dos produtos foram avaliadas por meio dos parâmetros: temperatura do ar, umidade relativa, isolamento, equipamento frigorífico (condensador, compressor, evaporador), piso, dimensões da câmara e da porta. Avaliou-se a eficiência de uso por meio do cálculo para a determinação da carga térmica. Observou-se que maçã e pêra possuem os maiores volumes comercializados, utilizando-se de estocagem pelo frio (63,25%), seguido pela banana (24,10%). Baseando-se no volume médio de comercialização dos permissionários, constatou-se que 73,91% possuem motores superdimensionados a sua capacidade calorífica de uso.

Isquemia e reperfusão hepática total associada ao estado de choque hemorrágico controlado: efeitos no seqüestro de neutrófilos no íleo terminal e cólon sigmóide do rato

OBJETIVO: Estudar os efeitos da isquemia e reperfusão hepática total sobre acúmulo de neutrófilos no íleo terminal e cólon sigmóide de ratos, em condições de normalidade e submetidos ao estado de choque hemorrágico controlado. MÉTODO: 32 ratos Wistar, machos, foram divididos em quatro grupos de oito animais cada: grupo Sham, submetido aos procedimentos padrões com um período de 60 minutos de observação; grupo Choque, submetido a choque hemorrágico controlado (PAM = 40mmHg, 20min) seguido de reposição volêmica (Ringer lactato + sangue, 3:1) e reperfusão (60min); grupo Pringle, submetido à isquemia hepática total (15min.) e reperfusão (60min); grupo Total submetido a choque hemorrágico controlado (20min) seguido de reposição volêmica (Ringer lactato + sangue, 3:1), isquemia hepática (15min) e reperfusão (60min). Após o sacrifício dos animais, procedeu-se à contagem de neutrófilos nos segmentos intestinais. RESULTADOS: Na contagem de neutrófilos no íleo terminal, apenas o grupo Choque diferiu dos demais (p<0.001) os quais não diferiram entre si (Sham 1.33 ± 0.55, Choque 5.48 ± 2.65, Pringle 2.47 ± 1.38, Total 2.44 ± 0.56) e, no cólon sigmóide, o grupo Choque diferiu apenas do grupo Sham (p = 0.021), sem diferença entre os demais (Sham 0.66 ± 0.44, Choque 2.08 ± 1.11, Pringle 1.04 ± 0.71, Total 1.21 ± 1.03). CONCLUSÃO: Diferentemente do estado de choque hemorrágico controlado, a isquemia hepática de 15 minutos, seguida de 60 minutos de reperfusão, não causou acúmulo significativo de neutrófilos no íleo terminal e cólon sigmóide.

Confecção de piloros artificiais em íleo terminal sem secção de musculatura em ratos: estudo anátomo-patológico

OBJETIVO: Estudar, experimentalmente, a diminuição do trânsito intestinal através de piloros artificiais no íleo terminal de ratos, sem secção da musculatura entérica. MÉTODO: O estudo foi realizado em 40 ratos distribuídos em dois grupos de 20 animais cada. Foram confeccionados quatro piloros no íleo terminal de cada animal, com pontos sero-musculares separados, distribuídos circunferencialmente na alça intestinal. O Grupo 1 foi morto com 15 dias e o Grupo 2, com 30 dias. Aferimos as medidas da circunferência do intestino no transoperatório e no momento da necrópsia. RESULTADOS: No Grupo 1 houve dilatação média de 3mm no nível do primeiro piloro e de 4,15mm no quarto piloro. No Grupo 2 a dilatação média foi de 7,50mm no primeiro piloro e de 5,75mm no quarto piloro. No estudo anátomo-patológico ficou evidente a formação bem definida dos piloros. CONCLUSÃO: Não é necessário remover ou seccionar a musculatura do intestino delgado, nem a secção do plexo nervoso próprio do intestino, para promover a dilatação intestinal com esse método e, como consequência, diminuir o trânsito intestinal.

Efeito da ressecção do íleo terminal na fibrose hepática secundária à ligadura do ducto hepático comum em ratas

OBJETIVO: A evolução para fibrose hepática e, posteriormente, para cirrose são fatos bem estabelecidos na colestase extra-hepática prolongada. A despeito dos avanços nos métodos diagnósticos e terapêuticos, essas complicações continuam de difícil solução, principalmente, quando não é possível reverter a causa da colestase. Neste trabalho, procurou-se verificar, em modelo experimental de colestase pela ligadura do ducto hepático comum, se a exclusão do íleo terminal reduziria o desenvolvimento de fibrose hepática. Não houve abordagem direta da causa da colestase, mas atuou-se nos mecanismos de secreção e regulação do fluxo biliar êntero-hepático. MÉTODO: Foram utilizadas trinta e cinco ratas Wistar, distribuídas em três grupos: Grupo 1, apenas laparotomia e laparorrafia; Grupo 2, ligadura do ducto hepático comum; Grupo 3, ligadura do ducto hepático comum associada a ressecção do íleo terminal, com reconstrução do trânsito intestinal, por meio de anastomose íleo-cólon ascendente. Após trinta dias, os animais foram mortos e o fígado de cada rata foi retirado, para a análise histológica. RESULTADOS: Os resultados foram submetidos a análise estatística pelo teste de Kuskal-Wallis, com nível de significância de 95 % (p < 0,05). Verificou-se que houve fibrose hepática nos grupos 2 e 3, porém sem cirrose. O Grupo 3 apresentou fibrose menos acentuada que o Grupo 2. CONCLUSÕES: Conclui-se que a ressecção do íleo terminal associa-se a menor alteração histológica, no fígado de ratas, decorrente de colestase obstrutiva.